CN106596978A - 一种ecm1蛋白抗体及其应用、试剂盒 - Google Patents

一种ecm1蛋白抗体及其应用、试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种ECM1蛋白抗体及其应用、试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明提供的ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白特异的结合，具有较高的特异性和灵敏度，将ECM1蛋白抗体应用于检测ECM1蛋白，能特异且灵敏的检测到ECM1蛋白，使检测结果更为可靠准确；而应用ECM1蛋白抗体制备检测ECM1蛋白的试剂盒快速方便的检测ECM1蛋白，还能定量检测出ECM1蛋白，为后续的检测分析提供可靠的准确的数据，将ECM1蛋白抗体检测精液中ECM1蛋白，能精确快速得到检测结果。

Description

一种ECM1蛋白抗体及其应用、试剂盒
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，且特别涉及一种ECM1蛋白抗体及其应用、试剂盒。
背景技术
细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1，ECM1)是1994年在鼠的成骨基质细胞中分离出来的一种分泌性糖蛋白。细胞外基质蛋白1广泛存在于各类组织器官中，与很多的疾病有一定关联。
近年来的研究发现，ECM1具有多种功能，如ECM1基因的缺失，可导致类脂蛋白沉积症的发生，硬化性苔藓患者血清中存在高滴度的ECM1自身抗体，并且一些慢性硬化性苔藓患者容易并发恶性肿瘤，主要是鳞状细胞癌。目前已知细胞外基质的肿瘤的发生及转移等方面有主要作用。
目前，梗阻性与非梗阻性无精症的检测多采用睾丸穿刺技术进行检测；该方法传统而且会给患者带来心理负担和生理痛苦，同时还会给患者带来感染的风险。需要采用新的方法对梗阻性与非梗阻性无精症进行检测。
目前，我们对对细胞外基质蛋白1的研究和应用主要集中在癌症方面，而细胞外基质蛋白1在人类精细胞中的表达及应用了解和研究还较少，但前景广泛，在本技术中，可以用于初步区分检测梗阻性与非梗阻性无精症。
发明内容
本发明的目的在于提供一种ECM1蛋白抗体，该抗体能特异的识别ECM1蛋白，具有较高的特异性和灵敏度。
本发明的第二目的在于提供上述ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。
本发明的第三目的在于提供上述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。
本发明的第四目的在于提供一种ECM1蛋白检测试剂盒，该试剂盒能方便快速的检测ECM1蛋白。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
一种ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
上述的ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。
上述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。
一种ECM1蛋白检测试剂盒，其包括上述的ECM1蛋白抗体。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白特异的结合，具有较高的特异性和灵敏度，将ECM1蛋白抗体应用于检测ECM1蛋白，能特异且灵敏的检测到ECM1蛋白，使检测结果更为可靠准确；而应用ECM1蛋白抗体制备检测ECM1蛋白的试剂盒快速方便的检测ECM1蛋白，还能定量检测出ECM1蛋白，为后续的检测分析提供可靠的准确的数据。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种ECM1蛋白的抗体及其应用、试剂盒进行具体说明。
细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1，ECM1)是1994年在鼠的成骨基质细胞中分离出来的一种分泌性糖蛋白。最初在是在小鼠的成骨基质细胞株MN7的细胞中通过二维SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳发现了该蛋白的存在。ECM1蛋白由540个氨基酸组成，分子量为60.7kDa，等电点PI 6.68。ECM1蛋白的540个氨基酸中，第1-19个氨基酸组成疏水性信号肽；第20-150个氨基酸组成不含半胱氨酸的区域；第151-279个与第280-405个组成两个前后重叠区域；第406-540个氨基酸组成C末端区域。ECM1蛋白的氨基酸含有6个成对的半胱氨酸，16个单个的半胱氨酸，其排列与血清白蛋白家族的半胱氨酸CC·(X7-10)-c典型模式相同。
ECM1蛋白中有一个疏水性信号肽和几个糖基化位点，说明该蛋白是一种分泌性糖蛋白。
男性不育很多情况是无精子症或严重少精子症。ECM1蛋白作为一种分泌性蛋白，在男性精液中也必然会产生，通过分析ECM1蛋白就能对男性的梗阻性无精症与非梗阻性无精症有一个初步的判断。
一种ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应。ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
ECM1蛋白作为蛋白靶点，ECM1蛋白抗体能特异的识别ECM1蛋白，且具有较高的灵敏度，使检测的结果更加的准确和可靠。ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
上述的ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。
进一步地，上述ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用，包括：浓度为0.3μg/mL-3μg/mL的ECM1蛋白抗体包被于酶标板，洗涤并拍干所述酶标板，加入待测样本和标准品后，再加入按照1:3000-1:10000稀释的酶标抗体并孵育，洗涤并拍干所述酶标板，然后加入显色液显色，加入终止液终止反应，在450nm波长下检测OD值。
本应用主要采用双抗夹心的方式进行反应，将ECM1蛋白抗体包被于酶标板等固定相，然后洗掉多余的未结合在固定相的ECM1蛋白抗体。在酶标板上设置几个孔，加入梯度稀释的ECM1标准蛋白，另外设置一个空白孔加等量稀释液，其余的孔加入待测样本，使待测样本或标准蛋白与ECM1蛋白抗体通过抗原抗体反应，经过充分的反应后；洗涤酶标板，加入酶标抗体，使酶标抗体与待测样本或标准蛋白反应，加入显色液与酶标抗体反应，产生显色反应；然后加入终止液将反应终止，然后通过酶标仪，在450nm波长下，读取酶标孔的吸光度OD值读数。
通过将标准蛋白按照10、102、103、104、105和106的倍数稀释，并测定每个梯度浓度的标准蛋白的OD值，并根据每个梯度浓度的OD值与梯度浓度的关系，得到蛋白浓度与OD值之间的关系的标准曲线。通过标准曲线可以计算出每个待测样本的ECM1蛋白的具体含量。
进一步地，上述应用中，抗体包被前还包括样品采集，采集精液样本10-40μL，并且离心20-30nim，重复离心3次，取上清作为待测样本。
采集的精液样本，先液化后，采用离心的方法，取上清，将取得的上清作为待测样本。
上述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。
一种ECM1蛋白检测试剂盒，其包括上述的ECM1蛋白抗体。
进一步地，ECM1蛋白检测试剂盒还包括标准蛋白、已包被的酶标板、洗涤液、样品稀释液、抗体稀释液、终止液、HRP标记的ECM1蛋白的抗体和TMB显色液中的至少一种。
ECM1标准蛋白在试剂盒中，既可以作为一个阳性参考，还能将ECM1标准蛋白梯度稀释后，通过测定梯度稀释的ECM1标准蛋白的OD值，从而得到计算样本中ECM1蛋白含量的标准曲线。
酶标板，一般选用96孔的酶标板，将酶标孔作为抗体包被以及后续反应等的一个反应池。
洗涤液，在抗体包被，样品、标准品孵育，抗体孵育反应等步骤中，会有一些残余的抗体或者未结合的样品以及非特异性结合，用洗涤液清洗掉，避免对最终的读数的影响。
终止液，用于终止整个反应，控制反应时间，避免持续的反应导致吸光度OD值的不稳定。
封闭液，通常选用BSA蛋白或者脱脂奶粉配制封闭液，封闭液可以封闭遮盖未结合的靶点，使检测的结果更加的准确。
酶标抗体，本技术将已知的ECM1蛋白的抗体用辣根过氧化物酶HRP标记，方便显色和检测。过氧化酶，通常来源于辣根(因此称辣根过氧化物酶，Horseradish Peroxidase，HRP)，是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类(ELISA)试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。
TMB显色液，TMB显色液能与辣根过氧化酶HRP反应而显色。
进一步地，洗涤液为TBST缓冲液，TBS缓冲液起溶解保护试剂的作用；原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应。TBST中含有的吐温20是一种去污剂，能够解除整个反应中的非特异性结合，提高反应特异性，降低背景值。
进一步地，TMB显色液包括：四甲基联苯胺、冰醋酸、磷酸氢二钠、柠檬酸和双氧水。
进一步地，终止液是浓度为0.5mol/L-2.4mol/L的硫酸溶液。
以硫酸溶液作为终止液，因为硫酸溶液的酸性较强，会破坏抗体蛋白或者相关的酶的空间结构等；抗原抗体反应被终止；同样，硫酸溶液也能破坏辣根过氧化物酶HRP的结构，显色液和辣根过氧化物酶HRP的反应也能停止，就能保证反应的完全终止。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种ECM1蛋白抗体，该ECM1蛋白抗体能特异的识别ECM1蛋白，以ECM1蛋白作为ECM1蛋白抗体的识别靶点。ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
实施例2
本实施例提供一种ECM1蛋白检测试剂盒，该ECM1蛋白检测试剂盒包括ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，特异的识别ECM1蛋白。
实施例3
本实施例提供一种ECM1蛋白检测试剂盒，该ECM1蛋白检测试剂盒包括ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，特异的识别ECM1蛋白。
ECM1蛋白检测试剂盒还包括有ECM1标准蛋白。
实施例4
本实施例提供一种ECM1蛋白检测试剂盒，该ECM1蛋白检测试剂盒包括ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，特异的识别ECM1蛋白。
ECM1蛋白检测试剂盒还包括有ECM1标准蛋白、酶标板、封板膜、洗涤液、终止液、抗体稀释液、样品稀释液、HRP标记的ECM1蛋白抗体和TMB显色液。
洗涤液选用TBST缓冲液，终止液选用浓度为0.5-2.4mol/L的硫酸溶液；TMB显色液包括四甲基联苯胺、冰醋酸、磷酸氢二钠、柠檬酸、双氧水
当然在本发明的其他实施例中，ECM1蛋白检测试剂盒还可以是包括ECM1标准蛋白、已包被的酶标板、样品稀释液、抗体稀释液、洗涤液、终止液、HRP标记的ECM1蛋白的抗体和TMB显色液中的至少一种。
洗涤液也可以选用除了TBST缓冲液外的其他缓冲液，终止液也可以选用除了硫酸溶液外的其他合适溶液；TMB显色液包括柠檬酸、四甲基联苯胺；醋酸，磷酸氢二钠和双氧水。
本实施例提供的试剂盒的使用，具体如下：
1.1样本制备，采集男性的精液样本，静置1-2h液化；
1.2取20-40μL精液在4℃条件下10000-13000rpm离心20-30min，取上清，重复两次；
1.3将取得的上清样品稀释10-1000000倍，作为待测样本待用；
1.4以CBS缓冲液稀释ECM1蛋白抗体，使ECM1蛋白抗体的浓度保持在0.3μg/mL-3μg/mL的范围；
1.5将上述稀释的ECM1蛋白抗体加入到酶标板的酶标孔中，每孔80-200μL，用膜覆盖酶标孔，在4℃的条件下，过夜孵育，使ECM1蛋白抗体包被于酶标孔；
1.6用Wash Buffer缓冲液洗涤酶标板3-5次，每个酶标孔加入200-400μL的WashBuffer缓冲液，拍干酶标孔中的液体；
1.7每个酶标孔加入100-300μL的封闭液，封闭酶标板固定载相上没有结合ECM1蛋白抗体的空位，25℃孵育2h(根据实验的时候，实验室温度等实际情况，在25-37℃的温度范围内选择合适的温度以及合适的孵育时间)，洗涤酶标板并拍干；
1.8选择酶标板的6个孔，作为标准样品孔，分别加入10、102、103、104、105和106的倍数稀释的标准蛋白BSA，同时设置一个空白孔，加入等量的稀释液，其余的酶标孔加入待测样本，25℃孵育2h，洗涤酶标板，拍干；
1.9加入待测样本的酶标孔加入HRP标记的ECM1蛋白抗体工作液100μL(酶标抗体按照1:3000-1:10000比例稀释，具体稀释倍数根据实际情况确定)，37℃反应1h，洗涤酶标板，拍干；
1.10每个酶标孔加入80-200μL的显色液，25-37℃避光孵育0.1-2h；
1.11每个酶标孔加入20-200μL的终止液，轻晃混匀，使用酶标仪在450nm波长的条件下，读取每个酶标孔的读数。
读取读数后，根据ECM1标准蛋白的酶标孔的OD值读数，并根据每个梯度浓度的OD值与梯度浓度的关系，得到蛋白浓度与OD值之间的关系的标准曲线。通过标准曲线可以通过待测样本的OD值读数，可以计算出每个待测样本的ECM1蛋白的具体含量。
实验例1
本实验例对ECM1蛋白检测试剂盒的检测限进行验证；具体操作方法参考实施例4的操作方法。
以ECM1蛋白为检测样本。分别设置ECM1蛋白的浓度为0pg/mL、3pg/mL、7pg/mL、15pg/mL、31pg/mL、62pg/mL、125pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、2000pg/mL和3000pg/mL；其中0pg/mL作为空白对照。
分别于2016年12月2日、12月6日、12月7日、12月9日和12月14日测定ECM1蛋白检测试剂盒的稳定性；试验方法参考实施例4。
试验结果如表1所示，表中CV值表示数据的离散程度，表征试剂盒的稳定，即CV值越小，ECM1蛋白检测试剂盒越稳定，ECM1蛋白检测试剂盒测定的数据越可靠。
表1试剂盒的稳定试验结果
从表1中可以看出，当ECM1蛋白的浓度稀释至3pg/mL的时候，还有一定的读数值，检测的灵敏度较好；而且具有ECM1蛋白的浓度越高，ECM1蛋白检测试剂盒的CV值越小的趋势，说明ECM1蛋白检测试剂盒的稳定性越好。而且不同的时间检测结果比较稳定，说明随着ECM1蛋白检测试剂盒的存放的时间延长，ECM1蛋白检测试剂盒的依然较为稳定。
说明ECM1蛋白检测试剂盒同批次产品的批间稳定性较好，试剂盒的功能稳定，测定数据稳定可靠，批次间的数据是可以信任的，也是可靠的。
实验例2
本实验例对ECM1蛋白检测试剂盒的检测准确性进行验证，以同一批待测样本进行检测，验证ECM1蛋白检测试剂盒检测准确性。具体的实验操作方法参考实施例4。
选取44个样本进行检测，然后判断检测结果与实际情况的符合的比例。实际检测结果见表2，表2中OA表示梗阻性无精症，NOA是非梗阻性无精症。
表2 ECM1蛋白检测试剂盒检测准确性
从表2中可以看出，除了2号样本的检测结果不符合，15号样本是数据异常，38号样本的数据刚好在判断标准附近，可能导致平淡不准确。其余的结果判断都是正确的。准确率达到92.7％的，具有较高的准确率。
综上所述，本发明实施例的提供的ECM1蛋白抗体能特异的识别ECM1蛋白，而且ECM1蛋白抗体的灵敏度较好。利用ECM1蛋白抗体制备的ECM1蛋白检测试剂盒同样的具有较好的特异性和灵敏度；而且检测的结果与实际情况的符合率高达92.7％，甚至还能高于92.7％。ECM1蛋白检测试剂盒检测的结果是准确可靠的；而且ECM1蛋白检测试剂盒的稳定性较好，即使结果一段时间的保存，检测结果也是可靠的。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
序 列 表
SEQUENCE LISTING
<110> 成都朴华科技有限公司
<120> 一种ECM1蛋白抗体及其应用、试剂盒
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 540
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Gly Thr Thr Ala Arg Ala Ala Leu Val Leu Thr Tyr Leu Ala Val
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ala Ser Glu Gly Gly Phe Thr Ala Thr Gly Gln Arg Gln
20 25 30
Leu Arg Pro Glu His Phe Gln Glu Val Gly Tyr Ala Ala Pro Pro Ser
35 40 45
Pro Pro Leu Ser Arg Ser Leu Pro Met Asp His Pro Asp Ser Ser Gln
50 55 60
His Gly Pro Pro Phe Glu Gly Gln Ser Gln Val Gln Pro Pro Pro Ser
65 70 75 80
Gln Glu Ala Thr Pro Leu Gln Gln Glu Lys Leu Leu Pro Ala Gln Leu
85 90 95
Pro Ala Glu Lys Glu Val Gly Pro Pro Leu Pro Gln Glu Ala Val Pro
100 105 110
Leu Gln Lys Glu Leu Pro Ser Leu Gln His Pro Asn Glu Gln Lys Glu
115 120 125
Gly Thr Pro Ala Pro Phe Gly Asp Gln Ser His Pro Glu Pro Glu Ser
130 135 140
Trp Asn Ala Ala Gln His Cys Gln Gln Asp Arg Ser Gln Gly Gly Trp
145 150 155 160
Gly His Arg Leu Asp Gly Phe Pro Pro Gly Arg Pro Ser Pro Asp Asn
165 170 175
Leu Asn Gln Ile Cys Leu Pro Asn Arg Gln His Val Val Tyr Gly Pro
180 185 190
Trp Asn Leu Pro Gln Ser Ser Tyr Ser His Leu Thr Arg Gln Gly Glu
195 200 205
Thr Leu Asn Phe Leu Glu Ile Gly Tyr Ser Arg Cys Cys His Cys Arg
210 215 220
Ser His Thr Asn Arg Leu Glu Cys Ala Lys Leu Val Trp Glu Glu Ala
225 230 235 240
Met Ser Arg Phe Cys Glu Ala Glu Phe Ser Val Lys Thr Arg Pro His
245 250 255
Trp Cys Cys Thr Arg Gln Gly Glu Ala Arg Phe Ser Cys Phe Gln Glu
260 265 270
Glu Ala Pro Gln Pro His Tyr Gln Leu Arg Ala Cys Pro Ser His Gln
275 280 285
Pro Asp Ile Ser Ser Gly Leu Glu Leu Pro Phe Pro Pro Gly Val Pro
290 295 300
Thr Leu Asp Asn Ile Lys Asn Ile Cys His Leu Arg Arg Phe Arg Ser
305 310 315 320
Val Pro Arg Asn Leu Pro Ala Thr Asp Pro Leu Gln Arg Glu Leu Leu
325 330 335
Ala Leu Ile Gln Leu Glu Arg Glu Phe Gln Arg Cys Cys Arg Gln Gly
340 345 350
Asn Asn His Thr Cys Thr Trp Lys Ala Trp Glu Asp Thr Leu Asp Lys
355 360 365
Tyr Cys Asp Arg Glu Tyr Ala Val Lys Thr His His His Leu Cys Cys
370 375 380
Arg His Pro Pro Ser Pro Thr Arg Asp Glu Cys Phe Ala Arg Arg Ala
385 390 395 400
Pro Tyr Pro Asn Tyr Asp Arg Asp Ile Leu Thr Ile Asp Ile Gly Arg
405 410 415
Val Thr Pro Asn Leu Met Gly His Leu Cys Gly Asn Gln Arg Val Leu
420 425 430
Thr Lys His Lys His Ile Pro Gly Leu Ile His Asn Met Thr Ala Arg
435 440 445
Cys Cys Asp Leu Pro Phe Pro Glu Gln Ala Cys Cys Ala Glu Glu Glu
450 455 460
Lys Leu Thr Phe Ile Asn Asp Leu Cys Gly Pro Arg Arg Asn Ile Trp
465 470 475 480
Arg Asp Pro Ala Leu Cys Cys Tyr Leu Ser Pro Gly Asp Glu Gln Val
485 490 495
Asn Cys Phe Asn Ile Asn Tyr Leu Arg Asn Val Ala Leu Val Ser Gly
500 505 510
Asp Thr Glu Asn Ala Lys Gly Gln Gly Glu Gln Gly Ser Thr Gly Gly
515 520 525
Thr Asn Ile Ser Ser Thr Ser Glu Pro Lys Glu Glu
530 535 540

Claims (10)

1.一种ECM1蛋白抗体，其特征在于，所述ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.如权利要求1所述的ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括：将浓度为0.3μg/mL-3μg/mL的所述ECM1蛋白抗体包被于酶标板，洗涤并拍干所述酶标板，加入待测样本和标准品后，再加入按照1:3000-1:10000稀释的酶标抗体并孵育，洗涤并拍干所述酶标板，然后加入显色液显色，加入终止液终止反应，在450nm波长下检测OD值。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述ECM1蛋白抗体包被前还包括：采集精液样本10-40μL离心20-30nim，重复离心操作2-3次，取上清作为待测样本。
5.如权利要求1所述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。
6.一种ECM1蛋白检测试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1所述的ECM1蛋白抗体。
7.根据权利要求6述的ECM1蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述ECM1蛋白检测试剂盒还包括ECM1标准蛋白、酶标板、封板膜、洗涤液、封闭液、终止液、样本稀释液、抗体稀释液、包被缓冲液、HRP标记的ECM1蛋白抗体和TMB显色液中的至少一种。
8.根据权利要求7述的ECM1蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为TBST。
9.根据权利要求8所述的ECM1蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述TMB显色液包括：四甲基联苯胺、冰醋酸、磷酸氢二钠、柠檬酸、双氧水。
10.根据权利要求9所述的ECM1蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述终止液是浓度为0.5mol/L-2.4mol/L的硫酸溶液。
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