CN106645688A - 一种快速检测黄曲霉毒素b1的方法及试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒，所述黄曲霉毒素B1试剂盒包括黄曲霉毒素B1标准溶液，黄曲霉毒素B1包被反应板，酶标抗原，酶标抗原稀释缓冲液，底物液，显色液，终止液，样品稀释液，浓缩洗涤液，浓缩PBS溶液。本发明提供的快速检测黄曲霉毒素B1试剂盒的方法，反应时间为25~35分钟，大大缩短了检测时间，加快了实验反应进程，可有效提高批量检测速度。能快速、简便、灵敏、准确地检测黄曲霉毒素B1。

Description

一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒

技术领域

本发明涉及了一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒，属于酶联免疫分析领域。

背景技术

黄曲霉毒素（Aflatoxins）是黄曲霉和寄生曲霉等产生的一组结构类似的次生代谢产物，是一组以二吠喃香豆素为基本结构的化合物。广泛存在于各种粮食谷物和饲料及其加工品中，对人类和动物表现出很强的毒性。黄曲霉毒素1993年被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的致癌性、致突变性、致畸性均居首位。

现有技术中常用的黄曲霉毒素检测技术主要有薄层层析法（TLC)、高效液相色谱法（HPLC)、免疫学分析法。前两者具有样品前处理步骤繁琐，耗时费力，仪器价格昂贵，需要专业人员操作等的缺点，而免疫学分析法具有特异性强、样品前处理简单、成本低、对实验人员和环境的污染危害小等优点。免疫学分析法特别是酶联免疫吸附分析技术具有快速、灵敏度高、操作简单、适应性强等优点，适合高通量样品筛选，因此对于快速检测黄曲霉毒素的残留，ELISA方法更具优势。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒，以便快速、简便地检测黄曲霉毒素B1。

本发明所述的检测黄曲霉毒素B1试剂盒包括：黄曲霉毒素B1标准溶液，黄曲霉毒素B1包被反应板，酶标抗原，酶标抗原稀释缓冲液，底物液，显色液，终止液，样品稀释液，浓缩洗涤液，浓缩PBS溶液。

基于上述，所述黄曲霉毒素B1试剂盒的黄曲霉毒素B1标准溶液浓度分别为：0 ng/ml，0.1 ng/ml，0.25 ng/ml，0.5 ng/ml，1 ng/ml，2 ng/ml。

基于上述，所述黄曲霉毒素B1试剂盒的黄曲霉毒素B1包被反应板，包被液是黄曲霉毒素B1抗体，浓度为2~6 ug/ml，每孔包被90~160 ul的包被液。

本发明所述的快速检测黄曲霉毒素B1试剂盒的方法，包括以下步骤：

1) 取上述所述包被反应板，洗涤0~1次，甩干，拍干；

2) 分别在包被反应板各孔加入50 µL黄曲霉毒素B1标准溶液、50 µL待测样液；

3) 每孔均加入50 µL酶标抗原工作溶液；

4) 放入37 ℃培养箱，孵育8 min～15 min；

5) 取出反应板，洗涤4~5次，甩干、拍干后，每孔分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液；

6) 放入37 ℃培养箱，孵育8 min～15 min；

7) 每孔分别加入50 µL的终止液，用450 nm酶标仪读取各孔的吸光度。

本发明提供了一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒，反应时间缩短到25~35分钟，大大缩短了检测时间，同时简化了洗涤过程，加快了实验反应进程，可有效提高批量检测速度。能快速、简便、灵敏、准确地检测黄曲霉毒素B1。

具体实施方式

下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

实施例1

一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒

一、包被反应板的制备

1、将黄曲霉毒素B1抗体加入反应板中，抗体包被液浓度为2 ug/ml，每孔包被150 ul，保鲜膜密封后4 ℃冰箱过夜后，洗涤1次，拍干。

2、每孔加入250 ul封闭液后，包被反应板密封后，37 ℃孵育2小时。

3、取出包被反应板，甩干，拍干，37 ℃烘干1.5小时。

二、黄曲霉毒素B1的超级快试剂盒

1、取相应的包被反应板放在框架上，对反应孔进行编号，设定1~6号孔为AFB1标准对照孔，其余孔为样品孔。

2、洗涤：每孔加入250 µL（约5滴）洗涤液，放置1 min。甩干，在吸水纸上拍干。

3、实验加样：1~6号孔分别加入50 µL的AFB1标准溶液（0，0.1，0.25，0.5，1，2ppb），其余孔加入相应的待测样液。

4、加酶标抗原：各反应孔均加入50 µL的酶标抗原工作溶液。轻轻振摇包被反应板框架，使试剂充分混匀。盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育8 min。

5、洗涤：取出反应板，甩干，拍干。每孔加入250 µL（约5滴）的洗涤液，放置1 min。甩干并拍干。按上述操作再重复洗涤4次。

6、显色：反应板拍干后，每孔分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液。轻轻振摇包被反应板框架，使试剂充分混匀。盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育8 min。

7、读取数值：取出反应板，每孔加入50 µL的终止液。轻轻振摇包被反应板框架，使反应板中的试剂充分混匀。放入450 nm酶标仪中读取各孔的吸光度（OD值）数值。用数据处理软件进行处理得出浓度值。

实施例2

一、包被反应板的制备

1、将黄曲霉毒素B1抗体加入反应板中，抗体包被液浓度为6 ug/ml，每孔包被90 ul，保鲜膜密封后4 ℃冰箱过夜后，洗涤1次，拍干。

2、每孔加入250 ul封闭液后，包被反应板密封后，37 ℃孵育2小时。

3、取出包被反应板，甩干，拍干，37 ℃烘干1.5小时。

二、黄曲霉毒素B1的超级快试剂盒

1、取相应的包被反应板放在框架上，对反应孔进行编号，设定1~6号孔为AFB1标准对照孔，其余孔为样品孔。

2、洗涤：每孔加入250 µL（约5滴）洗涤液，放置1 min。甩干，在吸水纸上拍干。

3、实验加样：1~6号孔分别加入50 µL的AFB1标准溶液（0，0.1，0.25，0.5，1，2ppb），其余孔加入相应的待测样液。

4、加酶标抗原：各反应孔均加入50 µL的酶标抗原工作溶液。轻轻振摇包被反应板框架，使试剂充分混匀。盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育15 min。

5、洗涤：取出反应板，甩干，拍干。每孔加入250 µL（约5滴）的洗涤液，放置1 min。甩干并拍干。按上述操作再重复洗涤4次。

6、显色：反应板拍干后，每孔分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液。轻轻振摇包被反应板框架，使试剂充分混匀。盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育15 min。

7、读取数值：同实施例1。

实施例3

一、包被反应板的制备

1、将黄曲霉毒素B1抗体加入反应板中，抗体包被液浓度为4 ug/ml，每孔包被100 ul，保鲜膜密封后4 ℃冰箱过夜后，洗涤1次，拍干。

2、每孔加入250 ul封闭液后，包被反应板密封后，37 ℃孵育2小时。

3、取出包被反应板，甩干，拍干，37 ℃烘干1.5小时。

二、黄曲霉毒素B1的超级快试剂盒

1、取相应的包被反应板放在框架上，对反应孔进行编号，设定1~6号孔为AFB1标准对照孔，其余孔为样品孔。

2、洗涤：每孔加入250 µL（约5滴）洗涤液，放置1 min。甩干，在吸水纸上拍干。

3、实验加样：1~6号孔分别加入50 µL的AFB1标准溶液（0，0.1，0.25，0.5，1，2ppb），其余孔加入相应的待测样液。

4、加酶标抗原：各反应孔均加入50 µL的酶标抗原工作溶液。轻轻振摇包被反应板框架，使试剂充分混匀。盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育11 min。

5、洗涤：取出反应板，甩干，拍干。每孔加入250 µL（约5滴）的洗涤液，放置1 min。甩干并拍干。按上述操作再重复洗涤4次。

6、显色：反应板拍干后，每孔分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液。轻轻振摇包被反应板框架，使试剂充分混匀。盖上盖子，放入37 ℃培养箱，孵育10 min。

7、读取数值：同实施例1。

Claims (4)

1.一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法及试剂盒，其特征在于，包括黄曲霉毒素B1标准溶液，黄曲霉毒素B1包被反应板，酶标抗原，酶标抗原稀释缓冲液，底物液，显色液，终止液，样品稀释液，浓缩洗涤液，浓缩PBS溶液。

2.根据权利要求1所述的检测黄曲霉毒素B1试剂盒，其特征在于，黄曲霉毒素B1标准溶液浓度分别为：0 ng/ml，0.1 ng/ml，0.25 ng/ml，0.5 ng/ml，1 ng/ml，2 ng/ml。

3.根据权利要求1所述的检测黄曲霉毒素B1试剂盒，其特征在于，黄曲霉毒素B1包被反应板的包被液是黄曲霉毒素B1抗体，浓度为2~6 ug/ml，每孔包被90~160 ul的包被液。

4.利用如权利要求1-3中任一项所述的快速检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：

1) 所述黄曲霉毒素B1包被反应板，洗涤0~1次，甩干，拍干；

2) 分别在包被反应板各孔加入50 µL黄曲霉毒素B1标准溶液、50 µL待测样液；

3) 每孔均加入50 µL酶标抗原工作溶液；

4) 放入37 ℃培养箱，孵育8 min～15 min；

5) 取出反应板，洗涤4~5次，甩干、拍干后，每孔分别加入50 µL的底物液和50 µL的显色液；

6) 放入37 ℃培养箱，孵育8 min～15 min；

7) 每孔分别加入50 µL的终止液，用450 nm酶标仪读取各孔的吸光度。