CN106511421B - 一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法，包括如下步骤：药材用乙醇回流提取，回收乙醇后加酸调至一定的pH值，静置一定时间后过滤，用大孔树脂吸附，加一定量的水洗，弃去水洗液，再用碱洗，水续洗，收集碱洗液与水续洗液，再加酸调至一定pH值后上大孔树脂吸附，再用一定浓度的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩、干燥，得总黄酮提取物。采用本发明精制的水飞蓟茎叶总黄酮，工艺简单，能耗低，大孔树脂和乙醇可以重复使用，所得产品纯度高。该工艺适合工业化生产。

Description

一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法
技术领域
本发明涉及精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物制备方法，尤其涉及一种利用中药提取分离技术来精制分离水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法。
背景技术
水飞蓟为菊科水飞蓟属植物水飞蓟Silybum marianum(L.)Gaertn.，别名老鼠筋、水飞雉、奶蓟，是一年生或两年生草本植物，原产南欧和北非，20世纪50年代引种我国，现已在陕西、河北、黑龙江、甘肃等省栽培。目前水飞蓟已成为世界公认的保肝植物。水飞蓟果实及种子中富含黄酮，其总提取物即水飞蓟素或西利马林(islimarin)是药用有效成分，为天然黄酮木脂素类化合物，淡黄色至棕黄色粉末，其主要成分为水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭和水飞蓟醇。我国引种的紫花水飞蓟以水飞蓟宾含量最高，其抗肝炎活性最强，多为羟苯基色满酮。
水飞蓟素作为抗肝损伤药物，具有稳定细胞膜，改善肝功能的作用，对急慢性肝炎、肝硬变和代谢中毒性肝损伤具有较好的疗效，它作为一种药效高、无副作用的保肝药物而引起了世界各国的广泛重视。
研究表明水飞蓟全草含有黄酮类化合物及延胡索酸；种子含有以水飞蓟素为主的黄酮类化合物和以亚油酸为主的水飞蓟油。现代药理学研究也证实水飞蓟种子中的水飞蓟宾是其生物活性的主要有效成分，具有清除自由基、抗脂质过氧化、保护肝细胞膜、促进肝细胞修复再生、抗肝纤维化、抗肿瘤、降血脂、预防糖尿病等功能。以往研究大多集中在对水飞蓟种子的研究上，而对其他部位的研究相对较少。现有的专利也未涉及水飞蓟全草中黄酮类化合物的提纯精制方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法，是将水飞蓟全草提取液经树脂上柱、洗脱、收集洗脱液、浓缩、干燥，获得水飞蓟全草总黄酮。
本发明提供的一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法，通过以下步骤实现：
一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法，包括如下步骤：
(1)将药材水飞蓟茎叶粗粉碎，用乙醇回流提取，合并提取液；
(2)将提取液回收乙醇，浓缩至适量体积，加酸调pH至2～5后，静置，得到静置液；
(3)将静置液过滤后加入大孔树脂吸附，纯化水洗脱，优选地，用4～8倍树脂体积的纯化水洗脱；弃去柱下液，再用碱溶液洗脱，优选地用2～5倍树脂体积的碱溶液洗脱，再用纯化水洗脱，优选地用4～8倍纯化水洗脱，收集碱以及水洗脱液
(4)将步骤(3)中的碱以及水洗脱液加酸调pH至2～5后，上大孔树脂吸附，再用50％～80％的乙醇洗脱，收集醇洗脱液；
(5)将醇洗脱液回收乙醇，浓缩，干燥，得黄酮类提取物。
优选地，步骤(1)中，用10～20倍40％～80％的乙醇进行回流提取，提取2～4小时，提取2～3次。
步骤(2)中，浓缩至药材和料液的比为1∶1～2。
步骤(2)中，静置时间为12小时以上。
步骤(3)和(4)中所用的大孔树脂为聚酰胺树脂、AB-8、D101、HPD722、HPD400、HPD427、HPD826、HPD600中的任意一种。
步骤(2)和(4)中的酸为盐酸或磷酸。
步骤(2)中的碱为碳酸钠、碳酸钙、碳酸氢钠、碳酸氢钙中的任意一种。
步骤(3)中，每g药材所用的树脂量为1.5～3ml。
步骤(4)中，每g药材所用的树脂量为1ml。
本发明具有以下优点：
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明提供的精制水飞蓟全草总黄酮方法操作简便、快捷；
(2)所选用的大孔树脂具有吸附量大、解析率大，可再生重复使用；
(3)用本发明提取精制水飞蓟全草总黄酮含量达50％以上。
附图说明
图1为水飞蓟全草总黄酮的精制工艺流程图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例详细说明本发明。
本发明中涉及到的提取物中总黄酮的含量检测方法如下：
(1)对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，加乙醇配制成0.2mg/ml的溶液。
(2)标准曲线制备
精密量取芦丁对照品溶液(0.2mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置25ml容量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液lml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
(3)供试品溶液制备
取本品提取物约0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加95％乙醇90ml，在60℃超声30min，放冷，加95％乙醇至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液lml，混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液lml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，过滤，依法测定吸光度，计算出供试品溶液中无水芦丁的含量。
实施例1
将水飞蓟全草药材1kg，粗粉碎，用20倍量40％乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，并减压浓缩至药材和料液的比为1∶1.5，加磷酸调pH至2～4，静置12小时以上，过滤，滤液用1500ml的HPD600大孔树脂吸附，用8000ml纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用3％的碳酸钙溶液3000ml洗脱，并加6000ml纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将续洗液加盐酸调pH至4～5，用1000ml的AB-8大孔树脂吸附，再用50％乙醇2000ml洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物15.9g，其总黄酮含量为52％。
实施例2
将水飞蓟全草药材lkg，粗粉碎，用15倍量60％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇，并减压浓缩至药材和料液的比为l∶2，加盐酸调pH至3～5，静置12小时以上，过滤，滤液用2000ml的HPD400大孔树脂吸附，用10000ml纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用2％的碳酸纳溶液6000ml洗脱，并加10000ml纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将续洗液加磷酸调pH至3～4，用1500ml的D101大孔树脂吸附，再用60％乙醇2000ml洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物12.5g，总黄酮含量为58％。
实施例3
将水飞蓟全草药材1kg，粗粉碎，用16倍量75％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收乙醇，并减压浓缩至药材和料液的比为1∶1，加磷酸调pH至2～3，静置12小时以上，过滤，滤液用3000ml的HPD427大孔树脂吸附，用15000ml纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用2％的碳酸氢钠溶液9000ml洗脱，并加16000ml纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将续洗液加磷酸调pH至2～4，用6000ml的聚酰胺树脂吸附，再用70％乙醇10000ml洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物13.8g，其总黄酮含量为60％。
实施例4
将水飞蓟全草药材lkg，粗粉碎，用12倍量80％乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇，并减压浓缩至药材和料液的比为l∶1.5，加盐酸调pH至2～4，静置12小时以上，过滤，滤液用2500ml的HPD826大孔树脂吸附，用12500ml纯化水冲洗，弃去洗脱液，再用3％的碳酸氢钙溶液10000ml洗脱，并加15000ml纯化水续洗，收集碱及水续洗液；将续洗液加盐酸调pH至3～4，用2000ml的HPD722大孔树脂吸附，再用65％乙醇6000ml洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得提取物15.7g，其总黄酮含量为54％。

Claims (8)

1.一种精制水飞蓟茎叶中黄酮类化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将药材水飞蓟茎叶粗粉碎，用乙醇回流提取，合并提取液；
（2）将提取液回收乙醇，浓缩至适量体积，加酸调pH至2～5后，静置，得到静置液；
（3）将静置液过滤后加入大孔树脂吸附，纯化水洗脱，弃去柱下液，再用碱溶液洗脱，再用纯化水洗脱，收集碱以及水洗脱液，其中，碱为碳酸钠、碳酸钙、碳酸氢钠、碳酸氢钙中的任意一种；
（4）将步骤（3）中的碱以及水洗脱液加酸调pH至2～5后，上大孔树脂吸附，再用50%～80%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液;
（5）将醇洗脱液回收乙醇，浓缩，干燥，得黄酮类提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，用10～20倍40%～80%的乙醇进行回流提取，提取2～4小时，提取2～3次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，浓缩至药材和料液的比为1:1~2。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，静置时间为12小时以上。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）和（4）中所用的大孔树脂为聚酰胺树脂、AB-8、D101、HPD722、HPD400、HPD427 、HPD826、HPD600中的任意一种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）和（4）中的酸为盐酸或磷酸。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，每g药材所用的树脂量为1.5～3ml。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，每g药材所用的树脂量为1 ml。
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