CN106581152A - 一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液,制备方法如下:黄芪回流提取:取黄芪原料10g,粉碎,加入150ml无水乙醇,水浴中保持沸腾回流提取约1.5h,放冷后过滤;在药渣中分别添加100、50ml无水乙醇提取2次,过滤,合并滤液,旋转蒸发仪浓缩,温度设定50℃并回收乙醇,浓缩至10ml,4℃保存备用;黄岑水煎的提取:称取黄岑药材10g,加150ml蒸馏水浸泡30min,加热至沸腾文火保持30min,用六层纱布过滤,药渣再加100ml蒸馏水,加热至沸腾文火保持30min,六层纱布过滤,合并2次滤液;本发明对对虾养殖中的常见细菌病有良好的效果,具有无毒、无药物残留、使用安全方便、功能全面等优点。
Description
技术领域
本发明涉及的是中草药复合液技术领域,具体的说是一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液。
背景技术
随着集约化、高密度养殖的迅速发展,水产疾病频繁暴发,目前都是依赖于使用大量的化学药物和抗生素来解决,这造成了许多问题,不仅会使细菌等病原微生物对这些药物产生抗药性,而且药物的长期使用也会使养殖品种的质量下降,导致严重的药物残留,而药物残留对人体构成许多如脏器受损等潜在的威胁。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足,提供了一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液,制备方法如下:
1、黄芪回流提取:取黄芪原料10g,粉碎,加入150ml无水乙醇,水浴中保持沸腾回流提取约1.5h,放冷后过滤;在药渣中分别添加100、50ml无水乙醇提取2次,过滤,合并滤液,旋转蒸发仪浓缩,温度设定50℃并回收乙醇,浓缩至10ml,4℃保存备用;
2、黄岑水煎的提取:称取黄岑药材10g,加150ml蒸馏水浸泡30min,加热至沸腾文火保持30min,用六层纱布过滤,药渣再加100ml蒸馏水,加热至沸腾文火保持30min,六层纱布过滤,合并2次滤液,旋转蒸发仪浓缩,温度设定55℃,115℃高压灭菌20min,4℃保存备用;
3、中草药复合液的制备方法:将1和2的液体,按1:1的比例进行混合,将无水乙醇换为60%乙醇提取中草药材有效成分,其他条件不变,制备得到中草药复合液。
本发明的有益效果为:该中草药复合液是在提取中草药有效成分的基础上,优化配伍复合而成,不仅可以保障药效的稳定性,还可以使得剂量精准控制,对对虾养殖中的常见细菌病有良好的效果,具有无毒、无药物残留、使用安全方便、功能全面等优点。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合具体实施方式,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实验所用中国对虾、凡纳滨对虾购于青岛市红岛东大洋养殖场。两种养殖对虾生物体长均为8.5±0.5cm,体色正常,健康活泼。暂养驯化7天,海水盐度为30,pH为8.5,温度为22±0.5℃,连续充气,日换水2次,换水量为1/3-1/2,并投喂对虾配合饲料。
设对照组和实验组,每组4个重复,实验组用添加了中草药浸泡后的饲料饲喂,对照组饲喂未添加中草药的饲料,保持水温、供氧、饲喂条件等一致,养殖30天。定期测定抗菌活力(副溶血弧菌和哈维氏弧菌)、酚氧化酶和溶菌活力等指标。
1、样品制备
用消毒的5号针头和2毫升注射器由头胸甲后插入心脏取血,注射器中预先加入已消毒的预冷抗凝剂,使血液与抗凝剂最终比例为1:1,血液置于冰箱(4℃)中保存过夜;低速离心(2000-3000r/min)10-15min,将析出的蓝色血清倾出,进行各项指标的测定。
2、测定方法
溶菌活力和抗菌活力测定分别以溶壁微球菌(Micrococcus lysoleikticus)冻干粉和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)为底物,参照Hultmark等改进的方法[10];酚氧化酶活力的测定以L-DOPA为底物,按Ashida的方法[11]进行。以上各种方法均有改进。
3、抗菌活力测定
菌悬液的制备:实验所用细菌为副溶血弧菌、哈维氏弧菌。将菌种接种于2116E斜面固体培养基上,30℃下培养18-20小时。然后用0.1mol/L,pH=6.4的磷酸钾盐缓冲液从固体斜面上将菌洗下作为底物,并配成一定浓度的悬浊液(O.D.570nm=0.3—0.5)。
抗菌活力测定:分别取3ml上述悬浊液于试管内置于冰浴中,再各加入50μl待测血清混匀,测其保温前试液在570nm波长处的光密度值(A0)。然后将试液移入37℃温浴中30min,取出后立刻再置于冰浴内10min以终止反应,测其经温浴后的试液在570nm波长处的光密度值(A)。抗菌活力按下式计算:
Ua2=(A0-A)/A
(注:为消除血蓝素的干扰,用空白血清为对照,于570nm波长处测其的光密度值,以校正A0、A值。)
3.2.2.2溶菌活力测定
菌悬液的制备:以溶壁微球菌(Micrococus lysoleikticus)冻干粉为底物,采用Hultmark等人(1980)改进的方法进行。用0.1mol/L,PH=6.4磷酸钾盐缓冲液配成底物悬液(O.D.570nm≈0.3)。
溶菌活力测定:取3ml该悬液于试管内置于冰浴中,再加入50μl待测血清混匀,于570nm波长处测A0值。然后将试液移入37℃温浴中放置30min,取出后立即置于冰浴中10min,以终止反应,测其A值。溶菌活力按下式计算:UL=(A0-A)/A(注:为消除血蓝素的干扰,用空白血清为对照,于570nm波长处测其的光密度值,以校正A0、A值。)
4、酚氧化酶活力测定
以L-DOPA为底物,参照Ashida(1971)的方法进行。将3ml,0.1mol/L,PH=6.0的磷酸钾盐缓冲液与100ul的0.01mol/l的L-DOPA及100ul的血清置于室温下混匀,每间隔2分钟读取在490nm波长处的光密度值一次。以O.D.490nm对反应时间(min)作图,以实验条件下每分钟O.D.490nm增加0.001定义为一个酶活力单位。(注:L-DOPA多巴[3、4-二羟苯丙氨酸],可用磷酸钾盐缓冲液配制)
通过分析所检测的对虾免疫敏感指标的数据,发现黄芪、黄岑和中草药复合液对南美白对虾的免疫力和抗病力都有明显的提高,以中草药复合液提高的更显著,可以更高效的提高虾蟹免疫力和抗病力,是理想的虾蟹病害防控的有效药物。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (1)
1.一种有效增强对虾免疫力和抗病力的中草药复合液,其特征在于:制备方法如下:
(1)、黄芪回流提取:取黄芪原料10g,粉碎,加入150ml无水乙醇,水浴中保持沸腾回流提取约1.5h,放冷后过滤;在药渣中分别添加100、50ml无水乙醇提取2次,过滤,合并滤液,旋转蒸发仪浓缩,温度设定50℃并回收乙醇,浓缩至10ml,4℃保存备用;
(2)、黄岑水煎的提取:称取黄岑药材10g,加150ml蒸馏水浸泡30min,加热至沸腾文火保持30min,用六层纱布过滤,药渣再加100ml蒸馏水,加热至沸腾文火保持30min,六层纱布过滤,合并2次滤液,旋转蒸发仪浓缩,温度设定55℃,115℃高压灭菌20min,4℃保存备用;
(3)、中草药复合液的制备方法:将1和2的液体,按1:1的比例进行混合,将无水乙醇换为60%乙醇提取中草药材有效成分,其他条件不变,制备得到中草药复合液。
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CN108142642A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-06-12 | 山东碧蓝生物科技有限公司 | 一种营养免疫型对虾软颗粒饲料及其制备方法 |
CN114158504A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-03-11 | 海南归耘田农业科技有限公司 | 一种用于防治稻虾病害的方法 |
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CN105661105A (zh) * | 2016-01-29 | 2016-06-15 | 中国海洋大学 | 一种用于对虾的复方中草药免疫增强剂 |
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齐子鑫,徐文彦,等: "中草药对鱼类免疫力的影响及应用研究", 《河北渔业》 * |
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