CN104322216B - 一种郁金香花粉采集和贮藏的方法 - Google Patents

Abstract

<b>一种郁金香花粉采集和贮藏的方法，其特点是：在上午选择含苞待放的大蕾期花苞，用手轻轻拨开花瓣，用镊子采集花药，花药采集后放入适当大小塑料培养皿中，培养皿上盖标明花粉采集日期、品种信息；再将采集好的花粉连同培养皿一起带回室内，放入密闭玻璃箱中，玻璃箱底部放入干燥剂，干燥剂上方设置网状隔板，将装有花粉的培养皿放在网状隔板上，经24小时后，脱水完成；最后将脱水后的花粉取出，将培养皿上盖扣好放回干燥箱内，然后密封玻璃干燥箱，在室温无阳光直射的条件下贮藏备用。本发明保险可靠，操作简单，节省空间，解决了郁金香花粉在自然条件下无法较长时间保存，克服了郁金香育种过程中的花期不遇等问题。</b>

Description

一种郁金香花粉采集和贮藏的方法

技术领域

本发明涉及一种花粉采集和贮藏的方法,特别是涉及一种采收和短期（30天）贮藏郁金香花粉种质的郁金香花粉采集和贮藏的方法，属于植物发育生物学领域。

背景技术

郁金香（Tulipa）是百合科（Liliaceae）的重要的多年生球根花卉，既可以做鲜切花，又可以做园林绿化和盆栽，用途非常广泛。几乎所有的郁金香品种自花授粉不结实，必须进行人工授粉才能获得理想的产量和高品质的种子。

由于郁金香的自然花期非常短，平均在10天左右，所以花期不遇就成了郁金香育种过程中遇到的最大的困难。在郁金香育种实践中，郁金香花粉贮藏时间达到30天，就完全可以满足人工杂交授粉的需要。相关研究报道，植物花粉可以使用超低温的方法贮藏，但花粉贮藏条件要求较高、贮藏成本大。在需要使用花粉时，花粉复苏过程较长，技术较复杂，稍有不慎就会导致花粉褐变，使花粉蛋白酶丧失活性。使用这种方法贮藏的花粉无法做到即取即用，使用效率较低。花粉贮藏是否成功最重要的指标是花粉活力，具有较高活力的花粉是杂交育种工作取得成功的关键性前提条件。因此，怎样在贮藏过程中延长花粉寿命，最大限度地维持花粉活力对郁金香育种和科研具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于发明一种郁金香花粉采集和在常温贮藏且有效维持花粉活力的方法，以解决现有技术存在的郁金香育种过程中花期不遇的问题。

本发明通过比较研究不同采收和贮藏条件对郁金香花粉萌发率的影响，形成包含三个关键技术步骤的郁金香花粉短期高效贮藏技术。该技术操作简单易行，节省空间，有效维持了郁金香花粉的活力，在郁金香育种过程中具有重要的应用价值。

本发明要实现上述目的所采用的技术方案如下。

这种郁金香花粉采集和贮藏的方法，其特点是有以下步骤。

1、花粉采集。

在上午选择含苞待放的大蕾期花苞，用手轻轻拨开花瓣，用镊子采集花药，花药采集后放入适当大小塑料培养皿中，培养皿上盖标明花粉采集日期、品种等信息。

最好将培养皿上盖放在培养皿的下部，保持花粉处于敞开状态。

2、花粉脱水。

将采集好的花粉连同培养皿一起带回室内，放入长宽高分别为40CM*40CM*50CM的密闭玻璃箱中，玻璃箱底部放入足量的干燥剂，干燥剂上方设置两层网状隔板，将装有花粉的培养皿放在网状隔板上，经24小时后，脱水完成。

3、花粉贮藏。

将脱水后的花粉取出，迅速将培养皿上盖扣好放回干燥箱内，然后密封玻璃干燥箱。在室温（18～25℃），无阳光直射的条件下贮藏，备用，为确保干燥剂工作效果，要经常检查干燥剂，当干燥剂由蓝转变成粉色或粉红色时，及时更换干燥剂。

与现有技术相比,本发明的有益效果是。

本发明的贮藏方法有效地保持了郁金香花粉活力，对于郁金香的育种、种质保存、科学研究等方面具有重要的有益效果，具体表现如下。

(1)解决了郁金香杂交育种过程中遇到的花期不遇的问题，为新品种选育提供了充足的花粉来源。

(2)为没有长期贮藏花粉条件的单位和野外场所，提供了一种可靠的短时间花粉贮藏方法，然后运回具有长期贮藏条件的单位进行长期贮藏，保障了从花粉采集到调运过程中花粉的安全性，为郁金香种质保存提供了一条新的途径。

(3)本贮藏方法投资小，操作简单，能在很小的空间里贮藏大量的花粉，并可借鉴用于保存其它种质资源，有着广泛的实用价值。

附图说明

图1a--图1e为贮藏湿度对Pax、Lledefrance、Cantata、Bellona和princeps5个郁金香品种的花粉萌发率的影响。

图2a和图2b为显微镜观察郁金香花粉萌发情况，其中图2a不适合杂交育种的花粉萌发情况，图2b适合用于杂交育种的花粉萌发情况。

图3为郁金香花粉采集和贮藏的流程示意图。

具体实施方案

下面结合具体实例对本发明的技术方案做详细介绍。

实施例1。

(一)实验方法。

1、花粉采集：本专利以Pax、Lledefrance、Cantata、Bellona和princeps5个郁金香品种为研究材料，采集含苞待放的大蕾期花苞，轻轻拨开花瓣，用镊子收集花药，采用培养皿扣盖和不扣盖两种采集方式，按不同的湿度保存花粉，并定期进行检测。

2、花粉处理方法。

(1)花粉扣盖和不扣盖处理：在上午选择含苞待放的大蕾期花苞，用手轻轻拨开花瓣，用镊子采集尚未散粉的花药。花药采集后分成两份，分别放入直径6厘米的塑料培养皿中。培养皿上盖标明花粉采集日期、品种等信息，然后将其中一份培养皿上盖放在培养皿的下部，保持花粉处于敞开状态，另一份培养皿上盖直接扣上，保持密封状态。供试花粉全都采集完毕后，带回室内，放入干燥箱中（干燥箱预先放入硅胶干燥剂，吸湿后干燥剂由蓝色变成粉红色，此时更换新的干燥剂），干燥箱放置于室温（18℃～25℃）无直射光的条件下贮藏。经24小时后检测花粉活力（0天），以后每隔5天检测一次，即从贮藏之日起第0天、5天、10天、15天、20天、25天、30天进行测定。

(2)花粉贮藏湿度的梯度处理：在上午选择含苞待放的大蕾期花苞，用手轻轻拨开花瓣，用镊子采集尚未散粉的花药。花药采集后放入直径6厘米的塑料培养皿中。培养皿上盖标明花粉采集日期、品种等信息，然后将培养皿上盖放在培养皿的下部，保持花粉处于敞开状态。在实验室进行花粉活力检测（0天），然后把花粉平均分成4份，分别置于空气相对湿度30％、50％、70％、90％的密闭人工气候箱中，在黑暗、室温（18℃～25℃）条件下贮藏，分别于第1天、5天、10天、15天、20天、25天测定花粉萌发率。

（3）花粉活力测定：本试验采用固体培养基培养花粉。培养基的配方为:蔗糖100g/L、琼脂5g/L、生物酸0.02g/L、PH值为5.8。用棉签将花粉均匀地点播在培养基上，在常温条件下培养24h。在显微镜下观察花粉的萌发情况。花粉萌发率为已萌发的花粉数除以单个视野总观测的花粉数乘以100％，每个处理设3次重复（观测3个视野）。

(二)结果与分析。

1、不同花粉采集方式对郁金香花粉萌发率的影响。

从表1可以看出，不同花粉采集方式对郁金香花粉贮藏后萌发率的影响非常显著。经过24小时后，采用扣盖的方法采集的花粉活力约为采用敞开状态采集的花粉活力的一半，贮藏5天后萌发率从0天的24.5%-30.5%下降到5％以下，已经不能在育种中应用。贮藏10天后，花粉完全失去活力。相反，采用没有扣盖的方法采集的花粉活力经贮藏后一直保持较高的萌发率，花粉贮藏30天后，花粉的萌发率依然可达20％左右，Pax品种花粉的萌发率达到30.6%,完全能够满足育种的要求。

2、不同贮藏湿度对郁金香花粉萌发率的影响。

在不同贮藏湿度下花粉萌发率存在很大差异（图1a--图1e），在高湿度条件下花粉迅速失去活力，随着湿度的降低，花粉维持活力的时间也越长。如相对湿度90％时，室温贮藏5天后，花粉就失去了育种的价值（图2a）；当相对湿度30%时，室温贮藏25天后，各试验品种的花粉萌发率仍然高于5%（图2b），可以在育种上使用。

采集方法和贮藏湿度都与花粉活力保持时间有密切的联系，采花粉时立刻扣上培养皿的上盖，严重降低了花粉的萌发率；低湿度条件有利于郁金香花粉的保存。

根据以上结论提出本发明郁金香花粉采集和贮藏的流程示意（图3）：选择含苞待放的大蕾期花苞，用手轻轻拨开花瓣，用镊子采集尚未散粉的花药。采集的郁金香花药放入塑料培养皿内，培养皿上盖标明花粉采集日期、品种等信息，然后将培养皿上盖放在培养皿的下部，保持花粉处于敞开状态。放入装有足量干燥剂的玻璃干燥箱中，脱水24小时后，扣上培养皿的上盖，在温度18～25℃，无阳光直射的室内保存，即用即取。

本发明给出的这种贮藏方法保险可靠，操作简单，节省空间，解决了郁金香花粉在自然条件下无法较长时间保存，克服了郁金香育种过程中的花期不遇等问题。

表1不同花粉采集方式对郁金香花粉贮藏后萌发率的影响

Claims (1)

1.一种郁金香花粉采集和贮藏的方法，其特征在于有以下步骤：

1）花粉采集：

在上午选择含苞待放的大蕾期花苞，用手轻轻拨开花瓣，用镊子采集花药，花药采集后放入适当大小塑料培养皿中，培养皿上盖标明花粉采集日期、品种信息；

2）花粉脱水：

将采集好的花粉连同培养皿一起带回室内，放入密闭玻璃箱中，玻璃箱底部放入干燥剂，干燥剂上方设置网状隔板，将装有花粉的培养皿放在网状隔板上，经24小时后，脱水完成；

3）花粉贮藏：

将脱水后的花粉取出，迅速将培养皿上盖扣好放回干燥箱内，然后密封玻璃干燥箱，在室温（18～25℃），无阳光直射的条件下贮藏，备用，为确保干燥剂工作效果，要经常检查干燥剂，当干燥剂由蓝转变成粉色或粉红色时，及时更换干燥剂;

所述的步骤1）花粉采集时将培养皿上盖放在培养皿的下部，保持花粉处于敞开状态；

所述的步骤2）花粉脱水时的玻璃箱底部放入足量的干燥剂，干燥剂上方设置两层网状隔板；

所述的步骤3）花粉贮藏时花粉的贮藏湿度不应大于30%。