CN106609267A - 黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用。本发明通过构建黄瓜CsTTG1基因的过表达载体和干扰载体，并将其转入黄瓜中，证明CsTTG1基因的过量表达可引起黄瓜果实上果刺的大量增加，果刺细胞数目的变化，单个果刺的性状也会发生变化，且可使黄瓜中果瘤相关基因CsTu的表达量显著提高。而干扰CsTTG1基因的表达可引起黄瓜果实上果刺数目的减少。本发明首次验证了黄瓜CsTTG1基因的功能，对于黄瓜品质的改良具有重要作用。

Description

黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体地说，涉及黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用。

背景技术

黄瓜(cucumis sativus L.)是葫芦科(Cucurbitaceae)黄瓜属(cucumis)一年蔓生的草本植物。黄瓜具有产量高、效益好等特点，是世界十大重要的蔬菜作物之一，也是我国主栽蔬菜作物之一，占全国蔬菜面积的10％左右。品质育种在黄瓜育种工作中具有非常重要的地位，其中黄瓜刺瘤是影响其外观商品品质的重要指标之一。我国的华北类型黄瓜果实上的果瘤和果刺大且数目多，华南类型黄瓜果瘤和果刺大数目较少，欧洲温室类型黄瓜无果瘤，且果刺小而且少，被称为“水果”黄瓜，其市场价格为普通黄瓜的2-3倍。外观光滑的黄瓜污染少，清洗方便，食用卫生，是无公害蔬菜的理想品种。经检测表明：无瘤少刺黄瓜果肉农药残留量比有瘤多刺的黄瓜低27％左右，果皮农药残留量低18％左右。而我国目前黄瓜市场占主导地位的品种多为密刺型，无刺瘤类型的黄瓜品种资源短缺。

表皮毛是大多数植物地上部分表皮组织所特有的一种特化结构，它由表皮细胞发育而来，形态多样，有丝状、螺状、鳞片状、盾状、分枝状、头状、块状等。按不同的分类方法，可分为单细胞和多细胞的表皮毛，有分支和无分支的表皮毛，有腺体和无腺体的表皮毛，植物表皮毛具有一系列功能，如抵御UV的伤害，应对干旱胁迫，降低辐射热，保护植物免受毒素、草食动物、昆虫和病原菌的侵害等。通过组织学观察发现，黄瓜的表皮毛为多细胞、有腺体或无腺体表皮毛，果实上的果刺与叶片上的表皮毛在形态结构上类似，均是由杆和基座两部分构成的多细胞无腺体的表皮毛。

模式植物拟南芥的表皮毛是由单个表皮原细胞发育而成的单细胞无腺体表皮毛；在植物表面这种由表皮细胞到表皮毛的分化不是随机发生的，有着严格的调控模式；拟南芥的许多与表皮毛分化相关的突变体的其他性状并不发生变化。目前，拟南芥表皮毛的发生已经成为研究细胞形态建成的模式系统。拟南芥叶片表皮毛的发育是一个在时空上受到严格调控的过程,其发育涉及多个基因的参与。拟南芥表皮毛发育的正调控因子包括3类蛋白：由TRANSPARENT TESTAGLABRA1(TTG1)基因编码的WD40类蛋白，由GLABRA1(GL1)、MYB23和MYB5编码的R2R3 MYB类转录因子以及由GLABRA3(GL3)和ENHANCER OF GLABRA3(EGL3)编码的bHLH蛋白。这3类蛋白组成一个三聚体复合物，决定表皮毛发育的起始。反向调控因子为由6个功能冗余的家族基因编码的R3MYB类转录因子，这些基因包括CAPRICE(CPC)、TRIPTYCHON(TRY)、ENHANCER OF TRY AND CPC 1(ETC1)、ETC2、ETC3和TRICHOMELESS1(TCL1)。

前期研究表明，拟南芥表皮毛起始发育模式的核心是TTG1和GL1分别与GL3/EGL3结合，形成一个GL1-GL3/EGL3-TTG1蛋白复合体驱动下游基因GL2的表达，使表皮细胞分化成为表皮毛。当TTG1发生突变时，ttg1突变体表现为一种植株表面光滑无毛的表型。这表明TTG1在拟南芥表皮毛的启动中发挥着重要作用。

黄瓜、烟草、矮牵牛和番茄的表皮毛是多细胞的，而拟南芥表皮毛是单细胞的。前期研究发现，黄瓜TTG1基因可以互补拟南芥ttg1突变体的表型；棉花TRY基因可以抑制烟草叶片表皮毛的发育；拟南芥GL1基因的过表达并不影响烟草表皮毛的形成；玉米中的R-like bHLH基因与玉米表皮毛的形成无关，它的过表达却可以使拟南芥的叶和茎上的表皮毛数量增加，但对烟草、矮牵牛和番茄表皮毛的形成却没有影响。这些研究结果说明单细胞和多细胞表皮毛的形成机制有着相似之处，但又不尽相同。与单细胞表皮毛相比，多细形成机制可能更为复杂，还需要在更多的其它植物种类上研究分析表皮毛形成的机制。

目前有关黄瓜果刺发育的相关基因及其应用研究的还很少，已报道的基因功能都不够专一，不仅影响黄瓜刺瘤的发育，且影响黄瓜植株地上所有器官表面的表皮毛的形成，往往也影响了植株的抗性，而特异性影响黄瓜果实上表皮毛的起始和发育的基因尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用，其中所述黄瓜CsTTG1基因的核苷酸序列为：

i)Seq ID No.1所示的核苷酸序列；

ii)在严格条件下与Seq ID No.1所示序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；或

iii)与i)或ii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；

所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

前述的应用，所述植物为双子叶植物。优选地，所述双子叶植物为黄瓜。

前述的应用包括将黄瓜CsTTG1基因转入目的植物中，得到与所述目的植物相比，表皮毛、果刺及刺瘤发育发生变化的转基因植物。

前述应用具体为：在目的植物中过表达所述黄瓜CsTTG1基因，使转基因植物的表皮毛、果刺及刺瘤数目增加。

优选地，过表达使用的表达载体为pCAMBIA1305.1。将黄瓜CsTTG1基因插入载体pCAMBIA1305.1的多克隆位点间，即得重组过表达载体CsTTG1-pCAMBIA1305.1。

所述果刺发育发生变化体现为与目的植物相比，含有重组过表达载体CsTTG1-pCAMBIA1305.1的转基因黄瓜果实上的果刺和有腺体表皮毛的数目明显增加，果刺杆的长度明显变长，杆的细胞组成个数明显增多，且杆上单个细胞的平均长度也明显增加，另外，果刺的基座明显变大，果瘤也发生了明显的变化。实验证明CsTTG1基因的过量表达可引起黄瓜果刺的大量增加，单个果刺的性状也会发生变化，且可使黄瓜中果瘤相关基因CsTU的表达量显著提高。

本发明还提供黄瓜CsTTG1基因在黄瓜品质改良中的应用。

前述的应用包括利用基因工程的方法，通过干扰或沉默黄瓜CsTTG1基因的表达，或者从黄瓜中敲除黄瓜CsTTG1基因，从而获得果刺数目减少或无刺型黄瓜。

前述应用具体为：通过构建特异性靶向黄瓜CsTTG1基因的重组干扰表达载体，并采用农杆菌介导的方法，将构建的重组干扰表达载体转入黄瓜中，获得品质改良的转基因黄瓜。

优选地，所述重组干扰表达载体的出发载体为pFGC1008。

更优选地，所述重组干扰表达载体的构建方法如下：

将黄瓜CsTTG1基因如Seq ID No.3所示DNA片段作为干扰片段，设计一对引物F和R，在引物上分别加上不同的酶切位点扩增正义片段和反义片段，正义片段两端引入酶切位点SpeI和BamHI，反义片段两端引入酶切位点AscI和SwaI，然后将正、反义片段分别连接到载体pFGC1008的GUS两端，即构建获得重组干扰表达载体CsTTG1-pFGC1008。含有重组干扰表达载体CsTTG1-pFGC1008的转基因植物果实上果刺呈现一种片状不均匀减少的现象。

引物F和R序列如下：

F：5’-TCTTGGCGACCTACGAATC-3’

R：5’-GCTGTTGTTGAGGAGGGAGA-3’

本发明通过构建黄瓜CsTTG1基因的过表达载体和干扰载体，并将其转入黄瓜中，证明CsTTG1基因的过量表达可引起黄瓜果实上果刺的大量增加以及果刺细胞数目的变化，而干扰CsTTG1基因的表达可引起黄瓜果实上果刺数目的减少。这表明黄瓜CsTTG1基因与拟南芥TTG1基因存在一定的功能冗余性，在黄瓜上具有其功能的特异性，表现为其表达量的变化仅影响果实上表皮毛的起始，对黄瓜植株地上其他部位表皮毛的发生均不发生作用；其表达量的变化既改变了果刺的密度，也改变了果刺的细胞个数和单个细胞的大小。本发明首次验证了黄瓜CsTTG1基因的功能，对于黄瓜品质的改良具有重要作用。

附图说明

图1为本发明实施例2中黄瓜过表达转基因黄瓜株系鉴定及其表型观察结果。

图2为本发明实施例2中黄瓜过表达转基因株系单个果刺杆长度、杆单个细胞平均长度和基座大小的统计结果。

图3为本发明实施例2中干扰表达转基因黄瓜株系鉴定及其表型观察结果。

图4为本发明实施例2中黄瓜果刺相关基因CsTTG1正调控果瘤相关基因CsTu的表达量。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular cloning:a laboratory manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1黄瓜CsTTG1基因的克隆

1.1材料

以黄瓜3407、黄瓜3413(由中国农业大学农学与生物技术学院提供)为试材，黄瓜3407表皮毛明显、刺瘤密集，而黄瓜3413表皮毛稀少、刺瘤不明显。将黄瓜种子播于日光温室中，进行普通的栽培管理，待植株开始结瓜时，取雌花芽液氮速冻，存于-80℃冰箱保存，备用。

1.2总RNA的提取与cDNA合成

1.2.1总RNA的提取

采用柱式植物RNAout试剂盒(购自北京天恩泽基因科技有限公司，产品目录号为71203)提取黄瓜果实的总RNA，并用DNase去除RNA样品中残留的DNA。步骤如下：

(1)在研钵中加入约200mg黄瓜果实，加入液氮研磨至粉末状。将研磨物转移至干净无RNA酶的1.5ml塑料离心管，加入1ml细胞裂解液(试剂盒自带)，充分振荡混匀。

(2)在离心管中加入300μl的去蛋白液(试剂盒自带)和200μl自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。室温12000rpm离心3-5min，两相间有约5-10mm厚的细胞破碎物。

(3)将上清液(约600μl)转移到另一干净的1.5ml塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。加入等体积的漂洗液，充分颠倒混匀。将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。

(4)将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。

(5)加700μl通用洗柱液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。加300μl通用洗柱液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。12000rpm室温离心1min。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。往吸附柱的中央加入50μl DNAase反应液，室温静置10-15min，加入500μl通用洗柱液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。12000rpm室温离心1min。

(6)将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50μl RNA洗脱液，室温放置1-2min。12000rpm室温离心1min，离心管中溶液即为RNA样品，存放于-80℃待用。

1.2.2cDNA第一链的合成

以1μg黄瓜果实RNA为模板，利用RTase合成cDNA第一链。反转录操作参照试剂盒说明进行[试剂盒名称：1st Strand cDNA Synthesis Kit(50次量)；北京六合通经贸有限公司；产品目录号：D6110A]。

cDNA第一链合成后于-20℃保存备用。

1.3黄瓜CsTTG1基因的克隆

对黄瓜的一对野生型和突变体材料进行转录组测序，根据测序结果的分析和基因的注释，选择其中的一个候选基因进行研究，暂命名为CsTTG1基因，根据CsTTG1的基因ID(Csa4G097650)在黄瓜基因组数据库(http://cucumber.genomics.org.cn/page/cucumber/index.jsp)中找到该基因的CDS序列，根据其CDS全长序列设计引物：

正向引物：5’-ATGGAACACGCAGCCTCCAG-3’(Seq ID No.5)

反向引物：5’-TCAAACTTTCAAAAGCTGCATTTTG-3’(Seq IDNo.6)

以cDNA为模板，利用上述正、反向引物，通过PCR扩增获得黄瓜CsTTG1基因。黄瓜CsTTG1基因的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如Seq ID No.2所示。

PCR扩增反应体系：5×Prime STAR Buffer(Mg²⁺plus)10.0μL，dNTP Mixture(各2.5mM)4.0μL，正向引物(10μM)1.0μL，反向引物(10μM)1.0μL，模板cDNA 2.0μL，Prime STAR HS DNA聚合酶(2.5U/μl)0.5μL，无菌去离子水补足至总体积50.0μL。

PCR扩增程序：95℃预变性3min；95℃变性30sec，55℃复性30sec，72℃延伸80sec，35个循环；72℃延伸5min。

1.4载体构建

1.4.1重组过表达载体的构建

使用的表达载体为pCAMBIA1305.1，选用酶切位点为BgI II和SPe I。在目的基因的ORF区两端设计引物，并在引物(Seq ID No.5和6)5'端分别加上相应的酶切位点和保护碱基，以黄瓜cDNA为模板进行PCR扩增。

PCR扩增反应体系：5×Prime STAR Buffer(Mg²⁺plus)10.0μL，dNTP Mixture(各2.5mM)4.0μL，正向引物(10μM)1.0μL，反向引物(10μM)1.0μL，模板cDNA 2.0μL，Prime STAR HS DNA聚合酶(2.5U/μl)0.5μL，无菌去离子水补足至总体积50.0μL。

PCR扩增程序：95℃3min；95℃10sec，54℃30sec，72℃80sec，共30个循环；72℃5min。

回收PCR扩增产物，与载体pCAMBIA1305.1分别用特异的限制性内切酶酶切。凝胶回收酶切产物，然后用T4连接酶连接，转化大肠杆菌DH5α，PCR鉴定后的阳性菌液送深圳华大基因科技有限公司测序，测序正确则成功构建重组过表达载体，提取质粒(CsTTG1-pCAMBIA1305.1)备用。

1.4.2重组干扰表达载体的构建

将黄瓜CsTTG1基因如Seq ID No.3所示DNA片段作为干扰片段，设计一对引物F和R(Seq ID No.3和4)，在引物上分别加上不同的酶切位点PCR扩增正义片段和反义片段，正义片段两端引入酶切位点SpeI和BamHI，反义片段两端引入酶切位点AscI和SwaI，然后将正、反义片段分别连接到载体pFGC1008的GUS两端，转化大肠杆菌后，经PCR和测序鉴定获得构建成功的重组干扰表达载体。提取质粒(CsTTG1-pFGC1008)备用。

PCR扩增反应体系和程序同1.4.1中的描述。

实施例2转基因植物的获得及检测

2.1黄瓜的遗传转化

2.1.1重组表达载体转化农杆菌

将电转仪打开预热，同时预冷电转杯若干。将80μl的大肠杆菌感受态细胞C58置于冰上融化，分别加入1-2μl构建好的重组过表达载体CsTTG1-pCAMBIA1305.1和重组干扰表达载体CsTTG1-pFGC1008，以及两个重组载体的空载体(对照)，轻弹混匀，转移到电转杯的底部。将电转杯放在电转仪的座上，电击。快速加入1mL不含抗生素的液体YEB培养基至电转杯中，轻柔吹打悬浮细胞。将细胞吸出至Eppendorf管中，28℃缓慢振荡培养1h。吸取含有过表达重组质粒的菌液100μl加到含有卡那霉素和利福平的YEB固体培养基上，含有干扰重组质粒的菌液吸取100μl加到含有氯霉素和利福平的YEB固体培养基上，分别用无菌的弯头玻棒轻轻将细胞均匀涂开，室温放置待平板表面干燥后，用封口膜封好平板。倒置平板，28℃培养36-48hr。PCR鉴定筛选阳性菌，PCR鉴定所用的引物为：

重组过表达载体CsTTG1-pCAMBIA1305.1的PCR鉴定用引物见Seq ID No.5和6。

重组干扰表达载体CsTTG1-pFGC1008的PCR鉴定用引物见SeqID No.7和8。

结果分别获得了含有过表达空载体pCAMBIA1305.1、干扰空载体pFGC1008，以及构建成功的重组过表达载体CsTTG1-pCAMBIA1305.1和重组干扰表达载体CsTTG1-pFGC1008的阳性农杆菌。

2.1.2黄瓜转化

利用Wang等优化的农杆菌介导的黄瓜遗传转化技术，经外植体制备、农杆菌侵染和共培养、不定芽的诱导分化、不定芽的伸长和生根、再生植株的驯化、PCR鉴定等步骤获得转基因阳性植株。

2.2转基因黄瓜植株的表型检测

2.2.1荧光定量PCR检测

(1)对所有转基因黄瓜植株取雌花芽进行RNA提取及cDNA合成，同实施例1中的描述。

(2)荧光定量分析所用试剂盒为SYBR Premix Ex Taq(TaKara，DRR041S)，荧光定量PCR仪为ABI 7500，设计如下引物：

CsTTG1-F:5′-CTCCTCAACAACAGCAAAACCA-3′(Seq ID No.9)

CsTTG1-R:5′-CCCCAAGCAATGTCATAAACC-3′；(Seq ID No.10)

荧光定量PCR的反应体系为：

扩增程序为：95℃,30sec；95℃,5sec；60℃,40sec,40个循环。以UBI基因为内参，利用2^-△△Ct算法计算各基因表达量变化。

结果如图1E和图3B所示，共得到15个过表达CsTTG1基因的转基因黄瓜株系，10个干扰转基因黄瓜株系。

2.2.2过表达基因CsTTG1植株的表型检测

待上述转CsTTG1基因黄瓜植株、转空载体对照植株及野生型对照植株长至结果期时，取不同发育阶段的果实观察其表型，结果如图1所示：CsTTG1基因过表达的转基因株系黄瓜果实上的果刺的数量明显比转空载体的对照植株多，且果刺明显变长，基座也明显的变大(图1中A，B，C)。这种表型的变化与CsTTG1基因过表达的量曾正相关性，当CsTTG1基因在稀刺品种(3413)中过表达，使其表达量达到密刺品种(3407)中CsTTG1基因本身的表达量时，稀刺品种(3413)的过表达株系中果实上果刺的表型和密刺品种(3407)基本一致(图1中D和E)。

统计过表达转基因黄瓜株系ox-Line1、ox-Line2和ox-Line3中黄瓜开花当天果实上果刺杆的细胞个数，结果如表1所示。

表1 空载体对照与ox-Line1、2和3开花当天黄瓜果实上果刺杆细胞个数统计结果

此外，对ox-Line1、2和3三个过表达转基因株系开花当天黄瓜果实上单个果刺的杆长度和基座的大小进行了量化统计，结果如图2所示，过表达株系中果刺的杆变长，且基座变大。同时对其杆上单个细胞的平均长度进行了量化，杆上单个细胞的平均长度变长。

另外，当CsTTG1过量表达时，不仅果刺的表型发生变化，果瘤也会变大，对果瘤相关基因CsTu表达量进行分析，引物设计如下：

CsTU-F:5′-ATGAAGCTCGTCGGCATGAGTGGG-3′(Seq ID No.11)

CsTU-R:5′-TGGATTGCCACTGAGTTGCCTCTG-3′(Seq ID No.12)

荧光定量PCR的反应体系、程序和算法同2.2.1中的描述。结果如图4所示，结果显示黄瓜基因CsTTG1对果瘤发育相关基因CsTu具有正调控作用。这也间接证明了果刺的决定基因对果瘤的发育具有上位性的调控作用。

2.2.3干扰表达植株的表型检测

待上述转CsTTG1-pFGC1008黄瓜植株、转空载体对照植株及野生型对照植株植株长至结果期时，取不同发育阶段的果实观察其表型，结果如图3所示，干扰转基因植物果实上果刺呈现一种片状不均匀减少的现象。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

参考文献

Wang,H.,Sui,X.,Guo,J.,Wang,Z.,Cheng,J.,Ma,S.,Li,X.,&Zhang,Z.2014.Antisensesuppression of cucumber(Cucumis sativus L.)sucrose synthase 3(CsSUS3)reduces hypoxic stresstolerance.Plant,Cell and Environment,37(3):795-810.

Claims (10)

1.黄瓜CsTTG1基因在调控植物表皮毛、果刺及刺瘤发育中的应用，其特征在于，所述黄瓜CsTTG1基因的核苷酸序列为：

i)Seq ID No.1所示的核苷酸序列；

ii)在严格条件下与Seq ID No.1所示序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；或

iii)与i)或ii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；

所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物为双子叶植物，优选黄瓜。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，将黄瓜CsTTG1基因转入目的植物中，得到与所述目的植物相比，表皮毛、果刺及刺瘤发育发生变化的转基因植物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在目的植物中过表达所述黄瓜CsTTG1基因，使转基因植物的表皮毛、果刺及刺瘤数目增加。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，过表达使用的表达载体为pCAMBIA1305.1。

6.黄瓜CsTTG1基因在黄瓜品质改良中的应用，其特征在于，所述黄瓜CsTTG1基因的核苷酸序列为：

i)Seq ID No.1所示的核苷酸序列；

ii)在严格条件下与Seq ID No.1所示序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；或

iii)与i)或ii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；

所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，利用基因工程的方法，通过干扰或沉默黄瓜CsTTG1基因的表达，或者从黄瓜中敲除黄瓜CsTTG1基因，从而获得果刺数目减少或无刺型黄瓜。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，通过构建特异性靶向黄瓜CsTTG1基因的重组干扰表达载体，并采用农杆菌介导的方法，将构建的重组干扰表达载体转入黄瓜中，获得品质改良的转基因黄瓜。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述重组干扰表达载体的出发载体为pFGC1008。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述重组干扰表达载体的构建方法如下：

将黄瓜CsTTG1基因如Seq ID No.3所示的DNA片段作为干扰片段，设计一对引物F和R，在引物上分别加上不同的酶切位点扩增正义片段和反义片段，正义片段两端引入酶切位点SpeI和BamHI，反义片段两端引入酶切位点AscI和SwaI，然后将正、反义片段分别连接到载体pFGC1008的GUS两端，即构建获得重组干扰表达载体；

引物F和R序列如下：

F：5’-TCTTGGCGACCTACGAATC-3’

R：5’-GCTGTTGTTGAGGAGGGAGA-3’。