CN106573040A - 治疗异常皮肤瘢痕形成 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用APC或其类似物来预防和治疗病理性瘢痕。

Description

治疗异常皮肤瘢痕形成
技术领域
本发明涉及异常皮肤瘢痕形成(abnormal cutaneous scarring)(包括肥厚性(hypertrophic)瘢痕形成、萎缩性(atrophic)瘢痕形成和瘢痕疙瘩性瘢痕形成(keloidscarring))及其治疗。
背景技术
本说明书中提及任何现有技术不是承认或表明该现有技术形成在任何管辖范围(jurisdiction)内的公知常识的一部分，或者可合理地预期该现有技术被本领域技术人员所理解、视为相关和/或与其他现有技术组合。
在成人中，针对损伤的正常响应通常是创伤修复(导致一定程度的纤维化的生理过程)，导致形成瘢痕组织。尽管可能存在外貌缺陷(cosmetic imperfection)，但是公认的是，由创伤修复产生的瘢痕组织实际上是一种正常组织形成。
在组织学上，由正常创伤修复过程产生的瘢痕组织呈现为主要由I型胶原构成的致密的、几乎无血管的小细胞性细胞外基质。I型胶原的分布和排列可与损伤前的组织中不同，并且特别地，与损伤前组织中布置的胶原相比，瘢痕组织的I型胶原在单一方向上的排列可更为显著。此外，与在损伤前组织中所观察到的相比，在瘢痕中胶原纤维之间可存在更广泛的交联。
生理性瘢痕形成已经典地描述为以下三个不同阶段，其由以下组成：其中形成纤维蛋白凝块的初始阶段，其中纤维蛋白凝块裂解并且形成由蛋白聚糖、糖蛋白和III型胶原组成的临时基质的中间阶段，以及其中临时相被消化并且替换成富含I型胶原的基质的最终阶段。
局部因素(例如，创伤的类型、大小和位置，向创伤的血管供应，感染的存在，局部运动(local movement)以及暴露于辐射和UV光)影响创伤修复并且因此影响生理性瘢痕形成。全身因素(包括心血管性能的状况、感染、代谢状态和激素)也影响生理性瘢痕形成。
公认的是，针对损伤的正常生理响应是随着从损伤起约3至4周时出现I型胶原沉积而完成的创伤修复过程。超过这一时间的创伤修复过程拖延提高形成病理性疤痕代替生理性瘢痕的可能性(Momtazi等.2013Wound Repair and Regeneration 21：77-87)。
病理性瘢痕可称为由纤维变性组织(fibrotic tissue)的增殖或形成调节异常引起的皮肤病症。具体实例包括肥厚性瘢痕、萎缩性瘢痕和瘢痕疙瘩性瘢痕。病理性瘢痕由于其可引起更加显著的外貌毁容(cosmetic disfigurement)和功能限制而受到特别关注，所述功能限制包括疼痛、瘙痒、热不耐受(heat intolerance)、活动范围减小和终生残疾至挛缩。
尽管肥厚性瘢痕、萎缩性瘢痕和瘢痕疙瘩性瘢痕之间存在一些明显差异，但是普遍认为病理性瘢痕一般由细胞(尤其是成纤维细胞和肌成纤维细胞)的异常信号传导和增殖引起。
此外，TGF-β1和TGF-β3之间的平衡是瘢痕形成的重要调节剂。TGF-β1的活性提高或延长导致成纤维细胞过量产生并过度沉积胶原，这常常导致肥厚性瘢痕(Abdou等2011Am J Dermatopathol.33：84-91；Honardoust，等2012，J.Burn Care Res.33：218-227；Chalmers 2011 Int Wound J 8：218-223)。
已在瘢痕疙瘩和瘢痕疙瘩源性成纤维细胞中发现TGF-β1和TGF-β2的过表达，以及显著较低的TGF-β3 mRNA表达(Lee TY，等Ann Plast Surg.1999；43：179-84；Xia W，等Wound Repair Regen.2004；12：546-56)。已显示，抗TGF-β1和抗TGF-β2抗体可减轻大鼠切割创伤中的创伤瘢痕形成(Shah，M等，J Cell Sci 107：1137-57，1994)。针对TGF-β1和TGF-β2的反义硫代磷酸寡核苷酸已在体内用于在青光眼外科手术的兔和小鼠模型中显著减轻术后瘢痕形成(Cordeiro MF，等Gene Ther.2003；10：59-71)。向可正常愈合而无瘢痕的大鼠胎儿创伤添加TGFβ1导致瘢痕形成(LinRY，等Ann Surg.1995；222(2)：146-154)。此外，已显示，瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast)对TGF-β高度敏感(Bettinger等1996Plast Reconstr Surg 98：827-833)。与表现出无瘢痕愈合的野生型同窝出生小鼠相比，在遗传上无TGFβ3的小鼠胚胎有瘢痕地愈合(Occleston NL，等J Biomater Sci PolymEd.2008；19(8)：1047-63)。在三项双盲的安慰剂对照研究中，皮内人重组TGFβ3阿伏特明(avotermin)改善瘢痕的外观(Bush J，等Dermatol Res Pract.2010；2010：690613)。
上述研究表明，TGF受体和/或TGF-β1的持续表达和/或TGF-β3的缺乏与导致形成病理性瘢痕的创伤修复拖延有关。此外，还应理解，TGF-β1的表达与已由创伤修复过程拖延引起的病理性瘢痕的持续性相关。这根据以下事实：现今用于在临床上治疗肥厚性瘢痕的很多形式(modality)靶向TGF-β1自身。
已使用皮质类固醇、甲氨蝶呤、干扰素α和β以及一些细胞因子抑制剂来治疗肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩并且取得一定成功。皮质类固醇被视为一种规范标准物(criterionstandard)，并且了解其抑制成纤维细胞生长且促进胶原降解(McCoy等1980 Proc Soc ExpBiol Med 163：216-222)。曲安西龙(triamcinolone)是已发现抑制TGF-β1表达并且在成纤维细胞中诱导凋亡的皮质类固醇的一个实例(Xu等2009 Chinese J.Plastic Surg 25：37-40)。
皮质类固醇治疗可导致不期望的副作用：瘢痕萎缩、组织色素沉着和疼痛。干扰素治疗可导致发热、头痛、关节痛、疲劳、寒战(chill)和意识错乱(confusion)(al Khawajah1996 Int.J.Dermatol.35：515-517)，并且在整体效力方面存在一些问题(Ledon等2013Dermatol Surg 39：1745-1757)。
提出用于治疗病理性瘢痕的另一些形式在其旨在所靶向的化学成分和作用机制方面不同。这些包括肉毒杆菌毒素A(botulinum toxin A)、己酮可可碱(pentoxifylline)、米诺环素、胶原-糖胺聚糖共聚物、重组TGF β3、甘露糖-6-磷酸、白介素-10、胰岛素和普萘洛尔(Ledon，同上)。
仍然需要使病理性瘢痕形成的可能性最小化，特别是使形成肥厚性瘢痕的可能性最小化。
而且，仍然需要治疗病理性瘢痕，例如肥厚性瘢痕。
发明内容
本发明试图解决现有技术的一个或更多个限制，并且提供了用于诱导皮肤细胞(例如成纤维细胞或角质形成细胞)表达或产生TGF-β3的方法。本发明还提供了用于抑制皮肤细胞的TGF-β1表达或产生的方法。
本发明还提供了用于抑制或预防病理性瘢痕(尤其是肥厚性瘢痕)的形成的方法。本发明还提供了用于使病理性瘢痕的外观最小化或减小的方法。本发明的这些方法利用活化蛋白C(activated protein C，APC)或其类似物(包括APC-3K3A)来诱导TGF-β3产生或者抑制TGF-β1诱导，从而能够抑制病理性瘢痕形成和最小化病理性瘢痕的外观。
本发明的另一些方面及前述段落中所述的一些方面的另一些实施方案将通过以下描述而变得显而易见，所述描述通过举例的方式并且参照附图给出。
附图说明
图1：经APC处理的人角质形成细胞的TGF-β1和TGF-β3产生。
图2：经APC-3K3A处理的人成纤维细胞的TGF-β1和TGF-β3产生。
图3：(SEQ ID No：1)：APC-3K3A的氨基酸序列。
具体实施方式
活化蛋白C(APC)是蛋白C(还称为自体凝血酶原IIA(autoprothrombin IIA)和凝血因子XIV)的活化形式，其在人及其他动物中在调节凝血、炎症、细胞死亡和维持血管壁的渗透性方面发挥重要作用。APC主要通过经蛋白水解使蛋白质因子Va和因子VIIIa失活来进行这些操作。
如本文中所述，本发明人已确定：APC和APC 3K3A各自对TGF-β的多种同种型的皮肤细胞产生具有共同的影响。特别地，本发明人已表明，APC和APC 3K3A二者均增强皮肤细胞的TGF-β3产生。与未经处理的对照相比，组成型地表达TGF-β3的细胞显示从与APC或APC3K3A接触开始TGF-β3的产生提高。重要的是，在经APC或APC-3K3A处理的皮肤细胞中，TGF-β1的产生基本上不增强。
认为，与TGF-β1产生或表达的量无关，大幅提高TGF-β3的产生或表达(就经APC-3K3A处理的皮肤细胞而言，与未经处理的对照相比，高至6倍。)对于使病理性瘢痕的形成最小化或者治疗病理性瘢痕具有重要意义。
此外，当停止APC增强的皮肤细胞TGF-β3产生时，TGF-β1的组成型表达受到抑制。而且，在经APC处理的皮肤细胞中组成型TGF-β1表达的抑制不会抑制组成型的TGF-β3表达。
通过上述观察结果可知，本发明人已确定了APC和APC-3K3A在选择性地增强皮肤细胞(例如成纤维细胞、肌成纤维细胞、角质形成细胞和内皮细胞，或者包含这些细胞中一种或更多种的组合物)的组成型TGF-β3表达或产生和选择性地抑制皮肤细胞的组成型TGF-β1表达或产生中的用途。基于这些发现以及TGF-β1和TGF-β3同种型在创伤修复和病理性瘢痕的持续方面的已知重要性，本发明人已鉴定APC及APC类似物(例如APC-3K3A)为用于使病理性瘢痕形成的可能性最小化和使病理性瘢痕的外观最小化的潜在形式。
A.定义
术语“包含/包括”及该术语的变化形式不旨在排除其他的添加物、组分、整数或步骤。
“正常瘢痕”或“生理性瘢痕”一般为由正常创伤修复过程引起的组织形成。在组织学上，正常瘢痕或生理性瘢痕可呈现为主要由I胶原构成的致密的、几乎无血管的小细胞性细胞外基质。
“病理性瘢痕”一般是指由异常创伤修复处理引起的瘢痕，所述异常创伤修复处理例如导致临时或最终基质的形成延迟或者无法产生任一种基质的已拖延或延长的创伤修复过程。拖延的创伤修复过程可以是与显著或延长的炎症相关的创伤修复过程。这些瘢痕与正常瘢痕在组织学上的区别之处可在于存在旋涡状的透明化胶原束并且具有比正常瘢痕更大的血管分布和细胞结构。病理性瘢痕可以是局限于损伤部位的边界内的瘢痕或延伸到这些边界以外的瘢痕。病理性瘢痕可导致活动范围减小和终生残疾至挛缩、显著外貌毁容和功能限制，其包括疼痛、瘙痒、热不耐受。
“病理性瘢痕形成”一般是指形成病理性瘢痕的过程。在这样的过程中，可正常地导致形成临时或最终基质的正常创伤修复阶段中至少一个受到干扰。这样的过程可导致闭合创伤的时间由于病理性瘢痕而延迟。就此而言，形成病理性瘢痕的过程可表示正常创伤修复过程的拖延或延长，但是应理解，支持病理性瘢痕形成的作用机制与支持针对损伤之正常生理响应的作用机制在创伤修复形式方面不相同。
“纤维增生性病症(fibro-proliferative disorder)”一般是指涉及导致形成过量纤维变性组织的成纤维细胞和纤维细胞的异常增殖或者成纤维细胞和纤维细胞的异常活性水平(包括成纤维细胞或纤维细胞产生异常的细胞因子谱)的病症。
“肥厚性瘢痕”是病理性瘢痕的一个实例，并且是一般在初始损伤之后自然消退的保持在原始病变的边界内的凸起瘢痕。这些瘢痕是硬的、凸起的、红的、痒的、柔软的且收缩的。这些瘢痕在烧伤损伤之后可见并且通过按压瘢痕的边界可使其扩大。肥厚性瘢痕可包含非增殖性成纤维细胞和迅速增殖且展示出活跃合成的较小亚类。在组织学上，肥厚性瘢痕可呈现为定向成与表皮表面平行的细微的、有条理的波状III型胶原束，其具有大量的含有肌成纤维细胞和丰富黏多糖以及低PCNA(增殖细胞核抗原)/p53水平/ATP表达水平的大量结节。肥厚性瘢痕可在损伤后4至8周内出现，进入长达6个月的快速生长期，然后经数年消退。
“瘢痕疙瘩”或“瘢痕疙瘩性瘢痕”是延伸到初始创伤或损伤部位的边界以外的良性纤维性增生。其是不会消退的永久性瘢痕。在组织学上，这些瘢痕可呈现为无结节或过量肌成纤维细胞的无序的、大的、厚的I和III型细胞过少的胶原束。其可不良地血管化，并具有广泛散布的扩张血管。PCNA/p53水平/ATP表达水平可较高。
“萎缩性瘢痕”是由导致在皮肤组织中形成凹陷的异常创伤修复过程引起的瘢痕。
“成纤维细胞”一般是产生细胞外基质的前体的中胚层来源的细胞。这些细胞对创伤修复而言必不可少。
“创伤床成纤维细胞”是可从正进行正常创伤修复的损伤部位或其附近分离的成纤维细胞。
“瘢痕疙瘩成纤维细胞”是可从瘢痕疙瘩或其附近分离的成纤维细胞。
“肥厚性瘢痕成纤维细胞”是可从肥厚性瘢痕或其附近分离的成纤维细胞。
“肌成纤维细胞”一般是指在分化上介于成纤维细胞和平滑肌细胞之间的细胞。肌成纤维细胞通常针对中间丝波形蛋白(intermediate filament vimentin)进行染色，所述中间丝波形蛋白是一般的间充质标志物和“α平滑肌肌动蛋白”。其在一些组织中对其他平滑标志物呈阳性(如其他中间丝型结蛋白(desmin)阳性)，但是在另一些组织中可对结蛋白呈阴性。一些星状形式(stellate form)的肌成纤维细胞还可对GFAP呈阳性。
“角质形成细胞”一般是指合成角蛋白及其他蛋白质和甾醇的表皮细胞。这些细胞构成表皮的95％，由未分化细胞或基底细胞在真皮-表皮接合处形成。其特征性的中间丝蛋白是细胞角蛋白(cytokeratin)。在其多个连续阶段中，角蛋白形成棘细胞层(pricklecell layer)和颗粒细胞层，其中细胞变成扁平并且慢慢死亡以形成最终层角质层，其逐渐脱落。
“内皮细胞”一般是指形成内皮的细胞。内皮是内衬于血管和淋巴管的内表面的薄细胞层，形成腔中循环血液或淋巴与血管壁其余部分之间的界面。
“活化蛋白C”(“APC”)是在生理性抗凝中发挥中心作用的分子量为约56kD的丝氨酸蛋白酶。无活性前体蛋白C是由肝和内皮合成的维生素K依赖性糖蛋白并且见于血浆中。蛋白C的活化发生在内皮细胞表面上并且由凝血酶与凝血调节蛋白(thrombomodulin)之间形成的复合物触发。已表明，另一种内皮特异性膜蛋白内皮蛋白C受体(endothelialprotein C receptor，EPCR)使这一反应加速超过1000倍。
短语“APC或其类似物”中的“类似物”是指“APC类似物”。APC类似物一般是可通过内皮蛋白C受体(EPCR)和蛋白酶活化受体-1(protease activated receptor-1，PAR-1)或者PAR-1和蛋白酶活化受体-3(PAR-3)起作用以在应激或受损细胞中使凋亡最小化或者提高细胞存活率的化合物。如本文中进一步描述的，APC类似物一般具有与人蛋白C序列同源的序列。
“治疗”一般是指出于抵抗疾病、病症或障碍的目的对患者进行管理和护理，不管是为了消除该疾病、病症或障碍，还是预防性地防止发生该疾病、病理状况或障碍的症状或并发症。
B. TGF-β3表达的APC诱导
在某些实施方案中，提供了用于诱导皮肤细胞表达或产生TGF-β3的方法，其包括以下步骤：使皮肤细胞与APC或APC-3K3A接触，从而诱导皮肤细胞表达或产生TGF-β3。
在一个实施方案中，所述皮肤细胞组成型地表达或产生TGF-β3。
在一个实施方案中，所述皮肤细胞组成型地表达或产生TGF-β1。
所述皮肤细胞可以是成纤维细胞、肌成纤维细胞、角质形成细胞或内皮细胞。
当所述皮肤细胞是成纤维细胞时，其可由创伤床(wound bed)成纤维细胞、瘢痕疙瘩成纤维细胞和肥厚性瘢痕成纤维细胞组成。
通常来说，皮肤细胞与APC或APC3K3A的接触增强皮肤细胞的TGF-β3表达或产生，例如其提高皮肤细胞的TGF-β3表达或产生，以使皮肤细胞的TGF-β3表达或产生大于未经处理皮肤细胞的TGF-β3表达或产生。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于增强皮肤细胞(例如，成纤维细胞、肌成纤维细胞、角质形成细胞或内皮细胞)的组成型TGF-β3表达或产生的方法，其包括以下步骤：使具有组成型TGF-β3表达或产生的皮肤细胞与APC或APC-3K3A接触，从而增强皮肤细胞的组成型TGF-β3表达或产生。
通常来说，相对于皮肤细胞的组成型TGF-β3表达或产生，经APC或APC-3K3A处理皮肤细胞的TGF-β3表达或产生在经处理的成纤维细胞中提高约100至500％，在经处理的角质形成细胞中提高约5至50％。
通常来说，在皮肤细胞与APC或APC-3K3A初始接触之后，使经APC或APC-3K3A处理皮肤细胞的TGF-β3表达或产生诱导或增强至少3至4天的时间。
通常来说，皮肤细胞与APC或APC-3K3A的接触不增强组成型的TGF-β1表达或产生。
通常来说，APC或APC-3K3A不诱导皮肤细胞的增殖。
C. TGF-b1表达的APC抑制
本发明还提供了用于抑制皮肤细胞(例如成纤维细胞、肌成纤维细胞、角质形成细胞或内皮细胞)的组成型TGF-β1表达或产生的方法，其包括以下步骤：使皮肤细胞与APC接触，从而抑制皮肤细胞的组成型TGF-β1表达或产生。
当所述皮肤细胞是成纤维细胞时，其可选自创伤床成纤维细胞、瘢痕疙瘩成纤维细胞和肥厚性瘢痕成纤维细胞。
通常来说，相对于皮肤细胞的组成型TGF-β1表达或产生，APC使TGF-β1的表达或产生抑制约5至30％，优选约10至25％，优选约20％。
通常来说，在皮肤细胞与APC接触之后，使TGF-β1的表达或产生抑制至少约3至5天。
通常来说，皮肤细胞组成型地表达或产生TGF-β3。
通常来说，皮肤细胞与APC的接触不抑制组成型的TGF-β3表达或产生。
通常来说，APC不诱导皮肤细胞的增殖。
D.病理性瘢痕形成的抑制
本发明提供了用于在个体中抑制或防止病理性瘢痕的形成的方法，其包括以下步骤：
-提供具有正进行创伤修复的组织损伤部位的个体；
-使组织损伤部位与APC或APC-3K3A接触；
从而在所述个体中抑制或防止病理性瘢痕的形成。
本发明还提供了用于在个体中抑制或防止损伤部位的创伤修复拖延的方法，其包括以下步骤：
-提供具有正进行创伤修复的组织损伤部位的个体；
-使组织损伤部位与APC或APC-3K3A接触；
从而在所述个体中抑制或防止损伤部位的创伤修复拖延。
在上述方法中，所述个体可以是处于形成病理性瘢痕之风险中的个体。特别地，所述个体可以是具有创伤修复拖延或以其他方式形成病理性瘢痕的全身或局部风险因素的个体。全身风险因素包括全身性感染、代谢综合征、糖尿病或葡萄糖耐受不良、心血管功能受损。所述个体可在遗传上倾向于瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕形成。局部风险因素包括与损伤有关的那些，包括损伤(例如，创伤或烧伤)自身的性质；异常炎症；由活动所致的反复物理应激；或者暴露于UV辐射。
本发明可包括以下步骤：对个体进行评估以确定所述个体或损伤部位是否具有上述形成病理性瘢痕或创伤修复过程拖延的一个或更多个全身或局部风险因素。通常来说，针对适用于肥厚性瘢痕形成的一个或更多个全身或局部风险因素对个体进行评估。
对于烧伤损伤，具体的风险因素可包括：遗传因素，尤其是深色皮肤，例如美国印地安人/阿拉斯加州本地人种族；面部烧伤；较高％TBSA；烧伤的严重程度(Thompson CM等，Genetic risk factors for hypertrophic scar development.J Burn Care Res.2013Sep-Oct；34(5)：477-82)。
其他风险因素包括年龄和激素影响。尽管瘢痕疙瘩性瘢痕和肥厚性瘢痕可在任何年龄发生，但是它们倾向于更容易在青春期期间和之后发生。绝经期倾向于促进瘢痕形成的消退，妊娠期倾向于使其加剧。由甲状腺外科手术产生的瘢痕(甲状腺切除术瘢痕)由于激素变化而可成问题。
遗传因素和过往病史也是相关的。特别地，在肤色较深的个体中发生异常瘢痕形成的可能性高15倍。瘢痕疙瘩性瘢痕形成发生于黑色素细胞浓度高的区域中，而在眼睑、生殖器、脚底和手掌上很少见。具有姜黄色头发和雀斑的个体也处于瘢痕疙瘩性瘢痕的高风险之中。具有过往个体瘢痕疙瘩性瘢痕形成病史的人更有可能以异常方式再次形成瘢痕，并且具有家族病史的那些也处于高风险之中。
瘢痕位置和外科手术技术是相关的，因为与在较不活跃区域上形成的瘢痕相比，在特别活跃的肌肉上或附近的瘢痕通常扩散或者变得更加明显。创伤修复期间的皮肤和创伤紧张也是瘢痕形成加剧的原因。
创伤感染提高异常瘢痕形成的风险，并且单独地，多种不同类型的皮肤损伤可导致发生瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕形成，包括外科手术、烧伤和炎性皮肤过程，例如痤疮、银屑病和水痘(chicken pox)。
当评估个体为具有形成病理性瘢痕或创伤修复过程拖延的一个或更多个局部或全身风险因素时，所述方法还可包括以下另外的步骤：选择该个体用于用APC或APC-3K3A进行治疗以在所述个体中抑制或防止病理性瘢痕的形成。
通常来说，所述损伤为由对皮肤组织的损害引起的损伤。所述损害可影响所有的皮肤组织层，例如基底层(stratum basale)(生发层(stratum germinativum))、棘层(stratum spinosum)、颗粒层(stratum granulosum)、透明层(stratum lucidum)。具体损伤的实例包括撕裂(laceration)、擦伤(abrasion)、破裂(rupture)、烧伤、挫伤(contusion)、压迫。
所述损伤可以是烧伤，包括1度、2度或3度烧伤。
通常来说，所述损伤是急性损伤。
通常来说，所述损伤与慢性炎症不相关。
通常来说，所述损伤与纤维化不相关。
通常来说，所述损伤不是炎性病症、变应性病症或者特发性病症或疾病。
在一个特别优选的实施方案中，所述个体具有形成肥厚性瘢痕的一个或更多个风险因素，并且如下文中进一步限定的以3K3A的形式提供APC。
可在创伤修复过程已形成临时基质之前将APC或APC-3K3A施用于组织损伤部位。在另一个实施方案中，可在创伤修复过程已形成最终基质之前将APC或APC-3K3A施用于组织损伤部位。通常来说，在大约形成临时基质时或者之后不久施用APC或APC-3K3A。
通常来说，用APC或APC-3K3A治疗个体以提供在组织损伤的约3至4周内完成创伤修复。
因治疗而形成的瘢痕一般具有生理性瘢痕的特征(包括主要是I型胶原)，并且一般缺乏肥厚性瘢痕或瘢痕疙瘩所特有的特征。这些特征可通过常规组织学或肉眼检查来确定。
尽管有前述内容，但是本领域技术人员应了解，APC或APC-3K3A的剂量可因以下而不同：所采用的具体化合物或化合物组合；待治疗的疾病或病症；疾病或病症的严重程度；局部施用的类型；化合物的排泄速率；治疗的持续时间；施用于动物的任何其他药物的特性(identify)；动物的年龄、大小和物种，以及医学领域中已知的类似因素。一般来说，化合物或化合物组合的合适日剂量是为有效地产生治疗效果的最低剂量的量。施用的剂量、剂型和方式可由主治医师在合理的医学判断范围内来确定。用于多种化合物及化合物组合的施用有效剂量、剂型和方式可凭经验来确定，并且作出这样的决定在本领域技术人员的能力之内。
在某些实施方案中，重要的是，提供APC或APC-3K3A以使得APC或APC-3K3A能够与组织损伤部位的本文中所述的皮肤细胞接触；尽管不希望受假设的限制，但是认为：通过这种接触，APC或APC-3K3A实现提供病理性瘢痕形成的最小化风险。一般来说，已与APC或APC-3K3A接触的那些细胞可通过具有以下特征来识别：增殖提高且凋亡降低；胱天蛋白酶-3减少；蛋白酶活化受体1、2或3活化；NF-kB活化降低；信号传导分子p38的活化降低；TNF分泌降低；基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2蛋白和活化提高；MMP-9降低；鞘氨醇-1-磷酸提高；血管生成素(Angiopoietin，Ang)1提高且Ang 2降低；Tie2活化提高；信号传导分子Akt活化。因此，细胞与APC或APC-3K3A的接触以及因此该治疗的治疗效果可通过评估这些细胞表型来确定。
在某些实施方案中，治疗有效量的APC或APC-3K3A一般实现提高组成型的TGF-β3产生或表达并且抑制TGF-β1组成型产生或表达。该结果可通过上文中B部分中讨论的方法来评估，从而确定是否已提供治疗有效量的APC。
在一个实施方案中，治疗有效量的APC或APC-3K3A可在个体中防止或抑制病理性瘢痕的形成。该结果可通过下文中所讨论的定性或定量测量来进行评估。
已设计了瘢痕量表来量化响应于治疗的瘢痕外观。目前存在至少5种瘢痕量表，其最初设计用于以客观方式来评估主观参数：温哥华瘢痕量表(Vancouver Scar Scale，VSS)、曼彻斯特瘢痕量表(Manchester Scar Scale，MSS)、患者和观察者瘢痕评估量表(Patient and Observer Scar Assessment Scale，POSAS)、视觉模拟量表(Visual AnalogScale，VAS)和斯托尼布鲁克瘢痕评价量表(Stony Brook Scar Evaluation Scale，SBSES)。这些依赖于观察者的量表考虑例如以下因素：瘢痕的高度或厚度、柔软度(pliability)、表面积、质地、色素沉着和血管分布。测量结果的范围在数值的连续区(continuum)内。因此，量表最佳用于确定个体内而非个体间的变化。
数种工具已被应用于评估柔软度：其中最常用的是气压式压力计(pneumatonometer)和皮肤弹性测试仪(cutometer)。气压式压力计利用压力来客观地测量皮肤柔软度。
皮肤弹性测试仪是已应用于客观且定量地测量皮肤弹性的非侵入性抽吸装置。其通过分析皮肤响应于负压的垂直变形来测量皮肤的黏弹性。其已用于测量治疗对烧伤瘢痕的效果以及评估瘢痕成熟。
硬度计向瘢痕上施加垂直方向的压痕负载(indentation load)来测量组织硬度。
测量瘢痕颜色的最广泛应用装置是比色计(Minolta，Tokyo，Japan)、皮肤分光计(DermaSpectrometer)(cyberDERM，Inc，Media，PA，USA)、皮肤黑色素和血红素测试仪(Mexameter)(Courage-Khazaka，Cologne，Germany)和三刺激色度计(tristimuluscolorimeter)。这些装置利用分光光度颜色分析来计算红斑和黑色素指数。
超声扫描仪(例如组织超声触诊系统(tissue ultrasound palpation system，TUPS))已被用于量化瘢痕的厚度。
激光多普勒灌注成像是用于测量烧伤瘢痕灌注的公认技术。其有助于早期确定烧伤的深度和后续的治疗过程。通过构建组织微灌注的颜色编码图，激光多普勒灌注成像提供了烧伤创伤活检的非侵入性替代方案。
可使用三维光学轮廓系统(3-dimensional optical profiling system)(Primos成像)来生成瘢痕的高分辨率局部解剖图示(topographic representation)，从而对瘢痕进行表征。或者，在瘢痕疙瘩研究中可应用非接触式三维数字化仪来测量瘢痕体积和针对治疗的响应。
在另一个实施方案中，上述结果通过在皮肤区域中建立以下局部组织浓度的APC或APC-3K3A来获得：每g皮肤组织0.1μg至10mg，优选1μg至1mg APC或APC-3K3A。这可通过在局部麻醉剂下从同一损伤部位取得皮肤穿刺活检来确定。然后，可通过本领域中已知的方法来确定APC或APC-3K3A的量。在一个实例中，将活检组织切碎并在冰上裂解。在离心之后，使用澄清的上清液通过ELISA来测量PC浓度并通过显色底物Spectrozyme PCa测定(American Diagnostica)来测量APC活性。酶活性通过在λ450nm下测量每单位时间产生的游离生色团的吸光度提高来确定。
在某些实施方案中，APC或APC-3K3A的治疗有效量为：每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域0.1μg至5000μg APC或APC-3K3A，或者每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域1μg至2000μg APC或APC-3K3A，或者每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域10μg至1000μg APC或APC-3K3A，或者每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域10μg至500μg APC或APC-3K3A。
基于组织损伤的性质，APC或APC-3K3A可每周一次地高至每日两次地施用。一般提供持续不超过20周的连续日或者不超过6周的连续日。
在某些实施方案中，APC或APC-3K3A可每4至5天施用。
D.1 表面施用
当相关皮肤区域为包含破裂皮肤表面的皮肤区域时，例如使用糊剂、凝胶剂、乳膏剂、油剂、洗剂、泡沫剂、软膏剂或类似物质的表面治疗方法特别有用，因为这允许可被施用的APC或APC-3K3A渗透到成纤维细胞所驻留的相关皮肤组织层中。
在一个实施方案中，APC或APC-3K3A的治疗有效量可以是每cm2皮肤区域0.1至2000μg，优选10至1000μg APC或APC-3K3A。当皮肤受到较为严重的影响时，或者当个体由于存在上述形成病理性瘢痕的局部或全身因素而特别处于风险之中时，一般优选较高的量。当皮肤未受到严重影响时，可优选较低的量。
制剂中APC或APC-3K3A的浓度可以是约100μg/ml至5mg/ml。在该实施方案中，施用于皮肤区域的组合物体积可以是约100μl至5ml。
所述组合物可一般用无菌表面(例如手指或抹刀(spatula))以不超过约10mm厚，优选约3mm厚的层提供至皮肤。然后，可将组合物摩擦或按摩到皮肤区域和周围区域中。所述施用一般为每天一次至每周一次，并且一般不长于20周或者不长于12周。
在一个实施方案中，可将包含APC或APC-3K3A的组合物施加至固体基质，即绷带、敷料等，然后将基质固定至相关的皮肤区域。
D.2 皮内注射施用
在某些实施方案中，上述结果通过建立至少2倍高于基线的局部浓度的APC或APC-3K3A来获得。APC或APC-3K3A的这一量可如上所述通过使用ELISA和显色底物SpectrozymePCa测定测量皮肤活检的APC或APC-3K3A活性来测量。当角质层完整并且具有APC或APC-3K3A穿过皮肤层的渗透受到限制这样的性质时，一般优选皮内或皮下注射作为施用途径。一般来说，可使用1ml注射器上针头(约28至34G)中的细小规格针头。可以以每cm2约1次注射来给予多次注射以覆盖皮肤的表面积。每次注射的量可以是10μl至1ml不等，通常量为50μl。一般来说，施用以每天一次至每周一次，并且一般不长于20周来给予。皮内或皮下注射可与APC或APC-3K3A的表面施用同时使用。
E.病理性瘢痕的治疗
本发明提供了用于在个体中使病理性瘢痕的外观最小化或减小的方法，其包括以下步骤：
-提供具有病理性瘢痕的个体；
-使病理性瘢痕与APC或APC-3K3A接触；
从而在所述个体中减小病理性瘢痕的外观
所述治疗可例如通过减小瘢痕延伸到邻近组织中的深度或者减小瘢痕所覆盖组织的表面积来减小瘢痕的体积。
在一个实施方案中，所述方法可使瘢痕得到部分或完全消退。
所述方法可使得降低色素沉着，特别是降低深色或红色色素沉着从而形成皮肤色素沉着更接近地类似于正常皮肤的瘢痕。
在一个实施方案中，所述方法涉及例如通过降低向瘢痕的神经组织供应或者通过改善瘢痕的柔性从而减小活动收缩来减轻由病理性瘢痕引起的疼痛。后面的一些实施方案可涉及减小瘢痕的组织收缩。
所述方法可使得减小病理性瘢痕的细胞结构和/或血管分布，或者在病理性瘢痕中或其附近提高组成型TGF-β3表达或产生或者降低或抑制组成型TGF-β1表达或产生。
病理性瘢痕可由针对皮肤组织的以下任一种损伤引起，所述损伤包括撕裂、擦伤、破裂、烧伤、挫伤、压迫。
所述损伤可以是烧伤，包括1度、2度或3度烧伤。
所述病理性瘢痕可以是肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩性瘢痕或萎缩性瘢痕。
在一个特别优选的实施方案中，所述病理性瘢痕是由烧伤损伤引起的肥厚性瘢痕，并且所述APC或其类似物是3K3A(如下文进一步限定的)。
在某些实施方案中，重要的是，提供APC或APC-3K3A以使得APC或APC-3K3A能够与病理性瘢痕部位的本文中所述的皮肤细胞接触；尽管不希望受假设的限制，但是认为：通过这一接触，APC或APC-3K3A提供病理性瘢痕的治疗。一般来说，已与APC或APC-3K3A接触的那些细胞可通过具有以下特征来识别：增殖提高且凋亡降低；胱天蛋白酶-3降低；蛋白酶活化受体1、2或3活化；NF-kB活化降低；信号传导分子p38的活化降低；TNF分泌降低；基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白和活化提高；MMP-9降低；鞘氨醇-1-磷酸提高；血管生成素(Ang)1提高且Ang 2降低；Tie2活化提高；信号传导分子Akt活化；因此，细胞与APC的接触以及因此治疗的治疗效果可通过评估这些细胞表型来确定。
在某些实施方案中，治疗有效量的APC或APC-3K3A一般提供增强组成型TGF-β3产生或表达并且抑制TGF-β1的组成型产生或表达。该结果可通过上文B部分中讨论的方法来评估，从而确定是否已提供治疗有效量的APC或APC-3K3A。
在另一个实施方案中，上述结果通过在皮肤区域中建立以下局部组织浓度的APC来获得：每g皮肤组织0.1μg至10mg，优选1μg至1mg APC或APC-3K3A。这可通过在局部麻醉剂下从同一病理性瘢痕部位取得皮肤穿刺活检来确定。然后，可通过本领域已知的方法来确定APC的量。在一个实例中，将活检组织切碎并在冰上裂解。在离心之后，使用澄清的上清液通过ELISA来测量PC浓度并通过显色底物Spectrozyme PCa测定(American Diagnostica)来测量APC活性。酶活性通过在λ450nm下测量每单位时间产生的游离生色团的吸光度提高来确定。
在某些实施方案中，APC或APC-3K3A的治疗有效量为：每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域0.1μg至5000μg APC或APC-3K3A，或者每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域1μg至2000μg APC或APC-3K3A，或者每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域10μg至1000μg APC或APC-3K3A，或者每cm2施用APC或APC-3K3A的皮肤区域10μg至500μg APC或APC-3K3A。
基于组织损伤的性质，APC或APC-3K3A可每周一次地高至每日两次地施用。一般提供持续不超过20周的连续日或者不超过6周的连续日。
在某些实施方案中，APC或APC-3K3A可每4至5天施用。
E.1 病灶内注射
在某些实施方案中，上述结果通过建立至少2倍高于基线的局部浓度的APC或APC-3K3A来获得。APC或APC-3K3A的这一量可如上所述通过使用ELISA和显色底物SpectrozymePCa测定测量皮肤活检物的APC或APC-3K3A活性来测量。一般优选皮内或皮下注射作为用于治疗病理性瘢痕的施用途径，因为在这些情况下，角质层完整并且具有APC或APC-3K3A穿过皮肤层的渗透受到限制这样的性质。一般来说，可使用1ml注射器上针头(约28至34G)中的细小规格针头。可以以每cm2约1次注射来给予多次注射以覆盖皮肤的表面积。每次注射的量可以是10μl至1ml不等，通常量为50μl。一般来说，施用以每天一次至每周一次，并且一般不长于20周来给予。皮内或皮下注射可与APC或APC-3K3A的表面施用同时使用。
F. APC及其制剂
用于上述方法的APC或APC-3K3A可采用组合物的形式，或以其他方式可通过下述方法来获得。
APC可通过体外活化从血浆纯化的蛋白C来制备或者通过本领域中公知的方法借助重组DNA技术来制备。参见例如美国专利No.4,981,952、5,151,268、5,831,025、6,156,734、6,268,344和6,395,270。
或者，APC可通过重组DNA技术直接制备。参见例如美国专利No.4,981,952、5,151,268、6,156,734、6,268,344和6,395,270。重组活化蛋白C可通过体外活化重组人蛋白C酶原或者通过从细胞直接分泌蛋白C的活化形式来产生。蛋白C可在转基因动物、转基因植物或多种真核细胞中产生，包括例如作为酶原从人肾293细胞分泌，然后纯化并通过本领域技术人员已知的技术来活化。
APC可来自于任何动物物种，但是优选人APC。
可使用APC的片段和衍生物来实施本发明，只要其表现出本文中所述的活性即可。参见例如美国专利No.5,151,268、5,453,373和5,516,650，以及PCT申请WO 89/12685、WO01/56532、WO 01/59084和WO 01/72328。
APC可以是具有人APC特征性的蛋白水解活性、酰胺水解活性、酯水解活性和生物学活性(抗凝活性、抗炎活性或促纤溶活性)的人APC衍生物。蛋白C衍生物的实例由Gerlitz，等，美国专利No.5,453,373和Foster，等，美国专利No.5,516,650进行了描述，其全部教导均在此通过引用并入。
重组APC或蛋白C可引入修饰(例如，氨基酸替换、缺失和异源氨基酸序列的添加)，从而形成可例如增强相应蛋白质的生物活性或表达的APC类似物。一个实例是ZZ Biotech的3K3A-APC，其是APC的基因工程变体并且具有降低的抗凝活性。特别地，3K3A-APC具有KKK191/193AAA突变。该突变可对应于APC的环37。APC类似物的另一个实例包含对应于APC的钙环的RR229/230AA突变。APC类似物的另一个实例包含对应于APC的自溶环的RR306/312AA突变。另一种APC类似物包含对应于APC的自溶环(autolysis loop)的RKRR306/314AAAA。与天然APC的活性相比，APC类似物的这些实例均具有降低的抗凝活性。然而，就与EPCR和PAR-1或PAR-3结合而言，其均具有相关的APC功能。
在一个优选实施方案中，本发明的方法利用3K3A-APC类似物(KKK191/193AAA)来进行本文中所述的多种应用，包括增强组成型TGF-β3表达或产生，或者抑制组成型TGF-β1表达或产生，或者使病理性瘢痕形成的风险最小化，或者减小病理性瘢痕的外观。3K3A-APC的氨基酸序列示于SEQ ID No：1中。
APC类似物一般具有与人蛋白C序列同源的序列。序列对之间的同一性百分比可通过在BESTFIT计算机程序中执行的算法来计算(Smith&Waterman.J.Mol.Biol.147：195-197，1981；Pearson，Genomics 11：635-650，1991)。计算序列趋异度的另一种算法已适应于快速数据库检索并且在BLAST计算机程序中执行(Altschul等，Nucl.Acids Res.25：3389-3402，1997)。与人序列相比，蛋白C多核苷酸或多肽在氨基酸水平上可具有仅约60％同一性、70％或更高同一性、80％或更高同一性、90％或更高同一性、95％或更高同一性、97％或更高同一性或者大于99％同一性。
在进行比对时，还可将保守氨基酸替换(例如，Glu/Asp、Val/Ile、Ser/Thr、Arg/Lys、Gln/Asn)考虑在内，因为预期这些氨基酸残基对的化学相似性在很多情况下产生功能等同性。预期保留多肽的生物功能的氨基酸替换可保留所替换氨基酸残基的化学属性，例如疏水性、亲水性、侧链电荷或大小。与人序列相比，蛋白C多肽可具有仅约80％或更高相似性、90％或更高相似性、95％或更高相似性、97％或更高相似性、99％或更高相似性或者约100％相似性。功能等同性或生物功能保留可通过用于结构确定和生物测定的方法来进行评价。
还可通过采纳宿主的密码子偏爱性来改变所使用的密码子以用于在异源宿主中翻译。这无需显著改变多肽的化学结构即可适应异源宿主的翻译机构(translationalmachinery)。
可产生具有选定化学结构(例如，天然的、突变的或多态性的)的重组蛋白C形式。作为一个例示，编码人蛋白C的基因在美国专利4,775,624中进行了描述并且可如美国专利4,981,952中所述用于产生重组人蛋白C。如美国专利6,037,322中所述，人蛋白C可在组织培养物中重组产生并活化。如美国专利5,084,274中所述，天然人蛋白C可从血浆纯化、活化并进行测定。可使用这些专利中公开的核苷酸和氨基酸序列作为蛋白C的参照物。
还可通过本领域中公知的方法对APC和/或蛋白C进行糖基化，并且所述方法可包括酶促和非酶促方式。
APC的合适功能性片段可通过用公知的蛋白酶(例如胰蛋白酶等)切割经纯化的天然APC或重组APC来产生，或更优选地通过重组DNA技术或肽/多肽合成来产生。这样的功能性片段可通过产生候选片段并如下评估生物活性来鉴定：例如，以与本文中所提供实施例中描述的方式类似的方式来测定鸡胚胎尿囊膜(chorio-alantoic membrane，CAM)中MMP-2的活化、受伤内皮单层修复和/或血管发生的促进。优选地，功能性片段的长度为5至100个氨基酸，更优选长度为10至30个氨基酸。功能性片段可以是线性的或环化的，并且可包含其所来源于之天然APC序列的氨基酸序列的修饰(例如，氨基酸替换、缺失和异源氨基酸序列的添加)。还可通过本领域中公知的方法对功能性片段进行糖基化，并且所述方法可包括酶促和非酶促方式。
在不存在二级和三级结构信息下，可基于肽序列使用本领域中用于设计肽模拟物的公知方法来设计合适的APC模拟化合物(即，模拟APC的功能的化合物)。例如，可如下产生肽模拟化合物：对氨基酸侧链进行修饰以提高肽的限定区域的疏水性(例如，用甲基取代肽的芳族残基上的氢)、用非氨基酸侧链取代氨基酸侧链(例如，用其他芳基取代肽的芳族残基)和用多种取代基取代氨基和/或羧基末端(例如，用脂族基团取代以提高疏水性)。
或者，模拟化合物可以是所谓的类肽(peptoid)(即，非肽)，其包含对肽骨架的修饰(即，通过例如用碳原子取代骨架中的氮原子来引入酰胺键替代物)，或者包含N-取代的甘氨酸残基、一个或更多个D-氨基酸(替代L氨基酸)和/或一个或更多个α-氨基酸(替代β-氨基酸或γ-氨基酸)。另一些模拟化合物替代物包括“反向倒置肽(retro-inversopeptide)”，其中将肽键倒置并且在其所基于的肽序列中将D-氨基酸以相对于L-氨基酸顺序的相反顺序组装；以及其他非肽构架，例如甾族化合物(steroid)、糖类、苯并氮杂基(benzazepinel)、3，4-三取代的吡咯烷酮、吡啶酮和吡啶并吡嗪。合适的模拟化合物还可通过结构建模/确定、筛选天然产物、产生噬菌体展示文库、最少化蛋白质、SELEX(适配体)选择、组合文库和集中组合文库、虚拟筛选/数据库检索以及本领域中公知的合理药物设计技术来设计/鉴定。
APC的合适药物组合物包含APC和可药用载体。参见例如美国专利No.6,395,270和6,159,468以及PCT申请WO 98/48818、WO 01/56532和WO 01/72328。包含APC的组合物一般可以是这样的组合物，其为包含填充剂(bulking agent)(例如，蔗糖、甘露糖醇、海藻糖和棉子糖)、盐(例如，氯化钠和氯化钾)、缓冲剂(例如，柠檬酸钠、Tris-乙酸盐和磷酸钠)和APC的高纯度的稳定冻干产品。例如，稳定的冻干组合物可包含重量比为约1份APC、约7至8份盐和约5至7份填充剂。这样的稳定冻干组合物的一个实例是每小瓶5.0mg APC、30mg蔗糖、38mg NaCl和7.56mg柠檬酸盐，pH 6.0。
可通过筛选在已建立动物模型中的相关效力来测试APC及APC类似物的多种重组形式和合成形式在治疗病理性瘢痕中的用途，所述动物模型的实例包括Momtazi等2013(同上)中所讨论的肥厚性瘢痕的裸鼠模型。
F.1 表面施用的制剂
在一个特别优选的实施方案中，根据上文D或E部分中所述的方法，以适于表面施用于相关组织损伤部位的组合物或制剂的形式提供APC或APC-3K3A。这样的制剂的实例包括可直接施用至相关表面使得能够将APC或APC-3K3A局部施用于相关部位的那些制剂。这些制剂包括凝胶剂、油剂、喷雾剂、走珠型制剂(roll on formulation)、软膏剂、洗剂、泡沫剂等。在一个实施方案中，APC或APC-3K3A以甲基纤维素凝胶剂的形式提供，并且可包含稳定剂，例如碳水化合物和盐。
皮肤软膏剂可以是有机成分、保健成分、美容成分或药物成分通常在石油油料基质(petroleum oil base)中的组合。这提供了皮肤软膏剂在身体表面上保留较长时间使得成分可更有效地起作用以治疗广泛多种问题的较稠的、水溶性较低的配方。有很多天然和有机皮肤乳膏剂可从公司(例如Therapex)订购。
还可使用丙酸氯倍他索(clobetasol propionate，CP)泡沫剂(0.05％)。这是乳剂型气雾泡沫剂，其已在美国用于治疗皮质类固醇响应性皮肤病的炎性和瘙痒表现，并且已在加拿大用于治疗中度到重度特应性皮炎的炎性和瘙痒表现(Olux-E(丙酸氯倍他索)泡沫剂，0.05％Stiefel Laboratories Inc，Research Triangle Park，NC(2011))。
当所述制剂是凝胶剂时，其可包含100至5000μg/g凝胶剂的量的APC或APC-3K3A。
F.2 可注射制剂
APC的一种制剂是由Eli Lilly和Co.，Indianapolis，Indiana以商品名XigrisTM销售的产品。XigrisTM作为用于静脉内输注的无菌的冻干粉末提供。5mg小瓶的XigrisTM包含5.3mg/小瓶人重组APC、31.8mg/小瓶蔗糖、40.3mg/小瓶NaCl和10.9mg/小瓶柠檬酸钠；以及20mg小瓶的XigrisTM包含20.8mg/小瓶人重组APC、124.9mg/小瓶蔗糖、158.1mg/小瓶NaCl和42.9mg/小瓶柠檬酸盐。可将小瓶用注射用无菌水(USP)重构以得到浓度为约2mg/ml的APC，然后，向该经稀释的APC添加0.9％注射用氯化钠得到浓度为约100至约5000μg/ml的APC以用于向患者施用。这是通过如上文中D或E部分中所述的皮下注射技术来施用APC特别优选的制剂。
不管是表面施用还是通过皮下注射来施用，在某些实施方案中，相关制剂可包含蛋白C作为APC的替代物或除APC之外的补充。例如，可施用有效量的蛋白C，蛋白C将通过内源蛋白C途径体内活化以产生APC。参见例如美国专利No.5,151,268和PCT申请WO 93/09807。如上所述，蛋白C可从血浆纯化而来，或者可通过重组DNA技术制成。参见例如美国专利No.4,959,318、4,981,952、5,093,117、5,151,268、5,571,786、6,156,734、6,268,344和6,395,270。包含蛋白C的合适药物组合物是已知的(参见例如美国专利No.5,151,268和5,571,786)。
还可通过在动物中施用一定量提高蛋白C合成的药剂来提高APC的内源产生。参见例如PCT申请WO 93/09807。合适的药剂包括蛋白同化甾类(例如，danazolol)。参见例如PCT申请WO 93/09807。
在某些实施方案中，可通过施用一定量有效地引起由内源合成的蛋白C和/或由共施用的蛋白C体内产生APC的蛋白C活化剂来提高APC的内源产生。参见例如PCT申请WO 93/09807。蛋白C活化剂是引起或提高APC的生成的任何化合物。合适的蛋白C活化剂包括凝血酶、α-凝血酶、活性位点酰化凝血酶、凝血酶类似物和突变体(例如，凝血酶E192Q和凝血酶K52E)、可溶性凝血酶-凝血调节蛋白复合物、可防止凝血酶-凝血调节蛋白复合物清除或衰解的药剂、增强凝血调节蛋白合成或延迟凝血调节蛋白清除的药剂、毒液(例如，Protac或Russel蝰蛇毒)、因子Xa、纤溶酶、胰蛋白酶，以及能够引起或提高由蛋白C产生APC的任何其他毒液、酶或化合物。参见例如PCT申请WO 93/09807。优选的蛋白C活化剂是凝血酶和活性位点酰化凝血酶。
在一些实施方案中，可将APC与用于控制炎症、细胞增殖和凋亡中一项或更多项的其他药剂一起施用。一种特别优选的药剂是抗IL-17抗体，特别是Ixekizumab，其与安慰剂相比在患有慢性斑块状银屑病(Chronic Plaque Psoriasis)患者的II期研究中表现出皮肤疾病严重程度的显著改善(NEJM，2012)。用于控制炎症的药剂的其他实例包括TNF-α抑制剂以及抗炎细胞因子和生物药品(biopharmaceutical)。
应理解，本说明书中公开且限定的发明延伸至所提及的或者由正文或附图可见的单独特征中两项或更多项的所有替选组合。所有这些不同的组合构成本发明的多个替选方面。
实施例
实施例1
将人新生儿包皮角质形成细胞(neonatal foreskin keratinocyte)在24孔板中培养至汇合。用1μg/ml重组APC处理单层。在处理后的第1、2、3和5天收集培养物上清液。通过酶联免疫吸附测定来检测上清液中的TGF-β1和TGF-β3。
实施例2
3K3A-APC对新生儿皮肤成纤维细胞的作用。将细胞在24孔板中培养至汇合，并转换至无血清培养基。然后，将细胞用3K3A-APC处理1、4或7天。在指定的时间点收集培养物上清液。通过ELISA测量TGFβ1和TGFβ3。数据表示为两次实验的平均值。＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，当与相同时间点的对照进行比较时。

Claims (19)

1.用于诱导皮肤细胞表达或产生TGF-β3的方法，其包括以下步骤：使皮肤细胞与APC或其类似物接触，从而诱导所述皮肤细胞表达或产生TGF-β3。
2.权利要求1所述的方法，其中所述皮肤细胞组成型地产生TGF-β3和TGF-β1，并且所述皮肤细胞与所述APC或其类似物的所述接触增强所述皮肤细胞的组成型TGF-β3表达或产生。
3.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述皮肤细胞与所述APC或其类似物的所述接触不增强所述皮肤细胞的组成型TGF-β1表达或产生。
4.前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于组成型的TGF-β3表达或产生，TGF-β3的表达或产生在经处理的成纤维细胞中增强约100至500％，或者在经处理的角质形成细胞中增强约5至50％。
5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述皮肤细胞是成纤维细胞、肌成纤维细胞、内皮细胞或角质形成细胞。
6.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述皮肤细胞以包含成纤维细胞、肌成纤维细胞、内皮细胞和角质形成细胞中一种或更多种的组合物提供。
7.用于在个体中抑制或防止病理性瘢痕形成的方法，其包括以下步骤：
-提供具有正进行创伤修复的组织损伤部位的个体；
-使所述组织损伤部位与APC或其类似物接触；
从而在所述个体中抑制或防止病理性瘢痕的形成。
8.权利要求7所述的方法，其中所述个体是处于形成病理性瘢痕之风险中的个体。
9.权利要求7所述的方法，其包括以下另外的步骤：
-确定个体是否处于形成病理性瘢痕之风险中；
-选择确定处于形成病理性瘢痕之风险中的个体用于在所述方法中进行治疗。
10.权利要求6至9中任一项所述的方法，其中所述损伤是烧伤。
11.用于在个体中使病理性瘢痕的外观最小化或减小的方法，其包括以下步骤：
-提供具有病理性瘢痕的个体；
-使所述病理性瘢痕与APC或其类似物接触；
从而在所述个体中减小病理性瘢痕的外观。
12.权利要求11所述的方法，其中所述瘢痕是肥厚性瘢痕。
13.权利要求11或12所述的方法，其中所述瘢痕由烧伤引起。
14.权利要求7至13中任一项所述的方法，其中所述APC或其类似物表面提供或者以可注射组合物的形式提供以用于所述方法。
15.权利要求7至14中任一项所述的方法，其中所述APC或其类似物以以下量提供：每cm2施用APC的皮肤区域0.1μg至5000μg APC，或者每cm2施用APC的皮肤区域1μg至2000μg APC，或者每cm2施用APC的皮肤区域10μg至1000μg APC，或者每cm2施用APC的皮肤区域10μg至500μg APC。
16.权利要求7至15中任一项所述的方法，其中所述APC或其类似物每天提供至少一次。
17.权利要求7至10、14和15中任一项所述的方法，其中所述APC或其类似物提供从所述损伤时间起不超过约4至5周的时间。
18.权利要求11至15中任一项所述的方法，其中所述APC或其类似物提供约4至20周的时间。
19.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述APC类似物是3K3A-APC。
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