CN106616409A - 一种畜禽骨骼营养成分的提取方法 - Google Patents
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Classifications
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Abstract
本发明公开了一种畜禽骨骼营养成分的提取方法。本发明提取方法包括以下步骤：(1)使畜禽骨头进行粉碎；(2)将经所述粉碎的畜禽骨头以水煎煮，得到煎煮液；(3)从所述煎煮液加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；(4)将所述酶解液中双极膜电渗析，得到含有营养成分的骨液。本发明畜禽骨骼营养成分的提取方法，包括双极膜电渗析，可以去除杂质阴离子等，提高钙离子在骨液中的稳定性；另外，在酶解和双极膜电渗析之间包括陶瓷膜，能除去胶体杂质和脂肪，由此使得本发明的提取方法钙溶出率高，含氮含量较高。
Description
技术领域
本发明涉及骨头处理的技术领域，具体而言，涉及畜禽骨骼营养成分的提取方法。
背景技术
随着人们对畜禽骨骼的深入研究，对骨头的营养价值也有了更深层的认识。骨骼约占动物体重的2～30％，主要为蛋白质、脂肪和矿物质等，是营养价值非常高的的肉类加工副产品。我国用脊椎动物骨骼作为药用的历史悠久、民间也有以骨补骨的说法。鲜骨所含营养物质非常丰富，其蛋白质和脂肪含量与肉类相似。骨骼中的蛋白质90％为胶原、骨胶原及软骨素，有加强皮层细胞代谢和防止衰老的作用。骨中含有构成蛋白质的所有氨基酸，且比例均衡、必需氨基酸水平高，属于优质蛋白。鲜骨中还含有大量的钙磷盐、生物活性物质、镁、钠、铁、锌、钾、氟盐、柠檬酸盐和VA、VD、VB1、VB2、VB12等，骨髓中有大脑不可缺少的磷脂质、磷蛋白等。骨骼中钙含量高，占比为19.3％。可见，骨头是一种很好的营养源，是一种优良的钙源。骨头中的营养成分与人体骨骼相似，如何能有效提取其钙等矿物质及其它营养成份用于制成可溶性的、易于吸收、利用补钙类功能食品及药品具有广阔的应用前景。
骨头提取物中含有多肽、氨基酸及其钙质，通过膜过滤除去提取物中影响钙与氨基酸或小分子多肽物质，促使钙与氨基酸或小分子多肽络合。制成第三类氨基酸螯合钙制剂。
现有技术中，畜禽骨骼营养成分的中提取方法钙溶出率低，杂质离子干扰严重，导致钙离子容易沉淀不利于人体吸收，水解不完全，含氮含量低。
发明内容
有鉴于此，本发明一方面在于提供一种畜禽骨骼营养成分的提取方法，该提取方法钙溶出率较高，杂质离子含量较低。
一种畜禽骨骼营养成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)使畜禽骨头进行粉碎；
(2)将经所述粉碎的畜禽骨头以水煎煮，得到煎煮液；
(3)从所述煎煮液加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；
(4)将所述酶解液中双极膜电渗析，得到含有营养成分的骨液。
进一步地，所述粉碎之前还包括蒸煮，所述蒸煮的温度为100～120℃，蒸煮的时间为2～6h。
进一步地，所述粉碎的具体为，先进行破碎至粒度不大于1cm，而后加入0.5～1.5倍质量于畜禽骨头的水研磨1～3h。
进一步地，所述煎煮的次数为1～3次，每次煎煮的时间为1～3h。
进一步地，所述酶解包括先使用胃蛋白酶进行酶解和而后使用胰蛋白酶进行酶解。
进一步地，所述蛋白酶进行酶解的pH为1～4，其酶解的温度为34～40℃，其酶解的时间为12～72h，所述胃蛋白酶的用量为底物质量的0.1～1％。
进一步地，所述胰蛋白酶进行酶解的pH为7～8，其酶解的温度为35～40℃，其酶解的时间为4～8h，所述胰蛋白酶的用量为底物质量的0.01～1％。
进一步地，所述双极膜电渗析的膜的有效面积为6.5～7.5m2，电流密度为30～60mA/cm2，流速为18～25L/h。
进一步地，所述步骤(3)之后且步骤(4)之前还包括使用陶瓷膜过滤，滤膜的孔径为0.05～0.45微米，流量为10～20L/h。
进一步地，所述步骤(3)之后且步骤(4)之前还包括将酶解液煮沸30～90min进行灭活。
本发明畜禽骨骼营养成分的提取方法，包括双极膜电渗析，可以去除杂质阴离子等，提高钙离子在骨液中的稳定性；另外，在酶解和双极膜电渗析之间包括陶瓷膜，能除去胶体杂质和脂肪，由此使得本发明的提取方法钙溶出率高，含氮含量较高。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面合实施例来进一步说明本发明的技术方案。
如本文所用，术语：
“一个”、“一种”和“所述”可交换使用并指一个或多个。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；
另外，本文中由端点表述的范围包括该范围内所包含的所有数值(例如，1至10包括1.4、1.9、2.33、5.75、9.98等)。
另外，本文中“至少一个”的表述包括一个及以上的所有数目(例如，至少2个、至少4个、至少6个、至少8个、至少10个、至少25个、至少50个、至少100个等)。
一种畜禽骨骼营养成分的提取方法，包括以下步骤：
(1)使畜禽骨头进行粉碎；
(2)将经所述粉碎的畜禽骨头以水煎煮，得到煎煮液；
(3)从所述煎煮液加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；
(4)将所述酶解液中双极膜电渗析，得到含有营养成分的骨液。
本发明的提取方法所适用于对畜禽骨骼，这里畜禽骨骼可以列举出牛骨、鸡骨和猪骨等。骨骼的部位可以为锁骨、肩胛骨、头骨等。
上述步骤(1)中，术语“粉碎”是破碎和粉末的统称，是指利用机械的方法使固体物料由大块分裂成小块直至细分的操作。
可列出一种粉碎的具体方式，例如可先破碎至粒度不大于1cm，例如，0.5cm、0.2cm、0.05cm等，而后加入0.5～1.5倍质量于畜禽骨头的水研磨1～3h，例如水的用量可以为0.5倍、1倍、1.5倍等，研磨的时间为1h、1.5h、2h、2.5h或3h等。破碎的设备可采用破碎机或绞肉机等，破碎的目的是进行粗步的粉碎。研磨的设备可采用胶磨机，其目的是进行更细化的粉碎。水的加入目的是能够使得研磨形成骨泥，同时也利于一些少量营养大分子物质的溶出。
为了提高研磨的效果，可以在粉碎的步骤之前还包括蒸煮。蒸煮的时间和温度以蒸煮后骨头变酥为准。例如，蒸煮的温度以100～120℃为宜，例如蒸煮的温度可以为100℃、102℃、105℃、110℃、115℃、118℃、119℃或120℃等。于此蒸煮温度的范围内，蒸煮的时间可以参考性地为2～6h，例如2h、2.5h、3h、4h、5h、5.5h或6h等。
上述步骤(2)中，煎煮可在常温常压下进行。煎煮的次数和时间以煎煮所得到的煎煮液中钙溶出率(％)≥1.5％且含氮量≥3.5mg/ml为准。此处，钙溶出率的计算方法为：钙溶出率＝溶液中钙含量*100/骨骼中总钙含量。可参考性地，煎煮的次数为1～3次，如1次、2次、3次等，优选为3次；每次煎煮的时间为1～3h，如1h、1.5h、2h、2.5h、3h等，优选为2h。至于煎煮中水的用量可根据实际情况选择，例如水的用量为研磨所形成骨泥质量的2～6倍，如2倍、、2.5倍、3倍、4倍、5倍、5.5倍、6倍等，优选为2倍水。
上述步骤(3)中，蛋白酶可以为胃蛋白酶、胰蛋白酶等或者其它公知的蛋白酶，优选为胃蛋白酶和胰蛋白酶。具体地，可先采用胃蛋白酶进行酶解，而后使用胰蛋白酶进行酶解。这样能够提高钙溶出率，增加氮含量。
上述胃蛋白酶进行酶解的工艺参数以酶解所得到的酶解液的钙溶出率(％)≥2.5％和含氮量≥5.0mg/ml为准，优选为钙溶出率(％)为3.5％和含氮量为6.0mg/ml。可参考性的，胃蛋白酶进行酶解的pH较好地为1～4，如pH为1、1.2、1.5、2、3、3.5、3.8或4等。这里调节pH可以为酸液，酸液可列举出盐酸，或有机酸(如乳酸、醋酸、苹果酸中的一种或数种)与盐酸混合酸溶液，例如盐酸、乳酸、柠檬酸可以按照摩尔比6～8:15～20:1进行复配。其酶解的温度较好地为34～40℃，如34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃等，优选为37℃。其酶解的时间为12～72h，如12h、13h、15h、20h、24h、30h、36h、42h、48h、60h、66h、70h或72h等，优选为48h。胃蛋白酶的用量为底物质量的0.1～1％，如0.1％、0.15％、0.2％、0.5％、0.55％、0.6％、0.8％、0.9％、1％等，优选为0.5％等。可以理解的是，这里底物是指煎煮液。
上述胰蛋白酶进行酶解的工艺参数以酶解所得到的酶解液的钙溶出率(％)为4％和含氮量为8.0mg/ml为准。可参考性地，胰蛋白酶进行酶解的pH较佳地为7～8，如7、7.2、7.5、7.8或8等，优选为7.5。此处，将上述胃蛋白酶进行酶解所得到的酶解液的酸性可使用常规对的碱调节至碱性，如氢氧化钠、氢氧化钾等。其酶解的温度较佳地为35～40℃，例如、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃等，优选为37℃。其酶解的时间较佳地为4～8h，如4h、4.25h、4.5h、5h、6h、7h、7.5h、7.75h、8h等，优选为8h。胃蛋白酶的用量较佳地为底物质量的0.01～1％，如0.01％、0.02％、0.03％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、0.55％、0.6％、0.8％、0.9％、1％等，优选为0.02％等。这里底物是指胰蛋白酶进行酶解所得到的酶解液。
上述步骤(4)中，双极膜电渗析是将双极膜与单极膜按照不同的方式组合形成的电渗析，双极膜电渗析的双极膜可将水离解，在膜两侧分别得到氢离子和氢氧根离子。这里，电渗析工作原理是在外加电场作用下，利用阳阴离子交换膜的选择透过性，使一部分离子透过离子交换膜从一个室迁移到另一个室，从而使一部分水淡化，一部分水浓缩。阳膜由带负电荷的酸性活性基团的阳离子交换树脂构成，能选择性地使阳离子透过，阴离子不能透过；阴膜由带正电荷的碱性活性基团的阴离子交换树脂构成，能选择性地使阴离子透过，阳离子不能透过。由于与离子交换膜所带电荷相反的离子能穿过膜，(称为反离子迁移)使一部分水淡化，一部分水浓缩。
本发明中双极膜电渗析能加好地去除酶解液中的杂质的阴离子和阳离子。双极膜电渗析的相关工艺参数以钙离子溶出率≥2.5％，含氮含量为≥5.0mg/ml为准，可参考性地，双极膜电渗析的膜的有效面积为6.5～7.5m2，如6.5m2、7m2、7.07m2、7.2m2、7.4m2或7.5m2等，优选为7.07m2；电流密度为30～60mA/cm2，如30mA/cm2、32mA/cm2、35mA/cm2、40mA/cm2、50mA/cm2、55mA/cm2、58mA/cm2或60mA/cm2，优选为50mA/cm2；流速为18～25L/h，如18L/h、19L/h、20L/h、22L/h、24L/h、25L/h，优选为24L/h。
上述步骤(3)之后且步骤(4)之前还包括使用陶瓷膜过滤，这样可除去煎煮液中的固体、胶体杂质和脂肪。陶瓷膜过滤的设备可采用钛型陶瓷膜过滤机。在陶瓷膜过滤为钛型陶瓷膜过滤机的前提下，滤膜的孔径较佳地为0.05～0.45微米，如0.05微米、0.20微米、0.22微米、0.45微米等，优选为0.20微米。流量较好地为10～20L/h，如10L/h、11L/h、13L/h、15L/h、18L/h、19L/h、20L/h等。至于，钛型陶瓷膜过滤机的泵功率可以为10Kw等。
上述步骤(3)之后且步骤(4)之前还包括将酶解液煮沸30～90min进行灭活。例如，煮沸的时间可以为30min、31min、32min、35min、40min、45min、50min、60min、70min、80min、85min、88min或90min。灭活的温度可以采用为常压下或者加压。当然，灭活还可采用其它公知的形式，如紫外线灭活等。
以上未述及之处适用于现有技术。
实施例1
步骤一、清洗。将鲜猪骨清洗，剔除变色、变质及附着于骨上的肉质。
步骤二、高温蒸煮：将鲜骨放置在蒸煮锅中直接蒸汽，100℃，蒸煮6小时，直至骨头变酥，易于研磨。
步骤三、粉碎。用破碎机或绞肉机将蒸煮后的骨头绞碎成直径不大于1cm的颗粒或骨片。然后在骨粒中加0.5倍量水，研磨1h，用胶磨机将骨粒研磨至骨泥。
步骤四、煎煮。骨泥加2倍量水，煎煮2次，每次3小时，以钙溶出率(％)1.8％、含氮量3.8mg/ml，得到煎煮液。
步骤五、在上述煎煮液中加入酸液，调pH值约为1。用盐酸或有机酸(如乳酸、醋酸、苹果酸中的一种或数种)与盐酸混合酸溶液。后加入胃蛋白酶0.11％，酶解时间12小时。以猪骨头中钙溶出率(％)3.5％和含氮量6.0mg/ml为指标。
步骤六、用碱调pH值至7.0。加胰酶1％，35℃酶解8小时。
步骤七、酶解后的骨液煮沸30分钟灭活。
步骤八、采用钛型陶瓷膜过滤机过滤，除去煎煮液中的固体、胶体杂质和脂肪。钛型陶瓷膜过滤机参数：滤膜:0.05微米，泵功率：10Kw,流量10L/h。
步骤九、骨液采用双极膜电渗析过滤，膜的有效面积(m2)：7.07；电流密度(mA/cm2)：30；流速：18L/h，骨液中钙离子溶出率3.5％，含氮含量为6mg/ml。
实施例2
步骤一、清洗。将鲜猪骨清洗，剔除变色、变质及附着于骨上的肉质。
步骤二、高温蒸煮：将鲜骨放置在蒸煮锅中直接蒸汽，120℃，蒸煮2小时，直至骨头变酥，易于研磨。
步骤三、粉碎。用破碎机或绞肉机将蒸煮后的骨头绞碎成直径不大于1cm的颗粒或骨片。然后在骨粒中加1.5倍量水，研磨3h，用胶磨机将骨粒研磨至骨泥。
步骤四、煎煮。骨泥加6倍量水，煎煮1次，每次1小时，以钙溶出率(％)1.7％、含氮量3.8mg/ml，得到煎煮液。。
步骤五、在上述煎煮液中加入酸液，调pH值约为4。用盐酸或有机酸(如乳酸、醋酸、苹果酸中的一种或数种)与盐酸混合酸溶液。后加入胃蛋白酶1％，，酶解时间72小时。以猪骨头中钙溶出率(％)3％和含氮量6.0mg/ml为指标。
步骤六、用碱调pH值至8.0。加胰酶1％，40℃酶解8小时，酶解后骨液中钙离子溶出率为4.0％，含氮含量为为7.0mg/ml。
步骤七、酶解后的骨液煮沸90分钟灭活。
步骤八、采用钛型陶瓷膜过滤机过滤，除去煎煮液中的固体、胶体杂质和脂肪。钛型陶瓷膜过滤机参数：滤膜:0.45微米，泵功率：10Kw,流量20L/h。
步骤九、骨液采用双极膜电渗析过滤，膜的有效面积(m2)：7.07；电流密度(mA/cm2)：30；流速：18L/h，骨液中钙离子溶出率4.0％，含氮含量为7.0mg/ml。
实施例3
步骤一、清洗。将鲜猪骨清洗，剔除变色、变质及附着于骨上的肉质。
步骤二、高温蒸煮：将鲜骨放置在蒸煮锅中直接蒸汽，120℃，蒸煮6小时，直至骨头变酥，易于研磨。
步骤三、粉碎。用破碎机或绞肉机将蒸煮后的骨头绞碎成直径不大于1cm的颗粒或骨片。然后在骨粒中加1倍量水，研磨2h，用胶磨机将骨粒研磨至骨泥。
步骤四、煎煮。骨泥加2～6倍量水，煎煮3次，每次2小时，以钙溶出率(％)1.8％、含氮量4mg/ml，得到煎煮液。
步骤五、在上述煎煮液中加入酸液，调pH值约为2.5。用盐酸或有机酸(如乳酸、醋酸、苹果酸中的一种或数种)与盐酸混合酸溶液。后加入胃蛋白酶0.5％，，酶解时间48小时。以猪骨头中钙溶出率(％)3％和含氮量6mg/ml为指标。
步骤六、用碱调pH值至7.5。加胰酶0.05％，37℃酶解6小时，酶解后骨液中钙离子溶出率为3.0％，含氮含量为为6mg/ml。
步骤七、酶解后的骨液煮沸60分钟灭活。
步骤八、采用钛型陶瓷膜过滤机过滤，除去煎煮液中的固体、胶体杂质和脂肪。钛型陶瓷膜过滤机参数：滤膜:0.22微米，泵功率：10Kw,流量15L/h。
步骤九、骨液采用双极膜电渗析过滤，膜的有效面积(m2)：7.07；电流密度(mA/cm2)：45；流速：21L/h，骨液中钙离子溶出率3％，含氮含量为6mg/ml。
实施例4
步骤一、清洗。将鲜猪骨清洗，剔除变色、变质及附着于骨上的肉质。
步骤二、高温蒸煮：将鲜骨放置在蒸煮锅中直接蒸汽，110℃，蒸煮4小时，直至骨头变酥，易于研磨。
步骤三、粉碎。用破碎机或绞肉机将蒸煮后的骨头绞碎成直径不大于1cm的颗粒或骨片。然后在骨粒中加1倍量水，研磨2h，用胶磨机将骨粒研磨至骨泥。
步骤四、煎煮。骨泥加4倍量水，煎煮3次，每次2小时，以钙溶出率(％)1.6％、含氮量3.8mg/ml，得到煎煮液。
步骤五、在上述煎煮液中加入酸液，调pH值约为2.5。用盐酸或有机酸(如乳酸、醋酸、苹果酸中的一种或数种)与盐酸混合酸溶液。后加入胃蛋白酶0.5％，，酶解时间48小时。以猪骨头中钙溶出率(％)2.8％和含氮量6.0mg/ml为指标。
步骤六、用碱调pH值至7.5。加胰酶0.02％，37℃酶解6小时。酶解后骨液中钙离子溶出率为4.0％，含氮含量为为8.0mg/ml。
步骤七、酶解后的骨液煮沸60分钟灭活。
步骤八、采用钛型陶瓷膜过滤机过滤，除去煎煮液中的固体、胶体杂质和脂肪。钛型陶瓷膜过滤机参数：滤膜:0.2微米，泵功率：10Kw,流量15L/h。
步骤九、骨液采用双极膜电渗析过滤，膜的有效面积(m2)：7.07；电流密度(mA/cm2)：45；流速：21L/h，骨液中钙离子溶出率3％，含氮含量为6mg/ml。
实施例5
步骤一、清洗。将鲜猪骨清洗，剔除变色、变质及附着于骨上的肉质。
步骤二、高温蒸煮：将鲜骨放置在蒸煮锅中直接蒸汽，110℃，蒸煮5小时，直至骨头变酥，易于研磨。
步骤三、粉碎。用破碎机或绞肉机将蒸煮后的骨头绞碎成直径不大于1cm的颗粒或骨片。然后在骨粒中加1倍量水，研磨3h，用胶磨机将骨粒研磨至骨泥。
步骤四、煎煮。骨泥加2倍量水，煎煮3次，每次2小时，以钙溶出率(％)为1.8％、含氮量4mg/ml，得到煎煮液。钙溶出率(％)为1.8％、含氮量4.0mg/ml。
步骤五、在上述煎煮液中加入酸液，调pH值约为2.5。用盐酸或有机酸(如乳酸、醋酸、苹果酸中的一种或数种)与盐酸混合酸溶液。后加入胃蛋白酶0.5％，，酶解时间48小时。以猪骨头中钙溶出率(％)3.5％和含氮量6mg/ml为指标。
步骤六、用碱调pH值至7.5。加胰酶0.02，37℃酶解6小时。酶解后骨液中钙离子溶出率为4.0％，含氮含量为为8.0mg/ml。
步骤七、酶解后的骨液煮沸60分钟灭活。
步骤八、采用钛型陶瓷膜过滤机过滤，除去煎煮液中的固体、胶体杂质和脂肪。钛型陶瓷膜过滤机参数：滤膜:0.2微米，泵功率：10Kw,流量15L/h。
步骤九、骨液采用双极膜电渗析过滤，膜的有效面积(m2)：7.07；电流密度(mA/cm2)：50；流速：24L/h，骨液中钙离子溶出率为4.0％，含氮含量为为8.0mg/ml。
本发明的提取方法采用仿生法进行动物骨骼营养成分提取方法。首先，采用高温蒸汽蒸煮可以减少高温水解的费时费力，更便于研磨；其次采用胶磨机进行研磨，粒度小，可以使后续酸化更加彻底、酶与底物接触更加充分，酶解效率更高；第三，骨渣酸化液采用胃蛋白酶与胰酶双酶解，能够提高钙溶出率，增加氮含量(与原基础比较)；第四，采用钛陶瓷膜过滤机与双极膜电渗析过滤可以去除脂质、杂质阴离子、大分子等，提高钙离子在骨液中的稳定性，还可以提高骨液产品品质。
由于本发明中所涉及的各工艺参数的数值范围在上述实施例中不可能全部体现，但本领域的技术人员完全可以想象到只要落入上述该数值范围内的任何数值均可实施本发明，当然也包括若干项数值范围内具体值的任意组合。此处，出于篇幅的考虑，省略了给出某一项或多项数值范围内具体值的实施例，此不应当视为本发明的技术方案的公开不充分。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式选择等，落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种畜禽骨骼营养成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)使畜禽骨头进行粉碎；
(2)将经所述粉碎的畜禽骨头以水煎煮，得到煎煮液；
(3)从所述煎煮液加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；
(4)将所述酶解液中双极膜电渗析，得到含有营养成分的骨液。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述粉碎之前还包括蒸煮，所述蒸煮的温度为100～120℃，蒸煮的时间为2～6h。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述粉碎的具体为，先进行破碎至粒度不大于1cm，而后加入0.5～1.5倍质量于畜禽骨头的水研磨1～3h。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述煎煮的次数为1～3次，每次煎煮的时间为1～3h。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述酶解包括先使用胃蛋白酶进行酶解和而后使用胰蛋白酶进行酶解。
6.根据如权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述胃蛋白酶进行酶解的pH为1～4，其酶解的温度为34～40℃，其酶解的时间为12～72h，所述胃蛋白酶的用量为底物质量的0.1～1％。
7.根据如权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述胰蛋白酶进行酶解的pH为7～8，其酶解的温度为35～40℃，其酶解的时间为4～8h，所述胰蛋白酶的用量为底物质量的0.01～1％。
8.根据如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述双极膜电渗析的膜的有效面积为6.5～7.5m2，电流密度为30～60mA/cm2，流速为18～25L/h。
9.根据如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)之后且步骤(4)之前还包括使用陶瓷膜过滤，滤膜的孔径为0.05～0.45微米，流量为10～20L/h。
10.根据如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)之后且步骤(4)之前还包括将酶解液煮沸30～90min进行灭活。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170510 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |