CN106498017A - 一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法 - Google Patents
一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106498017A CN106498017A CN201610930636.5A CN201610930636A CN106498017A CN 106498017 A CN106498017 A CN 106498017A CN 201610930636 A CN201610930636 A CN 201610930636A CN 106498017 A CN106498017 A CN 106498017A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- astaxanthin
- haematococcus pluvialis
- algae solution
- induction
- utilization
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 title claims abstract description 75
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 title claims abstract description 75
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 title claims abstract description 75
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 title claims abstract description 75
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 title claims abstract description 75
- 241000168517 Haematococcus lacustris Species 0.000 title claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 14
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M hexanoate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 title claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims abstract description 48
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 22
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims abstract description 20
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 30
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 3
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PUKLDDOGISCFCP-JSQCKWNTSA-N 21-Deoxycortisone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O PUKLDDOGISCFCP-JSQCKWNTSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FCYKAQOGGFGCMD-UHFFFAOYSA-N Fulvic acid Natural products O1C2=CC(O)=C(O)C(C(O)=O)=C2C(=O)C2=C1CC(C)(O)OC2 FCYKAQOGGFGCMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000168525 Haematococcus Species 0.000 description 2
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 229940095100 fulvic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002509 fulvic acid Substances 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000180279 Chlorococcum Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N aldehydo-N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，首先制备雨生红球藻藻液，雨生红球藻到对数生长期后期，此时细胞浓度达到106cells mL‑1，用含10％氮的BBM培养基稀释藻液使其浓度达到2×105cells mL‑1，获得诱导用的藻液；然后用去离子水配成80mM的DA‑6母液，将DA‑6母液添加到已经稀释好的诱导藻液中使DA‑6浓度达到5‑20mM；然后将上述藻液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞此时其虾青素的积累量已达到最高。本发明方法简单可行，成本低廉，并大幅缩短雨生红球藻变红的时间且虾青素的量有较显著地提高，从而很大的提高了虾青素的产率。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体地说，涉及一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法。
背景技术
天然虾青素(3，3′-二羟基-4，4′-二酮基-β，β′-胡萝卜素)是目前自然界发现的最强的抗氧化剂。天然虾青素来源自发夫酵母、鲑鱼、虾壳及雨生红球藻中，而雨生红球藻中含有丰富的虾青素，可达其干重的4％，被誉为天然虾青素的浓缩品。虾青素的抗氧化活性主要体现在一方面它是类胡萝卜素的最高级衍生物；另一方面其共轭双键末端具有不饱和的酮基和羟基，由此基团构成α-羟基酮，因此它要强于一般的类胡萝卜素的抗氧化性，高于其它类胡萝卜素10倍、维生素E 550倍，被誉为“超级氧化剂”。天然虾青素对人体无任何毒副作用，虾青素的抗氧化活性使得其在医药、化妆品和保健品等有很大的应用潜力，另外虾青素也可以作为水产动物的饲料添加剂以及食品添加剂。
雨生红球藻属于一种单细胞绿藻，它只有在胁迫条件下，比如高温、强光照、氮饥饿等，能够大量的积累虾青素。而关于刺激雨生红球藻产虾青素的诱导大多集中在物理和化学因子上，较少有关于植物激素的研究。己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)作为一种植物生长调节剂，能够促进植物生长，具有很强的抗逆作用，而雨生红球藻正是在这种胁迫下才大量积累虾青素。外源添加DA-6能激发植物防御基因的表达，诱导植物的化学防御，生与机械损伤和昆虫取食相似的效果。因此DA-6可能会诱导雨生红球藻大量积累虾青素。
目前国内已有多家公司可以大规模化生产虾青素，也已有了一些相关的技术和专利，例如专利一种从雨生红球藻中提取虾青素的方法(申请号：201410748498.X，申请日：2014-12-10，公开号：CN104529852A，公开日：2015-04-22)公开了一种高效提取虾青素的方法，主要利用冰醋酸冰浴、匀浆机匀浆和液氮低温处理相结合的方法，大大提高了细胞破壁率及虾青素提取率。专利一种雨生红球藻高密度培养的气升式光生物反应器(申请号：200510018203.4，申请日：2005-01-26，公开号：CN1680539A，公开日：2005-10-12)，公开了一种雨生红球藻高密度培养的气升式光生物反应器，包括养殖罐、水处理装置、照明装置、气体供应装置，通过调控反应条件实现全天候高密度养殖，并将藻的养殖和虾青素积累结合在同一反应器中完成。专利大规模培养雨生红球藻和转化虾青素的装置及其方法(申请号：200610154678.0，申请日：2006-11-20，公开号：CN1966660，公开日：2007-05-23)，公开了一种雨生红球藻大规模培养及虾青素转化的装置，包括光生物反应器、充气装置、培养液灌输装置和静细胞收集装置，通过浮沉控制装置实现全天候高密度养殖，并将藻的养殖和虾青素积累结合在同一反应器中完成。专利用酵母发酵残液培养藻类生产虾青素的方法(申请号：03130442.7，申请日：2003-07-23，公开号：CN1480524A，公开日：2004-03-10)，公开了一种利用酵母发酵残液生产虾青素的方法，是向酵母发酵残液中加入无机盐配成培养基，在特定的容器内培养雨生红球藻或绿球藻，经过分离提取虾青素。上述相关专利技术虽然先进，但是工艺较为复杂，设备要求高，操作较为繁琐，这就增加了生产的成本和技术推广的难度。专利一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法(申请号：201510376770.0申请日：2015-07-01)，公开了一种利用利用黄腐酸提高虾青素积累的方法，虽然提高了虾青素的积累，但虾青素积累量以及提取率鉴于生产需求还需进一步提高，培养完的废液也未充分利用。
发明内容
有鉴于此，本发明针对以上的问题，提供了一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，该方法的不仅操作简单、成本低，而且可很大程度上缩短积累虾青素的周期及提高虾青素的产率及提取率，培养完藻的废液可以直接用于灌溉农田，提高利用率。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，包括以下步骤：
步骤1、藻液的制备：培养雨生红球藻到对数生长期后期，用含10％(质量百分含量)氮的BBM培养基稀释藻液并获得诱导的藻液；
步骤2、诱导雨生红球藻积累虾青素：用DMSO配成80mM的DA-6母液，将DA-6母液添加到已经稀释好的诱导的藻液中使DA-6浓度达到5-20mM；然后将上述藻液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞；
步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素。
进一步地，雨生红球藻为雨生红球藻菌株Haematococcus pluvialis LUGU。
进一步地，步骤1中藻液的制备具体为：在25℃、光强2500-2800lx，持续光照条件下培养，培养雨生红球藻到达对数生长期后期，此时细胞浓度达到106cells mL-1，利用含10％(质量百分含量)氮的BBM培养基稀释到2×105cells mL-1作为诱导藻液。
进一步地，步骤2中诱导雨生红球藻积累虾青素中的培养条件为：28℃、光强11000-12000lx、冷光灯连续光照及氮饥饿的复合胁迫。
进一步地，步骤3中利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素具体为：取5ml上述藻液，3500r/min离心5min，弃上清得藻细胞沉淀；分别向藻细胞沉淀中加入2mL 30％甲醇和5％KOH混合液，66℃水浴15min，4000r/min离心10min，除上清，沉淀加入纯水洗涤2次，除碱液残留；然后加入5mL DMSO，250w超声破壁15min，其中，超声1min，10s间歇，于45℃水浴20min，抽提至藻体发白，离心收集上清测OD490；并按照公式计算得出虾青素的浓度，其中C为虾青素浓度，A为490nm下OD值，Va为DMSO体积，Vb为藻液体积。
与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：
1)本发明操作简单易行、成本低、虾青素提取率高，原材料为自己筛选的雨生红球藻菌株可按常规方法培养。提高培养完藻的废液利用率。
2)本发明大幅提高了虾青素的产率，实验证明，添加5-20mM的DA-6的诱导组比对照组积累虾青素的周期缩短了13-27％，虾青素的产量比对照组提高了87-91.6％，达到22.708-23.26mg L-1。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明提供一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，包括以下步骤：
步骤1、藻液的制备：雨生红球藻采用雨生红球藻菌株
Haematococcus pluvialis LUGU(NCBI:KM115647)，利用BBM培养基，在25℃、光强2800lx，持续光照条件下培养，培养雨生红球藻到达对数生长期后期，此时藻细胞浓度达到106cells mL-1，无菌条件下离心，利用含10％氮的BBM培养基稀释到2×105cells mL-1作为诱导藻液；
步骤2、诱导雨生红球藻积累虾青素：用去离子水配成80mM的DA-6母液，将DA-6母液添加到已经稀释好的诱导的藻液中使DA-6浓度达到5-20mM；然后将上述藻液在28℃、光强11000-12000lx、冷光灯连续光照及氮饥饿的复合胁迫下进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞，
步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素，虾青素的提取方法：
每隔一天取5ml上述藻液，3500r/min离心5min，弃上清得藻细胞沉淀；分别向藻细胞沉淀中加入2mL 30％甲醇和5％KOH混合液，66℃水浴15min，4000r/min离心10min，除上清，沉淀加入纯水洗涤2次，除碱液残留；然后加入5mL DMSO，250w超声破壁15min(超声1min，10s间歇)，于45℃水浴20min，抽提至藻体发白，离心收集上清测OD490；并按照公式计算得出虾青素的浓度，其中C为虾青素浓度，A为490nm下OD值，Va为DMSO体积，Vb为藻液体积。
实施例1
(1)雨生红球藻采用雨生红球藻菌株Haematococcus pluvialis LUGU，利用BBM培养基，在25℃、光强2800lx，持续光照条件下培养，培养雨生红球藻到达对数生长期，此时藻细胞浓度达到106cells mL-1，利用含10％氮的BBM培养基稀释到2×105cells mL-1作为诱导藻液。
(2)用去离子水配成80mM的DA-6母液，将DA-6母液添加到已经稀释好的诱导藻液中使DA-6度达到5mM；然后将上述藻液在28℃、光强11500lx、冷光灯连续光照及饥饿营养盐的复合胁迫下进行培养，每天定期取样观察藻细胞颜色变化，发现11天后藻体细胞完全变红后，收集藻细胞利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素，此时其虾青素的积累量已达到最高。
实施例2
(1)雨生红球藻采用雨生红球藻菌株Haematococcus pluvialis LUGU，利用BBM培养基，在25℃、光强2800lx，持续光照条件下培养，培养至雨生红球藻到达对数生长期，此时藻细胞浓度达到106cells mL-1，利用含10％氮的BBM培养基稀释到2×105cells mL-1作为诱导藻液。
(2)用去离子水配成80mM的DA-6母液，将DA-6母液添加到已经稀释好的诱导藻液中使DA-6浓度达到10mM；然后将上述藻液在28℃、光强11000lx、冷光灯连续光照及饥饿营养盐的复合胁迫下进行培养，每天定期取样观察藻细胞颜色变化，13天后藻体细胞完全变红后，收集藻细胞利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素，此时其虾青素的积累量已达到最高。
实施例3
(1)雨生红球藻采用雨生红球藻菌株Haematococcus pluvialisLUGU，利用BBM培养基，在25℃、光强2800lx，持续光照条件下培养，培养至雨生红球藻到达对数生长期，此时藻细胞浓度达到106cells mL-1，利用含10％氮的BBM培养基稀释到2×105cells mL-1作为诱导藻液。
(2)用去离子水配成80mM的DA-6母液，将DA-6母液添加到已经稀释好的诱导藻液中使DA-6浓度达到20mM；然后将上述藻液在28℃、光强12000lx、冷光灯连续光照及饥饿营养盐的复合胁迫下进行培养，每天定期取样观察藻细胞颜色变化，13天后藻体细胞完全变红后，收集藻细胞利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素，此时其虾青素的积累量已达到最高。
己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)作为一种植物生长调节剂可以有效地促进植物的生长和发育，利用一定浓度的DA-6作为诱导剂，诱导雨生红球藻积累虾青素，通过采用上述虾青素的提取方法对各组进行提取虾青素，结果显示：空白对照组(不添加DA-6)积累虾青素完成的时间为15天，第15天时虾青素的含量为12.14mg L-1，DA-6处理后的比对照组积累虾青素的周期缩短了13-27％，且虾青素的产量比对照组提高了87-91.6％，达到22.708-23.26mg L-1。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (5)
1.一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、藻液的制备：培养雨生红球藻到对数生长期后期，用含10％氮的BBM培养基稀释藻液并获得诱导的藻液，其中，氮的含量为质量百分含量；
步骤2、诱导雨生红球藻积累虾青素：用去离子水配成80mM的DA-6母液，将DA-6母液添加到已经稀释好的诱导的藻液中使DA-6浓度达到5-20mM；然后将上述藻液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞；
步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素。
2.根据权利要求1所述的利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述雨生红球藻为雨生红球藻菌株Haematococcus pluvialis LUGU。
3.根据权利要求1所述的利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述步骤1中藻液的制备具体为：在25℃、光强2500-2800lx，持续光照条件下培养，培养雨生红球藻到达对数生长期后期，此时细胞浓度达到106cells mL-1，利用含10％(质量百分含量)氮的BBM培养基稀释到2×105cells mL-1作为诱导藻液。
4.根据权利要求1所述的利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述步骤2中诱导雨生红球藻积累虾青素中的培养条件为：28℃、光强11000-12000lx、冷光灯连续光照及氮饥饿的复合胁迫。
5.根据权利要求1所述的利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述步骤3中利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素具体为：取5ml上述藻液，3500r/min离心5min，弃上清得藻细胞沉淀；分别向藻细胞沉淀中加入2mL 30％甲醇和5％KOH混合液，66℃水浴15min，4000r/min离心10min，除上清，沉淀加入纯水洗涤2次，除碱液残留；然后加入5mL DMSO，250w超声破壁15min，其中，超声1min，10s间歇，于45℃水浴20min，抽提至藻体发白，离心收集上清测OD490；并按照公式计算得出虾青素的浓度，其中C为虾青素浓度，A为490nm下OD值，Va为DMSO体积，Vb为藻液体积。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610930636.5A CN106498017B (zh) | 2016-10-31 | 2016-10-31 | 一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610930636.5A CN106498017B (zh) | 2016-10-31 | 2016-10-31 | 一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106498017A true CN106498017A (zh) | 2017-03-15 |
| CN106498017B CN106498017B (zh) | 2018-08-31 |
Family
ID=58318775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610930636.5A Expired - Fee Related CN106498017B (zh) | 2016-10-31 | 2016-10-31 | 一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106498017B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108588161A (zh) * | 2018-04-16 | 2018-09-28 | 昆明理工大学 | 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的新用途 |
| CN109439611A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-03-08 | 华南理工大学 | 提高色绿藻胞内虾青素和藻油积累量的诱导培养方法 |
| CN109679853A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-04-26 | 昆明理工大学 | 利用黄腐酸提高雨生红球藻生物量和虾青素产量的方法 |
| CN110484451A (zh) * | 2019-08-06 | 2019-11-22 | 天津农学院 | 一种促进雨生红球藻生长和积累虾青素的方法 |
| CN113846044A (zh) * | 2021-10-14 | 2021-12-28 | 新疆云藻农业科技发展有限公司 | 一种同时提高雨生红球藻干重和虾青素含量的方法 |
| CN114350736A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-04-15 | 万华化学(四川)有限公司 | 一种提高雨生红球藻培养物中虾青素双酯含量的方法 |
| CN115044527A (zh) * | 2022-02-15 | 2022-09-13 | 昆明理工大学 | 一种肌醇在促进雨生红球藻生产虾青素中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015079182A1 (fr) * | 2013-11-29 | 2015-06-04 | Roquette Freres | Procédé d'enrichissement en carotenoïdes et en protéines de la biomasse de microalgues |
| CN105648018A (zh) * | 2016-02-27 | 2016-06-08 | 昆明理工大学 | 一种利用丁基羟基茴香醚促进雨生红球藻生产虾青素的方法 |
-
2016
- 2016-10-31 CN CN201610930636.5A patent/CN106498017B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015079182A1 (fr) * | 2013-11-29 | 2015-06-04 | Roquette Freres | Procédé d'enrichissement en carotenoïdes et en protéines de la biomasse de microalgues |
| CN105648018A (zh) * | 2016-02-27 | 2016-06-08 | 昆明理工大学 | 一种利用丁基羟基茴香醚促进雨生红球藻生产虾青素的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LIQUN JIANG,ET AL.: "Effect of diethyl aminoethyl hexanoate on the accumulation of high-value biocompounds produced by two novel isolated microalgae", 《BIORESOURCE TECHNOLOGY》 * |
| XINHENG YU, ET AL.: "Chemicals to enhance microalgal growth and accumulation of high-value bioproducts", 《FRONTIERS IN MICROBIOLOGY》 * |
| 王灵昭等: "微波法提取雨生红球藻中虾青素的工艺研究", 《食品研究与开发》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108588161A (zh) * | 2018-04-16 | 2018-09-28 | 昆明理工大学 | 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的新用途 |
| CN109439611A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-03-08 | 华南理工大学 | 提高色绿藻胞内虾青素和藻油积累量的诱导培养方法 |
| CN109439611B (zh) * | 2018-11-20 | 2022-07-12 | 华南理工大学 | 提高色绿藻胞内虾青素和藻油积累量的诱导培养方法 |
| CN109679853A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-04-26 | 昆明理工大学 | 利用黄腐酸提高雨生红球藻生物量和虾青素产量的方法 |
| CN110484451A (zh) * | 2019-08-06 | 2019-11-22 | 天津农学院 | 一种促进雨生红球藻生长和积累虾青素的方法 |
| CN110484451B (zh) * | 2019-08-06 | 2022-03-11 | 天津农学院 | 一种促进雨生红球藻生长和积累虾青素的方法 |
| CN113846044A (zh) * | 2021-10-14 | 2021-12-28 | 新疆云藻农业科技发展有限公司 | 一种同时提高雨生红球藻干重和虾青素含量的方法 |
| CN114350736A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-04-15 | 万华化学(四川)有限公司 | 一种提高雨生红球藻培养物中虾青素双酯含量的方法 |
| CN115044527A (zh) * | 2022-02-15 | 2022-09-13 | 昆明理工大学 | 一种肌醇在促进雨生红球藻生产虾青素中的应用 |
| CN115044527B (zh) * | 2022-02-15 | 2023-12-15 | 昆明理工大学 | 一种肌醇在促进雨生红球藻生产虾青素中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106498017B (zh) | 2018-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106498017B (zh) | 一种利用己酸二乙氨基乙醇酯促进雨生红球藻生产虾青素的方法 | |
| CN101974598A (zh) | 利用茉莉酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法 | |
| CN105648018B (zh) | 一种利用丁基羟基茴香醚促进雨生红球藻生产虾青素的方法 | |
| CN101974599B (zh) | 利用油菜素内酯刺激雨生红球藻快速生产虾青素的方法 | |
| Zhang et al. | Production of astaxanthin from Haematococcus in open pond by two-stage growth one-step process | |
| CN103820325B (zh) | 波吉卵囊藻高密度培养方法及藻细胞收集方法 | |
| Wan et al. | Sequential heterotrophy–dilution–photoinduction cultivation of Haematococcus pluvialis for efficient production of astaxanthin | |
| CN103571906B (zh) | 一种利用微藻高效生产虾青素的新方法 | |
| CN101352249B (zh) | 一种全面利用含油微藻的生产方法 | |
| WO2011050578A1 (zh) | 一种微藻培养方法及其光生物反应器系统 | |
| CN104988200A (zh) | 一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法 | |
| CN102119655B (zh) | 铁皮石斛自然光快繁育苗方法 | |
| CN103396951A (zh) | 一种规模化养殖雨生红球藻及其生产天然虾青素调味包的方法 | |
| CN103834570B (zh) | 三角褐指藻和小新月菱形藻混合培养的培养基及培养方法 | |
| CN101974600A (zh) | 利用茉莉酸甲酯诱导雨生红球藻生产虾青素的方法 | |
| CN106133147A (zh) | 虾青素的生产方法 | |
| CN105647825B (zh) | 一种同时提高螺旋藻生物质和多糖产率的方法 | |
| CN104404118A (zh) | 一种利用海水促进雨生红球藻生产天然虾青素的方法 | |
| CN104232721A (zh) | 一种利用钨酸盐诱导雨生红球藻快速积累虾青素的方法 | |
| CN103966100B (zh) | 屠宰厂废水养殖球等鞭金藻和异胶藻的培养基及培养方法 | |
| CN107418993A (zh) | 褪黑素在提高雨生红球藻中虾青素含量中的应用 | |
| CN109679853A (zh) | 利用黄腐酸提高雨生红球藻生物量和虾青素产量的方法 | |
| CN103966102B (zh) | 一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻的培养基及培养方法 | |
| CN106868085A (zh) | 一种促进雨生红球藻快速转化积累虾青素的方法 | |
| CN104480178B (zh) | 胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180831 Termination date: 20201031 |