CN113897452A

CN113897452A - 一种黄瓜果实亮绿、果刺瘤正常、无果霜的snp分子标记及其应用

Info

Publication number: CN113897452A
Application number: CN202111217711.0A
Authority: CN
Inventors: 刘兴旺; 任华中; 张亚琦; 高一铭; 翟许玲; 冯钟萱
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2021-10-19
Filing date: 2021-10-19
Publication date: 2022-01-07

Abstract

本发明公开一种黄瓜果实亮绿、果刺瘤正常、无果霜的SNP分子标记及其应用。本发明首次发现黄瓜果实颜色及果霜性状由单隐性核基因csfbc控制，所述csfbc为黄瓜基因组第三条染色体上12731768‑12734020碱基位置处的基因。与普通多果霜深绿色密刺黄瓜的csfbc基因相比，本发明所述突变体csfbc是指黄瓜基因组第三条染色体第12733267处的碱基由C突变为T。本发明提供的黄瓜突变体csfbc丰富了黄瓜品种资源，为黄瓜的遗传育种提供了理想的遗传资源；本发明所提供的果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜符合消费者购买习惯及消费偏好，为农民增收提供了有增值价值的优良品种。

Description

一种黄瓜果实亮绿、果刺瘤正常、无果霜的SNP分子标记及其应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，涉及植物果实外观品质及其选育方法，具体涉及一种黄瓜果实亮绿、果刺瘤正常、无果霜的SNP分子标记及其应用。

背景技术

黄瓜(cucumis sativus L.)从野生种到人们种植培育至少已经历了3000年并至今形成了不同的栽培变种。黄瓜是目前世界十大重要蔬菜作物之一。其以未成熟的果实为产品器官，主要用于鲜食。对生产者而言，市场是体现黄瓜增值的重要场所。一般而言，果霜的少或无及其表皮光亮是评价黄瓜果实优良品质的重要性状之一，也是影响消费者购买的主要因素。目前，市场上占主导地位的黄瓜品种包括华北和华南两大类型，尽管刺瘤的疏密和大小有所不同，但生产推广的品种的瓜条大都多具有果霜、表皮灰暗、光泽度较差，而欧洲温室类型的黄瓜品种则大多表皮几乎无或少果霜、色泽亮绿明艳，但由于果皮厚、质地松软等不符合市场消费习惯而难以满足品种需求。因此，果霜性状在某种程度上已成为目前决定某个黄瓜品种是否具有生产推广应用潜力的关键性状之一，选育少或无果霜的品种已成为近年来各地黄瓜育种的重要目标。

有学者将果霜称之为蜡粉，是指覆盖在黄瓜果实表皮外的一层灰白色霜状混合物质，包括含表皮细胞外的一层由亲脂性化合物构成的疏水层，如脂肪酸、烷烃、醛类等有机物及外面的以二氧化硅为主的无机化合物(刘兴旺，2020)。迄今关于黄瓜果霜的研究多集中在环境因素以及农艺嫁接对其形成的影响，而对果霜性状的遗传开展并不多，且多局限于目标基因的定位及分子标记开发，且研究结果之间存在较大差异。沈琼等(2012)研究认为黄瓜果霜的有无或多少由1对主效基因控制，有或多果霜表现为部分显性；田桂丽等(2015)则认为黄瓜果霜性状的遗传符合1对加性主基因+加性-显性多基因(D-2)模型。出现这种研究结论不统一的主要原因可能在于：(1)各个研究小组所采用的试验材料遗传背景不同，特别是绝对无果霜黄瓜种质材料几乎没有；(2)对果霜性状的田间调查标准难以把握，导致相互间研究结果的差异较大；(3)环境条件的影响加大了对果霜性状田间调查的难度，导致数据统计的准确性较差。

目前，已发现与黄瓜果霜相关的间接突变体主要有三类：第一类是黄瓜整株包括果实上表皮非常光亮，表皮毛完全缺失的tril/csgl3(Pang et al.,BMC Plant Biology,2015,Vol 15,pp 302)，第二类是整个植株存在肉眼不可见，但电镜下观察依然存在发育受阻的表皮毛，果实依然存在光亮，无果霜的tbh/csgl1/mict(Chen et al.,Journal ofExperimental Botany,2014,Vol 65,pp 4943-4958)，最后一类是仅在黄瓜的茎、叶片上存在较小的表皮毛，而果实上不存在果刺，且表现光亮、无果霜的表型的csgl2(Xu et al.,Horticultural Plant Journal,2015,Vol 1,pp 29-34)。上述三种类型的黄瓜表皮毛突变体带直接影响了果霜的形成或分布。突变体在一定程度上减少了果霜的存在，但突变类型对于偏好密刺风味浓郁的消费者来说，基本没有任何的商品价值。因此，生产上解决黄瓜果实光亮，无果霜且具有密刺的品种的培育，获取特殊种质材料是必须的。

发明内容

本发明的目的是提供果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型黄瓜植物突变体及其选育方法与分子鉴定方法。本发明所提供的突变体材料可用于黄瓜分子育种，改变黄瓜果实的果霜的性状，从而改变其外观品质，提高其商品价值。

本发明请求保护的技术方案如下：

第一方面，本发明公开了一个SNP分子标记，所述SNP分子标记在黄瓜基因组第三条染色体的第12733267处，多态性为C/T；所述SNP分子标记位于基因csfbc上，所述基因csfbc的核苷酸序列由黄瓜基因组第三条染色体第12731768-12734020位的碱基组成。

本发明提供的SNP分子标记，在多态性位点为C时，代表黄瓜为多果霜深绿色密刺型；在多态性位点为T时，代表黄瓜为无果霜亮绿色密刺型。

具体地，本发明所提供的SNP分子标记，位于基因csfbc的第799位上，若基因csfbc第799位的碱基为C，则黄瓜为多果霜深绿色密刺型黄瓜；若基因csfbc第799位的碱基为T，代表黄瓜为无果霜亮绿色密刺型。

本发明提供的SNP分子标记，使用SEQ ID No.1-2所示的引物对扩增得到。

发明人利用天津津绿与新泰密刺黄瓜自交系作为亲本材料，经过常规复合杂交，在后代分离群体中，出现果实光绿、且果实表面少果霜鲜食黄瓜性状重组植株，再经过三代自交和连续选择。

在自交后代的种植群体中。存在一株果实光亮且无果霜的黄瓜植株。发明人将该黄瓜自交系定义为R59。R59主要特性表现为：从一片真叶开始与其分离的亲本具有完全相同的叶片特征，这种特征维持直至开花结果期。花后四天的黄瓜果实呈现亮绿，无果霜状态。商品瓜时期果实表皮呈亮绿色，瓜条笔直，风味浓郁，果皮无果霜。生理成熟的黄瓜果实逐渐变黄，表皮无果霜。

经过遗传分析，果实亮绿且无果霜的性状符合单基因隐性核基因控制的遗传规律。即本发明果实亮绿无果霜性状由单隐性核基因控制。发明人将控制果皮亮绿果果霜的基因名为csfbc。与csgl1、csgl2、csgl3不同，本发明具有果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜基因csfbc的黄瓜植物，除果实变亮无果霜外，花瓣、株高、叶片大小、叶色、叶脉以及其他营养生长、生殖生长与普通植株没有差别。

经过基因组序列分析，黄瓜植株R59与野生型在基因csfbc上存在一个多态性为C/T的SNP分子标记。

第二方面，本发明提供扩增上述SNP分子标记的引物对，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1-2所示。

采用SEQ ID No.1-2所示的引物扩增黄瓜植株R59，得到的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示，采用SEQ ID No.1-2所示的引物扩增野生型黄瓜，得到的核苷酸序列如SEQ IDNo.4所示。

第三方面，本发明提供一种含有上述引物对的检测试剂盒。

根据本领域技术人员的理解，本发明请求保护上述的SNP分子标记或上述的引物对或上述的检测试剂盒在黄瓜品种防伪鉴定或检测黄瓜果实性状中的应用。

本发明还请求保护上述的SNP分子标记或上述的引物对或上述的检测试剂盒在黄瓜育种中的应用。

第四方面，本发明提供一种检测黄瓜果实性状的方法，使用上述引物对，以待测样本的cDNA为模板进行PCR扩增，经测序比对，若PCR产物对应在基因csfbc第799位的碱基为C，则待测样本为多果霜深绿色密刺型黄瓜；若PCR产物对应在基因csfbc第799位的碱基为T，则待测样本为无果霜亮绿色密刺型黄瓜。

第五方面，本发明提供一种无果霜亮绿色密刺型黄瓜的选育方法，使用第三条染色体第12733267处的碱基为T的黄瓜作为亲本，进行育种。

本发明提供的选育方法中，使用上述引物对在育种后代的芽期或苗期，筛选保留育种后代中第三条染色体第12733267处的碱基为T的黄瓜。

本发明的有益效果在于：

本发明所提供的果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜植株突变体丰富了黄瓜品种资源，为黄瓜的遗传育种提供了理想的遗传资源；

本发明所提供的果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜植株突变体作为隐性核基因控制的质量性状，为黄瓜种子纯度鉴定及品种的真实性提供了一种快速鉴定的分子标记；

本发明的果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜植物所示，其外观非常符合消费者购买习惯及消费偏好，为农民增收提供了有增值价值的优良品种；

本发明成功克隆控制黄瓜果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜的基因，进而在黄瓜及其他瓜类上进行外观品种育种提供了良好的物质基础。

附图说明

图1为本发明实施例1中果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜照片，其中左侧为普通黄瓜，右侧为专利申请人所发明的csfbc突变体果实。

图2为本发明实施例1中果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜材料R59及野生型黄瓜植物植株的田间照片。

图3为本发明实施例1中果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜材料R59及野生型黄瓜植物果实的田间照片。

图4为本发明实施例4中果实光亮、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜材料R59及野生型黄瓜植物果实果霜发育电镜图观察对比例图。

图5为本发明实施例5中黄瓜品种3461的田间照片。

图6为本发明实施例6中果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺csfbc突变体材料(R59)的测序结果峰型图。

图7为本发明实施例6中普通材料(野生型)的测序结果峰型图。

图8为本发明实施例6中普通材料(3461)的测序结果峰型图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明所用黄瓜材料均为公知公用的黄瓜材料，本发明的黄瓜突变体R59已在期刊文章(Liu B,Guan D,Zhai X,et al.Selection footprints reflect genomic changesassociated with breeding efforts in 56cucumber inbred lines[J].Horticultureresearch 2019,6(127).)中公开。

实施例1 果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜的获取

本实施例提供果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜的获取方法，步骤如下。

利用天津津绿与新泰密刺黄瓜自交系作为亲本材料，经过常规复合杂交，在后代分离群体中，出现果实光绿且果实表面少果霜鲜食黄瓜性状重组植株，再经过三代自交和连续选择。

在自交后代的种植群体中，发明人发现一株果实光亮且无果霜的黄瓜植株。其主要特性表现为：从一片真叶开始与其分离的亲本具有完全相同的叶片特征，这种特征维持直至开花结果期。花后四天的黄瓜果实呈现亮绿，无果霜状态。商品瓜时期果实表皮呈亮绿色，瓜条笔直，风味浓郁，果皮无果霜。生理成熟的黄瓜果实逐渐变黄，表皮无果霜。发明人将该黄瓜自交系定义为R59。

本发明中果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜照片如图1所示，其中左侧为普通黄瓜，右侧为专利申请人所发明的csfbc突变体果实。

本发明中果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜材料R59及野生型黄瓜植物植株的田间照片，如图2所示，左侧为普通黄瓜，右侧为专利申请人所发明的csfbc突变体果实。

本发明果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型密刺黄瓜材料R59及野生型黄瓜植物果实的田间照片如图3所示。

实施例2 黄瓜材料R59的遗传分析

本实施例提供实施例1获得黄瓜材料R59的遗传分析。黄瓜R59是天津津绿与新泰密刺自交系中获得的果实表皮亮绿、无果霜的植株。

(1)以R59材料为亲本之一，以野生型的黄瓜自交系作为另一亲本配置正反交杂交种，(果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜密刺型为母本与野生型自交系杂交为正交，以果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜密刺型为父本与野生型自交系杂交为反交)，分别收获，获得F1代。

种植正反杂交组合的F1代，观察F1代植株果实果皮亮度、刺瘤情况及果霜；并在每个杂交组合中选其中一半的F1代植株自交，分别收获F2代；将另一半F1代植株与R59测交，收获BC1代种子。分别种植F2代和BC1代种，在成瓜期开始观察并统计果皮光亮无果霜型植株分离数据，见表1、表2。

表1 F₂代分离试验结果

表2 果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜型黄瓜植株测交试验结果

表1和表2数据经χ²测验，χ²小于标准(0.05)＝3.84。

表1和表2的结果显示，果实亮绿、果刺瘤正常且无果霜性状，符合单基因隐性核基因控制的遗传规律。即本发明果实亮绿无果霜性状由单隐性核基因控制。

实施例3 黄瓜材料R59的基因型分析

本实施例对实施例1获得的黄瓜材料R59的基因型进行分析。结果如下。

与野生型相比，黄瓜材料R59的第三条染色体的第12733267处的核苷酸由C突变为T，此处突变带来了黄瓜果实从多果霜深绿色密刺型变为无果霜亮绿色密刺型。

基于实施例2中的遗传分析结果，果实亮绿无果霜性状由单隐性核基因控制，将突变所在基因命名为csfbc，基因csfbc的核苷酸序列由黄瓜基因组第三条染色体第12731768-12734020位的碱基组成。

实施例4 电镜扫描观察黄瓜表面果霜的形态

本实施例提供对材料R59(实施例1所得)及对应野生型黄瓜的表面果霜的电镜扫描图，具体步骤如下。

(1)将R59及对应的野生型的新鲜果实样品于3％(v/v)戊二醛中固定24h；

(2)取出样品，然后在pH＝6.8，0.1M PBS(phosphate buffer sodium)中冲洗三次，每次10min；

(3)用体积比为1％的四氧化锇进行固定；

(4)将样品依次置于浓度为50％、70％、80％、90％、100％的酒精脱水干燥，每次10min；

(5)样品置于100％的丙酮中洗2次，每次15min；

(6)样品于100％的乙酸异戊酯洗3次，每次15min；

(7)在液态CO₂(Bal-Tec)临界点干燥仪中进行干燥处理；

(8)对样品进行喷金粉(10-nm-thick)操作，然后通过扫描电子显微镜(HitachiS-4700)在2kv的加速电压下观察拍照(图4)。结果表明，R59呈现无果霜型因为表皮I型刺没有破裂。

实施例5 通过杂交方法培育具有果实光亮、果刺瘤正常且无果霜密刺型黄瓜植株品种

本实施例提供，利用具有csfbc突变的黄瓜材料R59或由此衍生的具有果实光亮且无果霜型密刺的黄瓜自交系、F1杂交种或杂合体作为果实光亮且无果霜密刺型供体，选育果实光亮且无果霜型密刺黄瓜植物。具体步骤如下：

(1)2012年5月初，试验在温室大棚内进行，以果实光亮且无果霜型密刺R59作为亲本之一，与另外一种华北型黄瓜3461作为另一亲本，黄瓜3461的田间照片见图5，进行杂交，杂交通过人工授粉形式进行，得F1代种子；

(2)2012年10月初，在试验棚内种植F1代，自交，获得F2代种子；

(3)2013年2月底，在试验大棚内种植F2代，根据F2代表型分离的情况，选择农艺性状优良的光亮无果霜型植物，自交，按照单株收种，获得F3代种子；

(4)2013年8月底，在试验大棚内将种植F3代，在光亮无果霜密刺型的植株自交得到的F3代种，按照目标性状选择植株自交，只选择有光亮无果霜密刺型的植株分分离出的群体，按照(3)中的步骤进行操作；分别单株收获，得F4代；

(5)2014年2月底，在试验大棚内将种植F4代，在光亮无果霜密刺型的植株自交得到的F4代种，按照目标性状选择植株自交，只选择有光亮无果霜密刺型的植株分分离出的群体，按照(4)中的步骤进行操作分别单株收获，得F5代。

(6)2014年8月底，在试验大棚内将种植F5代，在光亮无果霜密刺型的植株自交得到的F5代种，按照目标性状选择植株自交，只选择有光亮无果霜密刺型的植株分分离出的群体，按照(5)中的步骤进行操作分别单株收获，得F6代。

(7)2015年2月底，在试验大棚内将种植F6代，在光亮无果霜密刺型的植株自交得到的F6代种，按照目标性状选择植株自交，只选择有光亮无果霜密刺型的植株分分离出的群体，按照(5)中的步骤进行操作分别单株收获，得F7代。

(8)2015年8月底，在试验大棚内将种植F7代，在光亮无果霜密刺型的植株自交得到的F7代种，按照目标性状选择植株自交，只选择有光亮无果霜密刺型的植株分分离出的群体，按照(5)中的步骤进行操作分别单株收获，得纯合F8代。

实施例6 利用SNP分子标记辅助选择光亮、果刺瘤正常且无果霜密刺型黄瓜品种

本实施例使用特异性引物，对不同黄瓜品种的csfbc基因突变进行了检测。本实施例所用黄瓜品种包括：光亮、果刺瘤正常且无果霜密刺型黄瓜材料R59、R59的衍生材料、与具有csfbc基因突变的R59对应的野生型、黄瓜品种3416、天津津绿、新泰密刺。

本实施例所用特异性引物为：

上游引物：5’-CTGGAAATTGTTATCTGTCCAG-3’如SEQ ID No.1所示；

下游引物：5’-TATGAGACCTGCGGATTTCTT-3’如SEQ ID No.2所示。

利用SNP分子标记辅助筛选的方法，具体步骤如下。

1、总RNA的提取

采用柱式植物RNAout试剂盒(购自北京天恩泽基因科技有限公司，产品目录号为71203)提取黄瓜果实的总RNA，并用DNase去除RNA样品中残留的DNA。步骤如下：

(1)在研钵中加入约200mg黄瓜果实，加入液氮研磨至粉末状。将研磨物转移至干净无RNA酶的1.5mL塑料离心管，加入1ml细胞裂解液(试剂盒自带)，充分振荡混匀。

(2)在离心管中加入300μl的去蛋白液(试剂盒自带)和200μl自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。室温12000rpm离心3-5min，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。

(3)将上清液(约600μl)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有RNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。加入等体积的漂洗液，充分颠倒混匀。将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。

(4)将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。

(5)加700μl通用洗柱液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。加300μl通用洗柱液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。12000rpm室温离心1min。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。往吸附柱的中央加入50μl DNAase反应液，室温静置10-15min，加入500μl通用洗柱液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。12000rpm室温离心1min。

(6)将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50μl RNA洗脱液，室温放置1-2min。12000rpm室温离心1min，离心管中溶液即为RNA样品，存放于-80℃待用。

2、cDNA第一链的合成

以1μg黄瓜果实RNA为模板，利用M-MLV Reverse Transcriptase合成cDNA第一链。反转录步骤参照该试剂盒的说明书。cDNA第一链合成后-20℃保存备用。

3、基因片段的克隆

SNP点突变的所用引物序列如下：

上游引物：5’-CTGGAAATTGTTATCTGTCCAG-3’如SEQ ID No.1所示；

下游引物：5’-TATGAGACCTGCGGATTTCTT-3’如SEQ ID No.2所示。

所述PCR扩增体系为：

所述PCR扩增程序为：

4、检测结果

将PCR扩增得到的产物，送去测序，并与基因csfbc的序列进行比对，黄瓜材料R59的峰型图见图6、野生型的峰型图见图7、黄瓜材料3461的峰型图见图8。

所用黄瓜品种的黄瓜果实性状及PCR产物测序的对应关系见表3。

表3 黄瓜果实性状与PCR产物测序的对应关系

表3结果显示，SNP分子标记能标记出具有果实光亮、果刺瘤正常且无果霜密刺型单隐性核基因的黄瓜。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中国农业大学

<120> 一种黄瓜果实亮绿、果刺瘤正常、无果霜的SNP分子标记及其应用

<130> KHP211121185.2

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ctggaaattg ttatctgtcc ag 22

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tatgagacct gcggatttct t 21

<210> 3

<211> 254

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctggaaattg ttatctgtcc agaaggatga agaagatcca tcaccagaag ttattgccga 60

tgaagatgtt ctttctcaca gattttcacc agccagatta tcacactcac aaattccatc 120

ccttaattct gcagaatggg attcttgatt ggatttgatg aacgcacaaa gtcctccatg 180

ctcgaacaca aatgtggaaa ctataagaaa ttcagtaagt tcaaaagata atgaagaaat 240

ccgcaggtct cata 254

<210> 4

<211> 254

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ctggaaattg ttatctgtcc agaaggatga agaagatcca tcaccagaag ttattgccga 60

tgaagatgtt ctttctcaca gattttcacc agccagatta tcacactcac aaattccatc 120

ccttaattct gcagaatggg attctcgatt ggatttgatg aacgcacaaa gtcctccatg 180

ctcgaacaca aatgtggaaa ctataagaaa ttcagtaagt tcaaaagata atgaagaaat 240

ccgcaggtct cata 254

Claims

1.SNP分子标记，其特征在于，黄瓜基因组第三条染色体第12733267处核苷酸的多态性为C/T；所述SNP分子标记位于基因csfbc上，所述基因csfbc的核苷酸序列由黄瓜基因组第三条染色体第12731768-12734020位的碱基组成。

2.根据权利要求1所述的SNP分子标记，其特征在于，多态性位点为C时，代表黄瓜为多果霜深绿色密刺型；多态性位点为T时，代表黄瓜为无果霜亮绿色密刺型。

3.根据权利要求1-2任一项所述的SNP分子标记，其特征在于，使用SEQ ID No.1-2所示的引物对扩增得到。

4.引物对，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1-2所示，用于扩增权利要求1所述SNP分子标记。

5.一种检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求4所述的引物对。

6.权利要求1-3任一项所述的SNP分子标记或权利要求4所述的引物对或权利要求5所述的检测试剂盒在黄瓜品种防伪鉴定或检测黄瓜果实性状中的应用。

7.权利要求1-3任一项所述的SNP分子标记或权利要求4所述的引物对或权利要求5所述的检测试剂盒在黄瓜育种中的应用。

8.一种检测黄瓜果实性状的方法，其特征在于，使用权利要求4所述的引物对，以待测样本的cDNA为模板进行PCR扩增，经测序比对，若PCR产物对应在基因csfbc第799位的碱基为C，则待测样本为多果霜深绿色密刺型黄瓜；若PCR产物对应在基因csfbc第799位的碱基为T，则待测样本为无果霜亮绿色密刺型黄瓜。

9.一种无果霜亮绿色密刺型黄瓜的选育方法，其特征在于，使用第三条染色体第12733267处的碱基为T的黄瓜作为亲本，进行育种。

10.根据权利要求9所述的选育方法，其特征在于，使用权利要求4所述引物对在育种后代的芽期或苗期，筛选保留育种后代中第三条染色体第12733267处碱基为T的黄瓜。