CN106591129A - 一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法 - Google Patents

一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法 Download PDF

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海晓鸥
肖纯凌
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material

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Abstract

一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法，包括以下步骤：步骤1：呼吸道拮抗性益生菌初筛；步骤1.1：致病菌培养；步骤1.2：采用菌饼法对益生菌拮抗性初筛；步骤2：呼吸道拮抗性益生菌复筛；本发明针对人源微生态菌群生长特点，设计出一套系统科学的筛选方法，从庞大的人源微生态菌群中，通过初筛和复筛有目的性的筛选，可以将拮抗性益生菌快速分离获得，节省了大量的人力、物力及时间。

Description

一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法。
背景技术
呼吸道分上下两部分，分别为上呼吸道和下呼吸道，上下呼吸道连续寄居着大量的益生菌菌群。这些益生菌菌群的寄居可以保护我们机体抵御外界病原生物的侵害，但是目前对于呼吸道益生菌拮抗作用的相关研究较少，此外随着抗生素滥用所导致的一系列问题日益增多，使得呼吸道益生菌群的研究及拮抗性益生菌制剂的开发日趋重要，且目前关于呼吸道拮抗性益生菌的培养及筛选，还没有报道。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明旨在提供一种能够培养、筛选呼吸道拮抗性益生菌的方法，为呼吸道拮抗性益生菌制剂开发提供重要的手段。
本发明采用的技术方案是：一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法，包括以下步骤：
步骤1：呼吸道拮抗性益生菌初筛
步骤1.1：致病菌培养
选取金黄色葡萄球菌作为致病菌，挑取致病菌单菌落，于5 ml 的肉汤培养基中培养，在37℃、220 rpm的条件下过夜培养后，用新鲜培养液稀释菌液至浓度达到5~6*106cfu/ml，备用；
步骤1.2：采用菌饼法对益生菌拮抗性初筛
用打孔器在含有呼吸道益生菌的体积分数为15%的羊血培养基上打孔，将益生菌菌柄置于涂布有200 ul 的步骤1.1制得的致病菌液的营养琼脂培养基上，37℃培养24小时，观察抑菌情况；
步骤2：呼吸道拮抗性益生菌复筛
采用牛津杯法进行复筛：刮取呼吸道益生菌菌落，于体积分数为5%的胎牛血清BHI培养基中培养，在37℃、220 rpm的条件下过夜培养后，取100 ul 益生菌菌液置于涂布有200 ul的步骤1.1制得的致病菌液的营养琼脂培养基上的牛津杯中，37℃培养24小时，观察抑菌情况，并测量抑菌直径，筛选出对致病菌具有较强抑制性的呼吸道益生菌。
所述呼吸道益生菌选自4-6岁健康儿童咽部菌群。
所述步骤1.2中打孔的直径为1cm。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：
目前，对于人源性的拮抗性益生菌尤其是呼吸道的拮抗益生菌的筛选方法还没有一套完整的流程，本发明专利针对人源微生态菌群生长特点，设计出一套系统科学的筛选方法，从庞大的人源微生态菌群中，通过初筛和复筛有目的性的筛选，可以将拮抗性益生菌快速分离获得，节省了大量的人力、物力及时间。通过本发明专利的筛选方法有效的分离出呼吸道拮抗性益生菌。
附图说明
图1为本发明呼吸道拮抗性益生菌初筛示意图；
图2为本发明呼吸道拮抗性益生菌复筛示意图。
具体实施方式
本发明采用的技术方案是：一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法，包括以下步骤：
步骤1：呼吸道拮抗性益生菌初筛
步骤1.1：致病菌培养
选取金黄色葡萄球菌作为致病菌，挑取致病菌单菌落，于5 ml 的肉汤培养基中培养，在37℃、220 rpm的条件下过夜培养后，用新鲜培养液稀释菌液至浓度达到5~6*106cfu/ml，备用；
步骤1.2：采用菌饼法对益生菌拮抗性初筛
用打孔器在含有呼吸道益生菌的体积分数为15%的羊血培养基上打孔，将益生菌菌柄置于涂布有200 ul 的步骤1.1制得的致病菌液的营养琼脂培养基上，37℃培养24小时，观察抑菌情况，如图1所示；
步骤2：呼吸道拮抗性益生菌复筛
采用牛津杯法进行复筛：刮取呼吸道益生菌菌落，于体积分数为5%的胎牛血清BHI培养基中培养，在37℃、220 rpm的条件下过夜培养后，取100 ul 益生菌菌液置于涂布有200 ul的步骤1.1制得的致病菌液的营养琼脂培养基上的牛津杯中，37℃培养24小时，观察抑菌情况，并测量抑菌直径，如图2所示，筛选出对致病菌具有较强抑制性的呼吸道益生菌。
步骤3：呼吸道益生菌分离培养与保存
步骤3.1：呼吸道益生菌分离培养
无菌咽试子采集健康儿童咽后壁菌群溶解于1 ml BHI液体培养基后，将菌液稀释1*103倍，取200 ul 菌液涂布在体积分数为15%的羊血培养基，在37℃恒温培养箱培养24小时。
步骤3.2：呼吸道益生菌保存
用无菌牙签，挑取针尖状带有草绿色溶血环的单菌落，于体积分数为15%的羊血培养基划线，在37℃恒温培养箱培养24小时；收集平板上的菌落于3 ml 的5%胎牛血清BHI培养基，过夜培养，按照1:1的比例与体积分数为40%的甘油混合，-80℃冻存。
步骤4：呼吸道益生菌复苏与传代：
步骤4.1：呼吸道益生菌复苏：
将-80℃保存的呼吸道益生菌菌株载于程序降温盒中，保持复苏整个过程中菌液处于冰冻状态，用无菌接种环刮取冻村状态的菌液，于体积分数为15%的羊血培养基划线培养，在37℃恒温培养箱培养24小时。
步骤4.2：呼吸道益生菌传代
用无菌接种环挑取单菌落，于体积分数为15%的羊血培养基划线培养，在37℃恒温培养箱培养24小时。
所述呼吸道益生菌选自4-6岁健康儿童咽部菌群。
所述步骤1.2中打孔的直径为1cm。

Claims (3)

1.一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：呼吸道拮抗性益生菌初筛
步骤1.1：致病菌培养
选取金黄色葡萄球菌作为致病菌，挑取致病菌单菌落，于5 ml 的肉汤培养基中培养，在37℃、220 rpm的条件下过夜培养后，用新鲜培养液稀释菌液至浓度达到5~6*106cfu/ml，备用；
步骤1.2：采用菌饼法对益生菌拮抗性初筛
用打孔器在含有呼吸道益生菌的体积分数为15%的羊血培养基上打孔，将益生菌菌柄置于涂布有200 ul 的步骤1.1制得致病菌液的营养琼脂培养基上，37℃培养24小时，观察抑菌情况；
步骤2：呼吸道拮抗性益生菌复筛
采用牛津杯法进行复筛：刮取呼吸道益生菌菌落，于体积分数为5%的胎牛血清BHI培养基中培养，在37℃、220 rpm的条件下过夜培养后，取100 ul 益生菌菌液置于涂布有200 ul的步骤1.1制得的致病菌液的营养琼脂培养基上的牛津杯中，37℃培养24小时，观察抑菌情况，并测量抑菌直径，筛选出对致病菌具有较强抑制性的呼吸道益生菌。
2.根据权利要求1所述的一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法，其特征在于，所述呼吸道益生菌选自4-6岁健康儿童咽部菌群。
3.根据权利要求1所述的一种呼吸道拮抗性益生菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤1.2中打孔的直径为1cm。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110904010A (zh) * 2019-12-17 2020-03-24 南方医科大学 Arthrobacter phenanthrenivoransL131菌株及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732460A (zh) * 2012-06-13 2012-10-17 浙江师范大学 吸水链霉菌Sh-43菌株及其发酵液生产方法和应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732460A (zh) * 2012-06-13 2012-10-17 浙江师范大学 吸水链霉菌Sh-43菌株及其发酵液生产方法和应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
于源华: "第三章 微生物学实验", 《生物工程与技术专业基础实验教程》 *
刘冬梅等: "用牛津杯法测定益生菌的抑菌活力", 《食品研究与开发》 *
唐梅等: "峨眉山异叶天南星抗ＭＲＳＡ 内生细菌的筛选", 《江苏农业科学》 *
张振等: "《益生菌在儿科临床中的应用》", 31 January 2011, 湖北科学技术出版社 *
张莉: "上呼吸道微生态平衡研究与益生菌制剂", 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 *
王平: "第一章实验四 微生物的分布", 《微生物学实验教程》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110904010A (zh) * 2019-12-17 2020-03-24 南方医科大学 Arthrobacter phenanthrenivoransL131菌株及应用
CN110904010B (zh) * 2019-12-17 2021-11-02 南方医科大学 拮抗呼吸道致病菌的Arthrobacter phenanthrenivoransL131菌株及应用

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