CN106519000A - 一种抗菌肽to2‑24及其应用 - Google Patents

一种抗菌肽to2‑24及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106519000A
CN106519000A CN201611058868.2A CN201611058868A CN106519000A CN 106519000 A CN106519000 A CN 106519000A CN 201611058868 A CN201611058868 A CN 201611058868A CN 106519000 A CN106519000 A CN 106519000A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibacterial peptide
antibacterial
aminoacid
application
fmoc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611058868.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106519000B (zh
Inventor
张敏
贺淑文
王光花
岳斌
董晓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingdao Agricultural University
Original Assignee
Qingdao Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Agricultural University filed Critical Qingdao Agricultural University
Priority to CN201611058868.2A priority Critical patent/CN106519000B/zh
Publication of CN106519000A publication Critical patent/CN106519000A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106519000B publication Critical patent/CN106519000B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/461—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from fish
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)

Abstract

本发明涉及一种抗菌肽TO2‑24及其应用，具体涉及一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。该抗菌肽可有效杀伤海岸弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌三种鱼类致病菌。本发明的抗菌肽经实验验证效果优异。

Description

一种抗菌肽TO2-24及其应用
技术领域
本发明涉及分子生物学及微生物学领域，具体的说是一种抗菌肽及其应用。
背景技术
随着水产养殖规模的不断扩大和养殖环境的不断恶化，各种病害也随之频繁发生。当前,细菌性感染和细菌性疾病的发生呈上升趋势,细菌耐药性的形成是一个重要的原因，传统抗生素的大量使用造成耐药菌株不断产生,使得许多曾经高度有效的抗生素药物失效,已严重影响到我国水产养殖业的健康发展。因此寻求新型的杀菌物质越来越重要。科研人员正努力寻求新的抗菌策略，其中抗菌肽研究与应用是最有前景的一个领域。抗菌肽几乎是所有生命物种都有的重要免疫分子,具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性，并且抗菌肽具有不易产生耐药性、热稳定性强等传统抗生素药物不可替代优势，因而越来越受到人们的关注。最近研究发现，人类组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2)的C末端衍生肽具有广谱抗菌和抗病毒作用；黑猩猩,老鼠,火鸡,家鸡,短吻鳄,海龟,青蛙,鲨鱼和斑马鱼的TFPI-2C末端衍生肽对大肠杆菌和铜绿假单胞菌具显著抗菌活性。目前，尚没有美国红鱼TFPI-2C末端衍生肽的报道。
发明内容
为了克服上述缺陷，本发明一方面提供了一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。
进一步地，本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物中的应用。
进一步地，所述细菌为鱼类致病菌，优选为海岸弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌。
进一步地，本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抗病毒的药物中的应用。
进一步地，所述病毒选自传染性脾肾坏死病毒。
本发明还涉及使用固相树脂合成法制备所述抗菌肽TO2-24的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
(1)将第一个Fmoc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上；
(2)将树脂溶胀，脱保护后与下一个氨基酸进行级联反应；
(3)合成完毕后洗涤、干燥，随后再连接下一个氨基酸，直至连完最后一个氨基酸；
(4)最后脱除N端Fmoc保护的氨基酸上面的保护基Fmoc，使N端裸露出来，并切除树脂，即得到纯化的抗菌肽TO2-24。
有益效果
本发明的抗菌肽具有高效抑菌作用，可以有效抑制多种致病菌和病毒，因此可以应用于鱼类病害防治。
具体实施方式
图1、TO2-24的抑菌作用。将TO2-24分别与藤黄微球菌(A)、金黄色葡萄球菌(B)和海岸弧菌(C)孵育后拍摄的抑菌圈。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。
实施例1
本发明的抗菌肽TO2-24为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列。
序列SEQ ID No.1为：CVKGGKKYKRQGKGHRMRRYRNNH
序列
(a)序列特征：
长度：24
类型：氨基酸序列
链型：单链
拓扑结构：线性
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：人工合成
本实施例合成的抗菌肽TO2-24按照Fmoc固相多肽合成法，最终得到纯度大于90％的抗菌肽TO2-24。合成时将一个Fmoc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上，经过树脂溶胀，脱保护，称料，投料，反应后洗涤，检测，合成完毕后的洗涤和干燥后再连接下一个氨基酸，直至连完最后一个氨基酸，即得到抗菌肽TO2-24的序列，最后脱除N端Fmoc保护的氨基酸上面的保护基Fmoc，使N端裸露出来，并切除树脂，即得到纯化的抗菌肽TO2-24。经检测，所得抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。
实施例2
抗菌肽TO2-24的应用
1)细菌悬液的制备。在LB培养基中培养海岸弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌分别至OD600为0.80，然后室温离心(5000g)10min，收集菌体，将其悬浮于LB中至终浓度为2×105CFU/ml。
所述PBS组成成分按重量百分比计：0.8％NaCl，0.02％KCl，0.358％，Na2HPO4.12H2O，0.024％NaH2PO4。
2)抗菌肽TO2-24的杀菌活性。将50μl上述步骤1)的菌液加入96孔细胞培养板中，与倍比稀释的TO2-24或PBS混合，28℃培养24h。结果发现，TO2-24对海岸弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为：11μM，3μM和6μM，而PBS组则完全不能抑制细菌生长。
3)抗菌肽TO2-24的抗病毒活性。将100μM的TO2-24或PBS与1ml传染性脾肾坏死病毒(2×108CFU/ml)的PBS悬液混合，室温放置4h。将实验用鱼美国红鱼分成两组，每组15条，然后将传染性脾肾坏死病毒与TO2-24(实验组)或PBS(对照组)的混合物腹腔注射美国红鱼，在注射后3d和5d分别在无菌条件下取鱼的脾脏，提取基因组DNA，利用绝对荧光定量PCR检测病毒拷贝数。结果发现，与对照组相比，实验组病毒的拷贝数在感染后3d和5d分别下降了6倍和82倍。说明TO2-24对传染性脾肾坏死病毒具有显著的杀伤作用。
SEQUENCE LISTING
<110> 青岛农业大学
<120> 一种抗菌肽TO2-24及其应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Cys Val Lys Gly Gly Lys Lys Tyr Lys Arg Gln Gly Lys Gly His Arg
1 5 10 15
Met Arg Arg Tyr Arg Asn Asn His
20

Claims (6)

1.一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物中的应用。
3.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细菌为鱼类致病菌，优选为海岸弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌。
4.如权利要求4所述的抗菌肽在制备抗病毒的药物中的应用。
5.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述病毒选自传染性脾肾坏死病毒。
6.以固相合成的方法制备权利要求1所述的抗菌肽的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
(1)将第一个Fmoc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上；
(2)将树脂溶胀，脱保护后与下一个氨基酸进行级联反应；
(3)合成完毕后洗涤、干燥，随后再连接下一个氨基酸，直至连完最后一个氨基酸；
(4)最后脱除N端Fmoc保护的氨基酸上面的保护基Fmoc，使N端裸露出来，并切除树脂，即得到纯化的抗菌肽TO2-24。
CN201611058868.2A 2016-11-25 2016-11-25 一种抗菌肽to2-24及其应用 Active CN106519000B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611058868.2A CN106519000B (zh) 2016-11-25 2016-11-25 一种抗菌肽to2-24及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611058868.2A CN106519000B (zh) 2016-11-25 2016-11-25 一种抗菌肽to2-24及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106519000A true CN106519000A (zh) 2017-03-22
CN106519000B CN106519000B (zh) 2019-06-18

Family

ID=58357040

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611058868.2A Active CN106519000B (zh) 2016-11-25 2016-11-25 一种抗菌肽to2-24及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106519000B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113880933A (zh) * 2021-11-12 2022-01-04 青岛农业大学 一种抗菌肽SsNKL27及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1609121A (zh) * 2003-10-17 2005-04-27 上海高科联合生物技术研发有限公司 一组抗菌肽及其制备方法和应用
CN102070711A (zh) * 2010-11-05 2011-05-25 中国科学院海洋研究所 组织因子途径抑制物及其制备和应用
CN105777876A (zh) * 2016-05-26 2016-07-20 青岛农业大学 一种抗菌肽tc38及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1609121A (zh) * 2003-10-17 2005-04-27 上海高科联合生物技术研发有限公司 一组抗菌肽及其制备方法和应用
CN102070711A (zh) * 2010-11-05 2011-05-25 中国科学院海洋研究所 组织因子途径抑制物及其制备和应用
CN105777876A (zh) * 2016-05-26 2016-07-20 青岛农业大学 一种抗菌肽tc38及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KASETTY ET AL: "Kasetty et al", 《BMC MICROBIOLOGY》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113880933A (zh) * 2021-11-12 2022-01-04 青岛农业大学 一种抗菌肽SsNKL27及其应用
CN113880933B (zh) * 2021-11-12 2023-10-20 青岛农业大学 一种抗菌肽SsNKL27及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN106519000B (zh) 2019-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Thandar et al. Novel engineered peptides of a phage lysin as effective antimicrobials against multidrug-resistant Acinetobacter baumannii
CN112029732B (zh) 一种耐高温宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及其组合物
CN102906105B (zh) 肽及其用途
CN102781953B (zh) 寡肽化合物及其应用
KR20140039157A (ko) 항미생물성 융합 화합물 및 그의 용도
CN102219831A (zh) 一种抗菌肽及其制备方法和应用
JP6066222B2 (ja) 抗菌ペプチド及びその利用
AU2015279705A1 (en) Acinetobacter lysins
US8652806B2 (en) Nucleic acids encoding for antifungal bifunctional molecules for treating fungal infection
Rodrigues et al. Adevonin, a novel synthetic antimicrobial peptide designed from the Adenanthera pavonina trypsin inhibitor (ApTI) sequence
CN101775068A (zh) 新的天然抗菌肽、其编码序列及用途
WO1997031942A1 (en) Broad spectrum antimicrobial peptides containing a tryptophan triplet and methods of use
JP5041231B2 (ja) 抗菌ペプチド及びその利用
CN104761629B (zh) 一种广谱高效抗微生物肽Pb‑CATH‑OH1及其基因、制备方法和应用
Huo et al. Molecular characterization, antibacterial activity and mechanism analyzation of three different piscidins from black rockfish, Sebastes schlegelii
CN106519000B (zh) 一种抗菌肽to2-24及其应用
CN105777876B (zh) 一种抗菌肽tc38及其应用
JP2005120050A (ja) 新規抗菌性ペプチドとその利用
CN105777875B (zh) 一种抗菌肽cstc24及其应用
KR101837658B1 (ko) 신규한 아에로모나스 히드로필라 특이 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
JPS60185799A (ja) ヒト癌壊死因子
CN104910265B (zh) 一种合江棘蛙抗菌肽及其编码序列的基因与应用
CN113880933A (zh) 一种抗菌肽SsNKL27及其应用
CN101878226A (zh) 精氨酸取代的新型合成肽及其应用
JP4154218B2 (ja) 新規抗菌性ポリペプチドとその利用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant