CN106507673A

CN106507673A - 6‑氯取代的咪唑并[1,2‑a]吡啶甲酰胺及其作为可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂的用途

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Publication number: CN106507673A
Application number: CN201580034595.5A
Authority: CN
Inventors: A·瓦卡洛波洛斯; M·福尔曼; J-P·施塔施; F·旺德; T·马夸特; L·迪茨; D·郎; 李民坚
Original assignee: Bayer Pharma AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2014-05-02
Filing date: 2015-04-29
Publication date: 2017-03-15
Also published as: JP2017514901A; CA2947372A1; EP3137465A1; WO2015165970A1; US20170101407A1

Abstract

本申请涉及新的6‑氯‑取代的咪唑并[1,2‑a]吡啶‑3‑甲酰胺，其制备方法，其单独或以结合物形式用于治疗和/或预防疾病的用途，以及其用于制备用于治疗和/或预防疾病、尤其是用于治疗和/或预防心血管病症的药物的用途。

Description

6-氯取代的咪唑并[1,2-a]吡啶甲酰胺及其作为可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂的用途

本申请涉及新的6-氯-取代的咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，其制备方法，其单独或以结合物形式用于治疗和/或预防疾病的用途，以及其用于制备用于治疗和/或预防疾病、尤其是用于治疗和/或预防心血管病症的药物的用途。

哺乳动物细胞中最重要的细胞传导系统之一是环一磷酸鸟苷(cGMP)。它与由内皮释放并传导激素和机械信号的一氧化氮(NO)一起形成了NO/cGMP系统。鸟苷酸环化酶催化由三磷酸鸟苷(GTP)至cGMP的生物合成。迄今已知的该家族的代表可以按照结构特征或按照配体类型分为两组：可被利钠肽刺激的颗粒状鸟苷酸环化酶，和可被NO刺激的可溶性鸟苷酸环化酶。可溶性鸟苷酸环化酶由两个亚单元组成并且每个异源二聚体很可能包含一个血红素，血红素是调节中心的一部分。这对激活机制至关重要。NO能够与血红素的铁原子结合并因此显著地增加酶的活性。相反，不含血红素的制剂不能被NO刺激。一氧化碳(CO)也能够与血红素的中心铁原子结合，但是由CO进行的刺激比由NO进行的刺激少得多。

通过形成cGMP，以及由此产生的磷酸二酯酶、离子通道和蛋白激酶的调节，鸟苷酸环化酶在多种生理过程中起着重要的作用，特别是在平滑肌细胞的舒张和增殖中、在血小板聚集和血小板粘附中和在神经信号传导中，以及在基于上述过程中断的病症中。在病理生理学条件下，NO/cGMP系统可被抑制，这可导致，例如，高血压、血小板激活、细胞增殖增加、内皮功能障碍、动脉粥样硬化、心绞痛、心力衰竭、心肌梗塞、血栓形成、中风和性功能障碍。

由于预期的高效率和低水平的副作用，通过把影响有机体中的cGMP信号通路作为目标而对这类病症进行可能的NO非依赖性治疗是有前景的方法。

迄今为止，对于可溶性鸟苷酸环化酶的治疗性刺激，仅使用了基于NO发挥作用的化合物如有机硝酸酯。NO通过生物转化形成并且通过攻击血红素的中心铁原子来激活可溶性鸟苷酸环化酶。除了副作用外，耐受性的发展也是这种治疗模式的关键性缺点之一。

近年来，已经记载了一些直接(即无需事先释放NO)刺激可溶性鸟苷酸环化酶的物质，例如，3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苄基吲唑[YC-1；Wu等人，Blood 84(1994)，4226；Mülsch等人，Brit.J.Pharmacol.120(1997)，681]、脂肪酸[Goldberg等人，J.Biol.Chem.252(1977)，1279]、二苯基碘鎓六氟磷酸盐[Pettibone等人，Eur.J.Pharmacol.116(1985)，307]、异甘草素[Yu等人，Brit.J.Pharmacol.114(1995)，1587]和各种取代的吡唑衍生物(WO 98/16223)。

可用于治疗病症的各种咪唑并[1,2-a]吡啶衍生物尤其记载于EP 0 266 890-A1、WO 89/03833-A1、JP 01258674-A[参见Chem.Abstr.112：178986]、WO 96/34866-A1、EP 1277 754-A1、WO 2006/015737-A1、WO 2008/008539-A2、WO 2008/082490-A2、WO 2008/134553-A1、WO 2010/030538-A2、WO 2011/113606-A1和WO 2012/165399-A1中。

本发明的一个目的是提供用作可溶性鸟苷酸环化酶的刺激剂并且其本身适合于治疗和/或预防疾病的新物质。

本发明提供选自以下的化合物及其N-氧化物、盐、溶剂合物、所述N-氧化物的盐以及所述N-氧化物和盐的溶剂合物

ent-N-(2-氨基-3-氟-2-甲基丙基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)

和

ent-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)

和

ent-N-(2-氨基-5-氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)

和

ent-N-(2-氨基-5-氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)

和

ent-N-(2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)

和

ent-N-(2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)

和

rac-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(外消旋体)

和

ent-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)

和

ent-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)

在本发明的上下文中，优选的盐为本发明化合物的生理上可接受的盐。还包括其本身不适于药学应用但可用于例如分离或纯化本发明的化合物的盐。

本发明化合物的生理上可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。

本发明化合物的生理上可接受的盐还包括常规碱的盐，例如并优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)以及衍生自氨或具有1至16个碳原子的有机胺的铵盐，所述有机胺例如并优选乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙基胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄基胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。

在本发明的上下文中，溶剂合物被描述为通过与溶剂分子配位而形成固态或液态络合物的本发明化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的一种具体形式，其中与水进行配位。在本发明的上下文中优选的溶剂合物为水合物。

根据其结构，本发明的化合物可以不同的立体异构形式存在，即以构型异构体的形式存在，或——如果合适——以构象异构体(对映异构体和/或非对映异构体，包括在阻转异构体的情况下的那些)的形式存在。因此，本发明包括对映异构体和非对映异构体及其各自的混合物。可以用已知的方法从所述对映异构体和/或非对映异构体的混合物中分离立体异构上一致的成分；为此目的优选使用色谱法，尤其是在非手性相或手性相上的HPLC色谱法。

如果本发明的化合物可以互变异构的形式存在，则本发明包括所有的互变异构形式。

本发明还包含本发明的化合物的所有合适的同位素变体。在本文中，本发明的化合物的同位素变体理解为意指这样的化合物：其中本发明的化合物中的至少一个原子被替换为具有相同原子序数但原子质量与在自然界中通常或主要存在的原子质量不同的另一原子。可纳入本发明的化合物的同位素的实例为氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，如²H(氘)、³H(氚)、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³²P、³³P、³³S、³⁴S、³⁵S、³⁶S、¹⁸F、³⁶Cl、⁸²Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁹I和¹³¹I。本发明的化合物的特定同位素变体，尤其是其中已纳入一种或多种放射性同位素的变体，可有益于例如检查机体内的作用机理或活性化合物的分布；由于相对容易的可制备性和可检测性，用³H或¹⁴C同位素标记的化合物尤其适合于此目的。此外，由于该化合物的更高的代谢稳定性，例如在体内的半衰期的延长或所需活性剂量的减少，同位素(例如氘)的纳入可产生特别的治疗益处；因此，本发明的化合物的此类修饰在一些情况下还可构成本发明的优选实施方案。本发明化合物的同位素变体可通过本领域技术人员已知的方法——例如通过下文进一步描述的方法以及在工作实施例中描述的方法，通过使用各自试剂和/或起始物料的相应同位素修饰——来制备。

此外，本发明还包括本发明化合物的前药。在本文中，术语“前药”指这样的化合物：本身可能有生物活性或无生物活性，但在其体内停留期间反应(例如通过代谢或水解)得到本发明的化合物。

在本发明的上下文中，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括抑制、延缓、检查、减轻、减弱、限制、减少、压制、驱除或治愈疾病、病状(condition)、病症、损伤或健康问题，或这些状态和/或这些状态的症状的发展、进程(course)或进展。在本文中术语“疗法(therapy)”理解为与术语“治疗(treatment)”同义。

在本发明的上下文中，术语“预防(prevention)”、“预防(prophylaxis)”和“阻止(preclusion)”同义使用且指的是避免或减少感染、经历、遭受或患有疾病、病状、病症、损伤或健康问题或这些状态和/或这些状态的症状的发展或演进的风险。

疾病、病状、病症、损伤或健康问题的治疗或预防可以是部分的或完全的。

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-3-氟-2-甲基丙基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

及其N-氧化物、盐、溶剂合物、所述N-氧化物的盐以及所述N-氧化物和盐的溶剂合物。

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-5-氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-5-氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为rac-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(外消旋体)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)和以下结构式的化合物

在本发明的上下文中，优选具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

本发明还提供一种制备本发明化合物的方法，其特征在于

[A]式(I)的化合物

其中

T¹代表(C₁-C₄)-烷基或苄基，

在惰性溶剂中在合适的碱或酸的存在下反应，得到式(II)的羧酸

随后在惰性溶剂中，在酰胺偶联条件下，与选自以下的胺反应，

任选在催化剂的存在下，将任选存在的保护基团氢解除去，

并且将所得到的化合物任选地使用合适的(i)溶剂和/或(ii)酸或碱转化成它们的溶剂合物、盐和/或所述盐的溶剂合物。

所述制备方法可例如通过以下合成方案(方案1)来说明：

方案1：

[a)：氢氧化锂，THF/甲醇/H₂O，RT；b)：HATU，N,N-二异丙基乙胺，DMF，RT；c)：于活性碳上的钯(10％)，乙醇，氢，RT]。

式(III-A)、(III-B)、(III-C)、(III-D)和(III-E)的化合物市售可得或由文献获知，或可类似于文献方法制备。

用于酰胺偶联的合适的惰性溶剂为，例如，醚如乙醚、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇二甲醚或二乙二醇二甲醚，烃如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷或矿物油馏分，卤代烃如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或其他溶剂如丙酮、乙酸乙酯、乙腈、吡啶、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N'-二甲基丙烯基脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。也可以使用所述溶剂的混合物。优选二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺或这些溶剂的混合物。

适合于作为缩合剂用于酰胺形成的是，例如，碳二亚胺如N,N'-二乙基碳二亚胺、N,N'-二丙基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)；光气衍生物如N,N'-羰基二咪唑(CDI)；1,2-噁唑鎓(oxazolium)化合物如2-乙基-5-苯基-1,2-噁唑鎓3-硫酸盐或2-叔丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐；酰氨基化合物如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉；或氯甲酸异丁酯；丙烷膦酸酐(T3P)；1-氯-N,N,2-三甲基丙-1-烯-1-胺；氰基膦酸二乙酯；双(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐、苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU)，任选地与其他助剂(如1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu))以及作为碱的碱金属碳酸盐(如碳酸钠或碳酸钾或碳酸氢钠或碳酸氢钾)或有机碱(如三烷基胺，例如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶或N,N-二异丙基乙胺)结合。优选使用与N-甲基吗啉结合的TBTU、与N,N-二异丙基乙胺结合的HATU或1-氯-N,N,2-三甲基丙-1-烯-1-胺。

缩合通常在-20℃至+100℃的温度范围内进行，优选在0℃至+60℃下进行。所述转化可在大气压、加压或减压(例如0.5至5巴)下进行。通常，所述反应在大气压下进行。

或者，也可以首先将式(II)的羧酸转化成相应的碳酰氯，然后可以将所述碳酰氯直接或在单独的反应中用式(III)的胺转化成本发明化合物。由羧酸形成碳酰氯通过本领域技术人员已知的方法进行，例如通过任选在合适的惰性溶剂中，在合适的碱的存在下，例如在吡啶的存在下以及任选地加入二甲基甲酰胺，用亚硫酰氯、磺酰氯或草酰氯处理。

式(I)的化合物中的酯基T¹的水解通过常规方法通过在惰性溶剂中用酸或碱处理酯而进行，在后者的情况下，将起初形成的盐通过酸处理而转化成游离羧酸。在叔丁酯的情况下，酯水解优选用酸进行。在苄基酯的情况下，酯裂解优选通过用于活性碳上的钯或雷尼镍氢解而进行。用于该反应的合适的惰性溶剂为水或常规用于酯水解的有机溶剂。这些有机溶剂优选包括醇如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，或醚如乙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二噁烷或乙二醇二甲醚，或其他溶剂如丙酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。也可以使用所述溶剂的混合物。在碱性酯水解的情况下，优选使用水与二噁烷、四氢呋喃、甲醇和/或乙醇的混合物。

用于酯水解的合适的碱为常规无机碱。其优选包括碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾或氢氧化钡；或碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐，如碳酸钠、碳酸钾或碳酸钙。特别优选氢氧化钠或氢氧化锂。

用于酯裂解的合适的酸通常为硫酸、氯化氢/盐酸、溴化氢/氢溴酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、甲苯磺酸、甲磺酸或三氟甲磺酸，或其混合物，任选加入水。在叔丁酯的情况下，优选氯化氢或三氟乙酸，在甲酯的情况下，优选盐酸。

酯水解通常在0℃至+100℃的温度范围内进行，优选在+0℃至+50℃下进行。

这些转化可在大气压、加压或减压(例如0.5至5巴)下进行。通常，所述反应在每种情况下都在大气压下进行。

所使用的氨基保护基团优选为叔丁氧基羰基(Boc)或苄氧基羰基(Z)。用于羟基或羧基官能团的保护基团优选为叔丁基或苄基。这些保护基团通过常规方法脱除，优选通过在惰性溶剂如二噁烷、乙醚、二氯甲烷或乙酸中与强酸如氯化氢、溴化氢或三氟乙酸反应；任选也可以在没有额外的惰性溶剂的情况下实现所述脱除。在苄基和苄氧基羰基作为保护基团的情况下，其也可通过在钯催化剂的存在下氢解除去。所述保护基团的脱除可任选地在一锅反应中同时进行或在单独的反应步骤中进行。

在本文中，苄基的去除通过由保护基团化学已知的常规方法进行，优选通过在钯催化剂(例如于活性碳上的钯)的存在下在惰性溶剂(例如乙醇或乙酸乙酯)中氢解[还参见，例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1999]。

式(I)的化合物由文献获知或可通过如下方法制备：在惰性溶剂中，在合适的碱的存在下，使式(IV)的化合物

与式(V)的化合物反应

其中

X¹代表合适的离去基团，特别是氯、溴、碘、甲磺酸根、三氟甲磺酸根(triflate)或甲苯磺酸根，

得到式(VI)的化合物

然后使其在惰性溶剂中与式(VII)的化合物反应

其中T¹具有以上给出的含义。

所述方法以示例性方式通过以下方案(方案2)来说明：

方案2：

[a)：i)NaOMe，MeOH，RT；ii)DMSO，RT；b)：EtOH，分子筛，回流]。

可修改所示合成顺序，使得各反应步骤以不同的次序进行。这样修改的合成顺序的实例示于方案3中。

方案3：

[a)：EtOH，分子筛，回流；b)：b)Cs₂CO₃，DMF，50℃]。

用于环合以得到咪唑并[1,2-a]吡啶碱骨架(VI)+(VII)→(I)或(IV)+(VII)→(VIII)的惰性溶剂为常规有机溶剂。其优选包括醇如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇或叔丁醇，或醚如乙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、二噁烷或乙二醇二甲醚，或其他溶剂如丙酮、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。也可以使用所述溶剂的混合物。优选使用乙醇。

所述环合通常在+50℃至+150℃的温度范围内进行，优选在+50℃至+100℃下进行，任选在微波中进行。

环合(VI)+(VII)→(I)或(IV)+(VII)→(VIII)任选地在脱水反应添加剂的存在下进行，例如在分子筛(孔径)的存在下或借助水分离器进行。反应(VI)+(VII)→(I)或(IV)+(VII)→(VIII)使用过量的式(VII)的试剂，例如用1至20当量的试剂(VII)，任选加入碱(例如碳酸氢钠)进行，在这种情况下，该试剂的添加可以一次性或分几个部分进行。

作为方案1至3中所示的引入2,6-二氟苄基的替代方案，还可以——如方案4中所示——使这些中间体在Mitsunobu反应的条件下与式(IX)的醇反应。

方案4：

其中

R¹代表式(III-A)、(III-B)、(III-C)、(III-D)和(III-E)的化合物

并且

其中T¹具有以上给出的含义。

酚与醇的这种Mitsunobu缩合的典型反应条件可见于相关文献，例如Hughes，D.L.Org.React.1992，42，335；Dembinski，R.Eur.J.Org.Chem.2004，2763。通常，所述反应使用活化剂如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)或偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和膦试剂如三苯基膦或三丁基膦，在惰性溶剂(如THF、二氯甲烷、甲苯或DMF)中在0℃和所用试剂的沸点之间的温度下进行。

本发明的化合物具有有价值的药理学特性并可用于预防和治疗人和动物的疾病。本发明的化合物提供了另一种治疗替代方案并因此扩大了药学领域。

本发明的化合物引起血管舒张和血小板聚集的抑制并导致血压降低和冠状动脉血流量增加。这些效果通过可溶性鸟苷酸环化酶的直接刺激和细胞内cGMP的增加来介导。此外，本发明的化合物增强了增加cGMP水平的物质的活性，所述物质例如EDRF(内皮衍生的舒张因子)、NO供体、原卟啉IX、花生四烯酸或苯肼衍生物。

本发明的化合物适合于治疗和/或预防心血管病症、肺病症、血栓栓塞性病症和纤维化的病症。

因此，可将本发明的化合物用于治疗和/或预防以下的药物中：心血管病症，例如，高血压(血压升高)、难治性高血压、急性和慢性心力衰竭、冠心病、稳定型和不稳定型心绞痛、外周和心血管病症、心律失常、房性和室性心律失常，以及受损传导，例如，I-III度房室传导阻滞(AB阻滞I-III)、室上快速性心律失常、心房颤动、心房扑动、心室颤动、心室扑动、室性快速性心律失常、尖端扭转型室性心动过速、房性和室性早搏、AV-交接区性期前收缩(AV-junctional extrasystole)、病态窦房结综合征、晕厥、AV-结折返性心动过速、沃-帕-怀综合征(Wolff-Parkinson-White syndrome)；急性冠状动脉综合征(ACS)、自身免疫性心脏病症(心包炎、心内膜炎、心脏瓣膜炎(valvolitis)、主动脉炎、心肌病)、休克(如心源性休克、感染性休克和过敏性休克)、动脉瘤、拳师犬心肌病(boxer cardiomyopathy)(心室早发性收缩(PVC))；用于治疗和/或预防以下疾病的药物中：血栓栓塞病症和局部缺血，如心肌缺血、心肌梗塞、中风、心脏肥大、短暂性和局部缺血性发作、先兆子痫、炎性心血管病症、冠状动脉和外周动脉痉挛，水肿形成如肺水肿、脑水肿、肾水肿或由心力衰竭引起的水肿、外周循环障碍、再灌注损伤、动脉和静脉血栓形成、微量清蛋白尿、心肌功能不全、内皮功能紊乱；用以预防再狭窄，例如溶栓治疗后、经皮腔内血管成形术(PTA)后、经腔内冠状动脉血管成形术(PTCA)后、心脏移植和搭桥手术后的再狭窄，以及微血管和大血管损伤(血管炎)、增高水平的纤维蛋白原和低密度脂蛋白(LDL)和增高浓度的纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)；以及用于治疗和/或预防勃起功能障碍和女性性功能障碍。

在本发明的上下文中，术语“心力衰竭”包括心力衰竭的急性和慢性形式，以及更具体或相关的疾病类型，如急性代偿失调性心力衰竭、右心衰竭、左心衰竭、全心衰竭(global failure)、缺血性心肌病、扩张型心肌病、肥大型心肌病、特发性心肌病、先天性心脏缺陷、与心脏瓣膜缺损相关的心力衰竭、二尖瓣狭窄、二尖瓣闭锁不全、主动脉瓣狭窄、主动脉瓣闭锁不全、三尖瓣狭窄、三尖瓣闭锁不全、肺动脉瓣狭窄、肺动脉瓣闭锁不全、复合性心脏瓣膜缺损(combined heart valve defect)、心肌炎症(心肌炎)、慢性心肌炎、急性心肌炎、病毒性心肌炎、糖尿病性心力衰竭、酒精性心肌病、心脏储积病症(cardiac storagedisorder)、舒张性心力衰竭和收缩性心力衰竭，以及现有的慢性心力衰竭恶化的急性期(恶化的心力衰竭)。

此外，本发明的化合物还可用于治疗和/或预防动脉硬化、受损的脂类代谢、低脂蛋白血症、血脂异常(dyslipidaemias)、高甘油三酯血症、高脂血症、高胆固醇血症、无β脂蛋白血症、谷甾醇血症、黄瘤病、丹吉尔病、肥胖(adiposity)、肥胖症(obesity)，以及混合性高脂血症(combined hyperlipidaemias)和代谢综合征。

本发明的化合物还可用于治疗和/或预防原发性和继发性雷诺现象、微循环障碍、跛行、外周和自主神经病、糖尿病性微血管病、糖尿病视网膜病、糖尿病四肢溃疡、坏疽、CREST综合征、红斑病(erythematosis)、甲癣、风湿病症，以及用于促进伤口愈合。

本发明的化合物还适于治疗泌尿系统病症，例如，良性前列腺综合征(BPS)、良性前列腺增生(BPH)、良性前列腺增大(BPE)、膀胱出口梗阻(BOO)、下泌尿道综合征(LUTS，包括猫泌尿综合征(FUS))；泌尿生殖系统病症，包括神经源性膀胱过度活动症(OAB)和(IC)、失禁(UI)(例如混合性尿失禁、急迫性尿失禁、压迫性尿失禁或溢流性尿失禁(MUI、UUI、SUI、OUI))、骨盆痛、男性和女性泌尿生殖系统器官的良性和恶性病症。

本发明的化合物还适于治疗和/或预防肾病，特别是急性和慢性肾功能不全以及急性和慢性肾衰竭。在本发明的上下文中，术语“肾功能不全”包括肾功能不全的急性和慢性表现，以及潜在或相关的肾脏病症如肾血流灌注不足、透析时低血压、梗阻性尿路病、肾小球病、肾小球肾炎、急性肾小球肾炎、肾小球硬化症、肾小管间质疾病，肾病病症如原发性和先天性肾病、肾炎、免疫性肾病如肾移植排斥和免疫复合物诱导的肾病、有毒物质诱导的肾病、造影剂诱导的肾病、糖尿病和非糖尿病肾病、肾盂肾炎、肾囊肿、肾硬化、高血压性肾硬化以及肾病综合征，所述肾病综合征可具有以下诊断特征，例如肌酸酐和/或水排泄的异常减少，尿素、氮、钾和/或肌酸酐的血液浓度异常升高，肾脏酶(例如谷酰基合成酶)的活性改变，尿液渗透压或尿量的改变，微量清蛋白尿的增加，大量清蛋白尿的增加，肾小球和小动脉的损害，肾小管扩张，高磷酸盐血症和/或需要透析。本发明还包括本发明的化合物用于治疗和/或预防肾功能不全后遗症的用途，例如肺水肿、心力衰竭、尿毒症、贫血、电解质紊乱(例如高钾血症、低钠血症)以及骨代谢和碳水化合物代谢紊乱。

此外，本发明的化合物还适于治疗和/或预防哮喘病症、肺动脉高血压(PAH)和其他形式的肺高血压(PH)，所述其他形式的肺高血压包括与左心疾病、HIV、镰状细胞贫血、血栓栓塞(CTEPH)、结节病、COPD或肺纤维化相关的肺高血压；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；急性呼吸窘迫综合征(ARDS)；急性肺损伤(ALI)；α-1-抗胰蛋白酶缺乏(AATD)；肺纤维化；肺气肿(例如香烟烟雾诱导的肺气肿)和囊性纤维化(CF)。

本发明描述的化合物也是用于控制以NO/cGMP系统紊乱为特征的中枢神经系统病症的活性成分。它们特别适于在认知损伤后提高知觉、注意力、学习或记忆力，所述认知损伤例如特别是伴随状况/疾病/综合征发生的认知损伤，如轻度认知损伤、年龄相关的学习和记忆力减退、年龄相关的记忆丧失、血管性痴呆、颅脑创伤、中风、中风后发生的痴呆(中风后痴呆)、创伤后颅脑创伤、一般性注意力集中障碍、具有学习和记忆力问题的儿童的注意力集中障碍、阿尔茨海默病、路易体痴呆、伴随着额叶退化的痴呆(包括皮克氏综合征、帕金森病、进行性核性麻痹)、伴随着皮质基底退化的痴呆、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、亨廷顿氏舞蹈病、脱髓鞘作用、多发性硬化症、丘脑退化、克-雅病痴呆(Creutzfeldt-Jakobdementia)、HIV痴呆、伴随着痴呆的精神分裂症或科尔萨科夫氏精神病。它们还适于治疗和/或预防中枢神经系统病症如焦虑、紧张和抑郁状态，CNS相关的性功能障碍和睡眠障碍，以及适于控制食物、兴奋剂和成瘾物质的摄取的病理性紊乱。

此外，本发明的化合物还适于控制脑血流量并是控制偏头痛的有效药剂。它们还适于预防和控制脑梗塞后遗症(脑中风)，如中风、脑缺血和颅脑创伤。本发明的化合物同样可用于控制疼痛和耳鸣状况。

此外，本发明的化合物有抗炎作用，并因此可用做治疗和/或预防以下疾病的抗炎药剂：败血症(SIRS)、多器官衰竭(MODS、MOF)、肾的炎症性病症、慢性肠炎(IBD、克罗恩氏病、UC)、胰腺炎、腹膜炎、风湿病症、炎症性皮肤病症和炎症性眼病症。

此外，本发明的化合物还可用于治疗和/或预防自身免疫性疾病。

本发明的化合物还适于治疗和/或预防内部器官(例如肺、心脏、肾、骨髓以及特别是肝)的纤维化病症，以及皮肤纤维化和眼的纤维化病症。在本发明的上下文中，术语纤维化病症特别包括以下术语：肝纤维化、肝硬化、肺纤维化、心内膜心肌纤维化、肾病、肾小球肾炎、间质性肾纤维化、由糖尿病引起的纤维化损伤、骨髓纤维化及类似的纤维化病症、硬皮病、硬斑病、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕(还有手术后的肥厚性瘢痕)、痣、糖尿病视网膜病、增生性玻璃体视网膜病变和结缔组织病症(例如结节病)。

本发明的化合物还适于控制术后瘢痕，例如由青光眼手术导致的瘢痕。

本发明的化合物还可在美容方面用于老化和角质化皮肤。

此外，本发明的化合物适于治疗和/或预防肝炎、肿瘤、骨质疏松症、青光眼和胃轻瘫。

本发明还提供本发明的化合物用于治疗和/或预防病症、尤其是上述病症的用途。

本发明还提供本发明的化合物用于治疗和/或预防心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾功能不全、血栓栓塞病症、纤维化病症和动脉硬化的用途。

本发明还提供本发明的化合物，其用于治疗和/或预防心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾功能不全、血栓栓塞病症、纤维化病症和动脉硬化的方法中。

本发明还提供本发明的化合物用于制备用于治疗和/或预防病症、尤其是上述病症的药物的用途。

本发明还提供本发明的化合物用于制备用于治疗和/或预防心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾功能不全、血栓栓塞病症、纤维化病症和动脉硬化的药物的用途。

本发明还提供一种使用有效量的至少一种本发明的化合物来治疗和/或预防病症、特别是上述病症的方法。

本发明还提供一种使用有效量的至少一种本发明的化合物来治疗和/或预防心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾功能不全、血栓栓塞病症、纤维化病症和动脉硬化的方法。

本发明的化合物可以单独使用或——如果需要——可与其他活性化合物结合使用。本发明还提供包含至少一种本发明的化合物和一种或多种其他活性化合物的药物，其尤其是用于上述病症的治疗和/或预防。适于结合的活性成分的优选实例包括：

有机硝酸盐和NO供体，例如硝普钠、硝化甘油、单硝酸异山梨酯、二硝酸异山梨酯、吗多明(molsidomine)或SIN-1以及吸入性NO；

抑制环一磷酸鸟苷(cGMP)分解的化合物，例如磷酸二酯酶(PDE)1、2和/或5的抑制剂，尤其是PDE 5抑制剂如西地那非(sildenafil)、伐地那非(vardenafil)和他达拉非(tadalafil)；

抗血栓形成剂，例如并优选选自血小板聚集抑制剂、抗凝血剂或致纤溶作用物质；

降血压的活性化合物，例如并优选选自钙拮抗剂、血管紧张素AII拮抗剂、ACE抑制剂、内皮素拮抗剂、肾素抑制剂、α-受体阻断剂、β-受体阻断剂、盐皮质激素受体拮抗剂，以及利尿剂；和/或

改变脂类代谢的活性化合物，例如并优选选自甲状腺受体激动剂，胆固醇合成抑制剂(例如并优选HMG-CoA还原酶抑制剂或鲨烯合成抑制剂)，ACAT抑制剂，CETP抑制剂，MTP抑制剂，PPAR-α、PPAR-γ和/或PPAR-δ激动剂，胆固醇吸收抑制剂，脂肪酶抑制剂，聚合胆汁酸吸附剂，胆汁酸再吸收抑制剂和脂蛋白(a)拮抗剂。

抗血栓形成剂优选理解为意指选自以下的化合物：血小板聚集抑制剂、抗凝血剂或致纤溶作用物质。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与血小板聚集抑制剂结合给药，所述血小板聚集抑制剂例如并优选阿司匹林、氯吡格雷(clopidogrel)、噻氯匹定(ticlopidine)或双嘧达莫(dipyridamole)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与凝血酶抑制剂结合给药，所述凝血酶抑制剂例如并优选希美加群(ximelagatran)、达比加群(dabigatran)、美拉加群(melagatran)、比伐卢定(bivalirudin)或克赛(clexane)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与GPIIb/IIIa拮抗剂结合给药，所述GPIIb/IIIa拮抗剂例如并优选替罗非班(tirofiban)或阿昔单抗(abciximab)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与Xa因子抑制剂结合给药，所述Xa因子抑制剂例如并优选利伐沙班(rivaroxaban)(BAY 59-7939)、DU-176b、阿哌沙班(apixaban)、奥米沙班(otamixaban)、非德沙班(fidexaban)、雷扎沙班(razaxaban)、磺达肝素(fondaparinux)、艾卓肝素(idraparinux)、PMD-3112、YM-150、KFA-1982、EMD-503982、MCM-17、MLN-1021、DX 9065a、DPC 906、JTV 803、SSR-126512或SSR-128428。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与肝素或具有低分子量(LMW)的肝素衍生物结合给药。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与维生素K拮抗剂(例如并优选香豆素)结合给药。

降血压剂优选理解为意指选自以下的化合物：钙拮抗剂、血管紧张素AII拮抗剂、ACE抑制剂、内皮素拮抗剂、肾素抑制剂、α-受体阻断剂、β-受体阻断剂、盐皮质激素受体拮抗剂和利尿剂。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与钙拮抗剂结合给药，所述钙拮抗剂例如并优选硝苯地平(nifedipine)、氨氯地平(amlodipine)、维拉帕米(verapamil)或地尔硫卓(diltiazem)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与α-1-受体阻断剂结合给药，所述α-1-受体阻断剂例如并优选哌唑嗪(prazosin)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与β-受体阻断剂结合给药，所述β-受体阻断剂例如并优选普萘洛尔(propranolol)、阿替洛尔(atenolol)、噻吗洛尔(timolol)、吲哚洛尔(pindolol)、阿普洛尔(alprenolol)、氧烯洛尔(oxprenolol)、喷布洛尔(penbutolol)、布拉洛尔(bupranolol)、美替洛尔(metipranolol)、纳多洛尔(nadolol)、甲吲洛尔(mepindolol)、卡拉洛尔(carazalol)、索他洛尔(sotalol)、美托洛尔(metoprolol)、倍他洛尔(betaxolol)、塞利洛尔(celiprolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡替洛尔(carteolol)、艾司洛尔(esmolol)、拉贝洛尔(labetalol)、卡维地洛(carvedilol)、阿达洛尔(adaprolol)、兰地洛尔(landiolol)、奈必洛尔(nebivolol)、依泮洛尔(epanolol)或布新洛尔(bucindolol)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与血管紧张素AII拮抗剂结合给药，所述血管紧张素AII拮抗剂例如并优选氯沙坦(losartan)、坎地沙坦(candesartan)、缬沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)或恩布沙坦(embursatan)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与ACE抑制剂结合给药，所述ACE抑制剂例如并优选依那普利(enalapril)、卡托普利(captopril)、赖诺普利(lisinopril)、雷米普利(ramipril)、地拉普利(delapril)、福辛普利(fosinopril)、奎诺普利(quinopril)、培哚普利(perindopril)或川多普利(trandopril)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与内皮素拮抗剂结合给药，所述内皮素拮抗剂例如并优选波生坦(bosentan)、达卢生坦(darusentan)、安立生坦(ambrisentan)或西他生坦(sitaxsentan)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与肾素抑制剂结合给药，所述肾素抑制剂例如并优选阿利吉仑(aliskiren)、SPP-600或SPP-800。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与盐皮质激素受体拮抗剂结合给药，所述盐皮质激素受体拮抗剂例如并优选螺内酯(spironolactone)或依普利酮(eplerenone)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与以下物质结合给药：袢利尿剂，例如呋塞米(furosemide)、托拉塞米(torasemide)、布美他尼(bumetanide)和吡咯他尼(piretanide)；保钾利尿剂，例如阿米洛利(amiloride)和氨苯蝶啶(triamterene)；醛固酮拮抗剂，例如螺内酯、坎利酸钾(potassium canrenoate)和依普利酮(eplerenone)；以及噻嗪类利尿剂例如氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、氯噻酮(chlorthalidone)、希帕胺(xipamide)和吲达帕胺(indapamide)。

脂类代谢调节剂优选理解为意指选自以下的化合物：CETP抑制剂，甲状腺受体激动剂，胆固醇合成抑制剂如HMG-CoA还原酶抑制剂或鲨烯合成抑制剂，ACAT抑制剂，MTP抑制剂，PPAR-α、PPAR-γ和/或PPAR-δ激动剂，胆固醇吸收抑制剂，聚合胆汁酸吸附剂，胆汁酸再吸收抑制剂，脂肪酶抑制剂和脂蛋白(a)拮抗剂。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与CETP抑制剂结合给药，所述CETP抑制剂例如并优选达塞曲匹(dalcetrapib)、BAY60-5521、安塞曲匹(anacetrapib)或CETP疫苗(CETi-1)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与甲状腺受体激动剂结合给药，所述甲状腺受体激动剂例如并优选D-甲状腺素、3,5,3'-三碘甲状腺氨酸(T3)、CGS23425或阿昔替罗(axitirome)(CGS26214)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与来自他汀类的HMG-CoA还原酶抑制剂结合给药，所述来自他汀类的HMG-CoA还原酶抑制剂例如并优选洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、罗舒伐他汀(rosuvastatin)或匹伐他汀(pitavastatin)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与鲨烯合成抑制剂结合给药，所述鲨烯合成抑制剂例如并优选BMS-188494或TAK-475。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与ACAT抑制剂结合给药，所述ACAT抑制剂例如并优选阿伐麦布(avasimibe)、甲亚油酰胺(melinamide)、帕替麦布(pactimibe)、依鲁麦布(eflucimibe)或SMP-797。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与MTP抑制剂结合给药，所述MTP抑制剂例如并优选英普他派(implitapide)、BMS-201038、R-103757或JTT-130。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与PPAR-γ激动剂结合给药，所述PPAR-γ激动剂例如并优选吡格列酮(pioglitazone)或罗格列酮(rosiglitazone)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与PPAR-δ激动剂结合给药，所述PPAR-δ激动剂例如并优选GW 501516或BAY68-5042。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与胆固醇吸收抑制剂结合给药，所述胆固醇吸收抑制剂例如并优选依泽替米贝(ezetimibe)、替奎安(tiqueside)或帕马苷(pamaqueside)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与脂肪酶抑制剂结合给药，所述脂肪酶抑制剂例如并优选奥利司他(orlistat)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与聚合胆汁酸吸附剂结合给药，所述聚合胆汁酸吸附剂例如并优选考来烯胺(cholestyramine)、考来替泊(colestipol)、考来维仑(colesolvam)、考来胶(CholestaGel)或考来替兰(colestimide)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与胆汁酸再吸收抑制剂结合给药，所述胆汁酸再吸收抑制剂例如并优选ASBT(＝IBAT)抑制剂，例如AZD-7806、S-8921、AK-105、BARI-1741、SC-435或SC-635。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与脂蛋白(a)拮抗剂结合给药，所述脂蛋白(a)拮抗剂例如并优选gemcabene calcium(CI-1027)或烟酸。

本发明还提供包含至少一种本发明的化合物、通常连同一种或多种惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂的药物，以及其用于上述目的的用途。

本发明的化合物可系统地和/或局部地作用。为此目的，其可以合适的方式给药，例如通过口服、肠胃外、肺、鼻、舌下、舌、颊、直肠、真皮、经皮、结膜或耳的途径给药，或作为植入物或支架给药。

本发明的化合物可以适于这些给药途径的给药形式给药。

用于口服给药的合适的给药形式为根据现有技术起作用并且快速和/或以缓和的方式释放本发明的化合物并且含有结晶和/或无定形和/或溶解形式的本发明的化合物的给药形式，例如片剂(未包衣或包衣片剂，例如具有控制本发明化合物的释放的抗胃液的包衣或延迟溶解的包衣或不溶的包衣)、在口腔中迅速崩解的片剂或薄膜/扁剂(oblate)、薄膜/冻干剂、胶囊剂(例如硬明胶胶囊剂或软明胶胶囊剂)、糖衣片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、乳剂、悬浮剂、气雾剂或溶液剂。

肠胃外给药可在避开吸收步骤的情况下进行(例如通过静脉内、动脉内、心内、椎管内或腰髓内的途径)或在包括吸收的情况下进行(例如通过肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内的途径)。适于肠胃外给药的给药形式包括以溶液剂、悬浮剂、乳剂、冻干剂或无菌粉剂形式注射和输液的制剂。

对于其他的给药途径，合适的实例为可吸入药物形式(包括粉末吸入剂、雾化剂)、滴鼻剂、溶液剂或喷雾剂；用于舌、舌下或颊给药的片剂、薄膜/扁剂或胶囊剂；栓剂；耳用或眼用制剂；阴道胶囊剂；水性悬浮剂(洗剂、振荡合剂(shaking mixture))、亲脂性悬浮剂；软膏剂；乳膏(cream)；经皮治疗系统(例如贴剂)；乳剂；糊剂；泡沫剂；洒粉剂(sprinklingpowder)；植入物或支架。

优选口服或肠胃外给药，尤其是口服给药。

本发明的化合物可转化成所提及的给药形式。这可用本身已知的方式通过与惰性的、无毒的、药学上合适的助剂混合来完成。这些赋形剂包括载体(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂和分散剂或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧脱水山梨糖醇油酸酯)、粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成聚合物和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，例如抗坏血酸)、着色剂(例如无机颜料，例如氧化铁)以及调味剂(flavour)和/或气味矫正剂(odour correctant)。

总的来说，已发现，有利的是，在肠胃外给药的情况下，为达到有效的结果，给药量为约0.001至1mg/kg体重，优选约0.01至0.5mg/kg体重。在口服给药的情况下，剂量为约0.001至2mg/kg体重，优选约0.001至1mg/kg体重。

然而，在一些情况下，可能需要偏离所述量，具体随着体重、给药途径、对活性化合物的个体响应、制剂的性质以及给药时间或给药间隔变化。因此，在一些情况下，小于上述最小量可能是足够的，而在其他情况下，必须超过所提及的上限。在更大量给药的情况下，将它们分成一天内的几个单独的剂量是可取的。

以下工作实施例说明了本发明。本发明不限于所述实施例。

除非另有说明，以下试验和实施例中的百分比为重量百分比；份数为重量份数。液体/液体溶液的溶剂比、稀释比和浓度数据在每种情况下基于体积计。

A.实施例

缩写和首字母缩略词：

LC/MS和HPLC方法：

方法1(LC-MS)：

仪器：具有Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：ThermoHypersil GOLD 1.9μ50×1mm；流动相A：1l水+0.5ml50％的甲酸，流动相B：1l乙腈+0.5ml50％浓度的甲酸；梯度：0.0min90％A→0.1min 90％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；柱温箱：50℃；流速：0.33ml/min；UV检测：210nm。

方法2(LC-MS)：

仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC系统；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ50×1mm；流动相A：1l水+0.25ml 99％的甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A；柱温箱：50℃；流速：0.40ml/min；UV检测：210-400nm。

方法3(LC-MS)：

仪器：具有Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：ThermoHypersil GOLD 1.9μ50×1mm；流动相A：1l水+0.5ml50％的甲酸，流动相B：1l乙腈+0.5ml50％浓度的甲酸；梯度：0.0min97％A→0.5min 97％A→3.2min 5％A→4.0min 5％A；柱温箱：50℃；流速：0.3ml/min；UV检测：210nm。

方法4(LC-MS)：

MS仪器：Waters(Micromass)QM；HPLC仪器：Agilent 1100系列；柱：AgilentZORBAX Extend-C18 3.0×50mm 3.5微米；流动相A：1l水+0.01mol碳酸铵，流动相B：1l乙腈；梯度：0.0min 98％A→0.2min 98％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；柱温箱：40℃；流速：1.75ml/min；UV检测：210nm。

方法5(LC-MS)：

仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC系统；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ30×2mm；流动相A：1l水+0.25ml 99％的甲酸，流动相B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A；柱温箱：50℃；流速：0.60ml/min；UV检测：208-400nm。

方法6(GC-MS)：

仪器：Thermo Scientific DSQII，Thermo Scientific Trace GC Ultra；柱：Restek RTX-35MS，15m×200μm×0.33μm；氦气恒定流速：1.20ml/min；柱温箱：60℃；入口：220℃；梯度：60℃，30℃/min→300℃(保持3.33min)。

在以下段落中报告的¹H NMR谱中的质子信号的多重性代表在每种情况下观察到的信号形式，并未考虑任何高阶信号现象。在所有¹H NMR谱数据中，化学位移δ以ppm表示。

此外，起始物料、中间体和工作实例可以水合物的形式存在。没有水含量的定量测定。在某些情况下，水合物可影响¹H NMR谱，并且可能移动和/或显著加宽¹H NMR中的水信号。

在¹H NMR谱中，化学体系“2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶”的甲基以单峰形式出现(通常在DMSO-d₆中并且在2.40-2.60ppm的范围内)且本身是可清楚识别的，被溶剂信号重叠或完全在溶剂的信号下。在所述¹H NMR谱中，可以假定存在该信号。

当本发明的化合物用制备型HPLC通过上述方法(其中洗脱剂包含添加剂，例如三氟乙酸、甲酸或氨)进行纯化时，如果本发明的化合物包含足够碱性或酸性的官能度，则本发明的化合物可以盐形式(例如作为三氟乙酸盐、甲酸盐或铵盐)获得。这样的盐可通过本领域技术人员已知的各种方法转化成相应的游离碱或酸。

在下文所述的本发明的合成中间体和工作实例的情况下，以相应的碱或酸的盐的形式说明的任何化合物通常是准确化学计量组成未知的盐，如通过各自的制备和/或纯化方法获得。因此，在这类盐的情况下，除非更具体地说明，名称和结构式的附加项，如“盐酸盐”、“三氟乙酸盐”、“钠盐”或“x HCl”、“x CF₃COOH”、“x Na⁺”不应理解为具有化学计量意义，而是对其中存在的成盐组分仅具有描述特征。

如果合成中间体或工作实例或其盐通过所述制备和/或纯化方法以化学计量组成未知的溶剂合物例如水合物的形式(如果它们具有确定类型)获得，则这相应地适用。

起始物料和中间体：

实施例1A

5-氯-2-硝基吡啶-3-醇

在冰冷却下，将30g 5-氯吡啶-3-醇(232mmol，1当量)溶解于228ml浓硫酸中，并在0℃下缓慢加入24ml浓硝酸。将反应加热至室温，搅拌过夜，然后搅拌加入到冰/水混合物中并再搅拌30min。将固体滤出，用冷水洗涤并风干。得到33g(理论值的82％)标题化合物，其无需进一步纯化即用于下一反应。

LC-MS(方法2):R_t＝0.60min

MS(ESneg):m/z＝172.9/174.9(M-H)^-

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝7.71(d,1H)；8.10(d,1H)；12.14(br.1H)。

实施例2A

5-氯-3-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-硝基吡啶

首先将33g 5-氯-2-硝基吡啶-3-醇(实施例1A；189mmol，1当量)和61.6g碳酸铯(189mmol，1当量)加入到528ml DMF中，加入40.4g 2,6-二氟苄溴(189mmol，1当量)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物搅拌加入到水/1N盐酸水溶液中。将固体滤出，用水洗涤并风干。得到54.9g(理论值的97％)标题化合物。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝5.46(s,2H)；7.22(t,2H)；7.58(q,1H)；8.28(d,1H)；8.47(d,1H)。

实施例3A

5-氯-3-[(2,6-二氟苄基)氧基]吡啶-2-胺

首先将59.7g 5-氯-3-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-硝基吡啶(实施例2A；199mmol，1当量)加入到600ml乙醇中，加入34.4g铁粉(616mmol，3.1当量)，并将混合物加热至回流。缓慢滴加152ml浓盐酸，并将混合物在回流下再沸腾30min。将反应混合物冷却并搅拌加入到冰/水混合物中。使用乙酸钠将所得混合物调节至pH 5。将固体滤出，用水洗涤并风干，然后在减压下在50℃下干燥。得到52.7g(理论值的98％)标题化合物。

LC-MS(方法2):R_t＝0.93min

MS(ESpos):m/z＝271.1/273.1(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝5.14(s,2H)；5.82(br.s,2H)；7.20(t,2H)；7.35(d,1H)；7.55(q,1H)；7.56(d,1H)。

实施例4A

6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯

首先将40g 5-氯-3-[(2,6-二氟苄基)氧基]吡啶-2-胺(实施例3A；147.8mmol，1当量)加入到800ml乙醇中，加入30g粉末状分子筛和128g 2-氯乙酰乙酸乙酯(739mmol，5当量)，并将混合物在回流下加热过夜。将反应混合物浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯中并过滤。将乙酸乙酯相用水洗涤，干燥，过滤并浓缩。得到44g(理论值的78％)标题化合物。

LC-MS(方法2):R_t＝1.27min

MS(ESpos):m/z＝381.2/383.2(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.36(t,3H)；2.54(s,3H；被DMSO信号隐藏)；4.37(q,2H)；5.36(s,2H)；7.26(t,2H)；7.38(d,1H)；7.62(q,1H)；8.92(d,1H)。

实施例5A

6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸

将44g 6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯(实施例4A；115mmol，1当量)溶于550ml THF和700ml甲醇中，加入13.8g氢氧化锂(溶于150ml水中；577mmol，5当量)，并将混合物在室温下搅拌过夜。加入1N盐酸水溶液，并将混合物在减压下浓缩。将所得到的固体滤出并用水洗涤。得到34g(理论值的84％)标题化合物。

LC-MS(方法1):R_t＝1.03min

MS(ESpos):m/z＝353.0/355.0(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝2.54(s,3H；被DMSO信号重叠)；5.36(s,2H)；7.26(t,2H)；7.34(d,1H)；7.61(q,1H)；8.99(d,1H)；13.36(br.s,1H)。

实施例6A

rac-2-氨基-3-氟-2-甲基丙腈

标题化合物由以下文献获知：

1)McConathy,J.等人，Journal of Medicinal Chemistry 2002，45，2240-2249。

2)Bergmann,E.D.等人，Journal of the Chemical Society 1963，3462-3463。

其他方法：

首先将1.0g(0.94ml；13.15mmol)氟丙酮加入到11ml 2N氨的甲醇溶液中。在室温下，依次加入721mg(14.72mmol)氰化钠和788mg(14.72mmol)氯化铵，并将混合物在回流下搅拌2小时。将反应溶液冷却，过滤并用二氯甲烷洗涤。固体从母液中沉淀出来，将其滤出。将二氯甲烷和甲醇在标准压力下从母液中蒸馏出。得到1.32g目标化合物(理论值的89％，纯度约90％)。将产物无需进一步纯化即用于下一反应。

GC-MS(方法6):R_t＝1.64min

MS(EIpos):m/z＝87(M-CH₃)⁺

实施例7A

rac-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯

向于29ml THF/水(9/1)中的来自实施例6A的1.34g(11.83mmol，纯度约90％)rac-2-氨基-3-氟-2-甲基丙腈中加入5.07g(36.67mmol)碳酸钾。在0℃下，缓慢滴加1.69ml(11.83mmol)氯甲酸苄酯，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂轻轻倒出，并将水相用THF萃取两次，然后将THF轻轻倒出。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯梯度)分离，并将产物级分在旋转蒸发仪上浓缩。得到1.89g目标化合物(理论值的66％，纯度97％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.89min

MS(ESpos):m/z＝237(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.58(d,3H),4.47-4.78(m,2H),5.10(s,2H),7.30-7.43(m,5H),8.34(br.s,1H)。

实施例8A

ent-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例7A的3.0g(12.69mmol)rac-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯通过制备型分离在手性相[柱：Daicel Chiralpak AY-H，5μm，250×20mm，流动相：80％异己烷，20％异丙醇，流速：15ml/min；40℃，检测：220nm]上分离成对映异构体。

对映异构体A：产量：1.18g(>99％ee)

R_t＝5.37min[Daicel Chiralcel AY-H，5μm，250×4.6mm；流动相：70％异己烷，30％2-丙醇；流速1.0ml/min；40℃；检测：220nm]。

实施例9A

ent-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

对映异构体B：产量：1.18g(>99％ee)

R_t＝6.25min[Daicel Chiralcel AY-H，5μm，250×4.6mm；流动相：70％异己烷，30％2-丙醇；流速1.0ml/min；40℃；检测：220nm]。

实施例10A

rac-(1-氨基-3-氟-2-甲基丙-2-基)氨基甲酸苄酯

在氩气下，将1.55g雷尼镍(水性浆液)加入到于14.9ml 7N氨的甲醇溶液中的来自实施例7A的1.2g(5.08mmol)rac-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯中，并将混合物在约25巴的氢气压力和室温下氢化24小时。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇洗涤并浓缩。得到1.2g目标化合物(理论值的98％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.49min

MS(ESpos):m/z＝241(M+H)⁺

实施例11A

ent-(1-氨基-3-氟-2-甲基丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

在氩气下，将1.55g雷尼镍(水性浆液)加入到于14.9ml 7N氨的甲醇溶液中的来自实施例8A的1.2g(5.08mmol)ent-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)中，并将混合物在约25巴的氢气压力和室温下氢化24小时。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇洗涤并浓缩。得到700mg目标化合物(理论值的57％，纯度约85％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.52min

MS(ESpos):m/z＝241(M+H)⁺

实施例12A

ent-(1-氨基-3-氟-2-甲基丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

在氩气下，将1.55g雷尼镍(水性浆液)加入到于14.9ml 7N氨的甲醇溶液中的来自实施例9A的1.2g(5.08mmol)ent-(2-氰基-1-氟丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)中，并将混合物在约25巴的氢气压力和室温下氢化24小时。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇洗涤并浓缩。得到1.2g目标化合物(理论值的98％，纯度约85％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.50min

MS(ESpos):m/z＝241(M+H)⁺

实施例13A

rac-2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊腈

首先将8.0g(57.1mmol)5,5,5-三氟戊-2-酮[CAS登记号：1341078-97-4；市售，或者甲基酮可通过本领域技术人员已知的文献方法制备，例如a)由4,4,4-三氟丁醛根据Y.Bai等人Angewandte Chemie2012，51，4112-4116；K.Hiroi等人Synlett 2001，263-265；K.Mikami等人1982Chemistry Letters，1349-1352经两阶段制备；b)或由4,4,4-三氟丁酸根据A.A.Wube等人Bioorganic and Medicinal Chemistry 2011，19，567-579；G.M.Rubottom等人Journal of Organic Chemistry 1983，48，1550-1552；T.Chen等人Journal of Organic Chemistry 1996，61，4716-4719制备。产物可通过蒸馏或色谱法进行分离。]加入到47.8ml 2N氨的甲醇溶液中，在室温下加入3.69g(75.4mmol)氰化钠和4.03g(75.4mmol)氯化铵，并将混合物在回流下搅拌4小时。将反应混合物冷却，加入乙醚并将存在的固体滤出。将溶剂在标准压力下从滤液中蒸馏出。得到作为残余物的8.7g标题化合物(理论值的92％)，其无需进一步纯化即用于后续阶段中。

GC-MS(方法6):R_t＝1.90min

MS(ESpos):m/z＝151(M-CH₃)⁺

实施例14A

rac-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯

首先将来自实施例13A的8.7g(52.36mmol)rac-2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊腈加入到128ml四氢呋喃/水＝9/1中，并加入22.43g(162.3mmol)碳酸钾。在0℃下，缓慢滴加8.93g(52.36mmol)氯甲酸苄酯。然后将混合物在搅拌下逐渐温热至室温，并在室温下搅拌过夜。将上清液溶剂轻轻倒出，将残余物用四氢呋喃搅拌两次，每次使用100ml四氢呋喃，然后每次将上清液溶剂轻轻倒出。将合并的有机相浓缩，并将粗产物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯梯度9/1至4/1)纯化。得到11.14g标题化合物(理论值的68％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.01min

MS(ESpos):m/z＝301(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.58(s,3H),2.08-2.21(m,2H),2.24-2.52(m,2H),5.09(s,2H),7.29-7.41(m,5H),8.17(br.s,1H)。

实施例15A

ent-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例14A的11.14g rac-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯通过制备型分离在手性相[柱：Daicel Chiralpak AZ-H，5μm，SFC，250×50mm，流动相：94％二氧化碳，6％甲醇，流速：200ml/min，温度：38℃，压力：135巴；检测：210nm]上分离成对映异构体。

对映异构体A：4.12g(约79％ee)

R_t＝1.60min[SFC，Daicel Chiralpak AZ-H，250×4.6mm，5μm，流动相：90％二氧化碳，10％甲醇，流速：3ml/min，温度：30℃，检测：220nm]。

LC-MS(方法2):R_t＝1.01min

MS(ESpos):m/z＝301(M+H)⁺

实施例16A

ent-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

对映异构体B：4.54g(约70％ee，纯度约89％)

R_t＝1.91min[SFC，Daicel Chiralpak AZ-H，250×4.6mm，5μm，流动相：90％二氧化碳，10％甲醇，流速：3ml/min，温度：30℃，检测：220nm]。

LC-MS(方法2):R_t＝1.01min

MS(ESpos):m/z＝301(M+H)⁺

实施例17A

ent-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例15A的4.12g(13.17mmol)ent-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)溶于39ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氩气下加入4g雷尼镍(50％的水性浆液)。将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化过夜。再加入1g雷尼镍(50％的水性浆液)，并将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化5h。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇冲洗并浓缩。得到3.35g(理论值的56％；纯度约67％)目标化合物，其无需进一步纯化即用于后续阶段中。

LC-MS(方法5):R_t＝1.68min

MS(ESpos):m/z＝305(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.13(s,3H),1.40(br.s,2H),1.70-1.80(m,1H),1.83-1.95(m,1H),2.08-2.2(m,2H),4.98(s,2H),6.85(br.s,1H),7.28-7.41(m,5H)。

实施例18A

ent-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

将来自实施例16A的4.54g(13.45mmol；纯度约89％)ent-(2-氰基-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)溶于39ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氩气下加入5g雷尼镍(50％的水性浆液)。将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化3h。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇冲洗并浓缩。得到4.20g(理论值的97％；纯度约95％)目标化合物，其无需进一步纯化即用于后续阶段中。

LC-MS(方法4):R_t＝2.19min

MS(ESpos):m/z＝305(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.13(s,3H),1.40(br.s,2H),1.69-1.80(m,1H),1.83-1.96(m,1H),2.07-2.22(m,2H),4.98(s,2H),6.85(br.s,1H),7.27-7.40(m,5H)。

实施例19A

rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4-氟丁腈

首先将16.5g(74.91mmol)[(二苯基亚甲基)氨基]乙腈加入到495ml无水THF中，并在氩气下，在-78℃下，加入35.96ml(89.89mmol)正丁基锂(2.5N，在己烷中)，并将混合物在-78℃下搅拌15min。随后，将反应溶液升温至0℃。将13.03g(74.91mmol)1-碘-2-氟乙烷滴加至反应溶液中，将其在0℃下再搅拌15min。在0℃下，向反应溶液中首先加入水，然后加入乙酸乙酯，并将混合物用饱和氯化钠水溶液洗涤。将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：二氯甲烷/环己烷＝1/1至2/1)纯化。得到18.7g目标化合物(理论值的80％，纯度85％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.42min

MS(ESpos):m/z＝267(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝2.13-2.41(m,2H),4.40(t,1H),4.43-4.71(m,2H),7.25-7.30(m,2H),7.33-7.63(m,8H)。

实施例20A

rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4,4-二氟丁腈

首先将18g(81.72mmol)[(二苯基亚甲基)氨基]乙腈加入到500ml无水THF中，并在氩气下，在-78℃下，加入39.22ml(98.06mmol)正丁基锂(2.5N，在己烷中)，并将混合物在-78℃下搅拌15min。随后，将反应溶液升温至0℃。将17.25g(89.89mmol)1,1-二氟-2-碘乙烷滴加至反应溶液中，将其在0℃下再搅拌15min。在0℃下，向反应溶液中首先加入水，然后加入乙酸乙酯，并将混合物用半饱和氯化钠水溶液洗涤三次。将合并的水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：二氯甲烷/环己烷＝1/1)纯化。得到13.57g目标化合物(理论值的49％，纯度84％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.48min

MS(ESpos):m/z＝285(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝2.53-2.61(m,2H；与溶剂峰部分叠加),4.50(t,1H),6.08-6.41(m,1H),7.23-7.33(m,2H),7.38-7.47(m,2H),7.49-7.67(m,6H)。

实施例21A

rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-5-氟戊腈

首先将18g(81.72mmol)[(二苯基亚甲基)氨基]乙腈加入到500ml无水THF中，并在氩气下，在-78℃下，加入39.22ml(98.06mmol)正丁基锂(2.5N，在己烷中)，并将混合物在-78℃下再搅拌15min。随后，将反应溶液升温至0℃并将16.9g(89.89mmol)1-氟-3-碘丙烷滴加至反应溶液中，将其在0℃下再搅拌15min。在0℃下，加入水，然后加入乙酸乙酯，并将混合物用饱和氯化钠水溶液洗涤。将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：甲苯100％，用二氯甲烷/环己烷＝1/1至2/1再次纯化)纯化。得到16.73g目标化合物(理论值的73％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.50min

MS(ESpos):m/z＝281(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.66-1.85(m,2H),1.87-2.00(m,2H),4.26-4.41(m,2H),4.43-4.55(m,1H),7.20-7.33(m,2H),7.38-7.48(m,2H),7.48-7.63(m,6H)。

实施例22A

rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4-氟-2-甲基丁腈

在-78℃和氩气下，向来自实施例19A的19.94g(63.64mmol，85％纯度)rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4-氟丁腈于421ml无水THF中的初始进料中加入25.71ml(64.28mmol)正丁基锂(2.5N，在己烷中)，并将混合物在-78℃下再搅拌10min。随后，在-78℃下，将36.1g(254.57mmol)碘甲烷加入到反应溶液中。将反应混合物经4.5h逐渐升至0℃。在0℃下，首先加入水，然后加入乙酸乙酯，并将混合物用饱和氯化钠水溶液洗涤两次。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯＝15/1)纯化。得到17.2g目标化合物(理论值的78％，纯度81％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.46min

MS(ESpos):m/z＝281(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.65-1.67(s,3H),2.30-2.47(m,2H),4.55-4.84(m,2H),7.27-7.32(m,2H),7.37-7.42(m,2H),7.43-7.52(m,6H)。

实施例23A

rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4,4-二氟-2-甲基丁腈

在-78℃和氩气下，向来自实施例20A的13.07g(38.62mmol)rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4,4-二氟丁腈于255ml无水THF中的初始进料中加入15.6ml(39.0mmol)正丁基锂(2.5N，在己烷中)，并将混合物在-78℃下再搅拌10min。随后，在-78℃下，将22.6g(154.46mmol)碘甲烷加入到反应溶液中。将反应混合物经3.5h逐渐升至0℃。在0℃下，首先加入水，然后加入乙酸乙酯，并将混合物用饱和氯化钠水溶液洗涤两次。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯＝15/1)纯化。得到11.4g目标化合物(理论值的91％，纯度92％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.52min

MS(ESpos):m/z＝299(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.67(s,3H),2.55-2.77(m,2H),6.14-6.48(m,1H),7.28-7.34(m,2H),7.36-7.44(m,2H),7.44-7.54(m,6H)。

实施例24A

rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-5-氟-2-甲基戊腈

在-78℃和氩气下，向来自实施例21A的16.73g(59.68mmol)rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-5-氟戊腈于394ml无水THF中的初始进料中加入24.11ml(60.27mmol)正丁基锂(2.5N，在己烷中)，并将混合物在-78℃下再搅拌10min。随后，在-78℃下，将34.93g(238.70mmol)碘甲烷加入到反应溶液中。将反应混合物经4.5h逐渐升至0℃。在0℃下，首先加入水，然后加入乙酸乙酯，并将混合物用饱和氯化钠水溶液洗涤两次。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯＝15/1)纯化。得到18.94g目标化合物(理论值的95％，纯度88％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.55min

MS(ESpos):m/z＝295(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.62(s,3H),1.73-1.90(m,2H),1.94-2.03(m,1H),2.04-2.18(m,1H),4.47(t,1H),4.58(t,1H),7.23-7.33(m,2H),7.35-7.43(m,2H),7.44-7.56(m,6H)。

实施例25A

rac-2-氨基-4-氟-2-甲基丁腈盐酸盐

将来自实施例22A的17.45g(50.45mmol；81％纯度)rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4-氟-2-甲基丁腈溶于235.6ml四氢呋喃和9.1ml水中，加入111ml(55.46mmol)氯化氢溶液(0.5N，在乙醚中)并将混合物在室温下搅拌过夜。然后加入25.21ml(50.42mmol)氯化氢溶液(2N，在乙醚中)，并将混合物浓缩。将分离出的粗产物无需进一步纯化而直接进一步反应。

LC-MS(方法3):R_t＝0.22min

MS(ESpos):m/z＝117(M-HCl+H)⁺

实施例26A

rac-(2-氰基-4-氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯

首先将来自实施例25A的粗产物rac-2-氨基-4-氟-2-甲基丁腈盐酸盐加入到165ml四氢呋喃/水(1:1)中，并加入28.57g(206.71mmol)碳酸钾和9.46g(55.46mmol)氯甲酸苄酯。将反应混合物在室温下搅拌过夜。再将1.72g(10.1mmol)氯甲酸苄酯加入到反应中，并将混合物在室温下再搅拌2h。然后，进行相分离，并将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯梯度20/1至5/1)纯化。得到5.04g目标化合物(经两个步骤，理论值的38％，)。

LC-MS(方法3):R_t＝1.95min

MS(ESpos):m/z＝251(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.59(s,3H),2.20-2.43(m,2H),4.55(t,1H),4.67(t,1H),5.08(s,2H),7.28-7.45(m,5H),8.12(br.s,1H)。

实施例27A

rac-2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁腈盐酸盐

将来自实施例23A的10.84g(33.43mmol；92％纯度)rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-4,4-二氟-2-甲基丁腈溶于156ml四氢呋喃和6ml水中，加入73.5ml(36.77mmol)氯化氢溶液(0.5N，在乙醚中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将16.71ml(33.43mmol)氯化氢溶液(2N，在乙醚中)加入到反应溶液中，并将混合物浓缩。将分离出的粗产物无需进一步纯化而直接进一步反应。

LC-MS(方法3):R_t＝0.32min

MS(ESpos):m/z＝135(M-HCl+H)⁺

实施例28A

rac-(2-氰基-4,4-二氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯

首先将来自实施例27A的粗产物rac-2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁腈盐酸盐加入到109ml四氢呋喃/水(1:1)中，加入18.94g(137.06mmol)碳酸钾和6.27g(36.77mmol)氯甲酸苄酯，并将混合物在室温下搅拌过夜。再将1.14g(6.69mmol)氯甲酸苄酯加入到反应中，并将混合物在室温下再搅拌2h。然后进行相分离，并将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯梯度20/1至5/1)纯化。得到7.68g目标化合物(经两个步骤，理论值的61％，纯度71％)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.04min

MS(ESpos):m/z＝269(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.65(s,3H),2.51-2.65(m,2H),5.10(s,2H),6.08-6.41(m,1H),7.27-7.44(m,5H),8.24(br.s,1H)。

实施例29A

rac-2-氨基-5-氟-2-甲基戊腈盐酸盐

将来自实施例24A的18.94g(56.62mmol；88％纯度)rac-2-[(二苯基亚甲基)氨基]-5-氟-2-甲基戊腈溶于264.6ml四氢呋喃和10.2ml水中，加入124.6ml(62.28mmol)氯化氢溶液(0.5N，在乙醚中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后加入28.3ml(56.62mmol)氯化氢溶液(2N，在乙醚中)，并将混合物浓缩。将分离出的粗产物无需进一步纯化而直接进一步反应。

LC-MS(方法3):R_t＝0.25min

MS(ESpos):m/z＝131(M-HCl+H)⁺

实施例30A

rac-(2-氰基-5-氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯

首先将来自实施例29A的粗产物rac-2-氨基-5-氟-2-甲基戊腈盐酸盐加入到185ml四氢呋喃/水(1:1)中，加入32.09g(232.18mmol)碳酸钾和10.63g(62.29mmol)氯甲酸苄酯，并将混合物在室温下搅拌过夜。再将1.93g(11.33mmol)氯甲酸苄酯加入到反应中，并将混合物在室温下再搅拌2h。然后进行相分离，并将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(流动相：环己烷/乙酸乙酯梯度20/1至5/1)纯化。得到11.77g目标化合物(经两个阶段，理论值的72％，92％纯度)。

LC-MS(方法3):R_t＝2.03min

MS(ESpos):m/z＝265(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.55(s,3H),1.66-1.85(m,2H),1.86-2.04(m,2H),4.40(t,1H),4.52(t,1H),5.08(s,2H),7.28-7.44(m,5H),8.05(br.s,1H)。

实施例31A

ent-(2-氰基-4,4-二氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例28A的7.68g(20.33mmol，纯度71％)rac-(2-氰基-4,4-二氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯通过制备型分离在手性相[柱：Daicel Chiralpak AY-H，5μm，250×20mm，流动相：80％异己烷，20％异丙醇；流速：25ml/min；温度：22℃，检测210nm]上分离成对映异构体。

对映异构体A：产量：2.64g(>99％ee)

R_t＝6.67min[Chiralpak AY-H，5μm，250×4.6mm；流动相：80％异己烷，20％异丙醇；流速：3ml/min；检测：220nm]。

实施例32A

ent-(2-氰基-4,4-二氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

对映异构体B：产量：2.76g(93％ee)

R_t＝7.66min[Chiralpak AY-H，5μm，250×4.6mm；流动相：80％异己烷，20％异丙醇；流速：3ml/min；检测：220nm]。

实施例33A

ent-(2-氰基-5-氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例30A的11.77g(40.97mmol，纯度92％)rac-(2-氰基-5-氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯通过制备型分离在手性相[柱：SFC Daicel Chiralpak AZ-H，5μm，250×30mm，流动相：90％CO₂，10％甲醇，流速：100ml/min；温度：40℃，检测：210nm]上分离成对映异构体。

对映异构体A：产量：5.7g(>99％ee)

R_t＝1.76min[SFC Chiralpak AZ-3，3μm，50×4.6mm；流动相：CO₂/甲醇梯度(5％至60％甲醇)；流速：3ml/min；检测：220nm]。

实施例34A

ent-(2-氰基-5-氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

将来自实施例30A的11.77g(40.97mmol，纯度92％)rac-(2-氰基-5-氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯通过制备型分离在手性相[柱：SFC Daicel Chiralpak AZ-H，5μm，250×30mm，流动相：90％CO₂，10％甲醇，流速：100ml/min；温度：40℃，检测：210nm]上分离成对映异构体。

对映异构体B：产量：5.0g(>99％ee)

R_t＝1.97min[SFC Chiralpak AZ-3，3μm，50×4.6mm；流动相：CO₂/甲醇梯度(5％至60％甲醇)；流速：3ml/min；检测：220nm]。

实施例35A

ent-(1-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例31A的2.3g(8.57mmol)ent-(2-氰基-4,4-二氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)溶于75ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氩气下加入2.66g雷尼镍(50％的水性浆液)。将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化1.5h。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇和2N氨的甲醇溶液冲洗，并浓缩。得到2.23g目标化合物(理论值的94％)。

LC-MS(方法3):R_t＝1.48min

MS(ESpos):m/z＝273(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.19(s,3H),1.48(br.s,2H),2.08-2.40(m,2H),2.53-2.72(m,2H；与溶剂峰部分重叠),5.00(s,2H),5.90-6.23(m,1H),6.95(br.s,1H),7.25-7.41(m,5H)。

实施例36A

ent-(1-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

将来自实施例32A的2.76g(10.29mmol)ent-(2-氰基-4,4-二氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)溶于90ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氩气下加入3.19g雷尼镍(50％的水性浆液)。将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化1.5h。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇和2N氨的甲醇溶液冲洗，并浓缩。得到2.64g目标化合物(理论值的88％，纯度93％)。

LC-MS(方法3):R_t＝1.49min

MS(ESpos):m/z＝273(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.19(s,3H),1.48(br.s,2H),2.08-2.40(m,2H),2.53-2.73(m,2H；与溶剂峰部分重叠),5.00(s,2H),5.90-6.24(m,1H),6.95(br.s,1H),7.25-7.41(m,5H)。

实施例37A

ent-(1-氨基-5-氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)

将来自实施例33A的5.7g(21.57mmol)ent-(2-氰基-5-氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)溶于125ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氩气下加入6.68g雷尼镍(50％的水性浆液)。将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化4.5h。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇和2N氨的甲醇溶液冲洗，并浓缩。得到5.22g目标化合物(理论值的77％，纯度85％)。

LC-MS(方法3):R_t＝1.51min

MS(ESpos):m/z＝269(M+H)⁺

实施例38A

ent-(1-氨基-5-氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)

将来自实施例34A的5.0g(18.92mmol)ent-(2-氰基-5-氟戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)溶于110ml 7N氨的甲醇溶液中，并在氩气下加入5.86g雷尼镍(50％的水性浆液)。将反应混合物在高压釜中在20-30巴下氢化4.5h。将反应混合物过滤通过硅藻土，用甲醇和2N氨的甲醇溶液冲洗，并浓缩。得到4.6g目标化合物(理论值的84％，纯度93％)。

LC-MS(方法3):R_t＝1.47min

MS(ESpos):m/z＝269(M+H)⁺

实施例39A

rac-4-氟-2-甲基丁烷-1,2-二胺二盐酸盐

将来自实施例26A的1.00g(4.00mmol)rac-(2-氰基-4-氟丁-2-基)氨基甲酸苄酯溶于114ml乙醇/冰醋酸(1/1)中，并加入0.85g于活性碳上的钯(10％)。将反应混合物在高压釜中在30-50巴下氢化3h。将反应混合物过滤，将滤饼用乙醇冲洗，然后将滤液再次过滤通过微孔滤器。将滤液与10ml氯化氢溶液(2N，在乙醚中)混合，然后浓缩。得到1.04g目标化合物，其无需进一步纯化即用于后续阶段中。

LC-MS(方法3):R_t＝0.19min

MS(ESpos):m/z＝121(M-2HCl+H)⁺

实施例40A

ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-3-氟-2-甲基丙-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)

将来自实施例5A的150mg(0.43mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸溶于2.7ml DMF中，加入178mg(0.47mmol)HATU和0.22ml(1.28mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌20min。随后，加入来自实施例12A的133mg(0.47mmol，85％纯度)ent-(1-氨基-3-氟-2-甲基丙-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。得到216mg标题化合物(理论值的63％；纯度86％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.23min

MS(ESpos):m/z＝575(M-TFA+H)⁺

实施例41A

ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)

将来自实施例5A的150mg(0.43mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸溶于2.7ml DMF中，加入178mg(0.47mmol)HATU和0.22ml(1.28mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌20min。随后，加入来自实施例18A的150mg(0.47mmol，95％纯度)ent-(1-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。得到216mg标题化合物(理论值的79％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.31min

MS(ESpos):m/z＝639(M-TFA+H)⁺

实施例42A

ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5-氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体A)

将来自实施例5A的250mg(0.71mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸溶于2.36ml DMF中，加入350mg(0.92mmol)HATU和0.62ml(3.54mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌20min。随后，加入来自实施例37A的291mg(0.92mmol，85％纯度)ent-(1-氨基-5-氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)。30min后，加入水并将所得固体滤出并用水洗涤。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。得到397mg标题化合物(理论值的71％；纯度91％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.21min

MS(ESpos):m/z＝603(M-TFA+H)⁺

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.22(s,3H),1.52-1.75(m,3H),1.80-1.93(m,1H),2.53(s,3H；与溶剂峰叠加),3.49-3.61(m,2H),4.29-4.38(m,1H),4.39-4.51(m,1H),5.00(s,2H),5.37(s,2H),7.07-7.17(m,1H),7.20-7.38(m,8H),7.54-7.64(m,1H),7.90(t,1H),8.76(d,1H)。

实施例43A

ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5-氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)

将来自实施例5A的250mg(0.71mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸溶于2.36ml DMF中，加入350mg(0.92mmol)HATU和0.62ml(3.54mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌20min。随后，加入来自实施例38A的267mg(0.92mmol，93％纯度)ent-(1-氨基-5-氟-2-甲基戊-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)。30min后，加入水并将所得固体滤出并用水洗涤。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。得到328mg标题化合物(理论值的61％；纯度94％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.21min

MS(ESpos):m/z＝603(M-TFA+H)⁺

实施例44A

ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体A)

将来自实施例5A的250mg(0.71mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸溶于2.36ml DMF中，加入350mg(0.92mmol)HATU和0.62ml(3.54mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌20min。然后加入来自实施例35A的256mg(0.92mmol)ent-(1-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体A)。60min后，加入水并将所得固体滤出并用水洗涤。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。得到439mg标题化合物(理论值的86％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.22min

MS(ESpos):m/z＝607(M-TFA+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.29(s,3H),2.05-2.25(m,2H),2.53(s,3H；与溶剂峰重叠),3.54-3.62(m,2H；与溶剂峰重叠),5.01(s,2H),5.38(s,2H),5.98-6.29(m,1H),7.18-7.39(m,9H),7.54-7.64(m,1H),7.95(t,1H),8.74(d,1H)。

实施例45A

ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)

将来自实施例5A的250mg(0.71mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸溶于2.36ml DMF中，加入323mg(0.85mmol)HATU和0.62ml(3.54mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温下搅拌20min。然后加入来自实施例36A的246mg(0.85mmol，93％纯度)ent-(1-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基)氨基甲酸苄酯(对映异构体B)。30min后，加入水并将所得固体滤出并用水洗涤。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。得到431mg标题化合物(理论值的82％)。

LC-MS(方法2):R_t＝1.21min

MS(ESpos):m/z＝607(M-TFA+H)⁺

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.29(s,3H),2.06-2.24(m,2H),2.53(s,3H；与溶剂峰重叠),3.55-3.62(m,2H),5.01(s,2H),5.38(s,2H),6.00-6.29(m,1H),7.19-7.39(m,9H),7.55-7.64(m,1H),7.99(t,1H),8.74(d,1H)。

工作实施例：

实施例1

将来自实施例40A的216mg(0.27mmol，纯度86％)ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-3-氟-2-甲基丙-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)溶于7ml乙醇中，加入14mg于活性碳上的钯(10％)，并将混合物在标准压力下氢化1小时。将反应溶液过滤通过微孔滤器，将滤饼用乙醇洗涤，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化两次。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用少量饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到53mg目标化合物(理论值的43％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.70min

MS(ESpos):m/z＝441(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.04(s,3H),1.65(br.s,2H),2.55(s,3H；与溶剂峰重叠),3.24-3.39(m,2H；与溶剂峰重叠),4.08-4.14(m,1H),4.19-4.27(m,1H),5.35(s,2H),7.16-7.29(m,3H),7.55-7.65(m,1H),7.72-7.81(m,1H),8.75(d,1H)。

实施例2

将来自实施例41A的261mg(0.35mmol)ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5,5,5-三氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)溶于9ml乙醇中，加入11mg于活性碳上的钯(10％)，并将混合物在标准压力下氢化1.5小时。将反应溶液过滤通过微孔滤器，将滤饼用乙醇洗涤，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用少量饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到105mg目标化合物(理论值的59％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.80min

MS(ESpos):m/z＝505(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.02(s,3H),1.47-1.61(m,4H),2.24-2.47(m,2H),2.53(s,3H；与溶剂峰叠加),3.18-3.28(m,2H),5.35(s,2H),7.17-7.29(m,3H),7.55-7.65(m,1H),7.81-7.92(m,1H),8.70(d,1H)。

实施例3

将来自实施例42A的397mg(0.50mmol，纯度91％)ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5-氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体A)溶于12.9ml乙醇中，加入16mg于活性碳上的钯(10％)，并将混合物在标准压力下氢化1.5小时。借助微孔滤器将反应溶液过滤，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用少量饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到133mg目标化合物(理论值的55％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.71min

MS(ESpos):m/z＝469(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.02(s,3H),1.30-1.42(m,2H),1.43-1.88(m,4H),2.53(s,3H；被溶剂峰叠加),3.17-3.30(m,2H),4.30-4.39(m,1H),4.42-4.52(m,1H),5.34(s,2H),7.18-7.30(m,3H),7.55-7.64(m,1H),7.78(br.s,1H),8.75(d,1H)。

实施例4

将来自实施例43A的328mg(0.43mmol，纯度94％)ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-5-氟-2-甲基戊-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)溶于11.1ml乙醇中，加入14mg于活性碳上的钯(10％)，并将混合物在标准压力下氢化3小时。将反应溶液过滤通过硅藻土，将滤饼用乙醇洗涤，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用少量饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到133mg目标化合物(理论值的63％)。

LC-MS(方法4):R_t＝2.35min

MS(ESpos):m/z＝469(M+H)⁺

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.01(s,3H),1.32-1.42(m,2H),1.45-1.83(m,4H),2.53(s,3H；被溶剂峰重叠),3.18-3.29(m,2H),4.32-4.39(m,1H),4.43-4.50(m,1H),5.34(s,2H),7.18-7.28(m,3H),7.56-7.63(m,1H),7.78(br.s,1H),8.75(d,1H)。

实施例5

将来自实施例44A的439mg(0.61mmol)ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体A)溶于15.6ml乙醇中，加入19mg于活性碳上的钯(10％)，并将混合物在标准压力下氢化75min。将反应溶液过滤通过微孔滤器，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用少量饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到152mg目标化合物(理论值的52％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.75min

MS(ESpos):m/z＝473(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.08(s,3H),1.70(br.s,2H),1.83-1.99(m,2H),2.53(s,3H；被溶剂峰重叠),3.20-3.35(m,2H；被溶剂峰重叠),5.34(s,2H),6.08-6.42(m,1H),7.18-7.29(m,3H),7.55-7.64(m,1H),7.82(t,1H),8.73(d,1H)。

实施例6

将来自实施例45A的431mg(0.59mmol，纯度97％)ent-{1-[({6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基}羰基)氨基]-4,4-二氟-2-甲基丁-2-基}氨基甲酸苄酯三氟乙酸盐(对映异构体B)溶于15.1ml乙醇中，加入19mg于活性碳上的钯(10％)，并将混合物在标准压力下氢化75min。将反应溶液过滤通过微孔滤器，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用少量饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到149mg目标化合物(理论值的53％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.74min

MS(ESpos):m/z＝473(M+H)⁺

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]＝1.08(s,3H),1.70(br.s,2H),1.84-1.98(m,2H),2.53(s,3H；被溶剂峰重叠),3.22-3.32(m,2H；被溶剂峰重叠),5.34(s,2H),6.10-6.38(m,1H),7.18-7.28(m,3H),7.57-7.63(m,1H),7.82(t,1H),8.73(d,1H)。

实施例7

rac-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(外消旋体)

首先向来自实施例5A的200mg(0.57mmol)6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸中加入于2.6ml DMF中的259mg(0.68mmol)HATU和0.40ml(2.27mmol)N,N-二异丙基乙胺，并将混合物搅拌20min。将来自实施例39A的311mg(1.20mmol，假定纯度约75％)rac-4-氟-2-甲基丁烷-1,2-二胺二盐酸盐于1.3ml DMF和0.59ml(3.40mmol)N,N-二异丙基乙胺中的溶液加入到第一反应混合物中，并将混合物在RT下搅拌0.5h。加入乙腈、水和TFA，并将产物通过制备型HPLC(RP18柱，流动相：乙腈/水梯度，其中加入0.1％TFA)纯化。将产物级分合并并浓缩。随后，将残余物溶于二氯甲烷和少量甲醇中，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。将水相用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并冻干。得到100mg目标化合物(理论值的38％)。

LC-MS(方法2):R_t＝0.69min

MS(ESpos):m/z＝455(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ＝1.04(s,3H),1.58(br.s,2H),1.66–1.84(m,2H),2.56(s,3H),3.19-3.32(m,2H；与溶剂峰部分重叠),4.55-4.63(m,1H),4.66-4.73(m,1H),5.34(s,2H),7.17-7.28(m,3H),7.56-7.64(m,1H),7.72-7.83(m,1H),8.74(d,1H)。

实施例8

将来自实施例7的135mg(0.30mmol)rac-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺通过制备型分离在手性相[柱：Daicel Chiralpak IF，5μm，250×20mm，流动相：100％乙醇+0.2％二乙胺，流速：15ml/min，温度：45℃，检测：220nm]上分离成对映异构体。

将产物级分在干冰上收集，浓缩(浴温：30℃)并冻干。

对映异构体A：产量：50mg(>99％ee)

R_t＝6.85min[Chiralpak AZ-H，5μm，250×4.6mm；流动相：100％乙醇+0.2％二乙胺；流速：1ml/min；检测：270nm]。

实施例9

将来自实施例7的135mg rac-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺通过制备型分离在手性相[柱：DaicelChiralpak IF，5μm，250×20mm，流动相：100％乙醇+0.2％二乙胺，流速：15ml/min，温度：45℃，检测：220nm]上分离成对映异构体。

将产物级分在干冰上收集，浓缩(浴温：30℃)并冻干。

对映异构体B：产量：50mg(96％ee)

R_t＝9.80min[Chiralpak AZ-H，5μm，250×4.6mm；流动相：100％乙醇+0.2％二乙胺；流速：1ml/min；检测270nm]。

B.药理功效的评估

使用以下缩写：

ATP 三磷酸腺苷

Brij35 聚氧乙烯(23)月桂基醚

BSA 牛血清白蛋白

DTT 二硫苏糖醇

TEA 三乙醇胺

本发明化合物的药理作用可通过以下试验证明：

B-1.通过PPi检测来测量sGC酶活性

可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)在受刺激时将GTP转化成cGMP和焦磷酸盐(PPi)。PPi借助WO 2008/061626中记载的方法来检测。在试验中产生的信号随着反应进行而增加，并且用作sGC酶活性的衡量标准。借助PPi参考曲线，酶可以已知方式表征，例如在转化速率、可刺激性或米氏(Michaelis)常数方面。

试验的实施

为了实施试验，首先将29μl酶溶液[0-10nM可溶性鸟苷酸环化酶(根据等人，Journal of Molecular Medicine 77(1999)14-23制备)，在50mM TEA、2mM氯化镁、0.1％BSA(级分V)、0.005％Brij35中，pH 7.5]加入到微量培养板中，并加入1μl刺激剂溶液(0-10μM 3-吗啉代斯德酮亚胺(3-morpholinosydnonimine)，SIN-1，Merck在DMSO中)。将微量培养板在RT下培养10min。然后，加入20μl检测混合物(1.2nM荧火虫荧光素酶(北美萤火虫(Photinus pyralis)荧光素酶，Promega)、29μM脱氢萤光素(根据Bitler&McElroy，Arch.Biochem.Biophys.72(1957)358制备)、122μM萤光素(Promega)、153μM ATP(Sigma)和0.4mM DTT(Sigma)在50mM TEA、2mM氯化镁、0.1％BSA(级分V)、0.005％Brij 35中，pH7.5)。通过加入20μl底物溶液(1.25mM 5’-三磷酸鸟苷(Sigma)在50mM TEA、2mM氯化镁、0.1％BSA(级分V)、0.005％Brij 35中，pH 7.5)启动酶反应，并在光度计中进行连续分析。

B-2.对重组鸟苷酸环化酶报道细胞系的作用

使用重组鸟苷酸环化酶报道细胞系测定本发明的化合物的细胞活性，如在F.Wunder等人，Anal.Biochem.339，104-112(2005)中所记载。

下表中示出了本发明化合物的代表性MEC值(MEC＝最低有效浓度)(在一些情况下为各次测定的平均值)：

表A

B-3.体外血管舒张作用

通过打击颈部将兔子打昏并放血。将主动脉取出，去除附着的组织并分成1.5mm宽的环，在预应力下，将所述环逐个地放入5ml器官浴槽中，所述浴槽含有37℃的用碳合气(carbogen)充气的克雷布斯-汉斯莱特(Krebs-Henseleit)溶液，所述溶液具有以下组成(各自以mM计)：氯化钠：119；氯化钾：4.8；二水合氯化钙：1；七水合硫酸镁：1.4；磷酸二氢钾：1.2；碳酸氢钠：25；葡萄糖：10。用Statham UC2细胞测定收缩力，使用A/D转换器(DAS-1802HC，Keithley Instruments Munich)放大和数字化，并在线性记录仪上平行地记录。为了产生收缩，将苯肾上腺素以增加的浓度累积地加入浴槽中。几个对照循环后，将待研究的物质在每一个进一步的循环中每次以增加的剂量加入，并将收缩量与在最近的前一循环中获得的收缩量进行比较。这用于计算将对照值的量值减少50％所需的浓度(IC₅₀值)。标准给药体积是5μl；浴槽溶液中的DMSO含量相当于0.1％。

B-4.麻醉大鼠的血压测量

用戊硫代巴比妥(100mg/kg腹膜内)将体重为300-350g的雄性Wistar大鼠麻醉。在气管切开术后，将导管引入股动脉以测量血压。将待试验的物质作为溶液剂通过管饲法口服给药或经股静脉静脉内给药(Stasch等人Br.J.Pharmacol.2002；135：344-355)。

B-5.无线电遥测测量清醒自发性高血压大鼠的血压

使用购自DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI，USA的市售遥测系统进行下文所述的对清醒大鼠的血压测量。

所述系统由3个主要组件组成：

植入式发射器(遥测发射器)

接收器(接收器)，其经由多路转接器(DSI Data Exchange Matrix)连接到

数据采集计算机。

所述遥测系统可以连续记录清醒动物在它们的通常栖息地中的血压、心率和身体动作。

动物材料

研究在体重>200g的成年雌性自发性高血压大鼠(SHR Okamoto)上进行。购自Okamoto Kyoto School of Medicine，1963的SHR/NCrl是血压极大升高的雄性WistarKyoto大鼠与血压稍微升高的雌性大鼠的杂交种，且其在F13上移送至美国国立卫生研究院(U.S.National Institutes of Health)。

在发射器植入后，将实验动物单独圈养在3型Makrolon笼中。它们可自由摄取标准饲料和水。

实验室中的日/夜节律由室内照明在上午6:00和下午7:00改变。

发射器植入

在第一次实验使用之前至少14天，将所用的TA11PA-C40遥测发射器在无菌条件下手术植入到实验动物中。以此方式带有仪器的动物可在伤口愈合和植入物固定后重复使用。

为了植入，将禁食的动物用戊巴比妥(耐波他(Nembutal)，Sanofi：50mg/kg腹膜内)麻醉，然后在其腹部的大面积上剃毛并消毒。在沿白线打开腹腔后，将所述系统的充满液体的测量导管在分叉点(bifurcation)上方沿颅骨(cranial)方向插入到降主动脉中并用组织胶(VetBonD TM，3M)固定。将发射器外壳在腹膜内固定至腹壁肌肉上，并将伤口逐层闭合。

在术后，给予抗生素(Tardomyocel COMP，Bayer，1ml/kg皮下)以预防感染。

物质和溶液

除非另有说明，将待研究的物质在每种情况下通过管饲法口服给予一组动物(n＝6)。按照5ml/kg体重的给药体积，将试验物质溶解于合适的溶剂混合物中或悬浮在0.5％纤基乙酸钠(tylose)中。

将溶剂处理的动物组用作对照。

实验概述

将现有的遥测测量装置配置以用于24只动物。按实验编号(V年月日)记录每次实验。

对每一个生活在所述系统中的带有仪器的大鼠分配一个独立的接收天线(1010Receiver，DSI)。

植入的发射器可通过内置式磁开关从外部激活。在实验前将它们切换到发射。所发射的信号可通过数据采集系统(Dataquest TM A.R.T.for WINDOWS，DSI)在线检测并相应地进行处理。将数据在每种情况下储存在为此目的创建并带有实验编号的文件夹中。

在标准程序中，在每种情况下以下各项测量10秒：

收缩期血压(SBP)

舒张血压(DBP)

平均动脉压(MAP)

心率(HR)

活性(ACT)。

在计算机控制下以5分钟的间隔重复采集测量值。将得到的绝对值形式的源数据在图表中用当前测量的气压(Ambient Pressure Reference Moniotr；APR-1)进行校正并储存为单独的数据。其他技术细节在制造公司(DSI)的大量文件中给出。

除非另有说明，在实验当天的上午9:00给予试验物质。给药后，在24小时期间测量上述参数。

评价

在实验结束后，用分析软件(DATAQUEST TM A.R.T.TM ANALYSIS)将所采集的单独数据分类。在本文中，假定给药前2小时的时间点为空白值，因此所选择的数据集包括从实验当天上午7:00至第二天上午9:00的时间段。

通过测定平均值(15-分钟平均值)将数据在可预定义的时段内平滑并将其以文本文件的形式转移到存储介质上。将以此方式预分类并压缩的测量值转移到Excel模板中并制成表。实验的每一天，将得到的数据储存在带有实验编号的专用文件夹中。将结果和试验方案存储在按照编号分类的纸件形式的文件夹中。

文献：

Klaus Witte，Kai Hu，Johanna Swiatek，Claudia Müssig，Georg Ertl和Lemmer：Experimental heart failure in rats:effects on cardiovascular circadianrhythms and on myocardialβ-adrenergic signaling.Cardiovasc Res 47(2)：203-405，2000；Kozo Okamoto：Spontaneous hypertension in rats.Int Rev Exp Pathol 7：227-270，1969；Maarten van den Buuse：Circadian Rhythms of Blood Pressure,HeartRate,and Locomotor Activity in Spontaneously Hypertensive Rats as MeasuredWith Radio-Telemetry.Physiology&Behavior 55(4)：783-787，1994。

B-6.静脉给药和口服给药后药代动力学参数的测定

在雄性CD-1小鼠、雄性Wistar大鼠和雌性小猎犬中测定本发明的化合物的药代动力学参数。在小鼠和大鼠的情况下，静脉给药通过物种特异性的血浆/DMSO制剂进行，在狗的情况下，通过水/PEG400/乙醇制剂进行。在所有物种中，基于水/PEG400/乙醇制剂，通过管饲法进行溶解物质的口服给药。在将物质给药前，通过将硅胶导管插入右颈外静脉(Venajugularis externa)中而简化从大鼠中采血。手术在实验前至少一天进行，其中使用异氟醚麻醉并给予止痛剂(阿托品/卡布洛芬(rimadyl)(3/1)0.1ml皮下)。在包括物质给药后至少24小时至最多72小时的终端时间点的时间窗口内采血(通常多于10个时间点)。将血采集到肝素化管中。然后通过离心获得血浆；如果需要，将其储存在-20℃下直至进一步处理。

将内标物(其也可以是化学上不相关的物质)加到本发明化合物的样品、校准样品和限定物(qualifier)中，接着通过过量乙腈使蛋白质沉淀。添加与LC条件匹配的缓冲溶液，随后涡旋，接着在1000g下离心。通过LC-MS/MS使用C18反相柱和可变的流动相混合物对上清液进行分析。通过来自特定选择离子监测实验的萃取离子色谱图的峰高或峰面积对物质进行定量。

借助经验证的药代动力学计算程序，使用所测定的血浆浓度/时间图来计算药代动力学参数如AUC、C_max、t_1/2(终末半衰期)、F(生物利用度)、MRT(平均停留时间)和CL(清除率)。

由于物质定量是在血浆中进行的，因此为了能够相应地调节药代动力学参数，必须测定物质的血液/血浆分布。为此目的，在摇滚式混合器(rocking roller mixer)中将限定量的物质在所讨论物种的肝素化全血中培养20min。在1000g下离心后，测量并通过计算C_血液/C_血浆值之比确定血浆浓度(通过LC-MS/MS；见上文)。

B-7.代谢研究

为了确定本发明化合物的代谢特性，将它们与重组人细胞色素P450(CYP)酶、肝微粒体或来自各种动物物种(例如大鼠、狗)以及人类来源的原发新鲜肝细胞培养，以获得和比较关于尽可能完整的肝期I和肝期II代谢以及关于参与代谢的酶的信息。

将本发明的化合物以约0.1-10μM的浓度培养。为此，制备浓度为0.01-1mM的本发明化合物在乙腈中的储备液，然后以1:100稀释度吸移到培养混合物中。将肝微粒体和重组酶在37℃下在含和不含NADPH生成体系(由1mM NADP⁺、10mM葡萄糖-6-磷酸和1单位葡萄糖-6-磷酸脱氢酶组成)的pH 7.4的50mM磷酸钾缓冲液中培养。同样在37℃下，将原发肝细胞在Williams E培养基中悬浮培养。在0-4h的培养时间后，用乙腈(最终浓度约30％)终止培养混合物，并将蛋白质在约15000×g下离心出。将如此终止的样品直接进行分析或储存在-20℃下直至分析。

通过带有紫外和质谱检测的高效液相色谱(HPLC-UV-MS/MS)进行分析。为此，将培养样品的上清液用合适的C18反相柱和乙腈与10mM的甲酸铵水溶液或0.05％甲酸的可变流动相混合物进行层析。将UV色谱图数据结合质谱数据用于代谢物的鉴定、结构解析和定量估计，以及用于本发明化合物在培养混合物中的定量代谢减少。

B-8.Caco-2渗透性试验

借助Caco-2细胞系——已在体外建立用于胃肠屏障渗透性预测的模型(Artursson,P.和Karlsson,J.(1991).Correlation between oral drug absorption inhumans and apparent drug permeability coefficients in human intestinalepithelial(Caco-2)cells.Biochem.Biophys.175(3),880-885)——确定试验物质的渗透性。将Caco-2细胞(ACC No.169，DSMZ，Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen，Braunschweig，Germany)种在具有插管的24孔板中并培养14至16天。为进行渗透性研究，将试验物质溶解在DMSO中并用转移缓冲液(Hanks缓冲盐溶液，Gibco/Invitrogen，含19.9mM葡萄糖和9.8mM HEPES)稀释至最终试验浓度。为了测定试验物质从顶端到基底外侧的渗透性(P_appA-B)，将包含试验物质的溶液施加到Caco-2细胞单层的顶面上，并将转移缓冲液施加到基底外侧面上。为了测定试验物质从基底外侧到顶端的渗透性(P_appB-A)，将包含试验物质的溶液施加到Caco-2细胞单层的基底外侧面上，并将转移缓冲液施加到顶面上。在实验开始时，从各自的供体室(donor compartment)中取样以确保质量平衡。在37℃下培养两个小时后，从两个室中取样。通过LC-MS/MS分析样品并计算表观渗透系数(P_app)。对于各细胞单层，测定荧光黄的渗透性以确保细胞层完整性。在运行的各试验中，还确定了阿替洛尔(低渗透性的标记物)和柳氮磺胺吡啶(主动排泄的标记物)的渗透性作为质量控制。

B-9.hERG钾电流试验

hERG(人ether-a-go-go相关基因)钾电流对人心肌细胞动作电位的复极化有显著贡献(Scheel等人，2011)。通过药物抑制这种电流在极少数情况下可引起潜在致命的心脏心律失常，并因此在药物开发过程的早期进行研究。

本文所使用的功能性hERG试验基于稳定表达KCNH2(HERG)基因的重组HEK293细胞系(Zhou等人，1998)。这些细胞在自动化系统(Patchliner^TM；Nanion，Munich，Germany)中通过“全细胞电压钳”技术(Hamill等人，1981)进行研究，所述自动化系统控制膜电压并在室温下测量hERG钾电流。PatchControlHT^TM软件(Nanion)控制Patchliner系统、数据采集和数据分析。电压由2个受PatchMasterPro^TM软件控制的EPC-10quadro放大器(两者：HEKAElektronik，Lambrecht，Germany)控制。具有中等电阻的NPC-16芯片(～2MΩ；Nanion)充当平面基底以用于电压钳实验。

将NPC-16芯片用细胞内和细胞外溶液(参见Himmel，2007)以及细胞悬浮液填充。在形成千兆欧姆密封和建立全细胞模式(包括几个自动质量控制步骤)后，将细胞膜在-80mV的保持电位下钳住。随后的电压钳方案将指令电压变至+20mV(持续1000ms)、-120mV(持续500ms)并变回到-80mV的保持电位；每12s重复一次这种过程。在最初的稳定阶段(约5-6分钟)后，将试验物质溶液通过吸移管以增加的浓度(例如0.1、1和10μmol/l)(每一浓度暴露约5-6分钟)引入，接着进行几个洗涤步骤。

由电位从+20mV变化到-120mV所产生的向内的“尾”电流的幅值用于将hERG钾电流定量并被描述为时间的函数(IgorPro^TM软件)。在各时段(例如试验物质前的稳定阶段、试验物质的第一/第二/第三浓度)结束时的电流幅值用于建立浓度/效应曲线，由其计算试验物质的半最大抑制浓度IC₅₀。

Hamill OP，Marty A，Neher E，Sakmann B，Sigworth FJ.Improved patch-clamptechniques for high-resolution current recording from cells and cell-freemembrane patches.Pfluegers Arch 1981；391：85-100。

Himmel HM.Suitability of commonly used excipients forelectrophysiological in-vitro safety pharmacology assessment of effects onhERG potassium current and on rabbit Purkinje fiber action potential.JPharmacol Toxicol Methods 2007；56：145-158。

Scheel O，Himmel H，Rascher-Eggstein G，Knott T.Introduction of amodular automated voltage-clamp platform and its correlation with manualhuman ether-a-go-go related gene voltage-clamp data.Assay Drug Dev Technol2011；9：600-607。

Zhou ZF，Gong Q，Ye B，Fan Z，Makielski JC，Robertson GA，JanuaryCT.Properties of hERG channels stably expressed in HEK293cells studied atphysiological temperature.Biophys J 1998；74：230-241。

C.药物组合物的工作实施例

本发明的化合物可被转化成如下的药物制剂：

片剂：

组成：

100mg本发明的化合物、50mg乳糖(一水合物)、50mg玉米淀粉(天然的)、10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(BASF，Ludwigshafen，Germany)和2mg硬脂酸镁。

片剂重量212mg。直径8mm，曲率半径12mm。

制备：

将本发明的化合物、乳糖和淀粉的混合物用5％PVP于水中的溶液(w/w)造粒。将颗粒干燥，然后与硬脂酸镁混合5分钟。将该混合物用常规压片机压片(片剂规格见上)。用于压片的指导值为15kN的压力。

用于口服给药的悬浮剂：

组成：

1000mg本发明的化合物、1000mg乙醇(96％)、400mg(购自FMC，Pennsylvania，USA的黄原胶)和99g水。

10ml口服悬浮剂相当于单一剂量的100mg本发明的化合物。

制备：

将Rhodigel悬浮于乙醇中；将本发明的化合物加入到悬浮液中。边搅拌边加入水。将混合物搅拌约6h，直到Rhodigel完全溶胀。

用于口服给药的溶液剂：

组成：

500mg本发明的化合物、2.5g聚山梨醇酯和97g聚乙二醇400。20g口服溶液剂相当于单一剂量的100mg本发明的化合物。

制备：

将本发明的化合物在搅拌下悬浮于聚乙二醇和聚山梨醇酯的混合物中。持续搅拌操作直到本发明的化合物完全溶解。

静脉内(i.v.)溶液剂：

将本发明的化合物以低于饱和溶解度的浓度溶于生理上可接受的溶剂(例如等渗盐溶液、葡萄糖溶液5％和/或PEG 400溶液30％)中。将所得溶液进行无菌过滤并分配于无菌和无热原的注射容器中。

Claims

1.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-3-氟-2-甲基丙基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

2.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-5,5,5-三氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

3.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-5-氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)和以下结构式的化合物

4.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-5-氟-2-甲基戊基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

5.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)和以下结构式的化合物

6.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4,4-二氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

7.具有系统名称为rac-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(外消旋体)和以下结构式的化合物

8.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体A)和以下结构式的化合物

9.具有系统名称为ent-N-(2-氨基-4-氟-2-甲基丁基)-6-氯-8-[(2,6-二氟苄基)氧基]-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(对映异构体B)和以下结构式的化合物

10.制备本发明的化合物的方法，其特征在于

[A]在惰性溶剂中，在合适的碱或酸的存在下，使式(I)的化合物反应

其中

T¹代表(C₁-C₄)-烷基或苄基，

得到式(II)的羧酸

随后在惰性溶剂中，在酰胺偶联条件下，使其与选自以下的胺反应，

任选地在催化剂的存在下，将任选存在的保护基团氢解除去，

并且将所得到的化合物任选地用合适的(i)溶剂和/或(ii)酸或碱转化成它们的溶剂合物、盐和/或所述盐的溶剂合物。

11.如权利要求1至9中任一项所定义的化合物，其用于治疗和/或预防疾病。

12.如权利要求1至9中任一项所定义的化合物用于制备用于治疗和/或预防心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾功能不全、血栓栓塞病症和动脉硬化的药物的用途。

13.药物，其包含与惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂结合的如权利要求1至9中任一项所定义的化合物。

14.药物，其包含如权利要求1至9中任一项所定义的化合物，所述化合物与选自以下的其他活性化合物结合：有机硝酸盐、NO供体、cGMP-PDE抑制剂、抗血栓形成剂、降血压剂和脂类代谢调节剂。

15.根据权利要求13或14所述的药物，其用于治疗和/或预防心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾衰竭、血栓栓塞病症和动脉硬化。

16.使用有效量的至少一种如权利要求1至9中任一项所定义的化合物或如权利要求13至15中任一项所定义的药物来治疗和/或预防人和动物的心力衰竭、心绞痛、高血压、肺高血压、局部缺血、血管病症、肾功能不全、血栓栓塞病症和动脉硬化的方法。