CN106636268A - 提高印度辣木籽脱脂率的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种提高印度辣木籽脱脂率的方法，步骤如下：预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；冻干保存。脱脂剂由以下成分及重量份组成：正己烷68~80份、硼氢化钾5~15份和环烯醚萜3~8份。本发明制备的脱脂剂显著提高了印度辣木籽的油脂脱脂率，且脱脂率较高，从而提高了提取到的活性蛋白含量。

Description

提高印度辣木籽脱脂率的方法
技术领域
本发明属于生化分离技术领域，具体涉及提高印度辣木籽脱脂率的方法。
背景技术
辣木又称鼓槌树，白花菜目辣木科，是多年生热带乔木，原产于印度。辣木籽为辣木树的种子，在食品、医药、保健、化妆品等领域都有着良好的应用价值，因为富含辣木籽油，其在降低血脂、血压，减肥瘦身，调节肠胃，护肝戒酒，增强人体免疫力方面都具有显著疗效。
现有技术提供多种脱脂方法，例如，中国发明授权专利文献 一种采用超声波辅助脱脂提取厥麻多糖的方法 授权公告号：CN104231096B 该发明提供一种采用超声波辅助脱脂提取厥麻多糖的方法，它以厥麻为原料，加入石油醚后，采用不同温度回流脱脂，挥干溶媒后用乙醇常温浸泡洗涤，加入蒸馏水，转入超声波提取设备，超声提取过滤，收集水提液，滤渣再加水超声提取两次，合并水提液，旋转蒸发浓缩后加入木瓜蛋白酶液酶解，离心后取上清液，用微抽滤仪抽滤，进一步除去较细的滤渣，浓缩收集到的滤液，再用正丁醇和氯仿的混合液,萃取3～5次,收集上层水相，向水相中加入乙醇，静置后离心收集沉淀，冷冻干燥将得到纯化的蕨蔴多糖。
现有技术采用超声波辅助脱脂，可缩短提取过程的时间，提取率有所提高，但工艺复杂且脱脂率和提取率有待提升。
发明内容
本发明针对上述技术问题提供一种脱脂率高的的提高印度辣木籽脱脂率的方法。
本发明针对上述技术问题所采取的方案为：提高印度辣木籽脱脂率的方法，制备步骤如下：
1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰。
2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率故用脱脂剂对内子粉末进行脱脂，添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性。
3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；将粉末中的活性蛋白充分酶解出来，提高活性蛋白的提取率。
4）冻干保存，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺。
脱脂剂剂体积为内子粉末2~4倍，可保证充分脱脂，搅拌静置1~2天后用50~150目筛子过筛，便于后续步骤提取活性蛋白。
脱脂剂由以下成分及重量份组成：正己烷68~80份、硼氢化钾5~15份和环烯醚萜3~8份。将内子粉末中的油脂充分脱离，脱脂效果优异，使用脱脂剂获得的内子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，经过滤风干可使水分也降低且易筛，提升后续的酶解的效果。活性剂由以下成分及重量份组成：脂肪酸甲酯乙氧基化物8~15份、烷基酚聚氧乙烯醚2~10份、异丙醇2~10份、丁基二甘醇3~10份、氯化钠1~4份、N-乙酰邻氨基苯酸1~3份、三聚磷酸钠2~4份。在脱脂的过程中肯会对蛋白的活性产生影响，加入活性剂保证蛋白活性，同时起到提升蛋白活性，效果优异。
Tris-Hcl缓冲液pH值为8.6~8.9，浓度为1.3~1.6mol/L，pH值和浓度在此范围缓冲液效果优异。
步骤3中离心机转速为3000~4000r/min，离心时间10~20min，进行固液分离将杂质去除便于活性蛋白的提取。
步骤1中内子在去离子水中浸泡30~50min后置于干燥器内干燥，充分将内子表面杂质浸泡出来，再进行干燥保证杂质充分去除。
有益效果：本发明采用的去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰，内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率，用脱脂剂将内子粉末中的油脂充分脱离，脱脂效果优异，使用脱脂剂获得的内子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，经过滤风干可使水分也降低且易筛，提升后续的酶解的效果。添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺，本发明制备的脱脂剂显著提高了印度辣木籽的油脂脱脂率，且脱脂率较高，从而提高了提取到的活性蛋白含量。
具体实施例
以下结合具体实施例作进一步详细描述：
实施例1：
提高印度辣木籽脱脂率的方法，制备步骤如下：
1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰。
2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率故用脱脂剂对内子粉末进行脱脂，添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性。
3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；将粉末中的活性蛋白充分酶解出来，提高活性蛋白的提取率。
4）冻干保存，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺。
脱脂剂剂体积为内子粉末2~4倍，可保证充分脱脂，搅拌静置1~2天后用50~150目筛子过筛，便于后续步骤提取活性蛋白。
脱脂剂由以下成分及重量份组成：正己烷68~80份、硼氢化钾5~15份和环烯醚萜3~8份。将内子粉末中的油脂充分脱离，脱脂效果优异，使用脱脂剂获得的内子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，经过滤风干可使水分也降低且易筛，提升后续的酶解的效果。
活性剂由以下成分及重量份组成：脂肪酸甲酯乙氧基化物8~15份、烷基酚聚氧乙烯醚2~10份、异丙醇2~10份、丁基二甘醇3~10份、氯化钠1~4份、N-乙酰邻氨基苯酸1~3份、三聚磷酸钠2~4份。在脱脂的过程中肯会对蛋白的活性产生影响，加入活性剂保证蛋白活性，同时起到提升蛋白活性，效果优异。
Tris-Hcl缓冲液pH值为8.6~8.9，浓度为1.3~1.6mol/L，pH值和浓度在此范围缓冲液效果优异。
步骤3中离心机转速为3000~4000r/min，离心时间10~20min，进行固液分离将杂质去除便于活性蛋白的提取。
步骤1中内子在去离子水中浸泡30~50min后置于干燥器内干燥，充分将内子表面杂质浸泡出来，再进行干燥保证杂质充分去除。
实施例2：
提高印度辣木籽脱脂率的方法，制备步骤如下：
1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；内子在去离子水中浸泡优选时间为50min后置于干燥器内干燥，充分将内子表面杂质浸泡出来，再进行干燥保证杂质充分去除，去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰。
2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率故用脱脂剂对内子粉末进行脱脂，添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性。
3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，Tris-Hcl缓冲液pH值优选为8.8，浓度优选为1.5mol/L，pH值和浓度在此范围缓冲液效果优异。搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，放入离心机进行离心，离心转速优选为4000r/min，离心时间优选为15min，进行固液分离将杂质去除便于活性蛋白的提取。上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；将粉末中的活性蛋白充分酶解出来，提高活性蛋白的提取率。
4）冻干保存，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺。
脱脂剂剂体积为内子粉末优选3倍，可保证充分脱脂，搅拌静置优选2天后优选用80目筛子过筛，便于后续步骤提取活性蛋白。
脱脂剂由以下成分及重量份组成：优选正己烷75份、优选硼氢化钾10份和优选环烯醚萜7份。将内子粉末中的油脂充分脱离，脱脂效果优异，使用脱脂剂获得的内子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，经过滤风干可使水分也降低且易筛，提升后续的酶解的效果。
活性剂由以下成分及重量份组成：优选脂肪酸甲酯乙氧基化物10份、优选烷基酚聚氧乙烯醚8份、优选异丙醇8份、优选丁基二甘醇8份、优选氯化钠3份、优选N-乙酰邻氨基苯酸2份、优选三聚磷酸钠2份。在脱脂的过程中肯会对蛋白的活性产生影响，加入活性剂保证蛋白活性，同时起到提升蛋白活性，效果优异。实验表明0.1-0.5重量份的磷脂酰胆碱在试剂体系中起到了耦合增效的效果。本发明采用的去离子水可充分的将去皮后的内子表面可溶杂质与内子分离，避免在后续步骤中杂质对提取的影响，保证提取过程无杂质干扰，内子中的油脂会影响活性蛋白的提取率，用脱脂剂将内子粉末中的油脂充分脱离，脱脂效果优异，使用脱脂剂获得的内子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，经过滤风干可使水分也降低且易筛，提升后续的酶解的效果。添加的活性剂可保证脱脂过程中内子粉末中活性蛋白的活性，由于活性蛋白对环境的要求很高，常温下高浓度的生物蛋白很容易失去活性，为确保活性采用冻干工艺，本发明制备的脱脂剂显著提高了印度辣木籽的油脂脱脂率，且脱脂率较高，从而提高了提取到的活性蛋白含量。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (8)

1.提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于以下步骤：
1）预处理：将辣木籽晒干，去皮，得到白色球状的内子，去离子水浸泡，干燥，超微粉碎，过筛；
2）脱脂：往内子粉末中加入脱脂剂和活性剂，搅拌，静置，过滤得块状粉末，再将粉末风干后过筛；
3）提取活性蛋白：往过筛后的粉末中加入Tris—HCl缓冲液，搅拌，水浴加热，加入酶解剂和助溶剂，继续搅拌，离心取上清液，上清液中加入析出剂，静置过滤得印度辣木籽中活性蛋白；
4）冻干保存。
2.根据权利要求1所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述脱脂剂剂体积为内子粉末2~4倍，搅拌2~3小时，静置1~2天后风干用50~150目筛子过筛。
3.根据权利要求1所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述脱脂剂由以下成分及重量份组成：正己烷68~80份、硼氢化钾5~15份和环烯醚萜3~8份。
4.根据权利要求3所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述的脱脂剂还含有0.1-0.5重量份的磷脂酰胆碱。
5.根据权利要求1所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述活性剂由以下成分及重量份组成：脂肪酸甲酯乙氧基化物8~15份、烷基酚聚氧乙烯醚2~10份、异丙醇2~10份、丁基二甘醇3~10份、氯化钠1~4份、N-乙酰邻氨基苯酸1~3份、三聚磷酸钠2~4份。
6.根据权利要求1所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述的Tris-Hcl缓冲液pH值为8.6~8.9，浓度为1.3~1.6mol/L。
7.根据权利要求1所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述步骤3中离心机转速为3000~4000r/min，离心时间10~20min。
8.根据权利要求1所述提高印度辣木籽脱脂率的方法，其特征在于：所述步骤1中内子在去离子水中浸泡30~50min取出后置于干燥器内干燥。
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