CN106492265B - 一种快速止血剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种快速止血剂，制备原料包括微孔淀粉、钙离子或锌离子，壳聚糖或甲壳素。每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为1‑50g，钙离子加入量为10‑500μmol或锌离子的加入量为6‑80μmol。本发明的快速止血剂在使用时不会使伤口处的皮肤温度明显上升，能够有效防止止血时伤口处的温度大幅上升，避免了现有止血剂使用时伤口处温度升高给患者带来的痛苦，能够用于各种中小动脉之下的内外创伤止血。
Description
技术领域
本发明属于新型止血材料技术领域，涉及一种止血剂，尤其涉及一种可防止伤口温度上升的快速止血剂。
背景技术
目前，外科手术中常用的传统止血材料有氧化纤维素、可吸收明胶海绵、胶原蛋白海绵和沸石等，虽然它们都可作为局部止血材料，但各自都有较大缺点并限制了其临床应用。例如沸石止血剂在应用过程中由于释放大量热能使局部温度升高而产生组织热灼伤的副作用，严重制约了它的应用。
实验研究发现，止血过程中，止血剂吸收血液中大量水份，若该过程瞬间完成，止血剂放热现象严重，使得伤口温度明显增加，甚至对伤口组织产生灼伤，疼痛感倍增。因此，快速止血与伤口升温本身为一对矛盾对映体。然而，现有的以微孔淀粉为主体的止血剂，在止血过程中均会产生不同程度的升温现象。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于，提供一种可降低伤口温度的快速止血剂，在具备现有止血剂良好的相容性、可自行吸收，抗感染、加快伤口愈合、迅速止血的优点的同时，更重要的是保证在使用本发明止血剂时伤口温度不会大幅升高。
为了实现上述目的，本发明采取如下的技术方案：
一种快速止血剂，制备原料包括微孔淀粉、钙离子或锌离子，壳聚糖或甲壳素。
每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为1-50g，钙离子加入量为10-500μmol或锌离子的加入量为6-80μmol。
优选的，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为30g，钙离子加入量为200μmol或锌离子的加入量为20μmol。
微孔淀粉孔径＜2μm，采用玉米微孔淀粉。
快速止血剂的制备方法，该方法采用在高浓度氮气环境中依次加入微孔淀粉、钙离子或锌离子以及壳聚糖或甲壳素混合制成快速止血剂。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的快速止血剂在使用时不会使伤口处的皮肤温度明显上升，能够有效防止止血时伤口处的温度大幅上升，避免了现有止血剂使用时伤口处温度升高给患者带来的痛苦。
(2)本发明快速止血剂一旦喷洒在伤口上，就如同海绵一样会迅速吸收血液中的水分而使血液中的血小板、红细胞、白细胞和血蛋白等得到迅速浓缩，从而触发最初的凝血，然后在凝血过程完成后，由淀粉酶将其分解为人体所吸收。这种快速止血剂在生物体内会自动降解为生物体可以吸收的小分子，被周边细胞吸收，无毒无副作用，不会引起体内通常会有的排异反应。因此在手术中和手术后无须将它移除，从而避免了伤口受到污染的可能，给其在无菌环境下进行手术提供了必要条件。同时，由于甲壳素和壳聚糖都具有一定的杀菌和促进伤口愈合作用，因此，它们的加入既可以防止止血剂本身在储藏和运输过程中的细菌感染和变质，又可以对受伤伤口进行初步的抗感染和促进伤口愈合。
(3)本发明快速止血剂能够用于各种中小动脉之下的内外创伤止血。
具体实施方式
在人血液中，红细胞是双面凹的圆饼状，边缘较厚而中间较薄，就好像一个甜甜圈一样，只是当中没有一个洞而已，红细胞的直径通常为6-9微米；白细胞则有5个类型：淋巴细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞，它们的直径分别为：单核细胞14-25微米，大淋巴细胞13-20微米，中淋巴细胞9-12微米，小淋巴细胞5-8微米，嗜酸性粒细胞10-15微米，中性粒细胞10-12微米，嗜碱性粒细胞10-12微米；而血小板是体内最小的血细胞，板直径约为2-4微米，是有折光的扁圆形小体。正常时呈圆盘状，有时可伸出伪足。
本申请的发明人在前期制备的微孔淀粉表面的微孔直径小于这些红细胞、白细胞和血小板的直径(比如小于1微米)，当血液与这种微孔淀粉接触后，血液的绝对主要成分水分子能够迅速进入这些小孔，而这些红细胞、白细胞和血小板由于它们的直径太大而不能进入这些小孔，这样瞬间血液中的红细胞、白细胞和血小板浓度就会增加好几倍，更有利于止血。但是，在后期的研究发现，单纯应用微孔淀粉止血的最大缺点是，在止血时在伤口处会吸收大量的水分，从而导致伤口处温度的升高。
甲壳素[β-(1,4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖]广泛存在于甲壳纲动物虾蟹的甲壳、昆虫的甲壳和真菌和植物的细胞壁中。甲壳素和壳聚糖都可以通过与血液中的血小板、红细胞和白细胞的相互作用而具有凝血特性。钙离子在血液凝固的多步反应中起着重要的催化激活作用，对血液凝固有非常重要作用。而锌离子对血小板具有重要的诱聚作用，它能够诱导血小板的聚集与血小板膜糖蛋白功能有关且需要纤维蛋白原的介导，由此提示二价锌离子在血栓形成与止血中发挥重要作用。60-800μmol/L二价锌离子可诱导凝胶过滤后的血小板聚集，这一聚集过程不伴有ATP的释放，并且不受环氧化酶抑制剂的影响。
基于以上的研究发现和理论基础，本发明提出了一种以微孔淀粉和甲壳素或壳聚糖为主要原料的能降低伤口温度的快速止血剂。
以下给出本发明的具体实施例，需要说明的是本发明并不局限于以下具体实施例，凡在本申请技术方案基础上做的等同变换均落入本发明的保护范围。
玉米微孔淀粉制备方法及性能测试结果如下所述：
(1)玉米淀粉中蛋白和脂类杂质的去除
将适量玉米原淀粉(市售)用浓度0.2％的稀碱液浸泡后进行胶体磨，然后过筛，离心，洗涤，干燥，然后进行预处理；
(2)玉米淀粉的预糊化和超声波处理
配制40％(W/V)处理过的淀粉乳浊液，65℃搅拌20min后离心，沉淀在40℃条件下常压干燥后粉碎，然后进行超声波预处理。预糊化后的淀粉配制成乳浊液，用超声波在室温、25kHz、无搅拌情况下进行约25min的超声处理；
(3)玉米淀粉的有限酸解
称取一定量超声波处理后的淀粉于200mL烧杯中，用浓度15％的HCl溶液调成含淀粉30％的均匀淀粉乳，置于40℃的水浴锅中加热，同时用电动搅拌机搅拌。6小时后停止反应，用饱和碳酸钠溶液中和盐酸，然后抽滤洗涤。
(4)初步酸解后玉米淀粉的双酶解
称取适量上述初步酸解后的淀粉，用pH为5.2的缓冲液(弱酸及其盐的混合溶液，如HAc与NaAc)配制成浓度为50％的淀粉乳，在50℃恒温水浴锅中预热20min，同时用电动搅拌机搅拌，往淀粉乳中加入按理论水解50％淀粉的配比为4：1的酶(α－淀粉酶与糖化酶)量，然后恒温水浴振荡36h，停止酶反应。反复抽滤、水洗，得湿淀粉样品，置烘箱内于45℃烘干至恒重，用粉碎机粉碎，得到微孔淀粉。
(5)孔密度以及吸水性和吸油性的测定
上述经过酸酶序解的微孔淀粉用扫描电镜观察表明，微孔淀粉呈蜂窝状，颗粒表面分布的微孔约为0.48个/μm2，孔径约为0.76μm，孔深不一且最深的可达颗粒中心。与仅仅用双酶解法所制备的微孔玉米淀粉的孔密度0.3个/μm2相比较，孔密度提高了约60％；吸水性或吸油性是微孔淀粉所吸收的水或色拉油与微孔淀粉的质量比。在恒温下将一定质量的微孔淀粉与水或色拉油混合搅拌30min，转入砂芯漏斗后用真空泵抽滤，直至无水或油滴滴下，然后根据吸收前后的样品质量差计算其吸水性和吸油性。结果表明，用上述酸酶序解的方法制备的微孔玉米淀粉的吸水性率约为94％，吸油率约为74％，与仅仅用双酶解法所制备的玉米微孔淀粉78％的吸水性率和56％的吸油率相比较，其吸水性率和吸油率分别增加20％和32％。
本发明快速止血剂中加入的既可以是甲壳素和壳聚糖其中之一，也可以是它们按一定比例混合的混合物。
本发明快速止血剂中加入的既可以是钙离子和锌离子其中之一，也可以是它们按一定比例混合的混合物。
本发明制备的快速止血剂，既可以直接涂抹于伤口，也可以将其放入一种充满一定压力氮气的小型储压装备中，使用时在压力作用下直接喷于伤口。
实施例1
本实施例给出一种快速止血剂，其制备原料包括微孔淀粉、钙离子和壳聚糖或甲壳素，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为30g，钙离子加入量为20μmol，其中，壳聚糖或甲壳素可以单独加入也可以混合加入。
本实施例快速止血剂的制备方法为：
(1)玉米微孔淀粉的活化
称取1.0千克玉米微孔淀粉，将其在室温真空干燥器中留置24小时，然后依次用5倍体积的无水乙醇洗涤两次和12倍体积的丙酮洗涤三次后，用G2砂心漏斗抽滤至干，于45℃真空干燥器中留置24小时后，转入一事先充满高纯氮气的容器中。
(2)甲壳素和/或壳聚糖的加入
在上述充满高纯氮气的容器中，加入300克甲壳素，或300克壳聚糖，或100克甲壳素和200克壳聚糖的混合物，然后搅拌混匀。
(3)钙离子和/或锌离子的加入
在上述已加入甲壳素和/或壳聚糖的充满高纯氮气的容器中，加入2毫摩尔Ca(CH3COO)2·H2O，或200微摩尔Zn(CH3COO)2，或1.8毫摩尔Ca(CH3COO)2·H2O和200微摩尔Zn(CH3COO)2，然后搅拌混匀。
对上述方法得到的快速止血剂进行快速止血剂的细胞毒性试、组织相容性试验、快速止血剂对兔耳创面的止血效果、快速止血剂对兔肝脏创面的止血效果、快速止血剂对不同动物和人的止血试验，结果如下：
1.止血剂的细胞毒性试验
(1)材料
干燥的快速止血剂，上述实施例1方法制备的止血剂；人胚肺二倍体细胞(MRC-5)细胞系：本实验室保藏；新生胎牛血清：美国Gibco公司产品；DMEM培养基：购于美国Gibco公司产品；HEPES：美国Sigma公司产品；无水碳酸氢钠：美国Sigma公司产品；二甲基亚砜：北京鼎国生物技术有限公司产品；噻唑蓝：科昊生物工程有限公司产品；EDTA：北京鼎国生物技术有限公司产品；胰蛋白酶：美国Gibco公司产品。
(2)方法
称取2g干燥的快速止血剂至于50mL已灭菌的血清瓶中，加入10mL全DMEM培养基，置于37℃恒温水浴箱中浸提24h±2h，离心后取上清，即100％微孔淀粉全DMEM培养基浸提液，后用全DMEM培养基将其稀释成50％浸提液和25％浸提液，4℃冷藏备用。
将培养48h的人胚肺二倍体细胞弃去原培养基，加入1mL消化液洗涤一次，后加入2mL消化液，将细胞培养瓶置于二氧化碳培养箱内3min后取出，于倒置显微镜下观察，若是胞质回缩，细胞间隙增大，细胞收缩变圆，则立即加入5mL全DMEM培养基，并用移液管吹打成单个细胞悬液，置于光学显微镜下计数，再加入适量的全DMEM培养基稀释成1×107个/L的细胞悬液。
将上述细胞悬液接种于96孔培养板上，每组6孔，共4组。置于二氧化碳培养箱内培养24h后取出，吸弃原培养基，分别加入100％、50％、25％马铃薯微孔淀粉止血剂浸提液和全DMEM培养液，放入二氧化碳培养箱内继续培养。
分别与1、3、5、7d各取一块96孔细胞培养板，置于倒置显微镜下观察并拍照后，加入20μL MTT溶液，在二氧化碳培养箱内继续培养4h后取出，小心吸去培养基并加入150μL二甲基亚砜，常温下震荡10min后用酶联免疫测定仪于490nm下测吸光值。细胞相对增殖率用下式计算：
细胞相对增值率RGR(％)＝[OD1/OD2]×100％
式中，OD1：浸提液组的吸光度；OD2：阴性对照组的吸光度。
实验数据采用表示，统计学处理采用SPSS17.0分析软件，组间差异采用单因素方差分析，P<0.01具有统计学意义。
(3)细胞形态观察
由倒置相差显微镜下观察发现，培养24h后，各组细胞生长基本正常，细胞呈梭形并贴壁生长，折光性好，胞浆内有离散颗粒，无细胞溶解现象；经72h培养后，细胞贴壁并呈梭形，折光性好，25％浸提液组和阴性对照组相比无明显区别，而100％浸提液组合50％浸提液组与阴性对照组相比细胞密度明显较低。经120h培养后，阴性对照组和25％浸提液组细胞伸展并呈梭形，折光性好，二者细胞密度较大。100％浸提液组和50％浸提液组细胞密度相对较低。二者细胞中有少量收缩，折光性较差并有少量细胞破碎；经168h培养后，25％浸提液组、50％浸提液组和阴性对照组细胞密度极高并已重叠生长，细胞伸展呈梭形。而100％浸提液组细胞密度相对较低，折光性差。其中100％浸提液组细胞密度更低并有部分细胞收缩，生长状态较差，细胞溶出物较多。二者细胞中有少量收缩，折光性较差并有少量细胞破碎。
(4)MTT比色
测定1、3、5、7d的100％浸提液组、50％浸提液组、25％浸提液组和阴性对照组的MTT比色结果发现：在加入浸提液培养1d后，各组细胞形态正常，贴壁生长良好，各组细胞毒性级别为0级，无细胞毒性。各浸提液组和阴性对照组OD值比较差异无显著性意义(P>0.05)；在加入浸提液培养3d后，100％浸提液组、50％浸提液组和25％浸提液组的相对增值率分别为90.3％、91.5％和97.9％，级别为1级，细胞毒性极轻，其中100％、50％浸提液组和阴性对照组OD值比较差异有显著性意义(P<0.05)。而各组细胞密度也与各组相对增值率相吻合，未见各组细胞溶解，由此可以推测马铃薯微孔淀粉止血剂中含有的物质可能对细胞繁殖有轻度的抑制；在加入浸提液培养5d后，100％浸提液组、50％浸提液组和25％浸提液组的相对增值率分别为78.7％、85.5％和89.7％，级别均为1级，细胞毒性极轻，各浸提液组和阴性对照组OD值比较差异有显著性意义(P<0.05)。各组细胞密度和细胞生长状况也与各组相对增值率相吻合。其中100％浸提液组细胞疏松贴壁，并有少量细胞收缩变圆，细胞密度较低，可见100％浸提液组对细胞的生长和繁殖都有轻微的影响；在加入浸提液培养7d后，100％浸提液组、50％浸提液组和25％浸提液组的相对增值率分别为77.27％、102.35％和109.57％，级别分别为1级、0级和0级，其中100％浸提液组和阴性对照组OD值相比差异具有显著意义(P<0.05)。推测可能是因为在连续培养168h后，由于细胞密度过大，对培养基中养分的竞争更为激烈，以及少量死亡细胞施放出的有害物质对其他细胞的影响导致阴性对照组生长缓慢，而100％浸提液组、50％浸提液组和25％浸提液组由于繁殖较阴性对照组缓慢，同时各浸提液组培养基和阴性对照组培养基相比含有少量的淀粉水解产物，能为高密度生长状态下细胞提供额外的养分，因此50％浸提液组和25％浸提液组的细胞增值率大于100％。综合各方面原因，可以推测止血剂在施加到创伤表面后对创伤表面的细胞有极轻微的毒性，毒性级别为0～1级，止血剂虽对细胞的生长繁殖有极轻微的毒性，但其水解产物也能为细胞提供养分。
2.止血剂的组织相容性试验
(1)材料
干燥的快速止血剂，上述实施例1方法制备的快速止血剂；健康昆明小鼠24只(雌雄各半，体重20g±2g)，购自第四军医大学动物实验中心；2.5％戊巴比妥那：西安交通大学医学院提供；一次性注射器：上海达华医疗器械有限公司产品；医用酒精：宝鸡市大明酒精有限责任公司产品；碘伏：陕西三木奇卫生消毒用品有限公司产品。
(2)方法
将昆明小鼠随机分成2组，每组12只。腹腔注射2.5％戊巴比妥那麻醉后剪去右股处绒毛，用碘伏进行消毒，后用医用酒精脱碘，在右股处划出长约1cm，深约0.5cm的条形切口，实验组将0.2g无菌干燥的止血剂填入其中，对照组不填塞。缝合切口。各组小鼠饲养在同样条件下，分别于2d、6d、10d、14d各取3只小鼠，观察一般状况后断颈处死，切取肝脏、肾脏和右股部肌肉的组织块，组织块的厚度以5mm左右为宜，并迅速投入10％的中性甲醛溶液中固定24h。固定后的组织块先用自来水冲洗30min，后进行脱水。脱水的具体方法是：将组织块投入75％乙醇25min，85％乙醇30min，95％乙醇30min，95％乙醇30min，无水乙醇30min，无水乙醇25min，无水乙醇25min。捞出后将无水乙醇甩干，立即投入至二甲苯10min，二甲苯6min，务必使组织块达到透明为止，透明后开始浸蜡，浸蜡过程务必保持温度在58℃左右。具体方法是：将透明的组织块从二甲苯中取出后浸入含有二甲苯的石蜡(二甲苯：石蜡为1：3)中30min，再浸入依次含有二甲苯的石蜡(二甲苯：石蜡为1：8)、纯石蜡24h。浸蜡后取出组织块用铜制包埋框进行包埋。包埋后取出蜡块用切片机切成4μm厚的组织，42℃条件下在摊片机上进行摊片，用载玻片捞出后置于烘片机上60℃烘烤24h。染色的具体方法是：将烘烤过的载玻片投入二甲苯15min，二甲苯15min，无水乙醇5min，无水乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min，自来水冲洗10min，苏木精染色20min，自来水冲洗1min，含1％盐酸的无水乙醇20s，自来水冲洗1min，1％氨水反蓝30s，自来水冲洗1min，伊红染色5min，自来水冲洗30s，质量分数为85％的乙醇20s，质量分数为90％的乙醇25s，质量分数为95％乙醇1min，质量分数为95％乙醇1min，无水乙醇2min，无水乙醇2min，二甲苯2min，二甲苯2min，二甲苯2min，后用中性树胶封片，待树胶干燥后显微镜下观察。
(3)小鼠一般观察
术后小鼠毛色光亮，饮食、活动正常。右股部伤口没有明显溢脓、渗血、红肿等炎症反应。手术切口处周围组织无明显化脓、积液、坏死等现象。肝脏、肾脏和未填塞组小鼠相比无明显变化。结果表明，在植入马铃薯微孔淀粉止血剂2d后，其中的微孔淀粉已基本被吸收，但伴有少量炎症反应。而在植入马铃薯微孔淀粉止血剂6d后，其中的微孔淀粉已全部被吸收，无明显炎症反应，手术切口处周围组织愈合情况良好。
(4)HE染色分析
进行植入止血剂2d、6d、10d、14d后肝脏、肾脏和止血剂植入处周围组织的HE染色。结果发现，止血剂植入2d后基本被完全吸收并开始降解，植入组织周围有少量炎性细胞浸润，止血剂植入6d、10d、14d后被完全吸收，炎症反应消除，未见明显纤维细胞包膜，肝、肾组织切片未见异常。
通过以上细胞毒性实验和股部植埋实验对止血剂进行了生物相容性评价研究，结果表明我们之辈的止血剂具有良好的细胞相容性和组织相容性，可作为止血材料使用。
3.止血剂对兔耳创面的止血效果
(1)材料与方法
成年健康的新西兰大白兔12只(雌雄各半，体重2.0±0.2Kg)；干燥的快速止血剂，实验室自制，其中每千克玉米微孔淀粉中加入100克甲壳素和200克壳聚糖以及1.8毫摩尔Ca(CH3COO)2·H2O和200微摩尔Zn(CH3COO)2；云南白药；乌拉坦；一次性注射器；医用酒精和碘伏。
将新西兰大白兔随机分为3组(每组4只)，实验组(止血剂组)，阳性对照组(云南白药组)和阴性对照组。将新西兰大白兔固定在解剖台上，剪去耳部绒毛，耳缘静脉消毒后缓慢注射10mL 20％(w/v)乌拉坦溶液麻醉，后在大白兔耳部中央动脉处用碘碘酒行消毒和医用酒精进行脱碘，后做一1cm2大小的创口，切断中央动脉并撕下表皮。动脉血涌出后先用灭菌的医用纱布吸收，然后将0.2g干燥的玉米微孔淀粉止血剂或云南白药施加于创面，施压时用已灭菌的医用纱布按压止血，记录完全止血时间。
(2)统计学处理方法
实验数据采用表示，统计学处理采用SPSS17.0分析软件，组间差异采用单因素方差分析，P<0.01具有统计学意义。
(3)结果
我们制备的止血剂和云南白药对兔耳创面完全止血时间结果如表1所示。
表1兔耳创面完全止血时间
| 止血剂 | 1 | 2 | 3 | 4 | 平均时间/s |
| 自制止血剂组 | 96 | 92 | 86 | 94 | 92±4 |
| 云南白药组 | 222 | 218 | 212 | 208 | 215±6 |
| 阴性对照组 | 284 | 304 | 282 | 294 | 291±8 |
SPSS17.0统计软件分析表明，在创伤处施加这种止血剂后用医用纱布加压的止血时间与单纯用纱布加压的止血时间相比具有显著差异性(P<0.01)。在创伤处施加这种止血剂的止血时间和施加云南白药的止血时间相比具有显著差异性(P<0.01)。和目前市场上广泛应用的云南白药相比，本申请的止血剂在兔耳创面的止血效果实验中表现出更好的止血效果。
在创面出血情况大致相同的情况下，这种止血剂颗粒间空隙和颗粒的多孔结构能够吸收大量血液，并且由于淀粉的凝胶作用，聚集的直链淀粉分子会把血液包含在部分缔合的直链淀粉网中形成凝胶体，因而止血更加牢固。而云南白药仅能依靠颗粒间的空隙吸收血液，因此止血效果不甚理想，并在血液凝固过程中时刻伴有小股渗血现象。
4.止血剂对兔肝脏创面的止血效果
(1)材料与方法
成年健康的新西兰大白兔12只(雌雄各半，体重2.0±0.2Kg)；干燥的快速止血剂，实验室自制，其中每千克玉米微孔淀粉中加入了100克甲壳素和200克壳聚糖以及1.8豪摩尔Ca(CH3COO)2·H2O和200微摩尔Zn(CH3COO)2；云南白药；乌拉坦；一次性注射器；医用酒精：宝鸡市大明酒精有限责任公司；碘伏：陕西三木奇卫生消毒用品有限公司。
将新西兰大白兔随机分为3组(每组4只)，实验组(自制止血剂)，阳性对照组(云南白药组)和阴性对照组。首先将新西兰大白兔固定在解剖台上，耳缘静脉消毒后缓慢注射10mL 20％(w/v)乌拉坦溶液麻醉。剪去腹部绒毛，用碘酒进行消毒，后用医用酒精脱碘，逐层开腹并暴露肝脏。用手术刀在肝叶上做一1cm2创面，血液涌出后先用灭菌的医用纱布吸收，然后将0.2g干燥的玉米微孔淀粉止血剂或云南白药施加于创面，施压时用已灭菌的医用纱布按压止血，记录完全止血时间。
(2)统计学处理方法
实验数据采用表示，统计学处理采用SPSS17.0分析软件，组间差异采用单因素方差分析，P<0.01具有统计学意义。
(3)结果
自制止血剂和云南白药对兔耳创面完全止血时间结果如下表2所示。
表2兔肝脏创面完全止血时间
| 止血剂 | 1 | 2 | 3 | 4 | 平均时间/s |
| 自制止血剂组 | 46 | 52 | 54 | 42 | 49±6 |
| 云南白药组 | 132 | 125 | 134 | 128 | 130±8 |
| 阴性对照组 | 196 | 216 | 204 | 208 | 206±8 |
SPSS17.0统计软件分析表明，自制止血剂的止血时间和用纱布加压的止血时间相比具有显著差异(P<0.01)。在创伤处施加自制止血剂的止血时间和施加云南白药的止血时间相比具有显著差异(P<0.01)。和目前市场上广泛应用的云南白药相比，自制止血剂在兔肝创面的止血效果实验中表现出更好的止血效果。止血时间表明，自制止血剂对实质性脏器的止血效果更好。这是因为和动脉出血相比脏器出血多为隐蔽的毛细血管渗血，出血速度较慢，而玉米微孔淀粉止血剂中的微孔淀粉可以紧密的粘附于创面并形成一层血痂，同时协助凝血因子发挥作用，最终达到快速止血的目的。
同时结果表明，在兔肝创面的止血效果实验中，自制止血剂组的肝脏表面干燥，这充分说明了自制止血剂具有极强的吸水能力，玉米微孔淀粉在与血液接触后能形成一层牢固的血痂而紧密粘附于创伤表面。而云南白药组的肝脏表面时刻伴有渗血现象，止血效果并不理想。
通过上述兔耳中央动脉出血和肝脏创面出血两个出血模型检验自制止血剂的止血效果，表明这种止血剂的兔耳中央动脉的完全止血时间和兔肝脏创面的完全止血时间分别为92±4s和49±6s，均明显优于云南白药组。
5.止血剂对不同动物的止血
(1)小鼠和兔子
用上述实施例2方法制备的止血剂，在小鼠和兔子的表浅皮肤割伤上进行实验。在剃毛后的小鼠和兔子左前肢上制造出两个一样的割伤：长10毫米，深2毫米，相隔3厘米。吸去血液后，立即在一个伤口上喷洒本申请制备的止血剂，然后两个伤口均加压处理并记录下每个伤口停止出血的时间，并分别在1天、3天、7天、15天、30天、45天和60天对伤口愈合情况进行拍照。试验发现，涂了这种止血剂的伤口几乎立即就能够止血，而未涂这种止血剂的伤口近5分钟后才能止血；涂了这种止血剂的伤口在两周就几乎完全愈合平整，而未涂这种止血剂的伤口在8-9周后才能完全愈合平整；
(2)其它动物
用本发明制备的止血剂在一系列哺乳动物身上进行试验，其中包括豚鼠、鸡、狗、猪、牛等，所试验的器官组织包括大脑、皮肤、肝脏、脊髓、腿骨小动脉等部位。结果表明，采用这种止血剂疗效非常快，能够在100秒内止住血液的流失。
实施例2
本实施例给出一种快速止血剂，其制备原料包括微孔淀粉、钙离子和壳聚糖或甲壳素，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为1g，钙离子加入量为10μmol，其中，壳聚糖或甲壳素可以单独加入也可以混合加入。
本实施例快速止血剂的测试方法同实施例1相同，所得结果如下：
自制止血剂组，云南白药组和阴性对照组兔耳创面完全止血平均时间分别为(94±3)s，(217±4)s和(300±6)s，兔肝创面完全止血平均时间分别为(50±2)s，(131±3)s和(210±5)s。止血效果明显优于市售云南白药，且对不同动物伤口止血时间也均在100秒内，止血效果明显，且未引起伤口温度升高。
实施例3
本实施例给出一种快速止血剂，其制备原料包括微孔淀粉、钙离子和壳聚糖或甲壳素，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为50g，钙离子加入量为500μmol，其中，壳聚糖或甲壳素可以单独加入也可以混合加入。
本实施例快速止血剂的测试方法同实施例1相同，所得结果如下：
自制止血剂组，云南白药组和阴性对照组的兔耳创面与兔肝创面完全止血平均时间分别为(91±3)s和(51±1)s，(216±2)s和(133±4)s，(303±4)s和(213±4)s，止血效果明显优于市售云南白药，对不同动物伤口止血时间也均在100秒内。此外，与实施例2相比，当壳聚糖或甲壳素加入量增加至50g，钙离子加入量增加至500μmol时，止血效果变化不明显。
实施例4
本实施例给出一种快速止血剂，其制备原料包括微孔淀粉、锌离子和壳聚糖或甲壳素，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为50g，锌离子加入量为6μmol，其中，壳聚糖或甲壳素可以单独加入也可以混合加入。
本实施例快速止血剂的测试方法同实施例1相同，所得结果如下：
自制止血剂组，云南白药组和阴性对照组兔耳创面完全止血平均时间分别为(90±2)s，(215±5)s和(298±3)s，兔肝创面完全止血平均时间分别为(48±2)s，(129±3)s和(208±5)s。止血效果明显优于市售云南白药，且对不同动物伤口止血时间也均在100秒内，止血效果明显，使伤口温度能得到良好控制。
实施例5
本实施例给出一种快速止血剂，其制备原料包括微孔淀粉、锌离子和壳聚糖或甲壳素，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为50g，锌离子加入量为80μmol，其中，壳聚糖或甲壳素可以单独加入也可以混合加入。
本实施例快速止血剂的测试方法同实施例1相同，所得结果如下：
自制止血剂组，云南白药组和阴性对照组的兔耳创面与兔肝创面完全止血平均时间分别为(89±3)s和(46±2)s，(213±4)s和(125±3)s，(296±6)s和(205±4)s，止血效果明显优于市售云南白药，对不同动物伤口止血时间也均在100秒内。此外，与实施例2相比，当钙离子加入量从6μmol增加至500μmol时，止血效果未有明显改善。
对比例1
按照实施例1中方法制备微孔淀粉止血剂，测定不含甲壳素或壳聚糖的微孔淀粉与含有不同剂量甲壳素、壳聚糖与锌离子的微孔淀粉止血剂使用前后，人体皮肤表面伤口温度变化，结果如表3所示：
表3微孔淀粉止血剂使用前后人体皮肤伤口温度变化情况
| 微孔淀粉止血剂 | 使用前伤口温度(℃) | 使用后伤口温度(℃) |
| (对比例)样品1 | 24.3±0.3 | 38.2±0.6 |
| 样品2 | 24.6±0.2 | 27.1±0.3 |
| 样品3 | 25.1±0.4 | 26.8±0.4 |
| 样品4 | 24.5±0.5 | 26.3±0.6 |
| 样品5 | 25.2±0.6 | 26.5±0.5 |
| 样品6 | 25.4±0.3 | 26.2±0.3 |
注：样品1：不含任何添加剂的微孔淀粉；样品2：每100g微孔淀粉含壳聚糖或甲壳素1g；样品3：每100g微孔淀粉含壳聚糖或甲壳素1g，钙离子10μmol；样品4：每100g微孔淀粉含壳聚糖或甲壳素50g，钙离子500μmol；样品5：每100g微孔淀粉含壳聚糖或甲壳素50g，锌离子6μmol；样品6：每100g微孔淀粉含壳聚糖或甲壳素50g，锌离子80μmol。
由表3可得，止血剂使用前，人体皮肤温度为24-26℃，当使用不含添加剂的微孔淀粉进行止血时，伤口温度升高至38.2℃，高于人体正常体温，虽然止血迅速，但产生疼痛感明显增加；当微孔淀粉中加入不同浓度壳聚糖、甲壳素、钙离子和锌离子时，伤口表面温度基本不变，处于26.2-27.1℃范围。
Claims (4)
1.一种快速止血剂，其特征在于，由微孔淀粉，钙离子或锌离子，壳聚糖或甲壳素组成；
每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为1-50g，钙离子加入量为10-500μmol或锌离子的加入量为6-80μmol；
所述微孔淀粉孔径＜2μm。
2.如权利要求1所述快速止血剂，其特征在于，每100g微孔淀粉中，壳聚糖或甲壳素加入量为30g，钙离子加入量为200μmol或锌离子的加入量为20μmol。
3.如权利要求1至2任一所述快速止血剂，其特征在于，所述微孔淀粉为玉米微孔淀粉。
4.权利要求1所述快速止血剂的制备方法，其特征在于，该方法采用在高浓度氮气环境中依次加入微孔淀粉、钙离子或锌离子以及壳聚糖或甲壳素混合制成快速止血剂。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
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Granted publication date: 20180213 |