CN106581693A - 一种具有抗癌活性的熊果酸偶联物作为药物载体或者分子探针载体的应用 - Google Patents

一种具有抗癌活性的熊果酸偶联物作为药物载体或者分子探针载体的应用 Download PDF

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Abstract

一种具有抗癌活性的熊果酸偶联物作为药物载体或者分子探针载体的应用；所述的熊果酸偶联物其特征在于其为熊果酸或其衍生物的羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式相连接形成偶联物。具体应用在于熊果酸偶联物包载药物或者分子探针形成纳米粒。本发明所涉及的偶联物作为载体具有一定的抗癌效果但有没有太大的细胞毒性，合成简单方便；通过溶剂交换法自组装成为纳米粒,作为抗癌药物或荧光物质的载体，有效地解决了一系列抗癌药物水溶性问题。

Description

一种具有抗癌活性的熊果酸偶联物作为药物载体或者分子探 针载体的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种新型无载体两亲性小分子纳米载药系统的制备及其在肿瘤治疗中的应用。
背景技术
近几年来，随着纳米科技的发展，人们开发了各种各样的载体用于药物的输送，如脂质体、胶束、蛋白、金属纳米粒子以及无机纳米粒子等，纳米材料由于其独特且优异的性质，得到越来越多研究者的关注，尤其是在生物医学领域，有多种脂质体和磷脂形纳米载药体系已经进入了临床应用;其中，利用多功能的纳米材料用于癌症的同时诊断与治疗也逐渐受到广泛的重视，出现了越来越多的文献报道。然而，多数的抗癌药物存在着水溶性差、药物体内运输困难等问题，虽然当前的纳米药物载体在一定程度上提高了疏水性药物的生物利用度。然而，载体的使用却带来了新的问题，如线粒体损伤、炎症、氧化应激反应以及血小板聚集等。并且，纳米载体将药物输送到癌细胞内后，其自身需要通过肝脏等器官排除体外，有可能引起肝脏等器官发生炎症或引起一些其他病症，这些成为阻碍纳米载药体系进一步应用于临床的棘手问题。与传统的纳米载体相比，无载体两亲性小分子纳米载药系统解决了载体纳米体系复杂，质控困难，作用机制不明确，代谢不清楚等问题。无载体两亲性纳米载药系统其优点是避免引入载体对人体带来的毒副作用，同时减轻额外的代谢负担，也解决了载体纳米粒制备过程中批次质量不可控问题。因此发展一种诊疗一体化的无载体多功能载药体系成为当前研究的重中之重，具有巨大的意义。
本专利以熊果酸及其衍生物为骨架，通过简单的化学偶联将含胍基类的药物连接至熊果酸及其衍生物C28位上，增加熊果酸及其衍生物的两亲性从而制得两亲性的抗癌前药:熊果酸及其衍生物-胍基类药物偶联物；此外该两亲性的抗癌前药在水中可以自组装形成无载体两亲性小分子纳米载药，形成稳定的胶束结构，同时可作为药物的载体包载分子成像探针/抗肿瘤药物，兼具聚合物胶束的特征：（1）在水溶液中可自组装形成纳米胶束，避免了纳米粒合成中辅料的使用；（2）由于包埋在该无载体两亲性小分子纳米载药系统的药物是以非共价键的方式与载体结合，使得运载的药物能够较为容易的释放出来，构成了快速释药的速释部分。（3）相比传统纳米粒载体，无载体纳米粒粒径均一，载药量大。
发明内容
本发明目的在于提供一种新型无载体两亲性小分子纳米载药系统的制备，以解决现有技术中纳米载体将药物运输到癌细胞内后，其自身需要通过肝脏等器官排出体外，有可能引起肝脏等器官发生炎症或引起一系列其他病症的技术性问题；
本发明的具体做法为，将熊果酸及其衍生物C28位羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式直接连接，制得两亲性抗癌前药：熊果酸及其衍生物-胍基类药物偶联物，然后抗癌前药作为载体包载其他的抗癌药物以达到更好的癌症治疗效果，或者包载分子探针，以达到实现诊疗一体化。
一种具有抗癌活性的熊果酸偶联物作为药物载体或者分子探针载体的应用；所述的熊果酸偶联物其特征在于其为熊果酸或其衍生物的羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式相连接形成偶联物。
所述的应用，其特征在于熊果酸偶联物包载药物或者分子探针形成纳米粒。
所述熊果酸或其衍生物为如式I所示的化合物，
；
其中R为-OH、=O、 、、或；
所述胍类药物如式II所示；其中：R1代表H、烃基或芳基；R2代表H、烃基、芳基；R3代表H、烃基或芳基；R4代表H、烃基或芳基；R5代表H、烃基或芳基
II。
更具体的，所述胍类药物如式III、IV或V所示：
III 作为抗病毒药物的吗啉胍（如式Ⅲ所示，简称Gua）；
IV作为抗高血压药物的胍乙啶（如式Ⅳ所示，简称Mor）；
V 作为降糖类药物药物的二甲双胍（如式Ⅴ所示，简称Met）；
其具体应用方式为：
1）将熊果酸偶联物溶于良性溶剂中，为溶液A
2）将溶液A滴入搅拌中的不良溶液中，为悬浊液B；
3）将含有待包载的药物或分子探针溶液滴入搅拌中的悬浊液B，得悬浊液C；
4）将悬浊液C继续搅拌，之后超声处理，之后离心取上清液，即得具抗癌活性的载有药物或者分子探针的熊果酸偶联物纳米粒。
其中，所述的良性溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、正丙醇、甲醇、吡啶、乙酸、二甲基亚砜一种或多种的混合；
所述的不良溶液为为磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、葡萄糖溶液一种或多种的混合；
所述的偶联物为将熊果酸或其衍生物位羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式直接连接，其制备方法为：先对熊果酸或其衍生物的羧基进行活化后，与含胍类药物中的氨基进行偶联后得到。
更具体的：
1）将熊果酸或其衍生物-胍基类药物偶联物溶于良性溶剂中，为溶液A；溶液浓度范围为20μM-20000μM；良性溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、正丙醇、甲醇、吡啶、乙酸、二甲基亚砜一种或多种的混合；
2）将溶液A滴入搅拌中的不良溶液中，为悬浊液B；悬浊液最后的浓度范围为2μM-2000μM；不良溶液为磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、葡萄糖溶液一种或多种的混合；
3）将含有待包载的药物或分子探针溶液滴入搅拌中的悬浊液B，得悬浊液C；其中熊果酸及其衍生物-胍基类药物偶联物：药物或分子探针和的物质的量的浓度为1:5-10；即载体和待包载的目标物的比例为1:5-10，其目标药物浓度为0.2μM-400μM；
将悬浊液C继续搅拌，之后超声处理，之后离心取上清液，即得具抗癌活性的载有药物或者分子探针的熊果酸偶联物纳米粒。超声时间为20s-1200s;搅拌时间1min-30min;搅拌过程中允许在20-70摄氏度下加热；
其中被载药物即待包载的药物可以为盐酸厄洛替尼、甲苯磺酸索拉非尼、阿柔比星、阿柔比星B、伊达比星、吡柔比星、紫杉醇、多西他赛、福美坦、埃博霉素、雷公藤内酯醇、米非司酮、紫杉醇、多西紫杉醇、喜树碱、10-羟基喜树碱、秋水仙碱、长春新碱、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、顺铂和6-巯基嘌呤、盐酸柔红霉素、盐酸表阿霉素、盐酸佐柔比星、盐酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶；
被载分子探针为钆配合物造影剂 、双吡啶硫酮、花氰荧光染料、全氟化碳。
该偶联物形成相对应的空白载体纳米粒的制备方法如下：将熊果酸偶联物溶于良性溶剂中，为溶液A
1）将溶液A滴入搅拌中的不良溶液中，为悬浊液B；
2）将悬浊液B继续搅拌，之后超声处理，之后离心取上清液，即得具抗癌活性的熊果酸偶联物纳米粒；
其中，所述的良性溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、正丙醇、甲醇、吡啶、乙酸、二甲基亚砜一种或多种的混合；
所述的不良溶液为为磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、葡萄糖溶液一种或多种的混合；
所述的偶联物为将熊果酸或其衍生物位羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式直接连接，其制备方法为：先对熊果酸或其衍生物的羧基进行活化后，与含胍类药物中的氨基进行偶联后得到。
具体实现方式为：
1）将熊果酸及其衍生物-胍基类药物偶联物溶于良性溶剂中，为溶液A；溶液浓度范围为20μM-20000μM；良性溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、正丙醇、甲醇、吡啶、乙酸、二甲基亚砜一种或多种的混合；
2）将溶液A滴入搅拌中的不良溶液中，为悬浊液B；悬浊液最后的浓度范围为2μM-2000μM；不良溶液为磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、葡萄糖溶液一种或多种的混合；超声时间为20s-1200s;搅拌时间1min-30min;搅拌过程中允许在20-70摄氏度下加热既得具有载药功能的熊果酸偶联物纳米粒空白载体。
上述的偶联物，例如如式Ⅵ所示的熊果酸UA和二甲双胍Met偶联物（UA-Met）；VI；
可由以下方法制备而得（但不限于此）：先对熊果酸或其衍生物的羧基进行活化后，与含胍基类药物的氨基进行偶联后得到。
具体的制备步骤：
（1）DCC/NHS活化法
1.熊果酸或其衍生物和DCC用四氢呋喃搅拌溶解；
2.NHS用乙腈搅拌溶解，于冰浴上逐滴加入到a溶液中；
3.反应24 h后，待UA反应完全后，过滤除去不溶物，过柱纯化的活化后的熊果酸及其衍生物纯品；
4.活化后的熊果酸及其衍生物和胍基类药物用乙醇搅拌溶解，于室温下反应24 h，过柱纯化得到熊果酸及其衍生物-胍基类药物偶联物纯品。
举例：所述熊果酸偶联物的合成为（例UA-Met的合成）；
（2）草酰氯活化法
1.将熊果酸或其衍生物溶于干燥的二氯甲烷，加入草酰氯，搅拌10 h，减压蒸除气体和溶剂。
2.重新加入二氯甲烷，溶液通过恒压漏斗向溶有胍基类药物和DMAP的吡啶：二氯甲烷（1v/1v）混合溶液中滴加，滴加完成后继续搅拌8-10 h。
3.反应完全后，减压蒸除二氯甲烷。
4.向反应瓶中加入水析出产物，抽滤，并用水洗滤饼至中性，真空干燥，柱层析得该偶联物。
5.所述熊果酸偶联物（例UA-Met的合成）合成路线图解如下：
本发明的优点在于：
1、本发明所制备的偶联物作为载体具有一定的抗癌效果但作为载体有没有太大的细胞毒性，合成简单方便；
2、本发明所制备偶联物在水中可以通过溶剂交换法自组装成为纳米粒,作为抗癌药物或荧光物质的载体，有效地解决了一系列抗癌药物水溶性问题；
3、本发明的纳米粒具备pH响应性；
4、可以对无载体纳米粒表面进行修饰（如加入部分靶向物质进行简单的修饰）,可以使纳米粒具有靶向性等功能;
5、本发明所制备的纳米粒可以解决传统纳米载体在体内代谢不明确，体系复杂等问题，并能为以后新药研发和制备提供新的思路。
附图说明
图1. 为实施例1合成的两亲性小分子药物UA-Met红外表征图谱；
图2. 为实施例2合成的UA-Met纳米粒的粒径图；
图3. 为实施例2合成的UA-Met纳米粒的pH响应；
图4. 为实施例4合成的UA-Met/DOX纳米粒的粒径图；
图5. 为实施例2和4合成的UA-Met纳米粒和UA-Met/DOX纳米粒的丁达尔效应图；
图6. 为实施例2合成的两亲性抗癌前药UA-Met自组装形成的无载体纳米粒作用24 h后对HeLa细胞的增殖抑制作用；
图7. 为实施例4合成的UA-Met/DOX纳米粒作用24 h后对HeLa细胞的增殖抑制作用；
图8. 为实施例6合成的Bev/UA-Met@DOX纳米粒的小动物成像图；
图9. 为实施例2合成的两亲性抗癌前药UA-Met自组装形成的无载体纳米粒作用24 h后对A549细胞的增殖抑制作用；
图10. 为实施例6合成的UA-Met/El纳米粒作用24 h后对A549细胞的增殖抑制作用；
图11. 为实施例2合成的两亲性抗癌前药UA-Met自组装形成的无载体纳米粒作用24 h后对HepG2细胞的增殖抑制作用；
图12. 为实施例8合成的UA-Met/Sora纳米粒作用24 h后对HepG2细胞的增殖抑制作用；
图13. 为实施例12合成的UA1-Met@ICG纳米粒的小动物成像图。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
UA-Met的合成，结构式Ⅵ所示，化学名：(1S,2R,4aS,6aS,6bR,10S,12aR)-N-(N-(N,N-dimethylcarbamimidoyl)carbamimidoyl)-10-hydroxy-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-octadecahydropicene-4a(2H)-carboxamide.
室温下，200 mg的UA和181 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的101 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA纯品。取100 mg活化后的UA纯品和30 mg的Met用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA-Met纯品(46.11mg)，产率为45.0％。
Ⅵ
将实施例1 所得的纯品进行氢谱1H NMR检查为UA-Met
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d, ppm): δ= 8.53 (s, 1 H), 5.32 (s, 1 H),4.02 (s, 1 H), 3.60 (pd, J = 7.0, 5.0 Hz, 1 H), 2.87 (s, 6 H), 2.09 - 1.86(m, 2 H), 1.84 - 1.39 (m, 10 H), 1.37 - 1.26 (m, 2 H), 1.31 - 1.18 (m, 3 H),1.22 - 1.00 (m, 3 H), 1.04 - 0.89 (m, 16 H), 0.83 (s, 3 H), 0.78 (s, 3 H).
所得UA-Met偶联物红外表征图谱如图1所示。
实施例2
UA-Met纳米粒子的制备方法
精确称取UA-Met粉末0.00586 g，溶于1 ml的甲醇中，超声溶解，配置成10 mM的溶液；取20 uL甲醇溶液，逐滴加入到装有180 uL的EP管中（注：滴加过程中进行涡旋，20 uL滴加时间为20s)，然。后超声1 min，以12000 rpm离心5 min，上清即为UA-Met纳米粒。
本实施例制备的UA-Met纳米粒水溶液的粒径的平均尺寸在110纳米左右，粒径图如图2所示。
实施例3
将实施例2所制备的纳米粒水溶液取200 ul两份于比色皿中，然后分别加入pH为7.0和pH为5.0的PBS溶液800 ul，然后用激光笔照射，观察现象，结果如图3所示。
如图3所示，结果表明UA-Met纳米粒水溶液在中性pH=7.0溶液中保持其纳米结构，在酸性条件pH=5.0时，纳米水溶液出现絮状物，光束分散。众多研究表明，肿瘤微环境呈弱酸性，这对于药物进入肿瘤微环境后，pH响应后，药物大量释放。
实施例4
UA-Met@DOX纳米粒子的制备方法
取10mM的UA-Met二氯甲烷溶液20 uL，在室温下将其逐滴加入176 uL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 uL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药DOX水溶液4uL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸阿霉素（缩写DOX）的UA-Met @DOX纳米粒水溶液。
本实施例制备的UA-Met@DOX纳米粒水溶液的粒径的平均尺寸在90纳米左右，粒径图如图4所示，粒径小于单一的药物纳米，更利于药物的吸收和利用，发挥更好的抗癌效果。
将空白水溶液、UA-Met@DOX纳米粒、UA-Met纳米粒稀释5倍于比色皿中激光照射，产生丁达尔效应，如图5所示。结果表明，本实验做出为胶体溶液。
实施例 5
抗癌活性实验通过细胞毒性来实现，采用标准MTT 比色法测定了UA-Met/DOX纳米粒，无载体的UA-Met纳米粒，UA，Met和UA-Met溶液对Hela细胞的增殖抑制活性。具体步骤为：将对数期的细胞，用胰酶消化后，细胞计数，配成5×104-1×105/ml的细胞浓度，将制得的细胞悬液，每孔100 μL接种到96孔板，放于37℃、5% CO2培养箱中培养24 h，弃掉旧的培养基，加入配制好的不同浓度样品，药物作用24 h后，吸弃含药培养基，于每孔中加入100 μL稀释好的MTT溶液（0.5 mg/ml MTT的母液:无血清无酚红培养基=1：9），继续孵育4 h后，终止培养；小心吸弃96孔板孔内上清液，每孔加入100 μL DSMO，振荡10 min，于570 nm 波长处在酶标仪上测定各孔光吸收值（OD值），计算细胞成活率（%）=（用药组平均OD值/空白对照组平均OD值）×100%。用GraphPad Prism 软件进行数据处理，结果如图6、7所示。
实验结果如图6、7所示，无载体的UA-Met/DOX纳米粒作用于Hela细胞24 h之后，UA-Met给药组、DOX给药组、UA-Met和DOX联合给药组、无载体的UA-Met纳米粒及包载抗肿瘤药盐酸阿霉素的无载体的UA-Met/DOX纳米粒给药组对HeLa细胞具有不同程度的增殖抑制作用，并呈浓度依赖性依赖性。UA-Met给药组在>50 μM的条件下能有效的抑制HeLa细胞的增殖，此时细胞的存活率大约在60%左右；与UA-Met给药组相比无载体的UA-Met纳米粒能够明显的降低抗癌前药UA-Met的毒副作用；包载抗肿瘤药盐酸阿霉素的无载体的UA-Met/DOX纳米粒给药组相比于UA-Met给药组、DOX给药组、UA-Met和DOX联合给药组能够更加有效的抑制HeLa细胞的增殖，效果最好。
实施例6
Bev/UA-Met@DOX纳米粒小动物成像
Bev/UA-Met@DOX纳米粒的制备方法:取10mM的UA-Met甲醇溶液100 μL，在室温下将其逐滴加入800 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为3 mg/mL的DOX甲醇溶液50 μL，室温搅拌两个小时振荡，除去甲醇，之后滴加10 mg/mL贝伐单抗（BEV）50 μL，超声1min即得靶向包载阿霉素（缩写DOX）的Bev/UA-Met@DOX纳米粒水溶液。将上述制备的纳米粒，取通过尾静脉注射200 μL于肿瘤裸鼠体内，然后对其进行拍照，结果如图8所示。
如图8所示，Bev/UA-Met@DOX纳米粒成功进入肿瘤裸鼠体内，DOX全部集中在肿瘤组织，成功的将DOX靶向肿瘤组织并成像。该实验结果表明，无需借助纳米材料载体，借助无载体纳米粒UA-Met，即可完成DOX的运输。
实施例 7
包载El的无载体两亲性纳米载药系统的制备
将上述制得的UA-Met溶解在有机溶剂中，在室温下将其滴入水中，加热、磁力搅拌或超声处理后，以无载体两亲性小分子纳米载药系统，逐滴加入抗肿瘤药El水溶液，室温搅拌两个小时即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼的UA-Met/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA-Met/El纳米粒水溶液的粒径的平均尺寸在180纳米左右。
实施例8
抗癌活性实验通过细胞毒性来实现，采用标准MTT 比色法测定了无载体的UA-Met纳米粒和包载El的无载体的UA-Met纳米粒对A549细胞的增殖抑制活性，操作步骤同实施例5，实验结果如图9、10所示。
实验结果如图9、10所示，无载体的UA-Met/El纳米粒作用于A549细胞24 h之后，UA-Met给药组、El给药组、UA-Met和El联合给药组、无载体的UA-Met纳米粒及包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼的无载体的UA-Met/El纳米粒给药组对A549细胞具有不同程度的增殖抑制作用，并呈浓度依赖性依赖性。UA-Met给药组在>25 μM的条件下能有效的抑制A549细胞的增殖，此时细胞的存活率大约在60%左右；与UA-Met给药组相比无载体的UA-Met纳米粒能够明显的降低抗癌前药UA-Met的毒副作用；包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼的无载体的UA-Met/El纳米粒给药组相比于UA-Met给药组、El给药组、UA-Met和El联合给药组能够更加有效的抑制A549细胞的增殖，效果最好。
实施例 9
包载Sora的无载体两亲性纳米载药系统的制备
将上述制得的UA-Met溶解在有机溶剂中，在室温下将其滴入水中，加热、磁力搅拌或超声处理后，以无载体两亲性小分子纳米载药系统，逐滴加入抗肿瘤药Sora水溶液，室温搅拌两个小时即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼的UA-Met/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA-Met/Sora纳米粒水溶液的粒径的平均尺寸在200纳米左右。
实施例10
抗癌活性实验通过细胞毒性来实现，采用标准MTT 比色法测定了无载体的UA-Met纳米粒和包载Sora的无载体的UA-Met纳米粒对HepG2细胞的增殖抑制活性，操作步骤同实施例5，实验结果如图11、12所示。
实验结果如图11、12所示，无载体的UA-Met/Sora纳米粒作用于HepG2细胞24 h之后，UA-Met给药组、Sora给药组、UA-Met和Sora联合给药组、无载体的UA-Met纳米粒及包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼的无载体的UA-Met/Sora纳米粒给药组对HepG2细胞具有不同程度的增殖抑制作用，并呈浓度依赖性依赖性。UA-Met给药组在>50 μM的条件下能有效的抑制HepG2细胞的增殖，此时细胞的存活率大约在60%左右；与UA-Met给药组相比无载体的UA-Met纳米粒能够明显的降低抗癌前药UA-Met的毒副作用；包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼的无载体的UA-Met/Sora纳米粒给药组相比于UA-Met给药组、Sora给药组、UA-Met和Sora联合给药组能够更加有效的抑制HepG2细胞的增殖，效果最好。
实施例11
UA1-Met的合成，结构如式Ⅶ所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(N,N-dimethylcarbamimidoyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl acetate
室温下，200 mg的UA1和170.9 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的95.4 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA1反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA1纯品。取100 mg活化后的UA1纯品和28.58mg的Met用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA1-Met纯品(49.47mg)，产率为48.3％。
Ⅶ
取10mM的UA1-Met二氯甲烷溶液20 L，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药El水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼（缩写El）的UA1-Met @El纳米粒水溶液。
UA1-Met/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA1-Met/El纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例12
UA1-Met@ICG纳米粒小动物成像
UA1-Met@ICG纳米粒的制备方法:取10mM的UA1-Met甲醇溶液100 μL，在室温下将其逐滴加入800 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为3 mg/mL的ICG甲醇溶液50 μL，室温搅拌两个小时振荡，除去甲醇即得包载吲哚菁绿（缩写ICG）的UA1-Met@ICG纳米粒水溶液。将上述制备的纳米粒，取通过尾静脉注射200 μL于肿瘤裸鼠体内，然后对其进行拍照，结果如图13所示。
如图13所示，包载ICG的纳米粒成功进入体内并成像。与实施例6合成的Bev/UA-Met@DOX纳米粒的小动物成像相比，ICG进入肿瘤裸鼠体内较为分散，没有集中在肿瘤组织。但是UA1-Met@ICG纳米粒仍可借助无载体纳米粒UA1-Met完成ICG的运输。
实施例 13
UA2-Met的合成，结构如式Ⅷ所示，化学名：(1S,2R,4aS,6aS,6bR,12aR)-N-(N-(N,N-dimethylcarbamimidoyl)carbamimidoyl)-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-10-oxo-1,3,4,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-octadecahydropicene-4a(2H)-carboxamide
室温下，200 mg的UA2和181.5 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的101.3 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA2反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA2纯品。取100 mg活化后的UA2纯品和30.03 mg的Met用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA2-Met纯品(50.96mg)，产率为49.7％。
Ⅷ
取10mM的UA2-Met二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药Sora水溶液4μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼（缩写Sora）的UA2-Met@Sora纳米粒水溶液。
UA2-Met/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA2-Met/Sora纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 14
UA3-Met的合成，结构如式Ⅸ所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(N,N-dimethylcarbamimidoyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl 2,2-dichloroacetate
室温下，200 mg的UA3和145.63 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的81.29mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA3反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA3纯品。取100 mg活化后的UA3纯品和25.34mg的Met用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA3-Met纯品(50.28mg)，产率为48.5％。
Ⅸ
取10mM的UA3-Met二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药DOX水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸阿霉素（缩写DOX）的UA3-Met @DOX纳米粒水溶液。
UA3-Met/DOX纳米粒水溶液。本实施例制备的UA3-Met/DOX纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 15
UA4-Met的合成，结构如式Ⅹ所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(N,N-dimethylcarbamimidoyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl 3-methylbutanoate
Ⅹ
室温下，200 mg的UA4和157.26 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的87.78 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA4反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA4纯品。取100 mg活化后的UA4纯品和26.64mg的Met用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA4-Met纯品(48.67mg)，产率为47.6％。
取10mM的UA4-Met二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药El水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼（缩写El）的UA1-Met @El纳米粒水溶液。
UA4-Met/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA4-Met/El纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 16
UA5-Met的合成，结构如式Ⅺ所示，化学名：4-(((((6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(N,N-dimethylcarbamimidoyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl)oxy)carbonyl)oxy)benzoic acid
室温下，200 mg的UA5和136.45 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的76.17 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA5反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA5纯品。取100 mg活化后的UA5纯品和23.61mg的Met用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA5-Met纯品(47.73mg)，产率为46.8％。
Ⅺ
取10mM的UA5-Met二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药Sora水溶液4μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼（缩写Sora）的UA2-Met@Sora纳米粒水溶液。
UA5-Met/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA5-Met/Sora纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 17
UA-Mor的合成，结构如式Ⅻ所示，化学名：(1S,2R,4aS,6aS,6bR,12aR)-N-(N-(2-(azocan-1-yl)ethyl)carbamimidoyl)-10-hydroxy-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-octadecahydropicene-4a(2H)-carboxamide
室温下，200 mg的UA和181 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的101 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA1纯品。取100 mg活化后的UA纯品和37.68 mg的Mor用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA-Mor纯品(57.01mg)，产率为49.6％。
Ⅻ
取10mM的UA-Mor二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药DOX水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸阿霉素（缩写DOX）的UA-Mor @DOX纳米粒水溶液。
UA-Mor /DOX纳米粒水溶液。本实施例制备的UA-Mor /DOX纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 18
UA1-Mor的合成，结构如式XⅢ所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(2-(azocan-1-yl)ethyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl acetate
室温下，200 mg的UA1和170.9 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的95.4 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA1反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA1纯品。取100 mg活化后的UA1纯品和35.65mg的Mor用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA1-Mor纯品(55.91mg)，产率为48.9％。
XⅢ
取10mM的UA1-Mor二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药El水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼（缩写El）的UA1-Met @El纳米粒水溶液。
UA1-Mor/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA1-Mor/El纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 19
UA2-Mor的合成，结构如式XIV所示，化学名：(1S,2R,4aS,6aS,6bR,12aR)-N-(N-(2-(azocan-1-yl)ethyl)carbamimidoyl)-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-10-oxo-1,3,4,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-octadecahydropicene-4a(2H)-carboxamide
室温下，200 mg的UA2和181.5 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的101.3 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA2反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA2纯品。取100 mg活化后的UA2和37.46 mg的Mor用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA2-Mor纯品(56.84mg)，产率为49.4％。
XIV
取10mM的UA2-Mor二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药Sora水溶液4μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼（缩写Sora）的UA2-Met@Sora纳米粒水溶液。
UA2-Mor/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA2-Mor/Sora纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 20
UA3-Mor的合成，结构如式XV所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(2-(azocan-1-yl)ethyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl 2,2-dichloroacetate
室温下，200 mg的UA3和145.63 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的81.29mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA3反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA3纯品。取100 mg活化后的UA3纯品和31.62mg的Mor用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA3-Mor纯品(55.07mg)，产率为48.2％。
XV
取10mM的UA3-Mor二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药DOX水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸阿霉素（缩写DOX）的UA3-Mor @DOX纳米粒水溶液。
UA3-Mor/DOX纳米粒水溶液。本实施例制备的UA3-Mor/DOX纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 21
UA4-Mor的合成，结构如式XVI所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(2-(azocan-1-yl)ethyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl 3-methylbutanoate
室温下，200 mg的UA4和157.26 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的87.78 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA4反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA4纯品。取100 mg活化后的UA4纯品和33.24 mg的Mor用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA4-Mor纯品(53.96mg)，产率为47.6％。
XVI
取10mM的UA4-Mor二氯甲烷溶液20 L，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药El水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼（缩写El）的UA1-Met @El纳米粒水溶液。
UA4-Mor/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA4-Mor/El纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 22
UA5-Mor的合成，结构如式XVII所示，化学名：4-(((((6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(2-(azocan-1-yl)ethyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl)oxy)carbonyl)oxy)benzoic acid
室温下，200 mg的UA5和136.45 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的76.17 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA5反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA5纯品。取100 mg活化后的UA5纯品和29.45 mg的Mor用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA5-Mor纯品(54.47mg)，产率为48.7％。
XVII
取10mM的UA5-Mor二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药Sora水溶液4μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼（缩写Sora）的UA2-Met@Sora纳米粒水溶液。
UA5-Mor/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA5-Mor/Sora纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 23
UA-Gua的合成，结构如式XVIII，化学名：(1S,2R,4aS,6aS,6bR,12aR)-10-hydroxy-N-(N-(imino(morpholino)methyl)carbamimidoyl)-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-octadecahydropicene-4a(2H)-carboxamide
室温下，200 mg的UA和181 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的101 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA纯品。取100 mg活化后的UA纯品和53.47mg的Gua用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA-Gua纯品(52.39mg)，产率为47.6％。
XVIII
取10mM的UA-Gua二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药DOX水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸阿霉素（缩写DOX）的UA-Gua @DOX纳米粒水溶液。
UA5-Mor/DOX纳米粒水溶液。本实施例制备的UA5-Mor/DOX纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 24
UA1-Gua的合成，结构如式XIX所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(imino(morpholino)methyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl acetate
室温下，200 mg的UA1和170.9 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的95.4 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA1反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA1纯品。取100 mg活化后的UA1纯品和51.11mg的Gua用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA1-Gua纯品(51.32mg)，产率为46.8％。
XIX
取10mM的UA1-Gua二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药El水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼（缩写El）的UA1-Met @El纳米粒水溶液。
UA1-Gua/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA1-Gua/El纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 25
UA2-Gua的合成，结构如式XX所示，化学名：(1S,2R,4aS,6aS,6bR,12aR)-N-(N-(imino(morpholino)methyl)carbamimidoyl)-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-10-oxo-1,3,4,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-octadecahydropicene-4a(2H)-carboxamide
室温下，200 mg的UA2和181.5 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的101.3 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA2反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA2纯品。取100 mg活化后的UA2和53.71 mg的Gua用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA2-Gua纯品(53.32mg)，产率为48.4％。
XX
取10mM的UA2-Gua二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药Sora水溶液4μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼（缩写Sora）的UA2-Met@Sora纳米粒水溶液。
UA2-Gua/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA2-Gua/Sora纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 26
UA3-Gua的合成，结构如式XXI所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(imino(morpholino)methyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl 2,2-dichloroacetate
室温下，200 mg的UA3和145.63 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的81.29mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA3反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA3纯品。取100 mg活化后的UA3纯品和45.33 mg的Gua用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA3-Gua纯品(52.08mg)，产率为47.3％。
XXI
取10mM的UA3-Gua二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药DOX水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸阿霉素（缩写DOX）的UA3-Gua @DOX纳米粒水溶液。
UA3-Gua/DOX纳米粒水溶液。本实施例制备的UA3-Gua/DOX纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 27
UA4-Gua的合成，结构如式XXII所示，化学名：(6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(imino(morpholino)methyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl 2,2-dichloroacetate
室温下，200 mg的UA4 和157.26 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的87.78 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA4反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA4纯品。取100 mg活化后的UA4纯品和47.65 mg的Gua用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA4-Gua纯品(56.43mg)，产率为46.3％。
XXII
取10mM的UA4-Gua二氯甲烷溶液20μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药El水溶液4 μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药盐酸厄洛替尼（缩写El）的UA1-Met @El纳米粒水溶液。
UA4-Gua/El纳米粒水溶液。本实施例制备的UA4-Gua/El纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。
实施例 28
UA5-Gua的合成，结构如式XXIII所示，化学名：4-(((((6aR,6bS,8aS,11R,12S,14bR)-8a-((N-(imino(morpholino)methyl)carbamimidoyl)carbamoyl)-4,4,6a,6b,11,12,14b-heptamethyl-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-icosahydropicen-3-yl)oxy)carbonyl)oxy)benzoic acid
室温下，200 mg的UA5和136.45 mg的DCC用3 ml的THF搅拌溶解；反应瓶在冰浴上逐滴加入事先用1.7 ml乙腈溶解的76.17 mg NHS。室温下搅拌反应24 h，待UA5反应完全后，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，柱层析得活化后的UA5纯品。取100 mg活化后的UA5纯品取100 mg活化后的UA5纯品和42.22 mg的Gua用5 ml的甲醇搅拌溶解，室温下反应24 h后，减压蒸除溶剂，柱层析得UA5-Gua纯品(47.91mg)，产率为49.6％。
XXIII
取10mM的UA5-Gua二氯甲烷溶液20 μL，在室温下将其逐滴加入176 μL的水中（注：整个制备过程进行涡旋，20 μL滴加时间为20s)，然后加入浓度为10mM的抗肿瘤药Sora水溶液4μL，室温搅拌两个小时振荡，之后超声1min即得包载抗肿瘤药甲苯磺酸索拉非尼（缩写Sora）的UA2-Met@Sora纳米粒水溶液。
UA5-Gua/Sora纳米粒水溶液。本实施例制备的UA5-Gua/Sora纳米粒水溶液其纳米粒粒径大小为90-150 nm。

Claims (7)

1.一种具有抗癌活性的熊果酸偶联物作为药物载体或者分子探针载体的应用；所述的熊果酸偶联物其特征在于其为熊果酸或其衍生物的羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式相连接形成偶联物。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于熊果酸偶联物包载药物或者分子探针形成纳米粒。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述熊果酸或其衍生物为如式I所示的化合物，
；
R为-OH、=O、 、、或；
所述胍类药物如式II所示；其中：R1代表H、烃基或芳基；R2代表H、烃基、芳基；R3代表H、烃基或芳基；R4代表H、烃基或芳基；R5代表H、烃基或芳基
II。
4.如权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于所述胍类药物如式III、IV或V所示：
III
IV
V。
5.如权利要求1所述的应用，其具体应用方式为：
1）将熊果酸偶联物溶于良性溶剂中，为溶液A
2）将溶液A滴入搅拌中的不良溶液中，为悬浊液B；
3）将含有待包载的药物或分子探针溶液滴入搅拌中的悬浊液B，得悬浊液C；
4）将悬浊液C继续搅拌，之后超声处理，之后离心取上清液，即得具抗癌活性的载有药物或者分子探针的熊果酸偶联物纳米粒；
其中，所述的良性溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、正丙醇、甲醇、吡啶、乙酸、二甲基亚砜一种或多种的混合；
所述的不良溶液为为磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、葡萄糖溶液一种或多种的混合；
所述的偶联物为将熊果酸或其衍生物位羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式直接连接，其制备方法为：先对熊果酸或其衍生物的羧基进行活化后，与含胍类药物中的氨基进行偶联后得到。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于被载药物为盐酸厄洛替尼、甲苯磺酸索拉非尼、阿柔比星、阿柔比星B、伊达比星、吡柔比星、紫杉醇、多西他赛、福美坦、埃博霉素、雷公藤内酯醇、米非司酮、紫杉醇、多西紫杉醇、喜树碱、10-羟基喜树碱、秋水仙碱、长春新碱、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、顺铂和6-巯基嘌呤、盐酸柔红霉素、盐酸表阿霉素、盐酸佐柔比星、盐酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶；分子探针为钆配合物造影剂 、双吡啶硫酮、花氰荧光染料、全氟化碳。
7.一种兼具抗癌活性和载药功能的熊果酸偶联物纳米粒，其特征在于制备方法如下：
1）将熊果酸偶联物溶于良性溶剂中，为溶液A
2）将溶液A滴入搅拌中的不良溶液中，为悬浊液B；
3）将悬浊液B继续搅拌，之后超声处理，之后离心取上清液，即得具抗癌活性的熊果酸偶联物纳米粒；
其中，所述的良性溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、正丙醇、甲醇、吡啶、乙酸、二甲基亚砜一种或多种的混合；
所述的不良溶液为为磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、葡萄糖溶液一种或多种的混合；
所述的偶联物为将熊果酸或其衍生物位羧基与胍类药物的氨基以酰胺键的形式直接连接，其制备方法为：先对熊果酸或其衍生物的羧基进行活化后，与含胍类药物中的氨基进行偶联后得到。
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