CN106551943A

CN106551943A - 含有螺甾烷化合物的组合物及其用途

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Publication number: CN106551943A
Application number: CN201510640941.6A
Authority: CN
Inventors: 黄成钢; 李佳; 李志雄; 李静雅; 孙兆林; 潘国宇; 陈明苍; 田小亭; 崔仕超; 林云飞; 刘磊; 江磊; 丁健
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-09-30
Filing date: 2015-09-30
Publication date: 2017-04-05
Anticipated expiration: 2035-09-30
Also published as: CN106551943B

Abstract

一种含有螺甾烷化合物的组合物，其包含小檗碱或其可药用盐与螺甾烷化合物或其可药用盐，各成分以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％。经动物实验证明，本发明组合物的毒副作用显著下降，并能快速有效地降低Ⅱ型糖尿病动物的血糖和高血脂动物的血脂水平。

Description

含有螺甾烷化合物的组合物及其用途

技术领域

本发明涉及一种含有螺甾烷化合物的组合物，尤其涉及一种包含小檗碱或其可药用盐与知母螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物，不仅能显著降低血糖和高血脂，而且能显著降低毒副作用，以及其作为活性成分在预防和治疗糖尿病和高血脂组合物中的应用。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种因体内胰岛素绝对或者相对不足所导致的一系列临床综合症。该病在发展进程中还会引起一些并发症，如：低血糖症(Hypoglycemia)、酮症酸中毒(Ketoacidosis)、非酮高渗性昏迷(Nonketotic Hyperosmolar Coma)、心血管疾病、慢性肾衰竭、视网膜病变、神经病变及微血管病变等。糖尿病治疗常用的药物主要有三大类：生物药类，如：胰岛素(Insulin)；化学药，如：磺酰脲类(Sulfonylurea)、双胍类(Biguanide)、格列酮类(Glitazone)和中成药类。限于目前尚没有较为成熟的胰岛素非注射给药技术，其使用仍以注射为主，且注射过程也存在安全性风险。化学类药物虽具有较强的降血糖作用，但对肝、肾等毒副作用大，还容易导致心血管并发症加重。此外，还有一些药物，如：胰高血糖素类多肽(Glucagon-like peptide 1，GLP-1)、脂酰基化胰高血糖素类多肽(NN2211，NovoNordisk)、Exendin-4(Amylin)和聚乙二醇修饰的Exendin-4(中国发明专利申请00809516.7)等，长期给药后虽能有效控制血糖、降低糖化血红蛋白HbA1c数值和改善β胰岛细胞功能，但由于这些分子还同样作用于中枢神经受体，所以给药后呕吐和眩晕的症状较难避免，且给药方式仍以注射为主。另一类DPPⅣ酶抑制剂，虽能口服，但其将对生物体内的一大类酶均产生抑制作用，从而会使体内脂肪分布发生变化，且给药的实际效果也相对较差。

知母为百合科(Liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)的根茎，具有滋阴降火、润燥滑肠的功效，中医临床多用于消渴证。知母药用以单位知母饮片或与其它中药配伍后煎煮或熬煮为主。中药材知母中含知母皂甙(苷)(timosaponin)A-Ⅰ、A-Ⅱ、A-Ⅲ、A-Ⅳ、B-Ⅰ、B-Ⅱ和B-Ⅲ，其中，知母皂甙A-Ⅱ、A-Ⅳ结构尚不明。以及知母皂甙(amemarsaponin)A2，即马尔考皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙B(marlogenin-3-O-β-D-glucopyranosy(1→2)-β-D-galactopyranosideB)、去半乳糖替告皂甙(desgalactotigonin)、F-芰脱皂甙(F-gitonin)和异菝葜皂甙(smilageninoside)等。此外，还含有知母多糖(anemaran)A/B/C/D、顺-扁柏树脂酚(cis-hinokiresinol)、单甲基-顺-扁柏树脂酚(monomethyl-cis-hinokiresinol)、氧化-顺-扁柏树脂酚(oxy-cis-himokiresinol)、2,6,4'-三羟基-4-甲氧基二苯甲酮(2,6,4'-trihydroxy-4-methoxy benzophenone)、对-羟苯基巴豆油酸(p-hydroxyphenyl crotonic acid)、二十五烷酸乙烯脂(pentacosyl vinyl ester)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、芒果甙(mangiferin)、烟酸(nicotinic acid)、烟酰胺(nicotinamide)及泛酸(pantothenic acid)等。

黄柏来源于芸香科(Rutaceae)植物黄皮树(Phellodendron chinense Schneid.)或黄檗(Phellodendronamurense Rupr.)的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”。黄柏始载于《神农本草经》，原名“檗术”，列上品。为清热燥湿、泻火解毒、退虚热的常用中药材，化学成分主要为小檗碱生物碱。小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌均有抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用。小檗碱的盐酸盐(俗称盐酸黄连素)已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。

关黄柏为黄檗树(Phyllodendron amurense Rupr.)的树皮，黄檗树皮含小檗碱(berberine)约1.6％，并含少量黄柏碱(phellodendrine)、木兰碱(magnoflorine)、药根碱(jatrorrhizine)、掌叶防己碱(palmatine)和白栝楼碱(candicine)等，其根皮可分离出的小檗碱约9％，尚有药根碱、黄柏碱和白栝楼碱等。川黄柏为黄皮树(Phyllodendron Chinense Schneid)和秃叶黄皮树(P.Chinense Schneid.var.Glabriusculum Schneid)的树皮，含小檗碱3-8％是提取小檗碱的重要来源之一。黄皮树树皮含小檗碱达3％。秃叶黄皮树树皮含小檗碱达6.5％，并含少量掌叶防己碱、药根碱、黄柏碱和木兰碱。

近年来，有关黄柏和知母单味药材及其有效成分治疗糖尿病的研究较多。已经有研究表明知母黄酮类成分具有防治糖尿病的作用(国外医学中医中药分册，2002，24，353；中国发明专利ZL03115509.X)。现代研究发现，知母总皂苷(中药药理与临床，2005，21，22-23)、知母皂苷A-Ⅲ、B-Ⅱ、B-Ⅲ和芒果苷等(Wakan Iyakugakn Zasshi，1995，5，404-405；中国生化药物杂志，2005，26，332)具有降低血糖的功效。据报道，知母醇提物可刺激糖尿病大鼠分泌胰岛素而起到降血糖作用(Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes，2004，112，520-525)；知母中的多糖类成分可显著降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖及肝糖元(中草药，1996，17，605-606)。研究表明，黄柏中的主要成分小檗碱具有能促进胰岛素分泌，调节脂质代谢和抗糖尿病的功效(Acta Pharmacologica Sinica，2004，25，496-502；中国发明专利ZL01118320.9)。进一步临床研究证实，黄连素，即小檗碱，对Ⅱ型糖尿病(Non-Insulin-Dependent DiabetesMellitus，NIDDM)患者的临床有效率为63.3％，且不良反应小(新中医，1997，29，33-34)。

中国发明专利申请93100485.3公开了一种荞麦保健食品，以苦荞麦粉为基料，辅以大豆蛋白粉，再添加枸杞、人参、知母、活性钙等中草药天然成分，其配方重量百分组成为：苦荞麦面粉60-80％、大豆蛋白粉15-30％、枸杞多糖0.5-2.5％、知母皂甙0.2-0.5％、人参多糖0.5-1.5％、活性钙1.2-4.3％。组成的食品对糖尿病具有治疗作用。该保健食品以荞麦为主，能对糖尿病患者的饮食起到一定作用，但在治疗方面的效果有待进一步的实验证实。

中国发明专利ZL95116521.6公开了一种双补降糖胶囊及其制作方法，使用熟地、黄芪、枸杞子、丹参、黄柏、知母和肉桂等20味原料药，经特殊炮制和加工而成。该降糖胶囊由中药材粉碎后制成，由于含有的纤维素含量多，而能减缓糖的吸收，加入附子和肉桂二药材后使得药物降糖效果更为显著，是该发明的重点所在。

中国发明专利申请99126988.8公开了一种专冶糖尿病降糖胶囊，以生地、天花粉、玄参、知母、黄柏、黄连、鹿茸、边桂、山药、石膏和干藕粉等药材为主要组分，治疗由糖尿病引起的上消、中消、下消和多食多尿等病症。

中国发明专利申请02107203.5公开了一种治疗2型糖尿病的复方中药制剂，以葛根、天花粉、苍术、玄参、生黄芪、山药、生石膏、肉桂、熟附片、鬼箭羽、地鳖虫、桑寄生、蚕茧、炮山甲、水蛭、血竭、菝葜、知母、绞股蓝、生地、麦冬、赤芍、地骨皮、制大黄等天然中药材为原料，通过粉碎、煎煮、烘干、灭菌等工序制成，用于Ⅱ型糖尿病及其并发症的治疗。

中国发明专利申请200310110332.7公开了一种治疗糖尿病的药物参芪山药膏及其制备方法，由“君”药：山药和人参；“臣”药：海龙、海马、阿魏、乳香、没药、红花、肉桂、珍珠、人工麝香、天花粉、黄柏、黄芪、芒果叶和番石榴叶；以及“使”药：冰片等药材共同配伍而成。将山药、人参、天花粉、黄柏、黄芪、芒果叶和番石榴叶等药材的碎段混匀，浸泡于麻油中，三天后经加热，过滤，在滤油中加入红丹，再搅匀，收膏；将药膏加入冷水中，不断搅拌，挤压换水；取药膏用文火熔化，加入珍珠层粉、冰片粉、人工麝香、海龙、海马、阿魏、乳香、没药、红花和肉桂等药材的细粉，搅匀，分摊在无纺布上制成膏药。所制得的药膏益气养阴、生津止渴，具有治疗Ⅱ型糖尿病的功效。

现有的各种中成药对糖尿病虽有一定的治疗作用，但目前临床使用的单一组分制剂或医生自拟的处方汤药，缺乏药效显著、有效成分和作用机理明确，且质量可控和剂型方便的现代中药。中国发明专利ZL200510110763.2公开了一种治疗糖尿病的组合物，由知母、黄柏和肉桂提取物组成，虽然克服了现有技术的诸多缺陷，但是需要用三种药材，生产成本较高，工艺路线较复杂。

中国发明专利ZL201010022822.1公开了一种预防和治疗糖尿病的药物组合物，其以知母皂苷B-Ⅱ和小檗碱为活性组分，组合物中知母皂苷B-Ⅱ含量为重量百分比5％-80％和小檗碱2％-60％时，已能显著地实现糖尿病预防和治疗的目的。但需要对患者给予较大量的该种组合物，且具有较大的毒副作用，由此限制了该组合物的实际应用。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种预防或治疗糖尿病和/或高血脂的组合物，其包含小檗碱或其可药用盐和螺甾烷化合物或其可药用盐，该组合物具有改善血糖和降低血脂的药理作用，且毒副作用显著下降。

在本发明的组合物中，小檗碱或其可药用盐和螺甾烷化合物或其可药用盐可以任选地以提取物的形式包含于该组合物中。

在本发明的组合物中，小檗碱或其可药用盐和螺甾烷化合物或其可药用盐为主要活性成分或仅有的活性成分。

本发明的组合物可以是药物、食品或保健品中的至少一种。

本发明的另一个目的在于提供本发明的组合物在制备预防或治疗糖尿病和/或高血脂的药物、食品或保健品中的用途。

本发明的又一个目的在于提供一种预防或治疗糖尿病和/或高血脂的药物组合，其包含含有小檗碱或其可药用盐的组合物和含有螺甾烷化合物或其药学上可接受的盐的组合物，该药物组合具有改善血糖和降低血脂的药理作用，且毒副作用显著下降。

本发明的再一个目的在于提供一种预防或治疗糖尿病和/或高血脂的组合在预防或治疗糖尿病和/或高血脂的药物、食品或保健品中的用途，该药物组合能够改善血糖，降低血脂，并且毒副作用显著下降。

本发明所称的“小檗碱”是指式Ⅰ所示的化合物化学名称为5,6-二氢-9,10-二甲氧基苯并-1,3-二苯并间二氧杂环戊烯-5,6α-喹嗪，是一种异喹啉生物碱，包括季铵式、醛式和醇式等三种不同形式，其中以季铵式最稳定，也通常视作为一种季铵生物碱。其存在于小檗科(Berberidaceae)等4科10属的植物中，以及所成的药学上可接受的盐。

小檗碱的熔点145℃，能溶于水和乙醇，在冷乙醇中的溶解度为1∶100，易溶于热水或热乙醇；难溶于苯、乙醚和氯仿。其从乙醚中可析出黄色针状晶体；从水或稀乙醇中析出的晶体带有5.5分子结晶水；若从氯仿、丙酮或苯中结晶，也带有相应的结晶溶剂分子。小檗碱主要以氢氧化季铵的形式存在，在季铵式小檗碱的水溶液中加入过量的碱则生成醇式(叔胺)和醛式(仲胺)小檗碱的沉淀，由此可得到季铵式、醛式和醇式等三种不同形式的小檗碱。小檗碱的盐类在水中的溶解度都比较小，如：其盐酸盐溶解度为1∶500，其硫酸盐溶解度为1∶30。

小檗碱及其盐可以通过化学合成的方式获得。如：以胡椒乙胺和3,4-二甲氧基苯乙酸为起始原料，通过缩合、还原和氧化等多个步骤得到小檗碱(Ber.,1912，44，2980-2985)。又如：以儿茶酚为起始原料，经成环反应得胡椒环，经氯氰化反应得胡椒乙腈，再经缩合、催化和氢化步骤得缩合物盐酸盐，又经环合反应得小檗碱粗品，经碱化和成盐可制得小檗碱盐酸盐、小檗碱硫酸盐或小檗碱鞣酸盐(中国发明专利ZL01106089.1)。还有如：以2,3-二甲氧基苯甲醇和胡椒乙胺为原料，经过烷基化、氯甲基化、氰化、醇解、缩合和环合六步制得盐酸小檗碱(中国发明专利申请200710020332.6)。

本领域技术人员根据现有技术能够从含有小檗碱的的天然植物或药材中提取得到纯度大于90％的小檗碱，经过条件的优化能进一步得到纯度大于95％的小檗碱。

小檗碱及其盐还可以从天然植物/中药材(如：三颗针、黄连和黄柏)的提取物中获得。酸水法是目前提取小檗碱常用的方法，从三颗针中提取小檗碱，常用多倍量的0.3％硫酸水溶液浸泡24h，过滤后滤液用石灰乳调pH值至12，经过滤的滤液用盐酸调pH值到2-3，再加入6％左右的精制食盐，使食盐完全溶解，放置过夜，抽滤得盐酸小檗碱(中药化学，山东科学技术出版社，1997)。或用0.5％的硫酸水溶液冷浸提取，提取液pH值调至7，滤液浓缩后pH值再调至2-3，再加入6％左右的食盐并过滤，将沉淀溶于热水，将pH调至8.5-9后过滤，滤液再调pH值到2～3，放冷过滤得盐酸小檗碱(天然药物化学，人民卫生出版社，2003)。在小檗碱提取过程中，提取工艺的条件，如：pH值、酸用量、水用量和温度等，对提高产物的提取率有一定影响(天然产物研究与开发，1998，10，62；广东药学院学报，1996，12，261；怀化医专学报，2004，3，26；海峡药学，1999，11，100；时珍国医国药，2001，12，982)。廖自基等人采用硫酸液浸泡，加入氯化钠、氯化锌沉降浓集后，再用石灰、强碱除去碱性杂质，用硫化铵除锌及胶体杂质的方法从“十大功劳”中提取黄连素，制得的成品小檗碱含量98.1％，提取率65％-69％(中国发明专利申请91105606.8)。乙醇法是另一种小檗碱常用的提取方法，一般包括：投料→提取→蒸发→溶解→洗涤→精制→成品等多个步骤。将中药材(如：黄连或黄柏)用热乙醇浸泡后，将乙醇浓缩液经过滤、加酸、沉淀、放置和过滤等步骤制得盐酸小檗碱。或于乙醇中回流30min后静置，反复多次后合并滤液，减压除去乙醇，加酸液后过滤冷却制得盐酸小檗碱。黄连用9倍体积50％乙醇，60℃提取两次，能使小檗碱提取率为91％以上，平均回收率为97.38％(山东农业生物学报，2004，6，502-505)。当提取工艺采用：6倍量80％乙醇，乙醇中硫酸加入量为0.25％，提取时间为1.5h/次，提取次数为3次时，制备所得盐酸小檗碱精制品含量在90％以上(中国药房，2004，15，18)。

小檗碱的碱提取法中，最常用的是石灰乳法，如：黄柏粗粉中加入石灰乳搅拌均匀，常法装渗漉桶，加入饱和石灰水浸泡6h后渗漉(pH值在10以上)，收集渗漉液，加入渗漉体积7％(质量浓度)的固体食盐，搅拌后放置过夜，过滤，沉淀，用热水溶解再过滤。滤液加酸调pH值至2，放置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，抽干后于80℃下干燥，即得盐酸小檗碱。在比较几种提取方法如：酸水法、石灰乳法和乙醇提取法等，并加以改进后，证明石灰乳法提取效率优于其他方法(基层中药杂志，2000，14，27-29)。

当单独使用超声波(海峡药学，1999，11，100-101；中医药学报，2004，32，29-30；中成药，2004，26，186-189；时珍国医国药，2005，16，374-375)、微波(数理医药学杂志，2002，15，88-89；化工进展，2003，22，1338-1341；光谱实验室，2006，23，526-529)和酶法(中草药，1994，25，123；应用化工，2006，35，373-374)等方法提取小檗碱，或与酸水法、碱提法和醇提法等方法相结合提取小檗碱时，能大大缩短提取的时间并显著提高小檗碱的提取率。

本发明所称的“螺甾烷化合物”如式Ⅱ所示的化合物之一种或几种，

其中，第5位碳原子和第6位碳原子间为单键或双键，R₁、R₂、R₃和R₄相互独立，表示氢、羟基以及取代的或者未取代的选自下列的基团：羧基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷基、C3～C7环烷氧基或糖基。

尤其是式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物之一种或几种，如：但不仅限于式Ⅵ、式Ⅶ和式Ⅷ所示，可从中药材知母中制取，

其中，R₁表示羟基以及取代的或者未取代的选自下列的基团：羧基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷基、C3～C7环烷氧基或糖基；

R₂表示氢、羟基以及取代的或者未取代的选自下列的基团：羧基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷基、C3～C7环烷氧基或糖基。

而式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物，其特征更在于，R₁表示羟基以及取代的或者未取代的选自下列的基团：C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基；

R₂表示羟基以及取代的或者未取代的选自下列的基团：羧基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基。更进一步，式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物，选自式Ⅵ、式Ⅶ和式Ⅷ所示之一种或几种，

本发明所称的“知母”或“中药材知母”是指百合科植物知母(Anemarrhenaasphodeloides)的各个部分，如：根、茎、叶和果实等，由于从该植物的根茎中能够制取最多的目标皂苷衍生物，因此本发明优先选择其干燥的根茎。这些知母药材的选料和炮制过程是否符合中药材加工工艺和标准不得限定本发明。

本发明所称的组合物所包含的小檗碱或其可药用盐和螺甾烷化合物或其可药用盐，以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％；优选螺甾烷化合物或其可药用盐20％～70％，小檗碱或其可药用盐30％～80％；更优选螺甾烷化合物或其可药用盐30％～60％，小檗碱或其可药用盐40％～70％；更优选螺甾烷化合物或其可药用盐30％～40％，小檗碱或其可药用盐60％～70％，最优选螺甾烷化合物或其可药用盐与小檗碱或其可药用盐的重量比为1:2。

在本发明的组合物中使用的螺甾烷化合物或其可药用盐的提取物形式是含有螺甾烷化合物或其可药用盐的知母提取物，即从知母中提取的知母皂苷元以及在此过程中随之一并获得的物质，如：但不仅限于知母皂苷AⅠ、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ、知母皂苷AⅣ、知母皂苷BⅠ、知母皂苷BⅡ和芒果苷等。

在本发明的组合物中使用的小檗碱或其可药用盐的提取物形式是含有小檗碱或其可药用盐的提取物，即从小檗科植物中提取小檗碱以及在此过程中随之一并获得的物质，如：但不仅限于含掌叶防己碱、黄柏碱、药根碱、黄柏酮、蝙蝠葛任碱、白栝楼碱、木兰碱、柠檬苦素、巴马亭等。

此外，本发明的组合物还可以包括各种与所含的化合物或组合物相适应的药物辅料，以制成有利于给药(drug delivery)的剂型，如：但不仅限于水溶液注射剂、粉针剂、丸剂、散剂、片剂、贴剂、栓剂、乳剂、霜剂、凝胶剂、颗粒剂、胶囊剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、缓释剂和控释剂等。这些药用辅料既可以是各种制剂中常规使用的，如：但不仅限于等渗剂、缓冲液、矫味剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂等；也可以是为了与所述物质相适应而选择使用的，如：乳化剂、增溶剂、抑菌剂、止痛剂和抗氧化剂等，这类辅料能有效提高组合物所含化合物的稳定性和溶解性或改变化合物的释放速率和吸收速率等，从而改善各种化合物在生物体内的代谢，进而增强组合物的给药效果。此外，还可以为实现特定的给药目的或方式，如：缓释给药、控释给药和脉冲给药等，而使用的辅料，如：但不仅限于明胶、白蛋白、壳聚糖、聚醚和聚酯类高分子材料，如：但不仅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。所称的“有利于给药”的主要表现有：但不仅限于提高治疗效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者顺应性等。

在水溶液注射剂中，辅料一般包括等渗剂和缓冲液，以及必要的乳化剂(如：Tweeen-80、Pluronic和Poloxamer等)、增溶剂和抑菌剂等。此外，还包括含有药学上可接受的其它药用辅料，如：抗氧化剂、pH调节剂和止痛剂等。

用于制取口服液体制剂的辅料一般包括溶剂，以及必要的矫味剂、抑菌剂、乳化剂和着色剂等。

用于制取片剂的辅料一般包括填充剂(如：淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙和甘露醇等)、粘合剂(如：乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解剂(如：干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠)和润滑剂(如：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸镁等)等。

用于制取乳剂的辅料一般为水、油(如：脂肪酸)、乳化剂，以及必要的防腐剂和矫味剂等。

用于制取颗粒剂的辅料与片剂类似，但造粒过程不同。根据需要，将制得的颗粒剂与助流剂混合后装入胶囊即得胶囊剂。

本发明所称的“C1～C6”或“C3～C6”表示碳原子个数为1～6或3～6。其中，字母C表示碳原子，其后数字为正整数，如：1、2或3，表示基团所含的碳原子个数，如：1、2、3、4、5和6等。

本发明所称的“烷基”作为一个基团或一个基团的一部分时是指直链或者带有支链的饱和脂肪烃基团，如：但不仅限于甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和己基等。

本发明所称的“烷氧基”为烷基与氧原子连结后而成的基团，如：但不仅限于甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。

本发明所称的“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环或螺环脂肪烃环烷基如：但不仅限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基等。

本发明所称的“糖基”是指糖苷分子中提供半缩醛羟基的糖部分，其包含单糖基、二糖基或多糖基，其中单糖基包含但不限于丙糖基、丁糖基、戊糖基和己糖基，其进一步包含但不限于甘油醛基、核糖基、脱氧核糖基、木糖基、阿拉伯糖基、葡萄糖基、半乳糖基、果糖基、鼠李糖基、甘露糖基，二糖基包含但不限于乳糖基、麦芽糖基、蔗糖基；多糖基包含但不限于棉籽糖基、水苏糖基等。

本发明所称的“可药用盐”包括但不限于有机酸盐、无机酸盐、金属盐、铵盐以及本发明的化合物的内盐形式。其中，所述有机酸盐包括但不限于对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、草酸盐、丙二酸盐等；所述无机酸盐包括但不限于盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐等；所述金属盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、镁盐、钙盐、铁盐等。

本发明所称的“生物体”、“动物”或“患者”是指人、野生动物和家畜(Livestock)。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而人工饲养的动物，如：但不仅限于狗、猫、鼠、大鼠、仓鼠、猪、兔、奶牛、水牛、公牛、绵羊、山羊、鹅和鸡等。给予治疗的“患者”或“生物体”优先选择哺乳动物，尤其是人。

本发明所称的“预防”是指在未被临床标准认定的疾病前，各种用于防止疾病发生或发展的手段或措施，包括医学、物理或化学的方法，以阻止和降低疾病各种症状的发生或发展。

本发明所称的“预防糖尿病”是指将本发明组合物用于还未符合“糖尿病”临床指标的，随着时间的延续将慢慢发展成为临床上定义为“糖尿病”的潜在患者，从而改善这些患者对葡萄糖的耐受，促进肌体对糖代谢的能力，增加肌体对胰岛素的敏感性。这类潜在的患者通常患有“代谢综合症(Metabolic Syndrome)”(Annnu.Rev.Nutri.,2005，25，391-406；Annnu.Rev.Med.,2005，56，45-62；Nat.Rev.Drug.Disc.,2006，5，295-309；Nat.Rev.Endocri.,2006，2，335-348)，如：肥胖、胰岛素抵制、葡萄糖不耐受、高血压、动脉硬化证(antherosclerosis)、血脂异常症(dyslipidemia)(即血液中的甘油三酯水平偏高，高密度脂蛋白同时偏低)等。

本发明所称的“治疗”是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持和/或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况。

本发明所称的“治疗糖尿病”是指将本发明组合物用于临床诊断为“糖尿病”的患者，改善这些患者对葡萄糖的耐受，促进肌体对糖代谢的能力，增加肌体对胰岛素的敏感性。进而使得患者的餐后和空腹血糖得以控制在正常的水平。由于对葡萄糖代谢的能力得以提高，从而减缓了因长期高血糖而产生的各种心血管疾病、慢性肾衰竭、视网膜病变、神经病变及微血管病变的发生和发展。

本发明所称的“食品”是指包括本发明提供的各种化合物、组合物或提取物制成可食用的单一化合物或组合物。该种单一化合物或组合物的生产和制造应当符合相关食品安全标准，但是这些食品安全标准不得限定本发明。

本发明所称的“保健品”是指将包括本发明提供的各种化合物、组合物或提取物制成可食用的单一化合物或组合物以施于患者，起到对疾病进行预防和治疗的目的。其属于本发明所称的食品，但其生产、制造和销售还应当符合各种相关的要求、标准和规范。

本发明所称的“药物”是指可以用于预防或治疗某种疾病的单一化合物、多种化合物形成的组合物、中药材及其提取物，或指以单一化合物为主要活性成分的组合物或制剂(formulation)，还指由多种化合物为活性成分的组合物或制剂。“药物”应理解为不仅指根据一国之法律规定，通过其设立的行政机构审批并准予生产的产品，还指在为了获得通过审批和准予生产的过程中，所形成的含单一化合物为活性成分的各类物质形态。“形成”应理解为通过化学合成、生物转化或购买等途径获得。

本发明提供另一种预防或治疗糖尿病和/或高血脂的组合物，其中小檗碱或其可药用盐和螺甾烷化合物或其可药用盐为主要活性成分，各成分以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％；优选螺甾烷化合物或其可药用盐20％～70％，小檗碱或其可药用盐30％～80％；更优选螺甾烷化合物或其可药用盐30％～60％，小檗碱或其可药用盐40％～70％；更优选螺甾烷化合物或其可药用盐30％～40％，小檗碱或其可药用盐60％～70％，最优选螺甾烷化合物或其可药用盐与小檗碱或其可药用盐的重量比为1:2。。

本发明提供另一种预防或治疗糖尿病和/或高血脂的组合物，其中小檗碱或其可药用盐和螺甾烷化合物或其可药用盐为主要活性成分，还包含本领域常见的辅料中的至少一种。各成分以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％；优选螺甾烷化合物或其可药用盐20％～70％，小檗碱或其可药用盐30％～80％；更优选螺甾烷化合物或其可药用盐30％～60％，小檗碱或其可药用盐40％～70％；更优选螺甾烷化合物或其可药用盐30％～40％，小檗碱或其可药用盐60％～70％，最优选螺甾烷化合物或其可药用盐与小檗碱或其可药用盐的重量比为1:2。

本发明还提供了一种用于预防或治疗糖尿病和/或高血脂的药物组合，其包括含有小檗碱或其可药用盐的药物组合物和含有螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物。其中，含有小檗碱或其可药用盐的药物组合物与含有螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物可以在单一制剂中同时使用，也可以被配置用于单独施用；二者可以配置成相同或不同的剂型；并且二者可以同时或顺序地施用。在顺序施用的时候，可以先施用含有小檗碱或其可药用盐的药物组合物，然后再施用含有螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物；或者先施用含有螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物，然后再施用含有螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物。在顺序施用含有小檗碱或其可药用盐的药物组合物与含有螺甾烷化合物或其可药用盐的组合物的时候，二者之间的给药间隔可以是约1分钟、约2分钟、约5分钟、约10分钟、约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约5小时、约10小时、约24小时、约1.5天、约2天、约3天、约5天、1周、约10天、约15天等。间隔给药的剂量可以为小于大约1000mg/kg，优选小于大约500mg/kg，更优选小于大约250mg/kg，更优选小于大约200mg/kg，更优选小于大约100mg/kg，更优选小于大约50mg，更优选小于大约20mg/kg，更优选小于大约10mg/kg，更优选小于大约5mg/kg，更优选小于大约2mg/kg，更优选小于大约1mg/kg。

本发明提供的各种组合物或药物组合，具有改善血糖和降低血脂的药理作用，可以作为唯一的或主要的活性成分而应用于制取各种预防和治疗糖尿病和高血脂的药物、食品和保健品，或与其它一种或多种具有改善糖尿病和高血脂的化学物质或药物一并给予生物体。这些化学物质如：但不仅限于小檗碱提取物、知母皂苷提取物、知母总皂苷及其水解物、知母皂苷A-Ⅱ及其水解物、知母皂苷A-Ⅲ及其水解物和芒果苷等。所称的“一并给予生物体”是指本发明各种皂苷衍生物单独或与其它一种或多种具有改善糖尿病和高血脂的化合物、提取物或药物混合后经单一的给药途径，如：但不仅限于，口服(Oral)、鼻腔(Nasal)、(面)颊(Buccal)、透皮(Transdermal)、肺部(Pulmonal)、阴道(Vaginal)、皮下(Subcutaneous)或静脉(Intravenous)给予生物体；或与其它一种或多种具有改善糖尿病和高血脂的化学物质或药物分别经多种的给药途径给予生物体。

本发明提供的一种药物组合物，以本发明提供的组合物为活性成分。

本发明提供的另一种食品，以本发明提供的组合物为活性成分。

本发明提供的另一种保健品，以本发明提供的组合物为活性成分。

本发明技术方案实现的有益效果：

本发明提供的组合物或药物组合，将小檗碱或其可药用盐与螺甾烷化合物或其可药用盐相结合，不仅能显著降低血糖和血脂，而且毒副作用显著下降，更具开发前景。

本发明提供的组合物或药物组合给予试验动物几周后，各组试验动物的空腹血糖得到显著降低。再经口服糖耐量实验证明，各个给药组动物在给糖后30分钟和60分钟的血糖水平，以及给糖后120分钟内的曲线下面积均有降低。尤其是将小檗碱和菝契皂苷元按照重量比为2∶1制得的组合物2给予试验动物后，动物在给糖后60分钟和120分钟曲线下面积与模型对照组相比具有明显的统计学差异。因此，本发明组合物或药物组合给予试验动物后，可有效改善试验动物的糖耐量。

将本发明组合物或药物组合作为活性成分可用于制备治疗和预防糖尿病，尤其是Ⅱ型糖尿病的药物、食品和保健品。

本专利的优点：现有技术是将知母皂苷(原型成分)与小檗碱相结合，本申请是将皂苷元与小檗碱相结合，既具有显著的降糖作用，又显著降低了知母皂苷(原型成分)与小檗碱相结合所带来的毒副作用。

具体实施方式

以下详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

本发明所用的试剂若未明确指明，则均购自于西格玛－奥德里奇(Sigma－Aldrich)。

实施例1菝契皂苷元的制取

化合物的制取方法如下：取市售的中药知母饮片知母10KG，用50％乙醇水溶液加热回流提取，提取液回收乙醇后，加水稀释，离心，然后上清液通过AB-8大孔吸附树脂(10L)吸附法分离，用4倍量体积(BV)水洗去杂质，再用3BV的15v/v％的乙醇水溶液作为洗脱剂洗脱，弃去该洗脱液；再90％的乙醇洗脱，收集洗脱液5倍量体积(BV)，减压回收洗脱液中的乙醇，干燥，得知母总皂苷480g。得到的知母总皂苷加4800mL水和480mL浓盐酸水解6小时，抽滤水解物并用水洗涤至中性，加入丙酮进行重结晶二次后，所得结晶以甲醇溶解后，加300g ODS拌样后上样到3L ODS柱子，然后以90％甲醇-水体系等度洗脱，收集目标组分合并，减压回收溶剂，干燥即得菝契皂苷元92g。

制得的菝契皂苷元为白色针晶，分子式为分子式为C₂₇H₄₄O₃。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,chloroform-d),δ_H(ppm):4.37(td,J＝8.2,7.5,6.4Hz,1H),4.08(brs,1H),3.45(dd,J＝11.0,2.0Hz,1H),3.35(d,J＝10.8,1H),0.96(s,3H),0.94(d,J＝6.9Hz,3H),0.77(d,J＝6.2Hz,3H),0.74(s,3H)；

¹³C-NMR(100MHz,chloroform-d),δ_C(ppm):109.4,81.0,67.2,67.0,62.4,56.6,41.7,40.8,40.4,40.0,36.6,35.4,35.4,33.6,31.9,31.5,30.4,30.1,28.9,27.9,26.7,26.7,24.0,21.0,17.2,16.6,14.6；

HR-ESI/MS m/z:417.3366[M+H]⁺(理论值C₂₇H₄₅O₃ ⁺，417.3363)。

实施例2马尔可皂苷元的制取

化合物的制取方法如下：取市售的中药知母饮片10KG，加50L水和8L浓盐酸水解6小时，抽滤水解物并用水洗涤至中性，干燥，粉碎，加入10倍量无水乙醇回流提取，提取液回收乙醇后，干燥，用氯仿搅拌使溶解，去除不溶解物。氯仿溶液回收至小体积后，加硅胶250克拌样，蒸干氯仿后，上样到3L硅胶柱子，然后以氯仿-甲醇(2:1)体系等度洗脱，收集目标组分合并，减压回收溶剂，干燥。所得干燥物以少量氯仿溶解，加硅胶100克拌样，蒸干氯仿后，上样到1.5L硅胶柱子，然后以氯仿-甲醇(1:1)体系等度洗脱，收集目标组分合并，减压回收溶剂，干燥，用无水乙醇重结晶2次，干燥即得马尔可皂苷元0.9g。

制得的马尔可皂苷元为白色晶针，分子式为C₂₇H₄₄O₄。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,chloroform-d),δ_H(ppm):5.27(d,J＝7.7Hz,1H),4.98(d,J＝7.7Hz,1H),1.13(d,J＝7.0Hz,3H),1.06(d,J＝6.6Hz,3H),0.94(s,3H),0.78(s,3H)；

¹³C-NMR(100MHz,chloroform-d),δ_C(ppm):109.5,81.9,73.2,67.3,64.3,62.6,56.5,41.5,40.7,40.4,40.3,37.6,36.9,36.1,36.0,35.4,35.3,32.1,32.1,30.5,26.8,26.8,24.0,21.2,17.6,16.8,14.6。

HR-ESI/MS m/z:433.3249[M+H]⁺(理论值C₂₇H₄₅O₄ ⁺,433.3240)。

实施例3薯蓣皂苷元的制取

化合物的制取方法如下：取市售的中药知母饮片10KG，加50L水和5L浓硫酸水解6小时，抽滤水解物并用水洗涤至中性，干燥，粉碎，加入10倍量无水甲醇回流提取，提取液回收甲醇后，干燥，用乙酸乙酯搅拌使溶解，去除不溶解物。乙酸乙酯溶液回收至小体积后，加硅胶300克拌样，蒸干乙酸乙酯，上样到3.5L硅胶柱子，然后以氯仿-甲醇(1:1)体系等度洗脱，收集目标组分合并，减压回收溶剂，干燥。所得干燥物以少量乙酸乙酯溶液溶解后，加硅胶150克拌样，蒸干乙酸乙酯，上样到2.0L硅胶柱子，然后以氯仿-甲醇(1:2)体系等度洗脱，收集目标组分合并，减压回收溶剂，干燥，再用丙酮重结晶2次，即得薯蓣皂苷元1.3g。

制得的薯蓣皂苷元为白色针晶，分子式为C₂₇H₄₂O₃。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,chloroform-d),δ_H(ppm):4.52(dd,J＝14.5,7.5Hz,1H),4.08(brs,1H),3.83(m,1H),3.48(dd,J＝10.8,5.0Hz,2H),1.05(s,3H),1.14(d,J＝7.0Hz,3H),0.67(d,J＝5.2Hz,3H),0.81(s,3H)；

¹³C-NMR(100MHz,chloroform-d),δ_C(ppm):140.7,121.9,109.2,81.8,67.4,66.8,62.8,56.6,50.2,41.9,40.4,39.8,38.6,37.4,37.1,32.3,32.2,31.8,31.3,30.6,30.0,29.2,21.1,19.4,17.2,16.8,15.0。

HR-ESI/MS m/z:415.3136[M+H]⁺(理论值C₂₇H₄₃O₃ ⁺，415.3142)。

实施例4式Ⅲ-1所示的菝契皂苷元衍生物的制取

在冰浴条件下，将葡萄糖(10g,55.56mmol)溶于干燥的吡啶和DMF的混合液300mL中，向反应体系中缓慢滴入苯甲酰氯(36mL,308.56mmol)，滴加完毕后继续搅拌反应18h。反应结束后，向体系中加入50mL水淬灭。用EtOAc萃取反应液，合并EtOAc层，并依次用水、稀盐酸、水、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液浓缩即得产物(白色固体)。

将上步得到的化合物(20g,28.5mmol)和乙酸肼(3.4g,37.0mmol)溶于干燥DMF溶液(100mL)中，在50-55℃下搅拌反应1.5h。待反应冷却至室温后，向反应体系中加入水100ml，然后用EtOAc萃取反应液，合并EtOAc层，再用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，有机层浓缩即得到产物。

将上步得到的化合物(5g,8.3mmol)、三氯乙腈(5mL,50.7mmol)、DBU(0.55mL,3.5mmol)溶解于干燥的CH₂Cl₂中70mL，在室温下搅拌反应3h。减压蒸出反应溶剂，残余物经硅胶柱层析得到白色固体。

将上步得到的化合物(0.74g,1.0mmol)溶于20mL干燥的CH₂Cl₂中，在氮气流的保护下，加入菝葜皂苷元粉末(0.46g,1.1mmol)，再加入分子筛，在冰浴条件下搅拌30min，然后加入TMSOTf(40μL,0.2mmol)，继续在冰浴下搅拌1h，再移至室温下搅拌0.5h，加入Et₃N淬灭反应。蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析分离，得到白色固体。

将白色固体溶于CH₂Cl₂-CH₃OH的混合溶液中，加入适量甲醇钠，室温下搅拌3h，加入阳离子交换树脂中和后，蒸干反应溶剂，甲醇重结晶即得式III-1所示的菝契皂苷元衍生物。

制得菝契皂苷元衍生物为白色粉末，分子式为C₃₉H₆₄O₁₃。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆),δ_H(ppm):4.67(m,1H,H-16),4.64(d,J＝7.0Hz,1H,H-1’),4.53(m,1H,H-2’),3.29(o,H,H-26),1.00(d,J＝7.1Hz,3H,H-21),0.92(d,J＝6.8Hz,3H,H-27),0.90(s,3H,H-19),0.70(s,3H,H-18)；

¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d6),δ_C(ppm):108.8(C-22),101.8(C-1’),80.4(C-16),75.0(C-3),73.6(C-5’),72.7(C-3’),70.7(C-2’),68.1(C-4’),64.3(C-26),61.9(C-17),60.4(C-6’),55.7(C-14),41.6(C-20),40.2(C-13),39.7(C-12),39.4(C-9),35.9(C-5),34.9(C-8),34.6(C-10),31.4(C-4),30.1(C-15),29.5(C-1),26.5(C-25),26.4(C-2),26.2(C-7),26.0(C-6),25.6(C-23),25.4(C-24),23.6(C-19),20.5(C-11),16.2(C-27),16.0(C-18),14.5(C-21)；

HR-ESI/MS m/z:579.3899[M+H]⁺(理论值C₃₃H₅₅O₈ ⁺,579.3891)。

实施例5式Ⅲ-2所示的菝契皂苷元衍生物的制取

在冰浴条件下，将鼠李糖(9g,55.54mmol)溶于吡啶和DMF的混合液300mL中，缓慢滴入苯甲酰氯(36mL,308.56mmol)，然后搅拌反应18h。结束后，往反应体系加入50mL水淬灭反应。用EtOAc萃取反应液，合并EtOAc层，并依次用水、稀盐酸、水、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液浓缩即得产物(白色固体)。

将上步得到的化合物(15.4g,28.5mmol)和乙酸肼(3.4g,37.0mmol)溶于干燥DMF溶液(100mL)中，在50-55℃下搅拌反应1.5h。待反应冷却至室温后，向反应体系中加入水100ml，然后用EtOAc萃取反应液，合并EtOAc层，再用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，有机层浓缩即得到产物。

将上步得到的化合物(4.3g,8.3mmol)、三氯乙腈(5mL,50.7mmol)、DBU(0.55mL,3.5mmol)溶解于干燥的CH₂Cl₂中70mL，在室温下搅拌反应3h。减压蒸出反应溶剂得到白色固体。

将上步得到的化合物(0.57g,1.0mmol)溶于20mL干燥的CH₂Cl₂中，在氮气流的保护下，加入菝葜皂苷元粉末(0.46g,1.1mmol)，再加入分子筛，在冰浴条件下先搅拌30min，然后加入TMSOTf(40μL,0.2mmol)，继续在冰浴下搅拌1h，然后移至室温下搅拌0.5h，加入Et₃N淬灭反应。向反应液加入100mL CH₂Cl₂稀释，过滤除去分子筛，蒸干溶剂，残余物经硅胶柱层析分离，得到白色固体。

将该白色固体溶于CH₂Cl₂-CH₃OH的混合溶液中，再加入适量甲醇钠，室温下搅拌3h，加入阳离子交换树脂中和后，蒸干反应溶剂，甲醇重结晶即得式III-2所示的菝契皂苷元衍生物。

制得菝契皂苷元衍生物为白色针晶，分子式为C₃₃H₅₄O₇。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆),δ_H(ppm):4.65(m,1H,H-16),4.64(d,J＝7.0Hz,1H,H-1’),1.07(d,J＝7.2Hz,3H,H-21),0.90(d,J＝6.8Hz,3H,H-27),0.81(s,3H,H-19),0.71(s,3H,H-18)；

¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d6),δ_C(ppm):108.9(C-22),101.6(C-1’),80.6(C-16),75.2(C-3),72.5(C-3’),70.3(C-2’),68.3(C-4’),64.1(C-26),61.8(C-17),60.6(C-6’),55.3(C-14),41.2(C-20),40.0(C-13),39.9(C-12),39.0(C-9),35.7(C-5),34.8(C-8),34.4(C-10),31.0(C-4),30.6(C-15),29.2(C-1),26.6(C-25),26.3(C-2),26.0(C-7),26.0(C-6),25.2(C-23),25.4(C-24),23.5(C-19),20.8(C-11),16.9(C-27),16.4(C-5’),15.6(C-18),14.1(C-21)；

HR-ESI/MS m/z:563.3897[M+H]⁺(理论值C₃₃H₅₅O₇ ⁺,563.3942)。

实施例6式Ⅲ-3所示的菝契皂苷元衍生物的制取

将菝葜皂苷元250mg(0.6mmol)、溴甲烷0.1ml(1.8mmol)加入5ml圆底烧瓶中，加入甲醇0.8ml、甲醇钠0.3ml(2.13mmol)，搅拌完全溶解。反应混合物于回流条件下，搅拌40分钟，然后停止加热，冷却至室温。减压蒸干反应溶剂后，得到棕红色固体。残余物经硅胶柱层析分离，将样品用二氯甲烷溶解上样，展开剂为石油醚：乙酸乙酯(10:1)，得到白色粉末状固体142mg(0.32mmol)。

制得Ⅲ-3菝契皂苷元衍生物为白色粉末状固体，分子式为C₂₈H₄₆O₃。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,chloroform-d),δ_H(ppm):4.40(td,J＝7.9,7.3,6.2Hz,1H,H-16),1.07(d,J＝7.1Hz,3H,H-21),0.98(d,J＝6.4Hz,3H,H-27),0.97(s,3H,H-19),0.75(s,3H,H-18)；

¹³C-NMR(100MHz,chloroform-d),δ_C(ppm):109.9(C-22),81.2(C-16),67.2(C-3),65.3(C-26),62.2(C-17),57.8(C-1’),56.6(C-14),42.3(C-20),40.8(C-13),40.5(C-12),40.0(C-9),36.7(C-5),35.4(C-8),35.4(C-10),33.7(C-4),31.9(C-15),30.1(C-1),28.0(C-23),27.2(C-25),26.7(C-7),26.7(C-6),26.1(C-2),25.9(C-24),24.1(C-19),21.0(C-11),16.6(C-27),16.2(C-18),14.5(C-21)；

HR-ESI/MS m/z:431.3569[M+H]⁺(理论值C₂₈H₄₇O₃ ⁺,431.3520)。

实施例7式Ⅲ-4所示的菝契皂苷元衍生物的制取

将菝葜皂苷元250mg(0.6mmol)、溴环丙烷0.13ml(1.6mmol)加入5ml圆底烧瓶中，加入甲醇1.0ml、甲醇钠0.2ml(1.77mmol)，搅拌完全溶解。反应混合物在回流条件下，搅拌2h，然后停止加热，冷却至室温。减压蒸干反应溶剂后，得到棕红色固体。残余物经硅胶柱层析分离，将样品用二氯甲烷溶解上样，展开剂为石油醚：乙酸乙酯(10:1)，得到白色粉末状固体105mg(0.23mmol)。

式Ⅲ-4为白色无定型粉末，分子式为C₃₀H₄₈O₃。其结构鉴定数据如下：

¹H-NMR(400MHz,chloroform-d),δ_H(ppm):1.08(d,J＝7.1Hz,3H,H-21),0.96(d,J＝6.4Hz,3H,H-27),0.92(s,3H,H-19),0.70(s,3H,H-18)；

¹³C-NMR(100MHz,chloroform-d),δ_C(ppm):109.2(C-22),81.8(C-16),67.0(C-3),65.1(C-26),62.2(C-17),56.6(C-14),47.8(C-1’),42.3(C-20),40.8(C-13),40.5(C-12),40.0(C-9),36.7(C-5),35.4(C-8),35.4(C-10),33.7(C-4),31.9(C-15),30.1(C-1),28.0(C-23),27.2(C-25),26.8(C-7),26.4(C-6),26.0(C-2),25.3(C-24),24.4(C-19),21.2(C-11),16.7(C-27),15.9(C-18),14.1(C-21),6.7(C-2’),6.7(C-3’)；

HR-ESI/MS m/z:457.3679[M+H]⁺(理论值C₃₀H₄₉O₃ ⁺，457.3676)。

实施例8盐酸小檗碱的制取

取黄柏饮片2kg，加30％乙醇水溶液回流提取三次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后，加水至60L，加热溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱(3L)，用1倍量体积(BV)水洗脱后，再用1倍量体积(BV)15％乙醇水洗脱，弃去15％乙醇水洗脱液，再用45％乙醇水洗脱，收集45％乙醇水洗脱液4倍量体积(BV)，浓缩成稠膏。稠膏加水加热至90℃，趁热滤过除去不溶物，边搅拌边加入浓盐酸，至pH为1-2，使盐酸小檗碱析出，静置过夜，滤过，再重复结晶1次，加水洗涤至滤液近中性，干燥，粉碎，得到28.6克固体。

实施例9包含小檗碱与菝契皂苷元的组合物对空腹血糖的影响

将小檗碱与菝契皂苷元按照重量比为5∶1制得组合物1，并给予糖尿病小鼠，并观察组合物对餐后血糖的影响。

将小檗碱与菝契皂苷元按照重量比为2∶1制得组合物2，并给予糖尿病小鼠，并观察组合物对餐后血糖的影响。

将小檗碱与菝契皂苷元按照重量比为1∶5制得组合物3，并给予糖尿病小鼠，并观察组合物对餐后血糖的影响。

实验选择db/db小鼠(自美国Jackson实验室引进后自主繁殖)，经SPF级小鼠饲养房饲养至年龄为6周～7周，体重为25g～30g。

所有糖尿病db/db小鼠于给药前1日上午9:00测定随机血糖和随机体重，之后禁食6小时(不禁水)测定空腹血糖，空腹体重并采血测定胰岛素含量。选取随机血糖大于11.1mmol/l的糖尿病db/db小鼠，并根据小鼠随机血糖和空腹血糖将小鼠分为7组(每组8只，4只雄性和4只雌性)，分别为模型对照Vehicle组(CMC-Na灌胃)、组合物1(120mg/kg)，组合物2(120mg/kg)，组合物3(120mg/kg)和阳性药二甲双胍(250mg/kg)，并按每日上午9时～10时，下午15时～16时各给药1次。另设一组与糖尿病db/db小鼠同窝的正常小鼠作为正常对照组。

正常对照组、模型对照组和各个给药组在首次给药后第7日、14日和21日测定随机血糖后，撤食物饥饿6小时，测定各组小鼠空腹血糖。血糖测定采用血糖测定仪(OneUltra，美国强生医疗器械有限公司)，按以下公式计算血糖下降率：血糖下降率＝(对照组血糖－给药组血糖)/对照组血糖×100％。

正常对照组、模型对照组、各组合物给药组小鼠于给药21日后进行口服葡萄糖耐量实验。小鼠禁食6小时后灌胃葡萄糖1.5g/kg，测定给糖前、给糖后15、30、60、90和120分钟时的血糖值，计算120分钟内的血糖曲线下面积(AUC)。

AUC＝1/2×15×(G₀+G₁₅)+1/2×15×(G₁₅+G₃₀)+1/2×30×(G₃₀+G₆₀)+1/2×30×(G₆₀+G₁₂₀)

注：“G”为血糖；“Gx”为给予葡萄糖X分钟时的血糖(X＝0、15、30、60和120)

数据以均值±标准差表示，采用Student-t test对数据进行统计学分析，p<0.05即为具有统计学差异。当给药组与对照药物相比，具有显著性差异即p<0.05，则认为药物具有确切的降血糖作用。

表1各组合物对糖尿病db/db小鼠空腹血糖的影响(mM)

“*”标示p<0.05与模型组(Vehicle)相比；“**”标示p<0.01与模型组(Vehicle)相比。

表2各组合物对糖尿病db/db小鼠空腹血糖下降率的影响(％)

试验结果表明：各组合物每天早晚两次给药，慢性治疗3周，组合物1在给药后1周即可降低糖尿病小鼠空腹血糖，至给药后2周和3周血糖也有一定程度的降低，但无明显的统计学差异，给药后1周、2周和3周的血糖下降率分别达16.95％、32.39％和17.58％。组合物2在给药后1周即可降低糖尿病小鼠空腹血糖，至给药后2周可明显的降低糖尿病小鼠空腹血糖，与模型对照组相比具有明显的统计学差异，效果持续至给药后3周，给药后1周、2周和3周的血糖下降率分别达15.11％、39.89％和16.64％。组合物3在给药后2周可明显降低糖尿病小鼠空腹血糖，与模型对照组相比有明显的统计学差异，效果持续至给药3周，给药后2周和3周的血糖下降率分别为28.24％和25.56％。各组合物给药3周后，饥饿6小时进行口服糖耐量实验，结果发现3个组合物的动物给糖后30分钟和60分钟的血糖水平，以及给糖后120分钟内的曲线下面积均有降低。其中，组合物2的动物给糖后60分钟和120分钟曲线下面积与模型对照组相比具有明显的统计学差异，结果见表3。

表3各组合物对糖尿病db/db小鼠口服糖耐量的影响

“*”标示p<0.05与模型对照组(Vehicle)相比；“**”标示p<0.01与模型对照组(Vehicle)相比。

实施例10包含小檗碱与马尔可皂苷元或薯蓣皂苷元的组合物对空腹血糖的影响

将小檗碱与马尔可皂苷元按照重量比为2∶1制得组合物4，并给予实验动物，并观察组合物对空腹血糖的影响。

将小檗碱与薯蓣皂苷元按照重量比为2∶1制得组合物5，并给予实验动物，并观察组合物对空腹血糖的影响。

实验选择db/db小鼠(自美国Jackson实验室引进后自主繁殖)，经SPF级大鼠饲养房饲养至年龄为6周～7周，体重为25g～30g。

所有糖尿病db/db小鼠于给药前1日上午9:00测定随机血糖和随机体重，之后禁食6小时(不禁水)测定空腹血糖，空腹体重并采血测定胰岛素含量。选取随机血糖大于11.1mmol/l的糖尿病db/db小鼠，并根据小鼠随机血糖和空腹血糖将小鼠分为3组(每组8只，4只雄性和4只雌性)，分别为模型对照Vehicle组(CMC-Na灌胃)、组合物4(240mg/kg)和组合物5(240mg/kg)，并按每日上午9时～10时，下午15时～16时各给药1次。另设一组与糖尿病db/db小鼠同窝的正常小鼠作为正常对照组。

正常对照组、模型对照组和各个给药组在首次给药后第7日、14日、21日和35日测定随机血糖后，撤食物饥饿6小时，测定各组小鼠空腹血糖。血糖测定采用血糖测定仪(OneUltra，美国强生医疗器械有限公司)，按以下公式计算血糖下降率：血糖下降率＝(对照组血糖－给药组血糖)/对照组血糖×100％，结果参见表4。各个给药组对糖尿病db/db小鼠空腹血糖下降率的影响(％)参见表5。

数据以均值±标准差表示，采用Student-t test对数据进行统计学分析，p<0.05即为具有统计学差异。当给药组与对照药物相比，血糖下降率≥20％，且具有显著性差异即p<0.05，则认为药物具有确切的降血糖作用。

表4各组合物对糖尿病db/db小鼠空腹血糖的影响(mM)

“*”标示p<0.05，“**”标示p<0.01Vs Vehicle组。

表5各组合物对糖尿病db/db小鼠空腹血糖下降率的影响(％)

实验结果表明：每天早晚两次给予本实施例的两个组合物，治疗5周，各给药组小鼠的空腹血糖均明显降低，组合物4和组合物5在给药五周后糖尿病小鼠的空腹血糖明显降低，降幅均超过20％。

实施例11包含小檗碱与菝契皂苷元的组合物对血脂的影响

将小檗碱与菝契皂苷元按照重量比为2∶1制得组合物2。

实验选择金黄地鼠，动物进入动物房后，适应性试验一周，体重为130g～150g。

雄性金黄地鼠饲喂高胆固醇饲料(0.5％胆固醇+11.5％氢化椰子油+11.5％玉米油)两周，禁食6小时(不禁水)，异氟烷麻醉，眼眶后静脉丛取血，12000rpm离心1分钟取血清，生化分析仪检测总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)水平。根据TC和LDL随机分为7组(每组8只)，分别为模型对照组(CMC-Na灌胃)、组合物2(120mg/kg)和阳性药非诺贝特Fenofibrate(100mg/kg)，并按每日上午9时～10时，下午20时～21时各给药1次。另设一组饲喂正常饲料的金黄地鼠作为正常对照组。

正常对照组、模型对照组和各个给药组在首次给药后第7日和14日禁食6小时(不禁水)，异氟烷麻醉，眼眶后静脉丛取血，12000rpm离心1分钟取血清，生化分析仪检测TC和LDL水平。

数据以均值±标准差表示，采用Student-t test对数据进行统计学分析，p<0.05即为具有统计学差异。

表6组合物2对金黄地鼠血清总胆固醇(TC)的影响(mM)

*标示p<0.05与模型组相比；**标示p<0.01与模型组相比

表7组合物2对金黄地鼠血清低密度脂蛋白(LDL)的影响(mM)

*标示p<0.05与模型组相比；**标示p<0.01与模型组相比

试验结果表明：每天早晚两次给药，慢性治疗2周，组合物2在给药后1周可明显降低高胆固醇血症金黄地鼠血清低密度脂蛋白水平，给药后2周可明显降低总胆固醇和低密度脂蛋白水平，结果见表6/7。

实施例12包含小檗碱与螺甾烷化合物的组合物的急毒试验

将小檗碱与菝契皂苷元按照重量比为2∶1制得的组合物2，给予实验动物，进行急毒试验。

将小檗碱和知母皂苷B2按照重量比为2∶1制得的组合物6，给予实验动物，进行急毒试验。

实验选择年龄为4周～5周的昆明小鼠(中科院上海实验动物中心提供，SCXK(沪)2003-0003号)，于SPF级小鼠饲养房内饲养，灌胃给药后连续观察14天，并记录给药后动物毒性反应以及死亡情况，参见表8。

表8各组合物对小鼠的急性毒试验结果

由表8可见，在同等剂量下，包含小檗碱与螺甾烷化合物的组合物(组合物2)的急性毒性明显低于包含小檗碱与知母皂苷B2的组合物(组合物6)。

Claims

1.一种预防或治疗糖尿病和/或高血脂的组合物，其特征在于包含式I表示的小檗碱或其可药用盐和式II表示的螺甾烷化合物或其可药用盐，各成分以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％；

其中，式II的第5位碳原子和第6位碳原子间为单键或双键，R₁、R₂、R₃和R₄相互独立，表示氢、羟基、羧基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷基、C3～C7环烷氧基或糖基。

2.根据权利要求1的组合物，其特征在于式I表示的小檗碱或其可药用盐和式II表示的螺甾烷化合物或其可药用盐以提取物的形式包含于所述组合物中。

3.根据权利要求1的组合物，其特征在于以式I表示的小檗碱或其可药用盐和式II表示的螺甾烷化合物或其可药用盐为主要活性成分或仅有的活性成分。

4.根据权利要求1～3之一所述的组合物，其特征在于所述的螺甾烷化合物选自于式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物之一种或几种，

其中，R₁表示羟基、羧基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷基、C3～C7环烷氧基或糖基；

R₂表示氢、羟基、羧基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷基、C3～C7环烷氧基或糖基。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于在所述的式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物中，

R₁表示羟基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基；

R₂表示羟基、羧基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基。

6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于所述的螺甾烷化合物选自于式Ⅵ、式Ⅶ和式Ⅷ所示之一种或几种，

7.根据权利要求1-6任一项所述的组合物，其特征在于所述的组合物为药物。

8.根据权利要求1-6任一项所述的组合物，其特征在于所述的组合物为食品。

9.根据权利要求1-6任一项所述的组合物，其特征在于所述的组合物为保健品。

10.式I表示的小檗碱或其可药用盐与式II表示的螺甾烷化合物或其可药用盐的组合在制备预防或治疗糖尿病和/或高血脂的药物、食品或保健品中的用途，其中各成分以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％；

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于所述的螺甾烷化合物选自于式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物之一种或几种，

12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于在所述的式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物中，

R₁表示羟基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基；

R₂表示羟基、羧基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基。

13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于所述的螺甾烷化合物选自于式Ⅵ、式Ⅶ和式Ⅷ所示之一种或几种，

14.一种用于预防或治疗糖尿病和/或高血脂的药物组合，其特征在于包括含有式I表示的小檗碱或其可药用盐的药物组合物和含有式II表示的螺甾烷化合物或其可药用盐的药物组合物，其中各成分以两种成分总重量计的重量百分含量为：螺甾烷化合物或其可药用盐10％～80％，小檗碱或其可药用盐20％～90％；

15.根据权利要求14所述的药物组合，其特征在于所述的螺甾烷化合物选自于式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物之一种或几种，

16.根据权利要求15所述的药物组合，其特征在于在所述的式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物中，

R₁表示羟基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基；

R₂表示羟基、羧基、C1～C6烷氧基、C3～C7环烷氧基。

17.根据权利要求16所述的药物组合，其特征在于所述的螺甾烷化合物选自于式Ⅵ、式Ⅶ和式Ⅷ所示之一种或几种，