CN106676020A - 一种乳酸菌在调制青贮饲料及预防奶牛乳房炎的应用 - Google Patents

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潘海婷
刘卫星
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Abstract

本发明公开了一种乳酸菌在调制青贮饲料及预防奶牛乳房炎的应用，所述乳酸菌为嗜酸乳杆菌。本发明采用嗜酸乳杆菌作为青贮添加剂，可以提高青贮饲料的质量，同时该嗜酸乳杆菌具有增强免疫作用，可用于预防奶牛乳房炎等疾病的发生。

Description

一种乳酸菌在调制青贮饲料及预防奶牛乳房炎的应用
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体是一种乳酸菌在调制青贮饲料及预防奶牛乳房炎的应用。
背景技术
青贮是指在密封条件下使青绿饲料发酵以能够在相当长的时间内保持其质量相对稳定的一种保鲜技术。
乳酸菌青贮添加剂，是专门用于饲料青贮的一类微生物添加剂，主要作用是有目的地调节青贮料内微生物，调控青贮发酵过程，促进多糖与粗纤维的转化，从而有效地提高青贮饲料的质量。因此，在青贮过程中添加乳酸菌青贮添加剂是非常必要的。
乳酸菌制剂是人工扩大青贮原料中乳酸菌群体的方法，当原料表面附着乳酸菌数量少时，通过添加乳酸菌制剂包装发酵所需的乳酸菌数量，取得早期进入乳酸发酵优势是非常有效的。乳酸菌制剂的添加效果与可溶性碳水化合物含量、缓冲能、干物质含量以及细胞成分变化有关。研究表明乳酸菌的添加明显促进了pH值的降低和乳酸含量的增加，使乳酸在青贮饲料中占主导地位。乳酸菌迅速繁殖成为青贮饲料中的优势菌，在适宜的温度、酸度、湿度环境中大量繁殖经过糖酵解作用产生大量乳酸，乳酸可部分转化为醋酸、丙酸及丁酸，使pH值进一步下降，以致于遏制了乳酸菌的生成，逐渐形成一个稳定的状态，即相对稳定期。由于存在大量的乳酸菌和乳酸，形成了一个相对稳定的平衡状态，乳酸菌分泌乳酸可以保持饲料不受其他因素影响而变质，同时又限制了乳酸菌的过量繁殖，乳酸菌在乳酸不足时又继续生长分泌乳酸，微生态如此循环。
国外对青贮添加剂技术的研究，主要集中在两个方面，一是外加防腐剂研究，以停止青饲料中微生物的活动，从而达到保存目的；二是微生物青贮技术的研究，即在青贮过程中，人为添加微生物制剂(包括活菌体、酶)。我国在青贮微生物添加剂领域的研究才刚刚起步，近几年一些单位筛选或从国外引进了一些菌株进行研究，但由于青贮过程中微生物菌群反应的复杂性和微生物制剂生产工艺的技术程度，到目前鲜有同类产品问世。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乳酸菌在调制青贮饲料及预防奶牛乳房炎的应用，以解决上述背景技术中所提到的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种乳酸菌在调制青贮饲料中的应用。
作为本发明进一步的方案：所述乳酸菌为嗜酸乳杆菌。
作为本发明进一步的方案：所述嗜酸乳杆菌用作青贮添加剂。
作为本发明进一步的方案：所述嗜酸乳杆菌的发酵条件为：MRS液体培养基，初始pH值为2.15～8.9，接种量为0.1mL，发酵温度为37℃。
一种乳酸菌在制备预防奶牛乳房炎的药物中的应用。
作为本发明进一步的方案：所述乳酸菌为嗜酸乳杆菌。
作为本发明进一步的方案：所述嗜酸乳杆菌用作预防奶牛乳房炎的抑菌剂。
作为本发明进一步的方案：所述奶牛乳房炎的致病菌包括大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
作为理想的青贮添加剂的乳酸菌必须满足的条件有：
1、生长旺盛，能够与其他区系竞争而且占统治地位；
2、具有同型发酵途径，快速产生乳酸；
3、耐酸，并尽快降低pH，至少使最终pH达到4.0；
4、能发酵多种糖，能发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、果聚糖、尤其是戊糖；
5、不使蔗糖产生葡聚糖；
6、不使果糖产生甘露醇；
7、不降解有机酸；
8、具有一定的生长温度，其范围可延伸至50℃左右；
9、能够在经过萎蔫的低水分材料草上生长；
10、必须能被制成粉末或颗粒的形式，而且能以这种形式稳定保存。
本发明采用嗜酸乳杆菌作为青贮添加剂，可以提高青贮饲料的质量，同时该嗜酸乳杆菌具有增强免疫作用，可用于预防奶牛乳房炎等疾病的发生。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中，一种乳酸菌在调制青贮饲料及预防奶牛乳房炎的应用，主要研究内容是筛选出产酸能力强的菌株，并对其发酵条件进行优化。具体的研究从以下具体实施步骤进行试验：
1、菌株选取：选取嗜酸乳杆菌(LB-1)、丙酸杆菌(PP-1)。
2、培养
分别将嗜酸乳杆菌(LB-1)、丙酸杆菌(PP-1)在MRS固体培养基上反复划线，经几代纯化，获得纯种的菌株；然后将纯种的嗜酸乳杆菌(LB-1)菌株、丙酸杆菌(PP-1)菌株分别接种于MRS液体培养基中，37℃培养30h，测定产酸率，从中筛选出产酸量高的菌株。
3、发酵条件的优化
分别选择不同的发酵液的初始pH(分别为1.5、2.0、2.15、3.0、3.2、4.0、5.0、5.4、6.8、8.1、8.9、9.0)，在接种量为0.1mL、发酵温度为37℃条件下，通过测定菌落数，确定最佳培养条件。
3.1测定方法：
3.1.1用精密pH计在室温下测定pH值；
3.1.2以酚酞为指示剂，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液滴定，结果以乳酸百分含量表示：
乳酸(％)＝(NNaOH*VNaOH*0.09)/V样品*100％；
其中，NNaOH为氢氧化钠溶液的浓度，单位为mol/L；VNaOH为消耗的氢氧化钠溶液的体积，单位为L；V样品为样品的体积，单位为L。
3.1.3采用平板菌落计数法进行菌落数的测定。
3.2耐酸碱的测定
以pH值为7.0的培养基为对照组，将活化好的嗜酸乳杆菌(LB-1)、丙酸杆菌(PP-1)分别接入上述不同pH值的培养基中，在37℃温箱培养8h后，将试管内培养液摇匀，用微量移液器分别吸取0.1mL，加入到pH值为7.0的各种菌的培养基中，继续培养18-24h，观察菌的生长速度和培养基的浑浊度。
3.3抑菌活性的测定
在直径为90mm培养皿中加入20mL灭菌的营养琼脂培养基，凝固后，用移液器分别吸取0.2mL指示菌大肠杆菌悬液、指示菌金黄色葡萄球菌悬液于平皿中的固体培养基上，用灭菌推棒涂抹均匀，在每个平皿中等距离放置牛津杯(直径为8mm)4个，每个牛津杯中加入200μL的上述菌液的上清液，在37℃温箱中培养18-24h，若在牛津杯周围出现明显抑菌圈，则表明菌液或菌的代谢产物具有抑菌活性，即可用游标卡尺测量抑菌圈的直径。
4、结果
按照上述测定方法测定的结果，表明：嗜酸乳杆菌(LB-1)对指示菌大肠杆菌和指示菌金黄色葡萄球菌有抑制作用，而丙酸杆菌(PP-1)则对指示菌大肠杆菌和指示菌金黄色葡萄球菌没有抑制作用；
丙酸杆菌(PP-1)分别在pH值4.0、5.0、5.4、8.1、9.0的营养肉汤培养8h后，再接种到pH值7.0的营养肉汤中，培养基变浑浊，可以继续生长，说明该菌对酸碱有一定的耐受力。而接种到pH值1.5、2.0、3.2的营养肉汤培养8h后，再接种到pH值7.0的营养肉汤时，则不能生长。
嗜酸乳杆菌(LB-1)在pH值2.15的MRS液体培养基中培养2h、3h后，再接种到pH值6.8的MRS液体培养基继续培养时，培养基变浑浊，说明在该培养基中可生长。而在pH值2.15的MRS液体培养基中培养6h后，再接种到pH值6.8的MRS液体培养基继续培养时，在其中不能生长。在pH值3.0、8.9的MRS液体培养基2h、3h、6h后，再接种到pH值6.8的MRS液体培养基中培养时，在其中均能生长。在pH值1.5的MRS液体培养基中培养2h、3h、6h后，再接种到pH值6.8的MRS液体培养基继续培养时，在其中不能生长。以上说明嗜酸乳杆菌(LB-1)对酸碱具有一定的耐受力。
研究表明，嗜酸乳杆菌(LB-1)具有增强动物免疫力、提高动物抗病力、产生有益代谢产物、促进消化等生物活性；耐酸碱试验，表明嗜酸乳杆菌(LB-1)符合青贮发酵的基本条件；且嗜酸乳杆菌(LB-1)对从患隐性乳房炎奶牛乳中分离的致病菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抑制作用。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (8)

1.一种乳酸菌在调制青贮饲料中的应用。
2.根据权利要求1所述的乳酸菌在调制青贮饲料的应用，其特征在于，所述乳酸菌为嗜酸乳杆菌。
3.根据权利要求2所述的乳酸菌在调制青贮饲料的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌用作青贮添加剂。
4.根据权利要求3所述的乳酸菌在调制青贮饲料的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌的发酵条件为：MRS液体培养基，初始pH值为2.15～8.9，接种量为0.1mL，发酵温度为37℃。
5.一种乳酸菌在制备预防奶牛乳房炎的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的乳酸菌在制备预防奶牛乳房炎的药物中的应用，其特征在于，所述乳酸菌为嗜酸乳杆菌。
7.根据权利要求6所述的乳酸菌在制备预防奶牛乳房炎的药物中的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌用作预防奶牛乳房炎的抑菌剂。
8.根据权利要求7所述的乳酸菌在制备预防奶牛乳房炎的药物中的应用，其特征在于，所述奶牛乳房炎的致病菌包括大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
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