CN106518985A - 一种万古霉素沉淀方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种万古霉素沉淀方法，万古霉素发酵液在碱性条件pH＝8.5～10.5下通过0.02～0.5μm的聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，大孔吸附色谱树脂柱用纯化水洗后再用占流动相用量30～50％的乙醇和占流动相用量50～70％的盐酸水溶液洗脱，万古霉素被洗脱下来，得到含有万古霉素的洗脱液。本发明通过聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，沉淀过程易控制，混合液易过滤，得到的万古霉素碱颜色浅，粉末松散，易溶解；本发明具有沉淀方法简便和工艺流程适用于大批量生产的优点。
Description
技术领域
本发明涉及万古霉素沉淀方法技术领域，尤其涉及一种万古霉素沉淀方法。
背景技术
万古霉素(Vancomycin)是1956年Micormick等从一株东方拟无枝酸菌发酵液中分离得到的一种糖肽类抗生素，是放线菌产生的糖肽类抗生素中具有代表性的一种。
万古霉素用于治疗革兰氏阳性菌引起的感染疾病，特别是目前临床上对由β-内酰胺类抗生素引起的耐药金黄色葡萄球菌引起的严重感染疾病有较好的疗效。
由于万古霉素的意义及其重要性，人们一直在寻找这种抗生素发酵混合物中分离万古霉素的方法。万古霉素的发酵和分离方法在美国专利(专利号：3067099)中公布，之后也有专利公开过万古霉素的回收方法，包括：使用与水混合的非溶剂如异丙醇、乙醇或丙酮净化发酵液，沉淀后分离产物(美国专利号：4440753)；使用磷酸盐离析产物(欧洲专利号：0145484)；使用铜盐离析产物(美国专利号：4845194)；调整发酵液pH到7.8，在不搅拌的情况下沉淀产物(欧洲专利号：0323150)；通过咪唑/万古霉素混合后过滤回收(美国专利号4868285)。
在抗生素的生产过程中，万古霉素发酵液中不仅含有抗生素，而且还有不溶的菌丝体悬浮在未反应的中间体稀溶液中，还有新陈代谢杂质以及产物。提取抗生素是非常困难的，需要经过分离，富集和纯化的步骤，这些多级步骤不仅价格昂贵，而且每步都会造成万古霉素的损失。
美国专利(专利号：5235037)公开了一种万古霉素的沉淀方法，用于从万古霉素水溶液中分离万古霉素，该方法通过往万古霉素水溶液中添加碱金属盐或碱土金属盐来沉淀万古霉素，但是，该沉淀过程控制性不强，混合液过滤困难，得到的万古霉素碱颜色较深，粉末呈粘状，难以溶解。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种万古霉素沉淀方法。
本发明的技术方案如下：本发明提供一种万古霉素沉淀方法，包括以下步骤：
a、万古霉素发酵液在碱性条件pH＝8.5～10.5下通过0.02～0.5μm的聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，大孔吸附色谱树脂柱用纯化水洗后再用占流动相用量30～50％的乙醇和占流动相用量50～70％的盐酸水溶液洗脱，万古霉素被洗脱下来，得到含有万古霉素的洗脱液，洗脱液中加入活性炭脱色，过滤得到的滤液浓缩得到盐酸万古霉素水溶液；
b、在沉淀容器中沉淀步骤a中所得的盐酸万古霉素水溶液，得到晶体，并且搅拌该晶体浆料，将PH值连续调节至所需程度，直至完全沉淀，得到晶体沉淀物；
c、将步骤b得到的晶体沉淀物溶解为水溶液，然后通过阴离子交换树脂将其转为万古霉素。
本发明优选的，根据步骤a中，所述盐酸的pH范围为1.0～3.0，所述乙醇的pH范围为2.0～5.0。
本发明优选的，根据步骤b中，通过在含净抗生素活性洗脱液中加入与水互溶的有机溶剂来结晶，结晶前溶液中万古霉素含量为5.0％～30.0％。
本发明优选的，所述机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮。
本发明优选的，所述机溶剂加入量为：甲醇为2～6倍结晶液体积；乙醇为1.5～5.5倍结晶液体积；异丙醇为1.2～5倍结晶液体积；丙酮为1.0～4.5倍结晶液体积。
本发明优选的，根据步骤b中，结晶过程起始温度为25～60℃；结晶过程终点温度为0～30℃；结晶过程降温速度为0.5～5℃/分钟。
本发明优选的，根据步骤c中，晶体用水溶解后的万古霉素浓度为1.0％～20.0％。
本发明优选的，根据步骤c中，所述阴离子交换树脂为717树脂、D293树脂或D301FD树脂。
本发明优选的，所述阴离子交换树脂用量按制备1克万古霉素需要用2～10mL的阴离子交换树脂计。
本发明的有益效果如下：
采用上述方案，本发明通过聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，沉淀过程易控制，混合液易过滤，得到的万古霉素碱颜色浅，粉末松散，易溶解；本发明具有沉淀方法简便和工艺流程适用于大批量生产的优点。
附图说明
图1为本发明所述一种万古霉素沉淀方法的流程图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例，对本发明进行详细说明。
请参阅图1，本发明提供一种万古霉素沉淀方法，包括以下步骤：
a、万古霉素发酵液在碱性条件pH＝8.5～10.5下通过0.02～0.5μm的聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，大孔吸附色谱树脂柱用纯化水洗后再用占流动相用量30～50％的乙醇和占流动相用量50～70％的盐酸水溶液洗脱，万古霉素被洗脱下来，得到含有万古霉素的洗脱液，洗脱液中加入活性炭脱色，过滤得到的滤液浓缩得到盐酸万古霉素水溶液；
b、在沉淀容器中沉淀步骤a中所得的盐酸万古霉素水溶液，得到晶体，并且搅拌该晶体浆料，将PH值连续调节至所需程度，直至完全沉淀，得到晶体沉淀物；
c、将步骤b得到的晶体沉淀物溶解为水溶液，然后通过阴离子交换树脂将其转为万古霉素。
根据步骤a中，所述盐酸的pH范围为1.0～3.0，所述乙醇的pH范围为2.0～5.0。
根据步骤b中，通过在含净抗生素活性洗脱液中加入与水互溶的有机溶剂来结晶，结晶前溶液中万古霉素含量为5.0％～30.0％。
所述机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮。
所述机溶剂加入量为：甲醇为2～6倍结晶液体积；乙醇为1.5～5.5倍结晶液体积；异丙醇为1.2～5倍结晶液体积；丙酮为1.0～4.5倍结晶液体积。
根据步骤b中，结晶过程起始温度为25～60℃；结晶过程终点温度为0～30℃；结晶过程降温速度为0.5～5℃/分钟。
根据步骤c中，晶体用水溶解后的万古霉素浓度为1.0％～20.0％。
根据步骤c中，所述阴离子交换树脂为717树脂、D293树脂或D301FD树脂。
所述阴离子交换树脂用量按制备1克万古霉素需要用2～10mL的阴离子交换树脂计。
实施例一：
本发明包括以下步骤：
a、万古霉素发酵液在碱性条件pH＝9下通过0.4μm的聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，大孔吸附色谱树脂柱用纯化水洗后再用占流动相用量40％的乙醇和占流动相用量60％的盐酸水溶液洗脱，万古霉素被洗脱下来，得到含有万古霉素的洗脱液，洗脱液中加入活性炭脱色，过滤得到的滤液浓缩得到盐酸万古霉素水溶液，所述盐酸的pH范围为2.0，所述乙醇的pH范围为3.5；
b、在沉淀容器中沉淀步骤a中所得的盐酸万古霉素水溶液，得到晶体，并且搅拌该晶体浆料，将PH值连续调节至所需程度，直至完全沉淀，得到晶体沉淀物，通过在含净抗生素活性洗脱液中加入与水互溶的有机溶剂来结晶，结晶前溶液中万古霉素含量为20.0％，所述机溶剂为乙醇，所述机溶剂加入量为：乙醇为4倍结晶液体积，结晶过程起始温度为50℃；结晶过程终点温度为20℃；结晶过程降温速度为3℃/分钟；
c、将步骤b得到的晶体沉淀物溶解为水溶液，然后通过阴离子交换树脂将其转为万古霉素，晶体用水溶解后的万古霉素浓度为15.0％，所述阴离子交换树脂为D301FD树脂，所述阴离子交换树脂用量按制备1克万古霉素需要用8mL的阴离子交换树脂计。
综上所述，采用上述方案，本发明通过聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，沉淀过程易控制，混合液易过滤，得到的万古霉素碱颜色浅，粉末松散，易溶解；本发明具有沉淀方法简便和工艺流程适用于大批量生产的优点。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、万古霉素发酵液在碱性条件pH＝8.5～10.5下通过0.02～0.5μm的聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，万古霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，大孔吸附色谱树脂柱用纯化水洗后再用占流动相用量30～50％的乙醇和占流动相用量50～70％的盐酸水溶液洗脱，万古霉素被洗脱下来，得到含有万古霉素的洗脱液，洗脱液中加入活性炭脱色，过滤得到的滤液浓缩得到盐酸万古霉素水溶液；
b、在沉淀容器中沉淀步骤a中所得的盐酸万古霉素水溶液，得到晶体，并且搅拌该晶体浆料，将PH值连续调节至所需程度，直至完全沉淀，得到晶体沉淀物；
c、将步骤b得到的晶体沉淀物溶解为水溶液，然后通过阴离子交换树脂将其转为万古霉素。
2.根据权利要求1所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，根据步骤a中，所述盐酸的pH范围为1.0～3.0，所述乙醇的pH范围为2.0～5.0。
3.根据权利要求1所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，根据步骤b中，通过在含净抗生素活性洗脱液中加入与水互溶的有机溶剂来结晶，结晶前溶液中万古霉素含量为5.0％～30.0％。
4.根据权利要求3所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，所述机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮。
5.根据权利要求4所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，所述机溶剂加入量为：甲醇为2～6倍结晶液体积；乙醇为1.5～5.5倍结晶液体积；异丙醇为1.2～5倍结晶液体积；丙酮为1.0～4.5倍结晶液体积。
6.根据权利要求1所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，根据步骤b中，结晶过程起始温度为25～60℃；结晶过程终点温度为0～30℃；结晶过程降温速度为0.5～5℃/分钟。
7.根据权利要求1所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，根据步骤c中，晶体用水溶解后的万古霉素浓度为1.0％～20.0％。
8.根据权利要求1所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，根据步骤c中，所述阴离子交换树脂为717树脂、D293树脂或D301FD树脂。
9.根据权利要求8所述的一种万古霉素沉淀方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂用量按制备1克万古霉素需要用2～10mL的阴离子交换树脂计。
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