CN106565819A - 一种制备盐酸万古霉素3种杂质高纯度样品的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备盐酸万古霉素相关杂质1、杂质2和杂质10高纯度样品的方法,取盐酸万古霉素结晶粉末,配制成浓度为40~50g/L的水溶液;水浴保温25~30℃,加入双氧水,搅拌40~42小时;然后缓慢加入草酸水溶液,搅拌均匀后不再产生气泡即停止加入,然后依次进行超滤、纳滤;向纳滤液中缓慢加入乙醇进行结晶,抽滤得到结晶母液;结晶母液用高压液相色谱制备柱分离得到盐酸万古霉素中杂质1、杂质2和杂质10的高纯度样品。该方法工艺简单,大大降低了制备成本。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵制药领域,涉及一种抗生素产品中的相关杂质的制备方法,尤其涉及盐酸万古霉素相关杂质1、杂质2、杂质10的高纯度样品的制备方法。
背景技术
盐酸万古霉素是三环糖苷化非核糖体肽的一种分支产物,由放线菌属的东方拟无枝酸菌(以前被命名为东方诺卡菌)通过发酵产生。盐酸万古霉素为窄谱抗生素,仅对革兰阳性菌有效,如溶血性链球菌、肺炎球菌及肠球菌等均属敏感,对耐药金葡菌本品尤为敏感。其作用机制是抑制细菌细胞壁的合成,它主要和细菌细胞壁结合,而使某些氨基酸不能进入细胞壁的糖肽中。临床主要用于耐青霉素金葡菌所引起的严重感染,如肺炎、心内膜炎及败血症等,对溶血性链球菌引起的感染及败血症等也有较好的疗效。
盐酸万古霉素相关杂质是盐酸万古霉素质量控制的重点,高纯度的杂质样品对其药理毒理研究有重要作用。
盐酸万古霉素的检测方式根据2010版中国药典规定,采用的高压液相色谱检测条件如下:
液相色谱仪:岛津LC-2010C HT
色谱柱:C18250×4.6mm 品牌:Thermo(赛默飞世尔)
流动相A:三乙胺缓冲液(取三乙胺4mL加水至2000mL,用磷酸调节pH值至3.2)∶乙腈∶四氢呋喃=92∶7∶1
流动相B:三乙胺缓冲液∶乙腈∶四氢呋喃=70∶29∶1
梯度设置:
检测波长:λ=280 流速:1.0mL/min 进样体积:20μL
根据上述的检测方法,对盐酸万古霉素样品进行高压液相色谱检测,检测图谱如图1所示。分别对图1中的杂质进行编号命名,如下表1所示:
表1
保留时间(Min) | 相对保留值 | 杂质编号 |
3.80 | 0.43 | 1 |
4.653 | 0.52 | 2 |
5.434 | 0.61 | 3 |
5.969 | 0.67 | 4 |
6.499 | 0.73 | 5 |
7.07 | 0.8 | 6 |
8.368 | 0.94 | 7 |
8.874 | 1 | 万古霉素 |
13.532 | 1.52 | 8 |
15.737 | 1.77 | 9 |
17.415 | 1.96 | 10 |
19.123 | 2.15 | 11 |
19.562 | 2.2 | 12 |
20.35 | 2.29 | 13 |
22.312 | 2.51 | 14 |
23.717 | 2.67 | 15 |
为了方便对杂质进行一个定量的计算,用盐酸万古霉素作为标准品,通过面积归一法计算得到的一个方便我们衡量上柱量的相对的数值。
其中杂质1、杂质2、杂质10(见图1)在盐酸万古霉素成品中含量比较低,C18填料制备柱分离制备此杂质需要消耗大量的盐酸万古霉素成品及大量的流动相,制备成本非常高昂。
发明内容
本发明的目的是提供一种盐酸万古霉素相关杂质1、杂质2和杂质10的高纯度样品的制备方法,可以快速且较方便地将盐酸万古霉素样品中的杂质1、杂质2、杂质10富集到较高的纯度,且组份相对单一,再通过制备分离得到高纯度的杂质样品。
一种制备盐酸万古霉素杂质1、杂质2和杂质10高纯度样品的方法,其步骤包括:
1)取盐酸万古霉素结晶粉末,配制成浓度为40~50g/L的盐酸万古霉素水溶液;
2)将步骤1)得到的盐酸万古霉素水溶液水浴加热到25~30℃,然后加入双氧水,搅拌并保温40~42小时;
3)在步骤2)保温40~42小时后的溶液中缓慢加入草酸水溶液,搅拌均匀后不再产生气泡即停止加入,然后依次进行超滤、纳滤;
4)向步骤3)得到的纳滤液中缓慢加入乙醇进行结晶,抽滤得到结晶母液;
5)结晶母液用高压液相色谱制备柱分离,得到盐酸万古霉素中杂质1、杂质2和杂质10的高纯度样品。
优选的,上述步骤2)中所加入的双氧水体积为盐酸万古霉素水溶液体积的5%~6%。
优选的,上述步骤3)中所述草酸水溶液的浓度为1%-2%(g/L);超滤使用的滤膜孔径为7000~5000Da;纳滤使用的滤膜孔径为500~400Da;纳滤液体积相当于将反应前的盐酸万古霉素结晶粉末配制成浓度为100~150g/L的溶液的体积。
优选的,上述步骤4)中加入的乙醇的体积为纳滤液体积的3~5倍。
优选的,上述步骤5)中制备柱使用的分离条件为:
制备填料:C18HCE
流动相A:乙腈
流动相B:0.1%(V/V)TFA水溶液
梯度设置:
表2
时间(min) | 流动相B | 流动相A | 流速(mL/min) |
0 | 92 | 8 | 70 |
30 | 85 | 15 | 70 |
31 | 20 | 80 | 70 |
35 | 10 | 90 | 70 |
35.1 | 92 | 8 | 100 |
45 | 92 | 8 | 100 |
检测波长:280nm
通过本发明方法可以快速制备盐酸万古霉素相关杂质1、杂质2、杂质10的高纯度样品,工艺简单,相比于现有技术中制备这几项杂质的方法节约了大量成本。
附图说明
图1是盐酸万古霉素样品的高压液相色谱检测图谱。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明,但这并非是对本发明的限制,本领域技术人员根据本发明的基本思想,可以做出各种修改或改进,但是只要不脱离本发明的基本思想,均在本发明的范围之内。
实施例1.
1.取5g盐酸万古霉素结晶粉末,加入纯化水配制成50g/L的水溶液,溶液体积约100mL;
2.将步骤1配制的溶液水浴保温,温度为30℃;加入5mL的双氧水,搅拌均匀保温42小时;
3.用滴管向溶液中缓慢滴加浓度为1%的草酸水溶液,并搅拌均匀,当溶液中没有明显的气泡出现后停止滴加;
4.将溶液使用7000Da孔径的超滤膜进行超滤,超滤液用杯式孔径为400Da纳滤机进行纳滤,纳滤后溶液体积33.3mL;
5.缓慢加入166.6mL的无水乙醇溶液进行结晶,分离出结晶母液;
6.高压液相色谱检测结晶母液,杂质1含量为23.3%(质量百分含量,下同),杂质2含量17.4%,杂质10含量36.5%;
7.使用高压制备液相色谱进行制备分离,分离杂质冻干检测,结果如表3所示。
表3
杂质名称 | 色谱纯度 | 冻干重量 |
杂质1 | 97.5% | 310μg |
杂质2 | 98.8% | 216μg |
杂质10 | 99.5% | 719μg |
实施例2.
1.取6g盐酸万古霉素结晶粉末,加入纯化水配制成40g/L的水溶液,溶液体积约150mL;
2.将步骤1配制的溶液水浴保温,温度为25℃;加入9mL的双氧水,搅拌均匀保温40小时;
3.用滴管向溶液中缓慢滴加浓度为2%的草酸水溶液,并搅拌均匀,当溶液中没有明显的气泡出现后停止滴加;
4.将溶液使用5000Da孔径的超滤膜进行超滤,超滤液用杯式孔径为500Da纳滤机进行纳滤,纳滤后溶液体积60mL;
5.缓慢加入180mL的无水乙醇溶液进行结晶,分离出结晶母液;
6.高压液相色谱检测结晶母液,杂质1含量为32.5%,杂质2含量28.1%,杂质10含量42%;
7.使用高压制备液相色谱进行制备分离,分离杂质冻干检测,结果如表4所示。
表4
杂质名称 | 色谱纯度 | 冻干重量 |
杂质1 | 98.5% | 430μg |
杂质2 | 98.8% | 378μg |
杂质10 | 99.7% | 823μg |
实施例3.
1.取5.4g盐酸万古霉素结晶粉末,加入纯化水配制成40g/L的水溶液,溶液体积约135mL;
2.将步骤1配制的溶液水浴保温,温度为28℃;加入8mL的双氧水,搅拌均匀保温41小时;
3.用滴管向溶液中缓慢滴加浓度为1.5%的草酸水溶液,并搅拌均匀,当溶液中没有明显的气泡出现后停止滴加;
4.将溶液使用7000Da孔径的超滤膜进行超滤,超滤液用杯式孔径为400Da纳滤机进行纳滤,纳滤后溶液体积41.5mL;
5.缓慢加入166.2mL的无水乙醇溶液进行结晶,分离出结晶母液;
6.高压液相色谱检测结晶母液,杂质1含量为26.6%,杂质2含量20.3%,杂质10含量39.6%;
7.使用高压制备液相色谱进行制备分离,分离杂质冻干检测,结果如表5所示。
表5
杂质名称 | 色谱纯度% | 冻干重量 |
杂质1 | 98.7% | 256μg |
杂质2 | 99.2% | 282μg |
杂质10 | 99.7% | 803μg |
Claims (8)
1.一种制备盐酸万古霉素杂质1、杂质2和杂质10高纯度样品的方法,其步骤包括:
1)取盐酸万古霉素结晶粉末,配制成浓度为40~50g/L的盐酸万古霉素水溶液;
2)将步骤1)得到的盐酸万古霉素水溶液水浴加热到25~30℃,然后加入双氧水,搅拌并保温40~42小时;
3)在步骤2)保温40~42小时后的溶液中缓慢加入草酸水溶液,搅拌均匀后不再产生气泡即停止加入,然后依次进行超滤、纳滤;
4)向步骤3)得到的纳滤液中缓慢加入乙醇进行结晶,抽滤得到结晶母液;
5)结晶母液用高压液相色谱制备柱分离,得到盐酸万古霉素中杂质1、杂质2和杂质10的高纯度样品。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中所加入的双氧水体积为盐酸万古霉素水溶液体积的5%~6%。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)步骤3)中所述草酸水溶液的浓度为1%-2%。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)超滤使用的滤膜孔径为7000~5000Da。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)纳滤使用的滤膜孔径为500~400Da。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)纳滤液体积相当于将步骤1)取的盐酸万古霉素结晶粉末配制成浓度为100~150g/L的溶液的体积。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)中加入的乙醇的体积为纳滤液体积的3~5倍。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤5)中制备柱使用的分离条件为:制备填料为C18HCE;流动相A为乙腈;流动相B为0.1%(V/V)的三氟乙酸水溶液;梯度设置为表2所示:
表2
检测波长为280nm。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110903346A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-03-24 | 丽珠集团新北江制药股份有限公司 | 一种制备盐酸万古霉素杂质ImpC的方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1861629A (zh) * | 2005-11-30 | 2006-11-15 | 上海医药工业研究院 | 供hplc分析的万古霉素发酵液前处理方法 |
US20080193986A1 (en) * | 2007-02-14 | 2008-08-14 | Sang Young Kim | Mutant strain of Amycolatopsis orientalis and process for preparing vancomycin hydrochloride |
CN102863519B (zh) * | 2012-09-13 | 2014-09-17 | 福建博美生物技术有限公司 | 一种盐酸万古霉素的精制方法 |
CN104387444A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-04 | 北大医药重庆大新药业股份有限公司 | 一种达托霉素杂质rs-2高纯度样品的制备方法 |
CN104610434A (zh) * | 2013-11-01 | 2015-05-13 | 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 | 一种高纯度盐酸万古霉素的分离纯化方法 |
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1861629A (zh) * | 2005-11-30 | 2006-11-15 | 上海医药工业研究院 | 供hplc分析的万古霉素发酵液前处理方法 |
US20080193986A1 (en) * | 2007-02-14 | 2008-08-14 | Sang Young Kim | Mutant strain of Amycolatopsis orientalis and process for preparing vancomycin hydrochloride |
CN102863519B (zh) * | 2012-09-13 | 2014-09-17 | 福建博美生物技术有限公司 | 一种盐酸万古霉素的精制方法 |
CN104610434A (zh) * | 2013-11-01 | 2015-05-13 | 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 | 一种高纯度盐酸万古霉素的分离纯化方法 |
CN104387444A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-04 | 北大医药重庆大新药业股份有限公司 | 一种达托霉素杂质rs-2高纯度样品的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
祝仕清等: "盐酸万古霉素中杂质的LC-MS分析", 《中国抗生素杂志》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110903346A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-03-24 | 丽珠集团新北江制药股份有限公司 | 一种制备盐酸万古霉素杂质ImpC的方法 |
CN110903346B (zh) * | 2019-11-08 | 2022-01-04 | 丽珠集团新北江制药股份有限公司 | 一种制备盐酸万古霉素杂质ImpC的方法 |
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