CN106544314A - 一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法 - Google Patents

一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，是采用低温低湿快速干燥甘蔗黑穗病菌冬孢子，最大限度地抑制了黑色鞭状穗上杂菌（尤其是细菌）的繁殖，大大降低了杂菌对甘蔗黑穗病菌冬孢子的污染，确保冬孢子保持较高的萌发率（90%～98%）；冬孢子分装于滤纸袋中保存，滤纸具有较好的透气性，不会导致冬孢子在长期贮藏过程中因缺氧而死亡。另一方面，滤纸袋在低温长期贮藏，低温下冬孢子处于休眠状态，可保存冬孢子4～6年，且能保持冬孢子较高萌发率；在接种前可将滤纸袋中的冬孢子直接兑水配制冬孢子悬浮液，无需重新称重，方便冬孢子悬浮液的配制；本发明所述方法简单、实用、经济，能保持冬孢子的萌发率，贮藏期长，方便接种鉴定。

Description

一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法
技术领域
本发明涉及植物病原菌贮藏技术领域，更具体地，涉及一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法。
背景技术
甘蔗是重要的糖料作物及较有发展潜力的可再生生物质能源作物。由甘蔗鞭黑粉菌（Sporisorium scitamineum）引起的甘蔗黑穗病是一种世界性重要甘蔗病害，也是我国一种经济危害性最严重的甘蔗病害。防治甘蔗黑穗病最经济最有效的方法是培育和推广抗病品种。甘蔗抗黑穗病育种的关键是甘蔗对黑穗病的抗性鉴定，目前主要采用人工接种甘蔗黑穗病菌冬孢子对育种材料进行抗性测定，此时就需要采集大量的甘蔗黑穗病菌冬孢子作为接种源，而甘蔗黑穗病零星发生于甘蔗田间，冬孢子的收集工作量大，特别是甘蔗黑穗病人工接种抗性鉴定试验需安排在非蔗区进行（因甘蔗黑穗病菌致病力分化，以防交叉感染），鉴定试验与蔗区较远，冬孢子的采集非常不方便。另一方面，作为接种源的冬孢子对其萌发率有较高要求（90%以上），一般贮藏方法冬孢子萌发率下降较快，达不到接种要求，贮藏期短。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的甘蔗黑穗病菌冬孢子采集工作量大、萌芽率下降快、贮藏期短，不方便甘蔗黑穗病人工接种鉴定的缺陷，提供一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：
一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，包括以下步骤：
S1. 于甘蔗黑穗病盛发期，采集发病植株刚抽出的黑色鞭状穗，存放于袋中；
S2. 取出袋中黑色鞭状穗，摊放于16～20℃，相对湿度为10～20%的环境中8～12h，充分干燥黑色鞭状穗后，刮取黑色鞭状穗上的冬孢子，去除杂质；
S3. 将去除杂质后的冬孢子分装于袋中，并低温保存。
本发明采用低温低湿快速干燥甘蔗黑穗病菌冬孢子，最大限度地抑制了黑色鞭状穗上杂菌（尤其是细菌）的繁殖，大大降低了杂菌对甘蔗黑穗病菌冬孢子的污染，较好地控制了杂菌对冬孢子萌发的抑制作用，确保冬孢子保持较高的萌发率。
由于甘蔗黑穗病人工接种抗性鉴定要求冬孢子萌发率高于90%，若冬孢子萌发率低于90%，则为不合格，不能作为接种源。
优选地，S2所述去除杂质是将冬孢子过筛。
优选地，S3所述分装于袋中是指先将去除杂质后的冬孢子分装于滤纸袋中，并将装有冬孢子的滤纸袋装于塑料袋中。
优选地，每个滤纸袋中冬孢子的重量为8～12g。
优选地，S3所述低温保存的温度为2～4℃。
优选地，上述冬孢子的萌发是：将滤纸袋从塑料袋中取出，直接用1%水琼脂培养（25～28℃，36～48h），镜检其冬孢子萌发率。
作为一种具体的实施方式，上述甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法包括以下步骤：
（1）甘蔗黑穗鞭采集：甘蔗黑穗病盛发期，采集发病植株刚抽出的黑色鞭状穗，并存放于塑料袋中，以防冬孢子扩散。
（2）冬孢子干燥及收集：将上述采集的黑色鞭状穗及时摊放于16～20℃，相对湿度10～20%的房间8～12h，其间翻动黑色鞭状穗1～2次，待黑色鞭状穗充分干燥后，用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目筛，去除杂质。
（3）冬孢子分装：将上述过筛后的冬孢子分成10g/份，分别装入滤纸袋中保存，将全部装有冬孢子的滤纸袋存放于塑料袋中保存。
（4）低温保存：将上述装有冬孢子的塑料袋2～4℃低温保存。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，是采用低温低湿快速干燥甘蔗黑穗病菌冬孢子，最大限度地抑制了黑色鞭状穗上杂菌（尤其是细菌）的繁殖，大大降低了杂菌对甘蔗黑穗病菌冬孢子的污染，较好地控制了杂菌对冬孢子萌发的抑制作用，确保冬孢子保持较高的萌发率（90%～98%）；冬孢子分装于滤纸袋中保存，滤纸具有较好的透气性，不会导致冬孢子在长期贮藏过程中因缺氧而死亡。另一方面，装有冬孢子的滤纸袋在低温长期贮藏，低温下冬孢子处于休眠状态，此种保存方法可保存冬孢子4～6年，且能保持冬孢子90%以上的萌发率；在接种前可将滤纸袋中的冬孢子直接兑水配制冬孢子悬浮液，无需重新称重（因冬孢子称重过程中会污染环境，且易沾附在称量仪器上），方便冬孢子悬浮液的配制；本发明所述方法简单、实用、经济，能较好的保持冬孢子的萌发率，贮藏期长，方便接种鉴定。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
甘蔗黑穗鞭采集：2011年5月中旬，甘蔗黑穗病盛发期，采集粤西甘蔗地甘蔗黑穗病发病植株刚抽出的黑色鞭状穗约200穗，并存放于塑料袋中，以防冬孢子扩散。
冬孢子干燥及收集：次日，将上述采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（18℃，相对湿度17%）10h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
冬孢子分装：将上述过筛后的冬孢子分成10g/份，分别装入滤纸袋中保存，将全部装有冬孢子的滤纸袋存放于塑料袋中保存。
低温保存：将上述装有冬孢子的塑料袋保存于实验室普通冰箱冷藏室（约3℃）低温保存。
冬孢子发芽率检测：2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为94%、92%。
实施例2
甘蔗黑穗鞭采集：2011年5月中旬，甘蔗黑穗病盛发期，采集粤西甘蔗地甘蔗黑穗病发病植株刚抽出的黑色鞭状穗约200穗，并存放于塑料袋中，以防冬孢子扩散。
冬孢子干燥及收集：次日，将上述采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（16℃，相对湿度10%）8h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
冬孢子分装：将上述过筛后的冬孢子分成10g/份，分别装入滤纸袋中保存，将全部装有冬孢子的滤纸袋存放于塑料袋中保存。
低温保存：将上述装有冬孢子的塑料袋保存于实验室普通冰箱冷藏室（约3℃）低温保存。
冬孢子发芽率检测：2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为94%、93%。
实施例3
甘蔗黑穗鞭采集：2011年5月中旬，甘蔗黑穗病盛发期，采集粤西甘蔗地甘蔗黑穗病发病植株刚抽出的黑色鞭状穗约200穗，并存放于塑料袋中，以防冬孢子扩散。
冬孢子干燥及收集：次日，将上述采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（20℃，相对湿度20%）10h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
冬孢子分装：将上述过筛后的冬孢子分成10g/份，分别装入滤纸袋中保存，将全部装有冬孢子的滤纸袋存放于塑料袋中保存。
低温保存：将上述装有冬孢子的塑料袋保存于实验室普通冰箱冷藏室（约3℃）低温保存。
冬孢子发芽率检测：2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为92%、91%。
对比例1
实验方法同实施例1，唯一不同的是，冬孢子干燥及收集的步骤为：将采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（25℃，相对湿度17%）10h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
低温保存后，于2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为78%、68%。
对比例2
实验方法同实施例1，唯一不同的是，冬孢子干燥及收集的步骤为：将上述采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（18℃，相对湿度30%）10h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
低温保存后，于2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为82%、78%。
对比例3
实验方法同实施例1，唯一不同的是，冬孢子干燥及收集的步骤为：将上述采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（25℃，相对湿度30%）10h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
低温保存后，于2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为48%、32%。
对比例4
实验方法同实施例1，唯一不同的是，冬孢子干燥及收集的步骤为：将上述采集的黑色鞭状穗摊放于空调房实验台面上（18℃，相对湿度17%）15h（其间翻动黑色鞭状穗2次），此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
低温保存后，于2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为83%、76%。
对比例5
实验方法同实施例1，唯一不同的是，冬孢子干燥及收集的步骤为：将上述采集的黑色鞭状穗摊放于常温，常湿下（25～28度，40～60%相对湿度）干燥72～96小时，此时，黑色鞭状穗已充分干燥，用医用解剖刀刮取全部鞭状穗上的冬孢子，并过400目铁筛，去除筛网上面的杂质。
于2015年7月上旬、2016年2月中旬分别取微量（约10mg）上述冬孢子用1%水琼脂培养（28℃，36h），用奥林巴斯显微镜（200×）镜检冬孢子萌发率分别为基本是10%，有的甚至为0。
由于甘蔗黑穗病人工接种抗性鉴定要求冬孢子萌发率高于90%，若冬孢子萌发率低于90%，则为不合格，不能作为接种源。

Claims (5)

1.一种甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 甘蔗黑色鞭状穗采集：于甘蔗黑穗病盛发期，采集发病植株刚抽出的黑色鞭状穗，存放于袋中；
S2. 冬孢子干燥：取出袋中黑色鞭状穗，摊放于16～20℃，相对湿度为10～20%的环境中8～12h，充分干燥黑色鞭状穗后，刮取黑色鞭状穗上的冬孢子，去除杂质；
S3. 冬孢子分装、保存：将去除杂质后的冬孢子分装于袋中，并低温保存。
2.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，其特征在于，S2所述去除杂质是将冬孢子过筛。
3.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，其特征在于，S3所述分装于袋中是指先将去除杂质后的冬孢子分装于滤纸袋中，并将装有冬孢子的滤纸袋装于塑料袋中。
4.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，其特征在于，每个滤纸袋中冬孢子的重量为8～12g。
5.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌冬孢子收集贮藏方法，其特征在于，S3所述低温保存的温度为2～4℃。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102204465A (zh) * 2011-04-20 2011-10-05 广州甘蔗糖业研究所 一种甘蔗黑穗病抗性鉴定方法
CN103190303A (zh) * 2013-04-15 2013-07-10 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种甘蔗黑穗病菌接种方法
CN104170668A (zh) * 2014-07-29 2014-12-03 云南省农业科学院甘蔗研究所 甘蔗实生苗进行黑穗病高效接种方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102204465A (zh) * 2011-04-20 2011-10-05 广州甘蔗糖业研究所 一种甘蔗黑穗病抗性鉴定方法
CN103190303A (zh) * 2013-04-15 2013-07-10 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种甘蔗黑穗病菌接种方法
CN104170668A (zh) * 2014-07-29 2014-12-03 云南省农业科学院甘蔗研究所 甘蔗实生苗进行黑穗病高效接种方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LOUIS-MARIE RABOIN ET AL.: "Evidence for the dispersal of a unique lineage from Asia to America and Africa in the sugarcane fungal pathogen Ustilago scitaminea", 《FUNGAL GENETICS AND BIOLOGY》 *
北京农业大学: "《农业植物病理学》", 31 October 1990, 农业出版社 *
吴伟怀等: "甘蔗黑穗病菌冬孢子生物学特性", 《热带作物学报》 *
方中达: "《植病研究方法》", 31 January 1979, 农业出版社 *
沈万宽等: "甘蔗品种（品系）对黑穗病的抗性鉴定和评价", 《华中农业大学学报》 *

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