CN105777876A - 一种抗菌肽tc38及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗菌肽TC38及其应用，具体涉及一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。该抗菌肽可有效杀伤创伤弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌等三种鱼类致病菌，以及传染性脾肾坏死病毒。本发明的抗菌肽经实验验证效果优异。

Description

一种抗菌肽TC38及其应用
技术领域
本发明涉及分子微生物学领域，具体的说是一种组织因子途径抑制物衍生抗菌肽及其应用。
背景技术
抗生素药物在水产养殖业中的大量使用引发水产动物药物残留，病原菌耐药性增强、生态平衡被破坏等一系列副作用，已严重影响到我国水产养殖业的健康发展。研发绿色、环保、高效的抗菌活性物质已成为实现水产养殖业可持续发展的迫切需求。抗菌肽是一类具广谱抗菌活性的小分子物质，是生物体抵抗外界病原感染的第一道防线。抗菌肽的杀菌机制在于它能破坏细菌的细胞膜，导致细胞内容物溢出，最终引起细菌死亡。抗菌肽具有抗菌谱广且不易产生耐药性、热稳定性强等传统抗生素药物无可比拟的优势，因而在水产养殖业中具有良好的应用前景。
发明内容
为了克服上述缺陷，本发明一方面提供了一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQIDNo.1所示。
进一步地，本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物中的应用。
进一步地，所述细菌为鱼类致病菌，优选为创伤弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌。
进一步地，本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抗病毒的药物中的应用。
进一步地，所述病毒选自传染性脾肾坏死病毒。
有益效果
本发明的抗菌肽具有高效抑菌作用，可以有效抑制多种鱼类致病菌和病毒，因此可以应用于鱼类病害防治。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。
实施例1
本发明的抗菌肽TC38的序列如SEQIDNo.1所示。
SEQIDNo.1为：RNCMEVCVKGEKKHTGQGMIRRLRRNKNNSIFVVRKRV
(a)序列特征：
●长度：38
●类型：氨基酸序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：人工合成
本实施例合成的抗菌肽TC38按照Fmoc固相多肽合成法，最终得到纯度大于90％的抗菌肽TC38。合成时将一个Fmoc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上，经过树脂溶胀，脱保护，称料，投料，反应后洗涤，检测，合成完毕后的洗涤和干燥后再连接下一个氨基酸，直至连完最后一个氨基酸，即得到抗菌肽TC38的序列，最后脱除N端Fmoc保护的氨基酸上面的保护基Fmoc，使N端裸露出来，并切除树脂，即得到纯化的抗菌肽TC38。经验证为如SEQIDNo.1所示的序列，本实施例的抗菌肽由苏州泰米克生物科技有限公司(苏州，中国)合成。
实施例2
抗菌肽TC38的应用
1)藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌和创伤弧菌的制备
在LB培养基中培养藤黄微球菌和创伤弧菌分别至OD600为0.5,然后室温离心(5000g)10min。收集菌体，将其悬浮于PBS中至终浓度为1x106CFU/ml。
所述PBS组成成分按重量百分比计：0.8％NaCl，0.02％KCl，0.358％Na2HPO4.12H2O，0.024％NaH2PO4。
2)抗菌肽TC38的杀菌效应
抗菌肽TC38的杀菌活性。将50μl上述步骤1)的菌液加入96孔细胞培养板中，与倍比稀释的TC38或PBS混合，28℃培养24h。结果发现，TC38对创伤弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为：316μM，2μM和16μM；最小杀菌浓度为：316μM，10μM和80μM，而PBS组则完全不能抑制细菌生长。
3)抗菌肽TC38的抗病毒活性
将316μM的TC38与1ml传染性脾肾坏死病毒(2×108CFU/ml)悬液混合，室温放置4h。将实验用鱼半滑舌鳎分成两组，每组15条，然后将传染性脾肾坏死病毒与TC38(实验组)或PBS(对照组)的混合物腹腔注射半滑舌鳎，在注射后3d和5d分别在无菌条件下取鱼的脾脏，提取基因组DNA，利用绝对荧光定量PCR检测病毒拷贝数。结果发现，与对照组相比，实验组病毒的拷贝数在感染后5d下降了50倍。说明TC38对传染性脾肾坏死病毒具有显著杀伤作用。

Claims (5)

1.一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQIDNo.1所示。
2.一种如权利要求1所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述细菌为鱼类致病菌，分别为创伤弧菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌。
4.一种如权利要求1所述的抗菌肽在制备抗病毒的药物中的应用。
5.一种如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述病毒选自传染性脾肾坏死病毒。
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