CN106556656A - 一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 - Google Patents
一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106556656A CN106556656A CN201610942234.7A CN201610942234A CN106556656A CN 106556656 A CN106556656 A CN 106556656A CN 201610942234 A CN201610942234 A CN 201610942234A CN 106556656 A CN106556656 A CN 106556656A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cholelithiasis
- trimethylamine
- reagent
- plasma
- metabolic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 title claims abstract description 82
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 title claims abstract description 36
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- UYPYRKYUKCHHIB-UHFFFAOYSA-N trimethylamine N-oxide Chemical compound C[N+](C)(C)[O-] UYPYRKYUKCHHIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 47
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 11
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 4
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 claims description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 abstract description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 9
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 21
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 15
- 238000002705 metabolomic analysis Methods 0.000 description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 12
- 208000001130 gallstones Diseases 0.000 description 11
- 230000001431 metabolomic effect Effects 0.000 description 11
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 10
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 5
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 5
- 238000007459 endoscopic retrograde cholangiopancreatography Methods 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 4
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- 206010004637 Bile duct stone Diseases 0.000 description 3
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 3
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000012336 endoscopic ultrasonography Methods 0.000 description 3
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 3
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 3
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 238000009557 abdominal ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 2
- 238000002192 cholecystectomy Methods 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- 208000000197 Acute Cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008614 Cholecystitis acute Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000027182 Ileal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;formic acid Chemical compound CC#N.OC=O XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037354 amino acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000003872 anastomosis Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000013189 cholangiography Methods 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020694 gallbladder disease Diseases 0.000 description 1
- 238000013110 gastrectomy Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000007449 liver function test Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 235000016236 parenteral nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000010882 preoperative diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 201000010304 suppurative cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001946 ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/60—Construction of the column
- G01N30/6091—Cartridges
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用，该标志物为氧化三甲胺和三甲胺。本发明通过采用UPLC‑Q exactive MS比较正常对照和胆石症患者血浆中的代谢小分子，发现了血浆中存在可用于评估患者是否胆石症，具有诊断价值的血浆代谢小分子标志物组合，以及该血浆代谢小分子标志物检测的UPLC‑Q exactive MS的应用，研制出可便于临床应用的胆石症诊断、监测试剂盒。
Description
技术领域
本发明属于分析化学及临床医学领域，涉及一种用于胆石症辅助早期诊断及高危人群筛选标志物及其应用，特点是检测与胆石症发生相关的代谢小分子标志物及其应用。
背景技术
胆石症(cholelithiasis)是世界范围的常见病。近20余年来，随着影像学(B型超声、CT及MRI等)检查的普及，很多无症状的胆石症也会在体检中被发现。在我国，随着经济发展和生活水平提高，其发病率逐年升高，并随年龄增长而增高，尤其是胆囊结石。最近的流行病学调查显示，在自然人群中，胆囊结石的发病率已接近15%。胆囊结石主要见于成人，女性多于男性，40岁后发病率随年龄增长而明显增高。结石为胆固醇结石或以胆固醇为主的混合性结石和黑色胆色素结石，而目前80%以上的胆囊结石都属于胆固醇性结石。胆囊结石与饮食、脂质代谢、遗传等多种因素有关。任何影响胆固醇与胆汁酸浓度比例改变，导致胆汁中胆固醇过饱和进而沉积的因素都能导致胆固醇结晶形成，并逐渐发展最终成结石。个别地区和种族的居民、女性激素、肥胖、妊娠、高脂肪饮食、长期肠外营养、糖尿病、高脂血症、胃切除或胃肠吻合手术后、回肠末段疾病和回肠切除术后、肝硬化、溶血性贫血等因素都可引起胆囊结石。在我国西北地区的胆囊结石发病率相对较高，可能与饮食习惯有关。胆石症可能引起急性胆囊炎、化脓性胆管炎、胆源性胰腺炎，长期的胆结石甚至导致胆囊癌。
胆石症的临床表现有多种，其自然病程无法预测。约60%～80%胆囊结石患者可在结石形成之后的一段时间内无症状，称无症状性胆石，通常是在体检时候偶然发现。目前临床上胆石症的诊断有多种方法，主要是腹部超声，进一步检查包括腹部CT、MRCP，必要时内镜超声(EUS)、内镜下逆行胰胆管造影术（Endoscopic RetrogradeCholangiopancreatography，ERCP）或术中胆管造影(Intraoperativecholangiography，IOC)。在肝功能检查中，血清胆红素和碱性磷酸酶可以提示胆道梗阻，但对胆管结石的诊断缺乏敏感性和特异性。腹部超声检查是最常用的一种无创检查手段，检查的敏感性为90%～95%，不但能发现结石，还能提示胆管结石的间接征象如胆管扩张等，但其高度依赖检查者的经验和水平。腹部CT在诊断胆石症中也起到一定作用，既可确定结石的存在，CT值的测定据报道有助于胆石性质的确定。MRCP作为一种准确和无创的诊断方法，能清晰地显示胆管的解剖特征，使其诊断敏感性达到81%～100%，特异性达到92%～100%，和ERCP及IOC的准确性相当。但MRCP可能漏掉直径<5mm的小结石，同时也较昂贵，尚未普遍应用。EUS也是一种有用的侵入性的术前诊断胆管结石的方法，其敏感性和特异性分别可以达到88%～97%和96%～100%，且可避免ERCP的并发症如胰腺炎等。但是上述影响学检查仅能发现已经形成的明确结石，不能更早的诊断如胆固醇结晶性结石或者对于具有成石高危人群的筛选和鉴别。
代谢组学(Metabolomics/Metabonomics)是20世纪90年代末期发展起来的一门新兴学科，它是通过考察生物体系在遗传改变或受刺激或扰动后，其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学。所谓代谢组(Metabolome)是基因组的下游产物也是最终产物，是一些参与生物体新陈代谢、维持生物体正常功能和生长发育的小分子化合物的集合，主要是相对分子质量小于1000的内源性小分子，这些内源性代谢小分子涉及糖代谢、能量代谢、脂代谢、氨基酸代谢、核酸代谢、辅酶代谢等。
正常状态下的生物体是一个完整的系统，生物体液、细胞和组织中的代谢过程维持一定的稳态，而代谢产物则处于动态平衡状态。机体由于遗传或者后天原因发生了病理变化，打破这种平衡，从而改变了代谢过程及其相应的代谢产物。通过代谢组学分析掌握代谢过程中的多种小分子在疾病过程中的变化，有助于人们寻找相关的生物标志物(biomarker)并用于辅助疾病诊断，也可帮助人们通过小分子物质本身涉及的代谢通路了解疾病的发病机制并以其靶点，涉及特异性的药物用于防治。近年来，代谢组学在人类各类疾病的研究中在疾病的早期诊断中取得了诸多具有重大意义的研究成果，如心血管疾病、肝胆疾病、糖尿病和癌症，相关论文发表在《Nature》、《Nature Medicine》、《Cell》、《Hepatology》和《Cancer Research》等学术期刊上，展现了代谢小分子在人类疾病诊断中巨大的潜力与价值。然而采用代谢组学分析与代谢异常相关所导致的胆石病的早期诊断和监测中的应用还未得到相应的关注。
目前代谢组学研究常用技术包括液相色谱-质谱联用(LC-MS)、气象色谱-质谱联用(GC-MS)及核磁共振技术(NMR)。核磁共振技术特点是对待测组分无破坏，样本前处理简单，但灵敏度较低；气相色谱-质谱联用具有较好的灵敏度和重现性，但一般要采用衍生化方法对样本进行前处理，使得实验步骤变得复杂。而LC-MS具有样本处理简单，灵敏度高，临床实用性强的特点，故而采用LC-MS进行代谢小分子的代谢组学分析，若能发现稳定的与胆石症发病相关的特异血浆代谢小分子作为生物标志物，并研发相应疾病的代谢小分子标志的LC-MS检测方法，对于更早发现胆石病，筛选胆石症高危人群，以及对于保留胆囊取石手术后患者再次复发的早期监控及指导预防具有重要价值。不仅在该领域处于国际领先地位，可创造令人瞩目的经济效益，对我国胆石症的防治也将是一次强有力的推动。
发明内容
解决的技术问题：本发明的目的是提供一种与胆石症发生相关的血浆代谢小分子标志物。
本发明另一个目的是提供上述血浆代谢小分子标志物在制备胆石症诊断和监测试剂盒的应用。
本发明再有一个目的是提供上述血浆代谢小分子标志物的色谱质谱检测用的诊断和监测试剂盒。
技术方案：一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物，该标志物为氧化三甲胺和三甲胺。
上述标志物在制备胆石症诊断或监测试剂盒中的应用。
胆石症诊断或监测试剂盒，该试剂盒含有氧化三甲胺和三甲胺标准品。
优选的，所述的试剂盒包括氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物；氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物；试剂A：流动相用，含0.1wt.％的甲酸的水；试剂B：流动相用，含0.1wt.％的甲酸的乙腈；试剂C：沉淀蛋白用，含100wt.％甲醇；试剂D：复溶用，超纯水。
该试剂盒还含有C18色谱柱，规格为100mm×2.1mm，粒径1.9μm。
本发明通过UPLC-Q exactive MS的方法确定正常和胆石症患者血浆中具有较高丰度的代谢小分子。然后，在其中通过基于UPLC-Q exactive MS的代谢组学技术筛选与胆石症相关的代谢小分子，作为胆石症诊断以及诊断程度的指标。最后将筛选出的对应血浆代谢小分子的数量控制在2个，这是在预实验的基础上做出的最优化的精简。
选用这2个代谢小分子的组合既能保证诊断的精确(灵敏度为68.13％,特异度为77.78％，ROC曲线下面积为0.7657)又能最大化减少检测成本，降低病人的经济负担，也利于临床推广使用。
本发明详细描述如下：
本发明人以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人群基础信息和临床资料，并采用了基于UPLC-Q exactive MS的代谢组学方法进行分析。
具体来说研究的实验方法主要包括以下几个部分：
一、研究对象选择和分组依据
第一阶段筛选阶段
随机纳入正常共200人。
1.年龄在25到70岁间；
2.无脂肪肝、胃溃疡等消化道其他疾病；
3.无吸烟、饮酒史；
4.无手术史；
5.无全身内分泌代谢、肿瘤等重大疾病；
第二阶段验证阶段
纳入病例和对照共200人。
A组：健康对照组(100人，健康无疾病正常人)：
1.年龄在25到70岁间；
2.无脂肪肝、胃溃疡等消化道其他疾病；
3.无吸烟、饮酒史；
4.无手术史；
5.无全身内分泌代谢、肿瘤等重大疾病；
B组：胆石症病人组(100人，手术确诊为胆石症病人)：
1.年龄在25到70岁间；
2.无脂肪肝、胃溃疡等消化道其他疾病；
3.无吸烟、饮酒史；
4.无手术史；
5.无全身内分泌代谢、肿瘤等重大疾病；
二、UPLC-Q exactive MS代谢组学分析和胆石症诊断用代谢小分子筛选和验证
1.样本前处理
1.1.新鲜血液于离心机3000rpm离心5min，取上清100μL分装至洁净1.5mL EP管中。
1.2.50μL血浆用150μL甲醇(试剂C)沉淀蛋白。
1.3.吸取上清，用氮气吹干再用真空干燥。
1.4.用100μL水(试剂D)溶解干燥物。
2.仪器检测
2.1.分析仪器：UPLC Ultimate 3000system(Dionex)高效液相色谱仪；QExactive高分辨质谱仪。
2.2.液相条件：
2.2.1液相色谱柱为C18色谱柱(100mm×2.1mm，粒径1.9μm)，柱温为40℃。
2.2.2采用的流动相为流动相A含0.1wt.％甲酸的水(试剂A)和流动相B含0.1wt.％甲酸的乙腈(试剂B)，流速为400μL/min。
2.2.3仪器梯度为：0-3min 1％试剂B(99％试剂C)，3-10min 1％到99％试剂B(99％到1％试剂C)，10-13min99％试剂B(1％试剂C)，13-13.1min 99％到1％试剂B(1％到99％试剂C)，13.1-17min 1％试剂B(99％试剂C)。
2.2.4进样方式：体积10μL。
2.3.质谱条件
2.3.1加热电喷雾电离方式(HESI)进行分析。
2.3.2正离子模式喷雾电压：3.5kV；负离子模式喷雾电压：2.5kV；两种模式下毛细管温度：250℃，加热器温度：425℃，鞘气气流：50AU，辅助气气流：13AU，反吹气气流：0AU；透镜电压：60V。采用全扫模式，扫描范围：70到1050m/z；分辨率：70000；自动增益控制(ACG)：1×10-6charges；最大注射时间：30ms。
3.物质定性和定量
代谢小分子定性采用与氧化三甲胺和三甲胺标准品比对色谱信息(保留时间)和质谱信息(精确分子量、同位素分布和MS/MS碎片信息)，并实时比对样本中同位素内标标准品(氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物和氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物)的色谱信息(保留时间)；定量采用氧化三甲胺和三甲胺标准品和同位素内标标准品(氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物和氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物)的内标标准曲线法。
4.数据分析
生物标志物筛选采用多元线性回归筛选稳健的与胆石症有关的代谢物，再采用多元Logistic回归确认关键代谢物。
5.健康对照组、胆石症组血浆样本中代谢小分子的差异和诊断意义
经过校正纳入个体的年龄、性别、体质指数，多元线性回归分析发现血浆氧化三甲胺和三甲胺的含量与胆石症的发生呈正相关。经过校正年龄、体质指数、性别，多元Logistic回归分析发现血浆氧化三甲胺和三甲胺的含量增加显著提高了胆石症的风险。浓度分层—OR（表1）。采用独立人群应用上述代谢小分子组合诊断胆石症，灵敏度为68.13％，特异度为77.78％，ROC曲线下面积为0.7657，具有较高的诊断价值。
表1
三、诊断试剂盒制备方法
根据上述一系列实验结果，本发明还提供了一种能用于胆石症高危人群筛选及监测的诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包含测定受试者血浆中稳定存在且可检测的氧化三甲胺和三甲胺的稳定同位素内标及氧化三甲胺和三甲胺的标准品。诊断试剂盒还包括一套血浆代谢小分子提取及色谱分离用试剂及器材。
有益效果：本发明通过采用UPLC-Q exactive MS比较正常对照和胆石症患者血浆中的代谢小分子，发现了血浆中存在可用于评估患者是否胆石症，具有诊断价值的血浆代谢小分子标志物组合，以及该血浆代谢小分子标志物检测的UPLC-Q exactive MS的应用，研制出可便于临床应用的胆石症诊断、监测试剂盒。
本发明采用血浆代谢小分子作为胆石症评价的标志物的优越性在于：
(1)血浆代谢小分子是一种新型生物标志物，其与疾病结局关联强，不仅稳定、微创、易于检测，且定量精确，将大大提高胆石症诊断的敏感性和特异性，该类小分子生物标志物的成功开发将为疾病生物标志物的研制提供借鉴。
(2)本发明提供的血浆代谢小分子标志物可用于胆石症的诊断标志物，更可在早期通过微创方式进行早期诊断、高危人群的筛选，特别是对行保留胆囊取石手术后病人再次复发前的检测和早期诊断，从而为临床医生进一步深入检查提供依据，为快速准确掌握患者的疾病状态和病情严重程度、及时采取更具个性化的防治方案提供支持，延缓和阻止疾病进展。
(3)本发明采用胆石症和健康对照人群的血浆样本进行验证，证明了血浆中氧化三甲胺和三甲胺水平在预测胆石症中具有较高灵敏度和特异度，可作为筛选高危人群标志物使用。
(4)UPLC-Q exactive MS技术样本处理简单，仪器分析迅速准确，具有较高的临床诊断实用价值。
附图说明
图1A胆石症B型超声检查图；
图1B典型胆固醇结石图；
图2胆石症手术所见图；
图3代谢小分子波动水平曲线图；
图4氧化三甲胺和胆汁胆固醇饱和度的相关性示意图；
图5正常对照组和胆石症组之间的ROC曲线图（氧化三甲胺）；
图6正常对照组和胆石症组之间的ROC曲线图（三甲胺）；
图7正常对照组和胆石症组之间的ROC曲线图（氧化三甲胺和三甲胺联合指标）。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。
实施例1：
研究对象选择和分组依据
本发明于2011年7月到2012年6月间从同济大学附属上海东方医院胆石病中心采集符合要求的胆石症及正常非胆石症个体的血液（图1A和图1B：为胆囊结石超声和肉眼所见），通过对样品资料的整理，从中选择了符合要求的200例健康对照（平均年龄：45.1±6.3岁）、200例胆石症症患者（平均年龄：46.5±5.2天）作为胆石症代谢小分子生物标志物的筛选实验对象。具体的样品归类标准如下：具体的样品归
类标准如下：
A组：健康对照组（n=100，75人筛选，25人独立人群验证）：
1.年龄25-70岁；
2.无消化系统疾病；
3.无其他内分泌代谢、肿瘤等全身性重大疾病。
B组：胆石症症组（n=100，75人筛选，25人独立人群验证）：
1.年龄25-70岁；
2.经B超及手术验证为胆囊结石病(图2)；
3.无其它消化系统疾病；
4.无其他内分泌代谢、肿瘤等全身性重大疾病。
UPLC-MS代谢组学胆石症生物标志物筛选
1.样本前处理
1.1.新鲜血液(筛选阶段样本100例)于离心机3000rpm离心5min，取上清100μL分装至洁净1.5mL EP管中。
1.2.50μL血浆用150μL甲醇(试剂C)沉淀蛋白。
1.3.吸取上清，用氮气吹干再用真空干燥。
1.4.用100μL水(试剂D)溶解干燥物。
2.仪器检测
2.1.分析仪器：UPLC Ultima te 3000sys tem(Dionex)高效液相色谱仪；QExactive高分辨质谱仪。
2.2.液相条件：
2.2.1液相色谱柱为C18色谱柱(100mm×2.1mm，粒径1.9μm)，柱温为40℃。优选液相色谱柱为Hypersil GOLD C18色谱柱(100mm×2.1mm，粒径1.9μm，Thermo Scientific，Germany)。
2.2.2采用的流动相为(A)含0.1wt.％甲酸的水(试剂A)和(B)含0.1wt.％甲酸的乙腈(试剂B)，流速为400μL/min。
2.2.3仪器梯度为：0-3min 1％试剂B(99％试剂C)，3-10min 1％到99％试剂B(99％到1％试剂C)，10-13min99％试剂B(1％试剂C)，13-13.1min 99％到1％试剂B(1％到99％试剂C)，13.1-17min 1％试剂B(99％试剂C)。
2.2.4进样方式：体积10μL。
2.3.质谱条件
2.3.1加热电喷雾电离方式(HESI)进行分析。
2.3.2正离子模式喷雾电压：3.5kV；负离子模式喷雾电压：2.5kV；两种模式下毛细管温度：250℃，加热器温度：425℃，鞘气气流：50AU，辅助气气流：13AU，反吹气气流：0AU；透镜电压：60V。采用全扫模式，扫描范围：70到1050m/z；分辨率：70000；自动增益控制(ACG)：1×10-6charges；最大注射时间：30ms。
3.物质定性和定量
代谢小分子定性采用与氧化三甲胺和三甲胺标准品比对色谱信息(保留时间)和质谱信息(精确分子量、同位素分布和MS/MS碎片信息)，并实时比对样本中同位素内标标准品(氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物，氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物)的色谱信息(保留时间)；定量采用氧化三甲胺和三甲胺标准品和同位素内标标准品(氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物，氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物)的内标标准曲线法。
4.数据分析
生物标志物筛选采用多元线性回归筛选稳健的与胆石症有关的代谢物，再采用多元Logistic回归确认关键代谢物。
5.健康对照组、胆石症组血浆样本中代谢小分子的差异和诊断意义
经过校正年龄、体质指数、性别，多元线性回归分析发现血浆氧化三甲胺和三甲胺的含量与胆石症的发生呈正相关。经过校正年龄、体质指数、性别，多元Logistic回归分析发现血浆氧化三甲胺和三甲胺的含量增加显著提高了胆石症发生的风险(表1)。
血浆代谢小分子的稳定性分析
采用实施例1同样的采集方法采集10名胆石病人的血浆，采用实施例2的方法对血浆氧化三甲胺和三甲胺水平的稳定性进行评价(间隔时间为2周)。结果显示，血浆中氧化三甲胺和三甲胺测定水平稳定(图3)，具备作为诊断/监测标志物的特性。
代谢小分子组合对胆石症的诊断
根据上述UPLC-Q exactive MS代谢组学方法，本发明人通过对独立人群200病例和200对照(验证阶段样本250例)的血浆样品检测氧化三甲胺和三甲胺，以此绘制ROC曲线并评估预测的灵敏性和特异性，进而评估检测血浆中这2个代谢小分子水平对胆石症的评估能力。
胆汁胆固醇饱和指数增加是结石形成的必要条件。检测显示：氧化三甲胺和胆石病人胆汁的胆固醇饱和度具有密切的正相关性（图4）。
氧化三甲胺的灵敏度为53.85％，特异度为74.62％，ROC曲线下面积为0.6503(图5)；三甲胺灵敏度为45.26％，特异度为77.71％，ROC曲线下面积为0.6606(图6)。
氧化三甲胺和三甲胺组合的灵敏度为68.13％，特异度为77.78％，ROC曲线下面积为0.7657(图7)。
故而氧化三甲胺和三甲胺组合具有较好地诊断胆石症的能力。
用于胆石症血浆代谢小分子检测和诊断试剂盒的制作
此试剂盒包括一批血浆代谢小分子检测用试剂和耗材，其中代谢小分子的定性和定量采用氧化三甲胺和三甲胺的标准品，辅助定量和辅助定性采用氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物，氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物。其它还有用于UPLC色谱分离的配套反向色谱柱(C18色谱柱，100mm×2.1mm，粒径1.9μm)、用于沉淀血浆蛋白的试剂(100％甲醇)，用于提取代谢小分子的试剂(100％超纯水)，用于流动相的试剂(含0.1wt.％的甲酸的水和含0.1wt.％的甲酸-乙腈)。此试剂盒的价值在于只需要100μL血浆，即可检测血浆代谢小分子标志物的含量，再通过含量评判胆石症发生可能性或诊断胆石症，并易于进行动态监测和观察治疗效果。
具体试剂盒组成举例如下：
氧化三甲胺标准品；
三甲胺标准品；
氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物；
氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物；
试剂A(含0.1wt.％的甲酸的水)；
试剂B(含0.1wt.％的甲酸的乙腈)；
试剂C(含100wt.％甲醇)；
试剂D(100wt.％超纯水)；
该试剂盒还含有C18色谱柱：100mm×2.1mm，粒径1.9μm。
以上实例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物，其特征在于该标志物为氧化三甲胺和三甲胺。
2.权利要求1所述标志物在制备胆石症诊断或监测试剂盒中的应用。
3.胆石症诊断或监测试剂盒，其特征在于该试剂盒含有氧化三甲胺和三甲胺标准品。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于包括氚3H标记的氧化三甲胺稳定同位素内标物；氚3H标记的三甲胺稳定同位素内标物；试剂A：流动相用，含0.1wt.％的甲酸的水；试剂B：流动相用，含0.1wt.％的甲酸的乙腈；试剂C：沉淀蛋白用，含100 wt.％甲醇；试剂D：复溶用，超纯水。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于该试剂盒还含有C18色谱柱，规格为100mm×2.1mm，粒径1.9μm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610942234.7A CN106556656B (zh) | 2016-10-26 | 2016-10-26 | 一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610942234.7A CN106556656B (zh) | 2016-10-26 | 2016-10-26 | 一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106556656A true CN106556656A (zh) | 2017-04-05 |
| CN106556656B CN106556656B (zh) | 2019-05-14 |
Family
ID=58443504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610942234.7A Active CN106556656B (zh) | 2016-10-26 | 2016-10-26 | 一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106556656B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107340341A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-11-10 | 长沙都正生物科技有限责任公司 | 一种氧化三甲胺定量检测试剂盒及方法 |
| CN109917042A (zh) * | 2019-04-08 | 2019-06-21 | 常州市第一人民医院 | 一种试剂盒 |
| CN111077240A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-28 | 深圳市农产品质量安全检验检测中心(深圳市动物疫病预防控制中心) | 一种高效液相色谱-质谱联用检测三甲胺的方法 |
| CN113376267A (zh) * | 2021-05-11 | 2021-09-10 | 兰立生物科技(苏州)有限公司 | 一种能够快速检测tmao生物标志物的方法及试剂盒 |
| CN114544825A (zh) * | 2020-11-24 | 2022-05-27 | 重庆医科大学 | 检测血浆中溶血磷脂酰胆碱(16:1)的试剂在制备抑郁症检测试剂盒中的用途 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102458481A (zh) * | 2009-05-28 | 2012-05-16 | 克里夫兰诊所基金会 | 用于诊断和预测疾病的含三甲胺的化合物 |
| CN104090051A (zh) * | 2014-07-24 | 2014-10-08 | 山东龙大植物油有限公司 | 一种测定食用油中三甲胺含量的方法 |
| WO2016097860A1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Uti Limited Partnership | Metabolomics for diagnosing pancreatic cancer |
| CN105738539A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-06 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种利用顶空气相色谱测定蛋黄中三甲胺含量的方法 |
| WO2016193757A1 (en) * | 2015-06-03 | 2016-12-08 | Oxford University Innovation Limited | Method for diagnosing a brain tumour in a human |
-
2016
- 2016-10-26 CN CN201610942234.7A patent/CN106556656B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102458481A (zh) * | 2009-05-28 | 2012-05-16 | 克里夫兰诊所基金会 | 用于诊断和预测疾病的含三甲胺的化合物 |
| CN104090051A (zh) * | 2014-07-24 | 2014-10-08 | 山东龙大植物油有限公司 | 一种测定食用油中三甲胺含量的方法 |
| WO2016097860A1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Uti Limited Partnership | Metabolomics for diagnosing pancreatic cancer |
| WO2016193757A1 (en) * | 2015-06-03 | 2016-12-08 | Oxford University Innovation Limited | Method for diagnosing a brain tumour in a human |
| CN105738539A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-06 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一种利用顶空气相色谱测定蛋黄中三甲胺含量的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘燕 等: "血清中氧化三甲胺的高效液相色谱串联质谱法测定研究", 《华南预防医学》 * |
| 唐乾利 等: "兔胆石症的代谢组学特征及大黄灵仙胶囊的干预作用", 《医药导报》 * |
| 成玉: "基于色谱质谱联用技术的代谢组学方法研究及大肠癌代谢组学研究", 《中国博士学位论文数据库》 * |
| 蒋兆彦 等: "胆固醇结石病的发生机制", 《世界华人消化杂志》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107340341A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-11-10 | 长沙都正生物科技有限责任公司 | 一种氧化三甲胺定量检测试剂盒及方法 |
| CN109917042A (zh) * | 2019-04-08 | 2019-06-21 | 常州市第一人民医院 | 一种试剂盒 |
| CN109917042B (zh) * | 2019-04-08 | 2021-11-19 | 常州市第一人民医院 | 一种试剂盒 |
| CN111077240A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-28 | 深圳市农产品质量安全检验检测中心(深圳市动物疫病预防控制中心) | 一种高效液相色谱-质谱联用检测三甲胺的方法 |
| CN114544825A (zh) * | 2020-11-24 | 2022-05-27 | 重庆医科大学 | 检测血浆中溶血磷脂酰胆碱(16:1)的试剂在制备抑郁症检测试剂盒中的用途 |
| CN113376267A (zh) * | 2021-05-11 | 2021-09-10 | 兰立生物科技(苏州)有限公司 | 一种能够快速检测tmao生物标志物的方法及试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106556656B (zh) | 2019-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106979982B (zh) | 一种用于糖尿病风险预测、治疗评价的方法及试剂盒 | |
| CN106556656A (zh) | 一种与胆石症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 | |
| WO2017054686A1 (zh) | 用于恶性肿瘤相关筛查及评估的产品、应用及方法 | |
| CN111562338B (zh) | 透明肾细胞癌代谢标志物在肾细胞癌早期筛查和诊断产品中的应用 | |
| CN106290653B (zh) | 与特发性男性不育相关的尿液脂肪酸代谢物标志物及其检测方法和应用 | |
| AU2006318653A1 (en) | Method for detecting an inflammatory disease or cancer | |
| CN116794330A (zh) | 用于酒精性肝病诊断的生物标志物及其应用 | |
| CN112903851A (zh) | 一种与妊娠期肝内胆汁淤积症辅助诊断相关的血清/血浆代谢分子标志物及其应用 | |
| Han et al. | Clinical value of pepsinogen in the screening, prevention, and diagnosis of gastric cancer | |
| CN105181869B (zh) | 一种巨大儿辅助诊断标志物的应用 | |
| CN111896641A (zh) | 结直肠癌相关雌激素血浆代谢小分子筛选方法及其应用 | |
| CN112129876A (zh) | 与特发性男性不育有关的精浆有机酸标志物及其检测方法和应用 | |
| CN112230003A (zh) | 三种血清脂质联合用于糖尿病肾病诊断的用途 | |
| CN103278579B (zh) | 人类肠管无神经节细胞症相关的血浆代谢小分子标志物及其应用 | |
| CN114252547A (zh) | 二甲基甘氨酸作为胎儿先天性心脏病血清标志物的应用 | |
| CN102565267B (zh) | 筛查结直肠癌的试剂盒 | |
| CN112129877A (zh) | 精浆甘露糖-6-磷酸和新蝶呤检测作为特发性男性不育诊断标志物及其应用 | |
| WO2009061412A1 (en) | Methods for detecting or monitoring cancer using lpe as a marker | |
| WO2019201216A1 (zh) | 十二烷酸和前列腺素e2组合作为巨大儿辅助诊断标志物及其应用 | |
| CN112763732B (zh) | Pe(16:0/20:2)及其组合物在糖尿病、糖尿病肾病诊断方面的应用 | |
| CN108872423A (zh) | 葡萄糖酸内酯和焦谷氨酸作为巨大儿辅助诊断标志物及其应用 | |
| CN112697895B (zh) | 棕榈酰肉碱作为检测靶点在制备icp辅助诊断试剂盒中的应用 | |
| CN116500168B (zh) | β-丙氨酸和哌啶酸的组合作为巨大儿预测标志物的应用 | |
| CN112946303A (zh) | Tag54:2-fa18:1及其组合物在糖尿病、糖尿病肾病诊断方面的应用 | |
| TWI817329B (zh) | 腎臟罹癌風險之判斷方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |