CN106456719A - 制备和施用单组份纤维蛋白封闭剂的装置和方法 - Google Patents
制备和施用单组份纤维蛋白封闭剂的装置和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106456719A CN106456719A CN201580016739.4A CN201580016739A CN106456719A CN 106456719 A CN106456719 A CN 106456719A CN 201580016739 A CN201580016739 A CN 201580016739A CN 106456719 A CN106456719 A CN 106456719A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mixture
- fibrin
- resin bed
- clot
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 78
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 334
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 219
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 218
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 183
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims abstract description 168
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims abstract description 167
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims abstract description 166
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 115
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 80
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 80
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 80
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 79
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims abstract description 45
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 claims abstract description 41
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000004891 communication Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 39
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 claims description 37
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 36
- 108010017446 glycyl-prolyl-arginyl-proline Proteins 0.000 claims description 32
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 claims description 22
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 22
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 16
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 13
- 239000003715 calcium chelating agent Substances 0.000 claims description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 9
- 239000012508 resin bead Substances 0.000 claims description 9
- 102000005525 fibrillarin Human genes 0.000 claims description 8
- 108020002231 fibrillarin Proteins 0.000 claims description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 8
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 7
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 6
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 5
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims description 5
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 5
- 210000003813 thumb Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims description 4
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical group [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical group [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 5
- 230000035602 clotting Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 42
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 42
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 37
- WXPZDDCNKXMOMC-AVGNSLFASA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-1-(2-aminoacetyl)pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical group NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 WXPZDDCNKXMOMC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 35
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 32
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 32
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 108010073651 fibrinmonomer Proteins 0.000 description 16
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 16
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 15
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 15
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 14
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 14
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 14
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 12
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 11
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 11
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 description 10
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 9
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 8
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 8
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 8
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 7
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 7
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 7
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 7
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 7
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 7
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 6
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 5
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 5
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 5
- 101100111164 Arabidopsis thaliana BAC2 gene Proteins 0.000 description 4
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 4
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 4
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 4
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 4
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 4
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 4
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 4
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 4
- GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N tranexamic acid Chemical compound NC[C@H]1CC[C@H](C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N 0.000 description 4
- 229960000401 tranexamic acid Drugs 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 108010027612 Batroxobin Proteins 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 210000004247 hand Anatomy 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N (4s)-4-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-3-carboxy-1-[[(2s)-1-[[1-[[(2s)-1-[[(2s)-4-carboxy-1-[[2-[[2-[[2-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 2
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006956 Calcium deficiency Diseases 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 2
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 2
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 description 2
- 101800000974 Fibrinopeptide A Proteins 0.000 description 2
- 102400000525 Fibrinopeptide A Human genes 0.000 description 2
- 102100024515 GDP-L-fucose synthase Human genes 0.000 description 2
- 101710119007 GDP-L-fucose synthase Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- 229920000459 Nitrile rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 2
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 2
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 2
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 description 2
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 description 2
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 2
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 2
- 239000004676 acrylonitrile butadiene styrene Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 2
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960002210 batroxobin Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000806 elastomer Substances 0.000 description 2
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 2
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 2
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- SJHPCNCNNSSLPL-CSKARUKUSA-N (4e)-4-(ethoxymethylidene)-2-phenyl-1,3-oxazol-5-one Chemical compound O1C(=O)C(=C/OCC)\N=C1C1=CC=CC=C1 SJHPCNCNNSSLPL-CSKARUKUSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010000196 Factor XIIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000842288 Hirudo medicinalis Hirudin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-UHFFFAOYSA-N Hydrogen atom Chemical compound [H] YZCKVEUIGOORGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010068052 Mosaicism Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-L Oxalate Chemical compound [O-]C(=O)C([O-])=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000012891 Ringer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XECAHXYUAAWDEL-UHFFFAOYSA-N acrylonitrile butadiene styrene Chemical compound C=CC=C.C=CC#N.C=CC1=CC=CC=C1 XECAHXYUAAWDEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000122 acrylonitrile butadiene styrene Polymers 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 1
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000000881 depressing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008355 dextrose injection Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000001513 elbow Anatomy 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000535 fibrinogen concentrate Substances 0.000 description 1
- 229940001501 fibrinolysin Drugs 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 210000003811 finger Anatomy 0.000 description 1
- 239000004811 fluoropolymer Substances 0.000 description 1
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 1
- 238000002194 freeze distillation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N levoglucosan Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2CO[C@@H]1O2 TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 230000001342 plasminogenolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000006965 reversible inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000013037 reversible inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000003765 sex chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 238000007631 vascular surgery Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/363—Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets
- A61B17/00491—Surgical glue applicators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4833—Thrombin (3.4.21.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/10—Polypeptides; Proteins
- A61L24/106—Fibrin; Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M3/00—Medical syringes, e.g. enemata; Irrigators
- A61M3/005—Medical syringes, e.g. enemata; Irrigators comprising means for injection of two or more media, e.g. by mixing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M2202/00—Special media to be introduced, removed or treated
- A61M2202/04—Liquids
- A61M2202/0413—Blood
- A61M2202/0445—Proteins
- A61M2202/0447—Glycoproteins
- A61M2202/045—Fibrin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Surgical Instruments (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的系统及其使用方法。在一个实施方案中，所述系统包括：a.设置在储存器(120)内的一定量液体混合物，所述混合物包含：I.纤维蛋白或II.纤维蛋白原和因子II；以及b.设置在容器(158)内的树脂床(160)，所述容器(158)能够与所述储存器(120)流体连通，其中当流体连通时，所述混合物经所述容器(158)的穿过导致所述混合物中小分子抑制剂和/或诱导剂的浓度的改变，从而有利于纤维蛋白凝块形成。
Description
序列表
本申请含有以ASCII格式通过EFS-Web与本申请同时提交并且据此全文以引用方式并入的序列表。2013年12月22日创建的所述ASCII副本命名为“序列表”并且大小为8千字节。
技术领域
本公开涉及用于制备和递送纤维蛋白封闭剂的装置、系统、方法和套件。
背景技术
纤维蛋白封闭剂也称为纤维蛋白胶，已使用了数十年(参见例如，Tabélé等人，Organic Glues or Fibrin Glues from Pooled Plasma:Efficacy,Safety andPotential as Scaffold Delivery Systems.J Pharm Pharmaceut Sci 2012,15:124–140；Dickneite,G等人，A comparison of fibrin sealants in relation to their invitro and in vivo properties.Thrombosis Res 2003,112:73–82)。
通常，纤维蛋白封闭剂由两种组分组成，包含纤维蛋白原的组分以及包含凝血酶的组分，所述组分通过双筒递送装置单独递送至目标区域，例如，如在美国专利4,874,368、美国专利4,978,336、美国专利5,104,375、美国专利6,234,994和EP-B-0 037 393、PCT专利申请WO2007059801、美国专利6,613,020以及美国专利6,783,514中所述。
通常，纤维蛋白封闭剂凝块通过涉及纤维蛋白原、凝血酶和因子XIII的酶促反应形成。凝血酶通过酶促作用将纤维蛋白原转化成纤维蛋白，速率由凝血酶的浓度确定。因子XIII作为血液凝固系统的酶，使纤维蛋白凝块交联并且稳定。此过程绕过了正常凝固的大多数步骤，并且模拟其最终阶段。
一些制造商将抗蛋白溶解剂添加到纤维蛋白胶制剂中(例如，如PCT专利申请WO93/05822中所述)或特异性除去纤溶酶原以使纤维蛋白溶解停止或延迟(例如，如美国专利5,792,835和7,125,569中所述)。凝血酶组分含有凝血酶，该凝血酶可来自人或动物(例如，牛或猪)来源或通过重组技术产生。纤维蛋白原组分含有凝血酶作用底物，纤维蛋白原，该纤维蛋白原可来自人或动物(例如，牛或猪)来源或通过重组技术产生。在将两种组分混合之后，凝血酶裂解纤维蛋白原，因此使纤维蛋白原聚合成纤维蛋白并得到封闭剂。
在现有技术装置中，两个供应贮存器，各包含一种粘合剂/封闭剂组分，通过固定装置连接在一起，因此使得一只手的指间固定施用装置并用另一只手操作装置是可能的。
本文称为“多组分”装置的现有技术装置可包括多个注射器，例如，两个注射器。例如，第一个注射器中的纤维蛋白原组分包含因子XIII和纤维蛋白原，而凝血酶组分在第二个注射器中，例如，如美国专利4,978,336中所述。通常，通过联接元件并按分配方向驱动联接元件，使第一个注射器和第二个注射器的柱塞同时接合，导致每个接合柱塞在各自注射器筒内纵向滑动，以实现同时同速度压下柱塞。两种组分混合后会自发形成纤维蛋白凝块，其可用作外科胶水。
当提到“多组分”装置时，术语“组分”是指容纳在贮存器例如注射器内的蛋白质混合物。因此，“多组分”装置需要多个贮存器，其中不同蛋白质混合物单独存放在每个贮存器中。
通常，现有技术装置还包括安装在装置分配端上的施涂尖端，其中各注射器中的流出物在此混合。流出物离开注射器后互不接触，并且仅在离开尖端时才进行混合。然而，由于当混合在一起时，两种组分会立即形成凝块，因此保持装置内液体流出稳定至关重要，目的是防止尖端堵塞。
发明内容
本发明的实施方案涉及用于制备和递送/施用纤维蛋白封闭剂的基于“单一组分”注射器装置，方法是使包含以下物质的液体混合物穿过树脂床，例如，尺寸排阻脱盐色谱介质：(i)纤维蛋白(例如，以单体、二聚体和/或低聚物形式)或(ii)纤维蛋白原和因子II。液体混合物经树脂床的穿过(i)提高混合物中纤维蛋白凝块形成小分子抑制剂的浓度和/或(ii)降低混合物中纤维蛋白凝块形成小分子抑制剂的浓度。
术语“提高”是指混合物中小分子活化剂的浓度上升至引发、促进和/或加速纤维蛋白凝块形成的浓度，其中凝结时间(TCLOT)在介于21℃和25℃之间的环境温度下为至多1小时。在一个实施方案中，纤维蛋白凝块在大约37℃的温度下形成。
术语“降低”是指混合物中小分子抑制剂的浓度降低至一定浓度，该浓度下，允许纤维蛋白凝块形成，凝结时间(TCLOT)在介于21℃和25℃之间的环境温度下为至多1小时。在一个实施方案中，纤维蛋白凝块在大约37℃的温度下形成。
通常，当混合物穿过并且/或者接触到预平衡的树脂床(例如，包装装置前已平衡)时，高效的缓冲液交换将导致包含至少90％的预平衡缓冲液的洗脱后混合物(例如，穿过树脂床之后得到的混合物)，并且/或者使混合物中小分子抑制剂的浓度降至混合物中小分子抑制剂初始浓度的10％以下。本领域的技术人员将会知道，通过改变小分子抑制剂和/或活化剂的浓度，以及较低的缓冲液交换效率可导致凝块形成。
在一个实施方案中，使用前装置由使用者使用适当的缓冲液(例如，包括在树脂床中的缓冲液，根据要施用的混合物制剂确定)进行平衡。
因此，在一个实施方案中，混合物在穿过树脂床之后，抑制剂的浓度降至混合物中抑制剂初始浓度的50％以下(例如，10％以下)。在一个实施方案中，混合物在穿过树脂床之后，混合物中活化剂的浓度升高到预平衡缓冲液中活化剂浓度的至少50％(例如，至少90％)。包含纤维蛋白的液体混合物可包含纤维蛋白单体、二聚体和/或具有多个纤维蛋白单元的低聚体，使得纤维蛋白在环境温度下在水性液体溶液中保持为可溶形式，该环境温度选自约21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。在一个实施方案中，低聚体含有多至10个纤维蛋白单元。
在一个实施方案中，液体混合物穿过树脂床之后，纤维蛋白封闭剂被递送和/或施加于表面并形成纤维蛋白凝块/纤维蛋白聚合物。
出于大多数目的和用途，术语“纤维蛋白封闭剂”、“纤维蛋白胶”、“纤维蛋白粘合剂”、“纤维蛋白凝块”和“纤维蛋白聚合物”可互换使用。如本文所用的术语“纤维聚合物”包括多个具有多个纤维蛋白单元的纤维蛋白单元，从而限制了纤维蛋白在环境温度下在水性液体溶液中的溶解度，该环境温度选自约21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
相比于上述常规“多组分”装置，本发明无需将第一种蛋白质混合物保存在第一个贮存器中并将第二种蛋白质混合物保存在第二个贮存器中。相反，本发明可采用“单一组分”方案，其中仅需一个容纳蛋白质的贮存器。如下文所述，当含有蛋白质的混合物从该贮存器/储存器中流出并穿过树脂床之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在介于21℃和25℃之间的环境温度下为至多1个小时。
“环境温度”是混合物周围环境的温度。
在一些实施方案中，相比于使用现有技术装置形成的快速凝结纤维蛋白封闭剂，通过将液体混合物流经树脂床形成的纤维蛋白封闭剂的凝结时间(TCLOT)可为至少30秒或至少1分钟，这允许提供“不易堵塞”并且“不易堵死”的装置，即正常操作装置期间，装置被形成的凝块堵塞或堵死的风险低于上述现有技术装置。
与通过多种蛋白质混合物的相互混合形成纤维蛋白凝块不同，可通过使单一蛋白质混合物穿过树脂床由该蛋白质混合物得到纤维蛋白凝块，以便(i)降低存在于混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或(ii)提高混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度。在这种意义上，尽管该单一混合物中可能存在不同类型的蛋白质，但本发明所公开的装置仍可定义为“单一组分”装置，原因是仅需一种蛋白质混合物。术语“单一组分”与术语“单组分”是可互换的。
因此，在一些实施方案中，混合物穿过树脂床使混合物经历缓冲液交换过程，由此去除混合物中的大部分抑制剂小分子，同时保留活性蛋白质，例如I)纤维蛋白或II)纤维蛋白原和因子II。在一些实施方案中，混合物穿过树脂床可为混合物补充诱导剂/活化剂小分子，诸如可诱导/或加速纤维蛋白凝块形成的钙离子。本文的术语“诱导剂”可与术语“引发剂”和“活化剂”互换使用。
根据下文所指出，在注射器的具体实施中，驱动蛋白质混合物穿过树脂床所需的力的大小相对较小，并且可通过人拇指的力量施加。因此，在一些实施方案中，本发明所公开的装置可成为上述现有技术的多组分装置的可行替代装置。在一个非限制性示例(例如，涉及基于注射器的具体实施)中，本发明所公开的装置可例如在手术期间使用单手操作以产生外科胶水。
在涉及基于注射器的具体实施的一些实施方案中，(i)液体混合物(即包含：I-纤维蛋白或II-纤维蛋白原和因子II)设置/容纳在注射器的筒内，并且(ii)注射器筒已附接或可附接至内部容纳有树脂床的容器。当注射器筒内部与树脂床流体连通时，按下注射器柱塞将液体混合物排出注射器筒并迫使液体混合物穿过树脂床。混合物穿过树脂床导致形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多1小时，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
在一个实施方案中，穿过树脂床之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间在大约37℃的环境温度下为至多1小时。
在一个实施方案中，包含纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体的液体混合物维持在中性pH下并且包含可逆的纤维蛋白聚合阻断剂，例如下文详细阐述的GPRP肽。
在另一个实施方案中，包含纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体的液体混合物维持在酸性pH条件下，如下文详细阐述。
“中性”pH为例如约6-8的pH或约6.5-7.5的pH或约6.7-7.2的pH。“酸性”pH为例如小于4的pH。
相比于常规的“多组分”装置，在一些实施方案中，用于制备纤维蛋白封闭剂的所有蛋白质可由单个注射器筒内部供应，无需保持多种隔离的蛋白质混合物，然后将它们彼此混合以制备并递送纤维蛋白封闭剂。
在本发明的一些优选实施方案中，注射器的筒内包含(i)纤维蛋白或(ii)纤维蛋白原和因子II的液体混合物以及驻留物在穿过树脂床之前是“稳定的”，即在至少2周的时间段内不会自发形成纤维蛋白聚合物(“纤维蛋白凝块”)。穿过树脂床导致凝块形成。
如上所述，在一些实施方案中，仅需“最小的”力即可使混合物穿过树脂床。这可以实现，因为引发凝块形成仅需相对较短的树脂床。不希望受理论的束缚，在一些实施方案中，穿过树脂床可将相对较大的蛋白质(例如，大于20kDa的蛋白质)与纤维蛋白凝块形成的小分子抑制剂分离并且/或者加入纤维蛋白凝块形成的小分子诱导剂。由于蛋白质与抑制剂的分子量有本质上的差别，例如，精氨酸和柠檬酸盐，该过程仅需相对较短的树脂床。
在一个实施方案中，抑制剂为可逆抑制剂，例如没有持久效果的低亲和力抑制剂。因此，通常稀释和/或小分子交换将除去抑制作用。
在一个方面，本发明涉及用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的装置，该装置包括：a.包括筒和柱塞的注射器，其中筒内容纳有一定量的包含以下成分的液体混合物(例如，无细胞体系)：I.纤维蛋白或II.纤维蛋白原和因子II；以及b.树脂床，该树脂床设置在容器内，使得当注射器筒内部与树脂床流体连通时，通过柱塞将混合物排出筒，迫使混合物穿过容器内的树脂床，从而导致(i)混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度降低和/或(ii)混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度提高，其中(A)在经容器的穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多1小时(或至多50分钟，或至多40分钟，或至多30分钟，或至多20分钟和/或至少5秒，或至少10秒，或至少30秒，或至少1分钟，或至少3分钟，或至少5分钟，或至少10分钟，或至少15分钟)，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃；并且(B)抑制剂和诱导剂为小分子。
在另一个方面，本发明涉及用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的系统，该系统包括：a.设置在储存器例如注射器的筒内的一定量的液体混合物(例如无细胞体系)，该液体混合物包含：I.纤维蛋白或II.纤维蛋白原和因子II；以及b.设置在容器内的树脂床，该容器可与储存器流体连通，其中当流体连通时，混合物经容器的穿过(i)降低混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或(ii)提高混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，使得混合物经容器的穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多1个时(或至多50分钟，或至多40分钟，或至多30分钟，或至多20分钟和/或至少5秒，或至少10秒，或至少30秒，或至少1分钟，或至少3分钟，或至少5分钟，或至少10分钟，或至少15分钟)，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃，其中抑制剂和诱导剂为小分子。
在另一个方面，本发明涉及套件，该套件包括：a.设置在储存器内的一定量液体混合物(例如，无细胞体系)，该液体混合物包含：I.纤维蛋白或II.纤维蛋白原和因子II；以及b.设置在容器内的树脂床，该容器可与储存器流体连通，使得当容器和储存器流体连通时，混合物经容器的穿过(i)降低混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或(ii)提高混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，使得混合物经容器的穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多1小时(或至多50分钟，或至多40分钟，或至多30分钟，或至多20分钟和/或至少5秒，或至少10秒，或至少30秒，或至少1分钟，或至少3分钟，或至少5分钟，或至少10分钟，或至少15分钟)，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃，其中抑制剂和诱导剂为小分子。
在另一个方面，本发明涉及用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的方法，该方法包括：a.提供一定量的液体混合物(例如，无细胞体系)，该液体混合物包含：I.纤维蛋白或II.纤维蛋白原和因子II；以及b.使混合物穿过树脂床以便(i)降低混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或(ii)提高混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，使得混合物穿过树脂之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多1小时，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃，其中抑制剂和诱导剂为小分子。
在一个实施方案中，纤维蛋白凝块在约20℃至40℃例如21℃至37℃环境温度范围内形成，其中凝结时间(TCLOT)为至多1小时。
在另一个方面，本发明涉及被构造成由液体混合物生成纤维蛋白封闭剂的装置，该液体混合物包含纤维蛋白原和因子II，混合物储存在装置的储存器中，其中
(i)装置以不易堵塞并且不易堵死的装置操作；并且
(ii)形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下高达约1小时(例如约10秒至约1小时或10分钟至约1小时)，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
在一个实施方案中，在将纤维蛋白封闭剂施加至包含组织因子和/或磷脂的表面例如受伤组织的情况下，纤维蛋白凝块形成，其中凝结时间为约10秒至约10分钟。
在另一个方面，本发明涉及被构造成由液体混合物生成纤维蛋白封闭剂的装置，该液体混合物包含纤维蛋白和可逆的纤维蛋白聚合阻断剂，该混合物储存在装置的储存器中，其中
(i)液体混合物中的纤维蛋白为单体和/或低聚体形式；
(ii)装置以不易堵塞并且不易堵死的装置操作；并且
(iii)形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下在约5秒至约1小时的范围内，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
本文还公开了不易堵塞并且不易堵死的装置，该装置被构造成通过储存在贮存器/储存器例如装置的注射器筒内的包含纤维蛋白原和因子II的液体混合物生成纤维蛋白封闭剂，其中穿过树脂床之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多约1小时(例如，在约10秒至约1小时范围内或在约10分钟至约1小时范围内)，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。在一些实施方案中，液体混合物还包含因子X、因子VII、因子IX以及任选上述因子的相关辅因子(例如，因子V、因子VIII)。
本文还公开了不易堵塞并且不易堵死的装置，该装置被构造成通过包含纤维蛋白(以单体、二聚体和/或低聚体形式)和可逆的纤维蛋白聚合阻断剂例如GPRP的液体混合物形成纤维蛋白封闭剂，混合物储存在装置的贮存器中，其中穿过树脂床之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间(TCLOT)在环境温度下在约5秒至约1小时的范围内，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
在一些实施方案中，根据本发明的装置、系统和/或套件用于向表面递送纤维蛋白封闭剂。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，在使液体混合物穿过树脂床之前，注射器筒内的液体混合物稳定至少两周。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床为填充床。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，装置还包括能够与容器的远端流体连通的尖端，使得当流体连通时，纤维蛋白封闭剂经尖端递送至表面。液体混合物可例如通过滴注、喷涂(例如，通过包括与加压气体储存器共用的喷嘴)和/或展布施加。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，储存器(例如，注射器筒)和容器彼此之间机械地联接，使得它们各自的内部由可移除的隔挡和/或(i)隔膜、(ii)单向滤件、(iii)阀和(iv)旋塞阀中的至少一者来分离。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，储存器和容器之间可拆卸地连接。在另一个实施方案中，储存器和容器以整体件一体形成。在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，储存器和容器是整体件例如灵活的整体件的部件。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，使液体混合物穿过树脂床所需的大部分力由人拇指的肌肉力量提供。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，(i)凝结时间(TCLOT)为至多50分钟，或至多40分钟，或至多30分钟，或至多20分钟和/或(ii)至少5秒，或至少10秒，或至少30秒，或至少1分钟，或至少5分钟，或至少10分钟，或至少15分钟。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，介于i.穿过树脂床之前混合物中20+kDa蛋白质的浓度和ii.穿过树脂床之后纤维蛋白封闭剂中20+kDa蛋白质的浓度之间的比率为约1。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，介于i.穿过树脂床之前混合物中30+kDa蛋白质的浓度和ii.穿过树脂床之后纤维蛋白封闭剂中30+kDa蛋白质的浓度之间的比率为约1。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，在一定保留时间后由液体混合物制备纤维蛋白封闭剂，该保留时间为至多1分钟，或至多45秒，或至多30秒，或至多15秒，或至多10秒，或至多5秒，或至多3秒，或至多1秒。
术语“保留时间”通常是指液体混合物在设定条件下穿过包含树脂的容器所需的时间。
不受机制的束缚，该保留时间相对较短可能是由于树脂床属性，例如由于以下因素，包括但不限于，树脂体积、树脂床的物理尺寸，例如长度和/或宽度/直径、填充后树脂床的压缩等。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，将液体混合物从储存器(例如，从注射器筒)排出迫使混合物在树脂床的横截面上以基本均匀的方式流动穿过树脂床。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，装置包括至少一个网片，该网片被构造成将流动分配到树脂床上(例如，在树脂床横截面上以基本均匀的方式)并且/或者将树脂珠粒保留在床内。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，装置包括两个网片。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床在容器内，由此使得混合物穿过网格，随后途中穿过滤纸到达树脂床，该网格被构造成在施压期间提供机械支撑以及将流动分散到滤纸上，并且该滤纸被构造成将流动分配到树脂床上并将树脂珠粒保留在床内。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床的高度为至多10cm，或至多7.5cm，或至多5cm或至多2.5cm，或至多2cm，或至多1.5cm或至多1cm。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床的高度为至少为0.5cm。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床的高度为至多10cm，或至多7.5cm，或至多5cm，或至多2.5cm，或至多2cm，或至多1.5cm或至多1cm和/或至少0.5cm。
不希望受理论的束缚，在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，由于床相对较短，可能需要相对“较宽的床”以实现充分的缓冲液交换从而引发和/或加速纤维蛋白凝块形成。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床的宽度为至多5cm，或至多为2.5cm，或至多为1.3cm。
通常，词语“宽度”与词语“直径”是可互换的。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床的高度与其特征宽度之间的比率为至多2.5，或至多2，或至多1.5，或至多1，或至多0.75和/或至少0.5。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，储存器(例如，注射器筒)内液体混合物的量具有至少0.5ml，或至少1ml和/或至多15ml，或至多10ml，或至多5ml的体积。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床相对“较短”，使得即使是一般使用者也能够迫使液体混合物穿过床，无需离心机。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，在至多60秒的时间段内施加至柱塞的至多100牛顿或至多75牛顿，或至多50牛顿，或至多30牛顿的力足以迫使储存器(例如，注射器筒)内储存的大部分液体混合物以至多60秒的保留时间穿过树脂床。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床为预填充过的。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床为使用诱导剂进行预平衡过的。
在一个实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床为使用所需最终浓度的抑制剂例如，以低于混合物中抑制剂初始浓度的浓度预平衡过的。不受机制的束缚，使用者可通过使树脂床中包含固定浓度的抑制剂，控制穿过装置后混合物中抑制剂的浓度，从而控制纤维蛋白聚合速率。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床中液相部分的比例为至少10％，或至少20％，或至少30％和/或至少50％，或至多40％(所有百分比均为v/v)。
在一个具体示例中，树脂床中液相部分为树脂床总体积的30-40％，并且约等于储存器(例如，注射器筒)中液体混合物的体积。
在一个实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床的体积在0.7ml至20ml范围内。
在一个实施方案中，树脂床的体积为6.4ml。在另一个实施方案中，树脂床的体积为12.3ml。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，介于(i)注射器筒内液体混合物的体积与(ii)树脂床的体积之间的体积比为至少0.1，或至少0.2和/或至多10，或至多5。
在一个实施方案中，介于(i)注射器筒内液体混合物的体积与(ii)树脂床的体积之间的体积比在约0.1至约10的范围内。在另一个实施方案中，介于(i)注射器筒内液体混合物的体积与(ii)树脂床的体积之间的体积比在约0.2至约5的范围内。在又一个实施方案中，介于(i)注射器筒内液体混合物的体积与(ii)树脂床的体积之间的体积比在约0.3至约1的范围内。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床为可消毒的，即树脂床经消毒后仍能够执行其功能。在一些实施方案中，装置及其部件(包括液体混合物)为无菌的。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，液体混合物包含纤维蛋白原和因子II。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，抑制剂为丝氨酸蛋白酶活性位点抑制剂。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，抑制剂是钙螯合剂。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，诱导剂是阳离子，例如钙阳离子或其它二价阳离子，诸如镁、铁或锌或它们的组合。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，诱导剂为磷脂、脑磷脂和/或二价阳离子。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，使用维生素K依赖性凝结酶原活化缓冲溶液，例如高岭土粉、磷脂、脑磷脂、组织因子、促凝血酶原激酶、合适pH的缓冲液，对树脂床进行预平衡。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床包含CaCl2。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，液体混合物包含单体、二聚体和/或低聚体形式的纤维蛋白。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，液体混合物维持在中性pH下，并且抑制剂为GPRP肽或其它可逆的纤维蛋白聚合阻断剂。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，液体混合物维持在酸性pH下，并且抑制剂为水合氢离子(H3O+)。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，诱导剂为羟基离子(OH-)。
在一些实施方案中(例如，涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法)，树脂床中包含精氨酸。
所有实施方案涉及本文所公开的任何装置、系统、套件和/或方法。
附图说明
图1A和图1B为根据一些实施方案的用于制备和递送纤维蛋白封闭剂的示例性装置的分解图和前视图。
图2A示出了液体混合物经容器内树脂床的穿过。
图2B示出了O形环、近侧滤纸、树脂床和设置在容器内的远侧滤纸。
图3是用于通过使用根据本发明的装置制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的方法的实施方案流程图。
图4A示出通过使混合物穿过市售的经CaCl2预平衡的柱(一次性PD-10脱盐柱)经受小分子交换的液体混合物。交换后，纤维蛋白凝块自发形成。
图4B示出通过使混合物穿过市售的用缺乏CaCl2的缓冲液预平衡的柱来经受小分子交换的液体混合物。即使在若干天之后也未发生凝结。
图5A示出由GPRP抑制的纤维蛋白溶液，该纤维蛋白溶液未经受缓冲液交换程序，在测试条件受测时间段[环境室温(约22-24℃)下持续24小时]下保持液体形式。
图5B示出通过使用柱执行缓冲液交换过程去除GPRP抑制剂后聚合的液体混合物。
图6示出酶原与补充了组织因子和磷脂的酶原：纤维蛋白原混合物的快速凝结取决于CaCl2浓度。
图7示出纤维蛋白的聚合速率与GPRP的浓度之间存在对数关系。
具体实施方式
本文参照附图，仅以举例说明的方式描述本发明。现具体参照附图详细说明，应当强调的是细节均以举例的方式示出并且目的只是对示例性系统的优选实施方案进行例示性讨论，并且展示的目的是针对本发明中被认为是有用并且易懂的原理和概念性问题进行说明。就这一点而言，除对本发明做基本了解时所必需的信息外，本发明将不就自身结构详情进行说明，附图随附的描述可使本领域的技术人员轻松了解在实施过程中本发明有几种可实施形式以及如何制定和使用实施方案。
为简明起见，各特征结构的一些明确组合并未在图中明确示出和/或描述。现公开说明本文所公开的方法或装置特征结构的任何组合能够以任意方式组合，包括任何特征结构的组合，任何特征结构的组合可包括在任何实施方案和/或从任何实施方案中省去。
图1A和图1B为用于制备和递送纤维蛋白封闭剂的装置的分解图和前视图。根据图1A-1B的非限制性示例，装置包括：(i)注射器120；(ii)容器158；和(iii)设置在容器158内的树脂床160。注射器120包括(i)柱塞122和(ii)筒124，该筒包括用于将注射器附接至容器的尖端126(例如，阳螺纹旋锁接头)。尖端126的尺寸被设计为配合承窝128(例如，以形成不透液密封)，并且不与位于树脂床160远侧的施涂尖端(未示出)混淆。
在图1的具体示例中，容器158包括近侧外壳部分130和远侧外壳部分180。设置在容器158内的是(i)O形环140；(ii)近侧滤纸150和远侧滤纸170；和(iii)树脂床160。如图1B所示，容器158具有阳螺纹旋锁适配器，该适配器为远侧端194。
图1B还示出一定量的液体混合物190(例如，无细胞混合物，诸如由血液的脱细胞血浆部分或通过重组技术制备的蛋白质混合物)包含：(i)纤维蛋白或(ii)纤维蛋白原和因子II。该液体混合物设置在注射器120的筒124内。在一些实施方案中，当混合物190在注射器筒124内时，认为混合物190为“稳定的”，例如，至少2周的时间段内不能自发形成纤维蛋白聚合物(“纤维蛋白凝块”)。
使混合物190(例如将其从注射器120的筒124排出后)穿过树脂床160导致：(i)降低存在于混合物中的纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或(ii)提高混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，其中抑制剂和诱导剂为小分子。在一些实施方案中，按下柱塞122将混合物190从注射器筒124(例如经由尖端126)排出并迫使被排出的混合物190穿过树脂床160。
图2A-2B是其中设置有树脂床160的被组装的容器158的特写图示。图2A示出了混合物190对容器158内树脂床160的穿过。图2B示出了O形环140、近侧滤纸150、树脂床160和设置在容器158内的远侧滤纸170。O形环140可防止渗漏，例如从并置在包括可拧紧元件的近侧外壳部分130与远侧外壳部分180的螺纹蚀刻之间的渗漏。在图2A-2B的实施方案中，容器由可通过紧固彼此附接的近侧外壳部分和远侧外壳部分组装。在另一个实施方案中，外壳的近侧部分和远侧部分为可机械附接的。
外壳可由塑性材料，例如聚丙烯、聚碳酸酯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)等，以及它们的组合构成。O形环可由弹性体，诸如有机硅；橡胶和含氟聚合物弹性体；橡胶；和/或丁腈橡胶(NBR)等构成。
在一个实施方案中，装置包括滤纸150和170，例如两侧均具有支撑网格(例如，适用于26mm内径柱的支撑筛网；产品代码：18-9377-01；GE Healthcare，Sweden)的WatmannGF。在此类实施方案中，一个支撑网格定位在滤纸150的近侧，并且另一个支撑网格定位在滤纸170的远侧。支撑网格可为滤纸提供机械支撑。支撑网格可由聚丙烯、聚乙烯、聚酰胺、特氟隆和/或不锈钢等构成。
图2A示出了混合物190对容器158内树脂床160的穿过。根据本发明的结果示出根据本发明的装置包括具有高宽比(例如0.52或1)的树脂床，使得有利的是，树脂床能够被人拇指肌肉能量所施加的力操纵，同时由已知的市售凝胶过滤离心柱(例如，一次性PD-10脱盐柱，产品代码：17-0851-01，GE Healthcare，Sweden)提供高效缓冲液交换。通常，市售的凝胶过滤离心柱为长且窄的(例如，高度:宽度的比率为约>3)。为使混合物穿过此类市售柱，需要较长的处理时间(当利用重力作用时)或者较大的力(例如，使用离心机)。这些可商购获得的柱通常不兼容手持装置(例如，注射器)。因此，在一些实施方案中，可能期望采用最小高度的树脂床，例如，以便最小化使混合物190穿过树脂床160所需的力的量。因此，可能优选的是使用具有以下比率的树脂床，介于(i)树脂床高度(图2B中的161)和(ii)相应特征宽度(图2B中的162)之间的比率为至多约2.5或至多约2或至多约1.5或至多约1或至多约0.75和/或至少0.5。在一个实施方案中，树脂床的直径(宽度)为25mm并且高度为13mm，即，高宽比为0.52。在另一个实施方案中，树脂床的直径(宽度)为25mm并且高度为25mm，即，高宽比为1。
因此，为使混合物190与基本上整个树脂床“相互作用”或者“接触”，可能需要实现在树脂床160横截面上相对均匀的流动，使得混合物流动穿过整个树脂床。该流动剖面示于图2A中。
术语“接触”或“相互作用”是指任何类型的联合作用，该联合作用使混合物以一定的方式近距离充分接触树脂床，该方式为溶质/小分子在穿过树脂床时被除去和/或交换。混合物可在树脂床内温育足够的一段时间，以允许溶质/小分子的去除和/或交换。混合物穿过树脂床时的温度可在20℃至40℃范围内，并且离开装置时pH在6至8范围内。
滤纸150可起作用以有助于树脂床160上的流动分配。近侧滤纸150连同远侧滤纸170的另一个功能可为将珠粒颗粒保留在树脂床160内。
滤纸是网片的一个示例，在不同实施方案中，可使用其它网片结构(即除滤纸之外)以有助于树脂床160横截面上的流动分配和/或将珠粒颗粒保留在树脂床160内。
在一些实施方案中，目尺寸(即，网片中孔的尺寸)比最小珠粒的尺寸小至少2倍。在一个实施方案中，目尺寸介于10-20微米之间。“网片”涉及可有助于树脂床160横截面上流动分配和/或将珠粒颗粒保留在树脂床160中的任何类型的多孔基质。网片的非限制性示例为网格、蚀刻材料、聚合物网络、滤纸等。网片可由任何材料构成，例如生物相容性材料，诸如塑料、尼龙、纤维素、合金、玻璃等。装置可包括不止一个网片元件。
本领域的技术人员将会知道典型的填充树脂床可由大约60-70％(v/v)的固体材料和由包含小分子溶质的液体溶液构成的另外30-40％(v/v)构成，或可由固体材料和液体溶液以任何其它比例构成。在一个实施方案中，填充树脂床由大约60-70％(v/v)的固体材料和由包含小分子溶质的液体溶液构成的另外30-40％(v/v)构成。当一定体积的含蛋白质的液体混合物190被驱动穿过如上所述装置时，液体混合物中的小分子被去除和/或交换。因此，蛋白质溶液从装置流出时的体积与穿过树脂床160之前的体积基本类似并且蛋白质组成变化极小，然而溶质/小分子均在穿过树脂时被去除和/或交换。
在一些实施方案中，认为混合物190在进入容器158之前为“稳定的”。使混合物190穿过树脂床160并穿过容器158允许封闭剂形成，其中凝结时间(TCLOT，时间参数)在环境温度下为至多1小时，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。在一些实施方案中，TCLOT的值为至多1小时，或至多50分钟，或至多40分钟，或至多30分钟，或至多20分钟。另选地或除此之外，TCLOT的值为至少5秒，或至少10秒，或至少30秒，或至少1分钟，或至少3分钟，或至少5分钟，或至少10分钟，或至少15分钟。
在一些实施方案中，混合物190穿过树脂床160后可用作外科胶水。
为了方便起见，在此列出该说明语境下的各术语。就本专利申请中此处或其它位置明确或隐含提供的定义而言，此类定义的理解应与相关领域技术人员所定义术语的用法保持一致。此外，对此类定义的理解可最广义地与上述用法保持一致。
除非另外指明，对于本公开，当两个量QUANT1和QUANT2，彼此“约”等于或彼此“基本上相同”时，所述量完全相等，或者介于(i)两个量中较大一方MAX(QUANT1,QUANT2)与(ii)两个量中较小一方MIN(QUANT1,QUANT2)之间的“量比”为至多1.3。在一些实施方案中，该比率为至多1.2或至多1.1，或至多1.05。本公开中，“约”等于和“基本上相同”能够互换使用并且具有相同含义。
“小分子”诱导剂/活化剂或抑制剂的分子量为至多1,000千道尔顿。“小分子”的非限制性示例包括离子、具有小于8个氨基酸的短肽和化合物。
在一些实施方案中，小分子抑制剂为分离的肽、它们的衍生物或盐，其能够可逆地结合纤维蛋白单体并且防止或延迟纤维蛋白凝块形成。在一些实施方案中，小分子抑制剂为小化学分子。小分子抑制剂可为对纤维蛋白单体的低亲和力试剂，并且对纤维蛋白聚合不具有永久性作用。因此，通常稀释和/或小分子交换将引发聚合。
在一些实施方案中，抑制剂选自：钙螯合剂、丝氨酸蛋白酶活性位点抑制剂、以及它们的组合。
在一些实施方案中，小分子活化剂/诱导剂为二价阳离子，例如钙阳离子。在一些实施方案中，钙阳离子由CaCl2提供。
“树脂床”是指多元基质，其由维持在液体例如缓冲液中的聚合物基材(例如，琼脂糖凝胶、琼脂糖、丙烯酸酯)以珠粒的形式(例如，以亚毫米至测微尺寸)制成。树脂在本领域中是众所周知的，例如，如“蛋白质液相色谱”中所描述，编辑人：Michael Kastner，Journalof Chromatography Library，第61卷，Elsevier Science，2000；第94-114页。树脂床被用作小分子交换装置，也称为“尺寸排阻”树脂。通常，小分子交换为将一组小分子用另一组置换。通常，使用引发和/或加速纤维蛋白凝块形成的小分子对树脂进行预平衡。树脂床通常是指例如包含溶质的液相，以及固相，即树脂床的树脂珠粒。
珠粒能够由以下材料构成：亲水材料，诸如琼脂糖、琼脂糖凝胶、丙烯酸珠粒、纤维素、可控孔度玻璃、硅胶、葡聚糖；疏水材料；或有机人工/合成聚合物，诸如基于聚丙烯酰胺或聚苯乙烯的材料。典型的材料/聚合物可以下面的商品名商购获得，所述商品名为 (GE Healthcare,Sweden)、(Biosepara,France)、TSK-Gel(Tosoh Corp.,Japan)、HEMA(Alltech Ass.(Deer-field,Ill.,USA)、(Rohm Pharma,Darmstadt,Germany)。还有基于二氢唑酮(3M,St.Paul,Minn.,USA)的材料。在一个实施方案中，珠粒由或或构成。上述材料均可商购获得。通常，树脂为由有机聚合物基材制成的不溶解基质。不受理论束缚，树脂珠粒通常为多孔的，孔在待置换的那些分子的分子量范围内。混合物中的蛋白质将太大以至于不能进入树脂的孔并且将快速地穿过树脂床。相比之下，混合物中的小分子，例如抑制剂，将沿一条更曲折的路线行进，因为它们能够进入并再离开树脂的孔，因此大大减缓了它们穿过树脂床的迁移速率。那些使树脂预平衡的小分子，例如诱导剂，享有显著“领先”的优点，并由此与蛋白质一起离开树脂。因此，缓冲盐和其它小分子在这个步骤中得以交换。该技术以多种名称为人所知，取决于具体应用，例如“凝胶过滤”、“脱盐”和“缓冲液交换”。
在某些优选的实施方案中，树脂床是“填充床”。通常，“填充床”是指其中在树脂床内，珠粒就其尺寸基本均一分布的情况。床为经压缩的(加压压缩)，使得珠粒无需使它们的结构发生显著形变即可相互接触。本领域的技术人员将会知道最佳压缩比是通过经验确定和掌握的，并且不同树脂之间的最佳压缩比不同。在一些实施方案中，压缩比为(i)至少5％，或至少10％，或至少20％和/或(ii)至多40％。在一个实施方案中，给定珠粒的尺寸分布在介于15-90微米(超细树脂)和至多80-500微米(粗糙树脂)范围内。适当珠粒的示例包括但不限于琼脂糖凝胶、琼脂糖、丙烯酸酯。
已证实，当根据本发明的装置用于再次穿过混合物时，用预平衡缓冲液洗涤后，观察到纤维蛋白凝块形成时间缩短。不受理论的束缚，液体穿过树脂床导致树脂床的压缩，从而影响纤维蛋白凝块形成时间。
在一个实施方案中，装置中所用的树脂为Sephadex G-25介质(产品代码：17-0033-01；GE Healthcare，Sweden)，具有以下特征：基质：交联葡聚糖，分离机制：根据尺寸、润湿颗粒尺寸范围：38至235μm，干燥颗粒尺寸：>50μm，排阻限(Mr)：5000，化学稳定性：所有常用缓冲液，工作pH范围：2至13。
术语“树脂床”和“凝胶过滤基质”可互换使用。
“凝结时间”为可观察到凝块形成所需时间。凝块可通过目视观察到或通过机械手段观察到，例如通过观察倒置或倾斜含混合物的管后流动停止或通过测量粘度。混合物形成封闭剂的凝结活性水平或能力可在体外和/或体内确定。
术语“凝结”不一定需要有凝血酶存在才实现“凝结”。术语“凝结”还包括纤维蛋白聚合物的形成。凝块的形成也能够通过以下方式测定：测定其在倾斜表面(或下落试验模型)上的迁移长度、使用诸如Start4凝结分析仪(Diagnostica Stago)或在本领域中是已知的任何其它方法。充分凝结可通过液体混合物例如在倒置时的流动停止来评价。迅速聚合可使用Stat4凝结分析仪Stago Diagnostics或等同的测凝计测量。一些实施方案涉及液体混合物，液体混合物(i)在穿过树脂床之前被被视为是“稳定的”并且(ii)在穿过树脂床之后，在介于21℃和25℃之间的环境温度下，凝结时间为至多1小时。
术语“稳定的”和“稳定性”当指代液体混合物时大体上意指混合物在穿过并且/或者接触树脂床之前，混合物中基本不存在纤维蛋白聚合/凝结。
例如，包含(i)纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体或(ii)纤维蛋白原和因子II的液体混合物在穿过树脂床之前可被视为稳定的。混合物(例如，储存在注射器筒或其它适合储存器中的混合物)可为稳定的，因为存在小分子抑制剂和/或不存在小分子诱导剂。低pH条件[例如，水合氢离子(H3O+)浓度高于0.1mM或pH低于4的混合物]可被视为小分子抑制剂防止纤维蛋白聚合的实施方案。
包含(i)纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体或(ii)纤维蛋白原和因子II中至少一种的稳定液体混合物的非限制性示例：
第一个示例涉及混合物，该混合物包含因子II(也称为凝血酶原，其为维生素K依赖性凝结酶原)和浓缩纤维蛋白原，以及任选其它维生素K依赖性凝结酶原(例如，因子X、因子VII、因子IX)，以及任选的它们的相关辅因子(例如，因子V、因子VIII)。因子II或维生素K依赖性凝结酶原(U)与纤维蛋白原(mg可凝结蛋白质)的比率可为约0.01至约1.0，如所归一化至因子II。
在一些实施方案中，混合物包含约1mg/ml至2mg/ml、1mg/ml至110mg/ml、10mg/ml至110mg/ml诸如约40mg/ml至70mg/ml的有效量的纤维蛋白原。
在一些实施方案中，混合物包含最终浓度为约0.1IU/ml至约25IU/ml，例如0.14IU/ml的因子II。
在一些实施方案中，混合物包含纤维蛋白原；和至少包含因子II和因子X的维生素K依赖性凝结酶原；和至少一种维生素K依赖性凝结酶原的至少一种可逆小分子抑制剂。
在一些实施方案中，混合物不含添加的不可逆凝血酶抑制剂，例如，水蛭素和/或抗凝血酶III。不可逆凝血酶抑制剂包含共价结合凝血酶或利用非常高亲和力结合凝血酶的一组分子和/或破坏凝血酶上的官能团或使凝血酶失活的一组分子。例如，水蛭素和抗凝血酶III在本文被视为此类不可逆凝血酶抑制剂。凝血酶与抗凝血酶III结合，使得凝血酶不从复合物释放出来。如本文所用，利用高亲和力(亚微摩尔)结合凝血酶的凝血酶抑制剂被认为是不可逆的。一种此类示例为水蛭素，水蛭素在皮摩尔范围内结合凝血酶。
在一些实施方案中，混合物还包含因子V。混合物还可能包含因子VII和/或因子IX。在一些实施方案中，因子X、因子VII和/或因子IX至少部分地为它们的活性形式。
在一些实施方案中，可逆小分子抑制剂选自：钙螯合剂、丝氨酸蛋白酶活性位点抑制剂、以及它们的组合。在一些实施方案中，混合物例如液体制剂，在约2℃至8℃的环境温度下保持稳定至少14天(例如，约一个月，约三个月)。在一些实施方案中，混合物在约2℃和高至室温的范围内的环境温度下可稳定至少7天。
在一些实施方案中，混合物在室温(20℃至25℃)下稳定约30天。在一些实施方案中，混合物不含添加的凝血酶。
结合术语“不含添加的凝血酶”和“不含添加的不可逆凝血酶抑制剂”的术语“不含添加的”意指混合物未补充有凝血酶或不可逆凝血酶抑制剂。然而应当指出的是，混合物可包含低含量的凝血酶(例如小于1IU/ml的混合物)和/或最初存在于混合物中的不可逆凝血酶抑制剂(例如小于5μM)和/或混合物中自发形成的凝血酶。
在一个实施方案中，用于制备混合物的维生素K依赖性凝结酶原以浓缩物的形式提供，相比于血浆中的酶原浓度被浓缩约2-50倍，如所归一化至因子II。
在一个实施方案中，用于制备混合物的维生素K依赖性凝结酶原浓缩物是PPSB浓缩物[PPSB为以下物质的缩写：因子II(凝血酶原)；因子VII(前转变素)、因子X(司徒因子)；和因子IX(抗血友病因子B)]。
在一个实施方案中，混合物包含PCC浓缩物(PCC为以下物质的缩写：因子II的相关浓缩凝血酶原酶复合物；因子V；和因子X)。
在一个实施方案中，此类液体混合物在环境温度下稳定至少14天，该环境温度选自约2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃和8℃。在一些实施方案中，液体混合物在约2℃至8℃的温度下保持稳定达30天、35天、45天、60天和多至90天或更长时间。
如本领域中所述，可标准地产生作为维生素K依赖性凝结酶原的来源的PPSB，例如“Production of plasma proteins for therapeutic use”.Joseph Bertolini,NeilGoss,John Curling.2013 Wiley Press中所述。可通过将冷冻耗尽的人血浆填塞在DEAE阴离子交换柱上并用还包含柠檬酸钠(NaCitrate，例如10mM)的浓缩盐溶液(例如，0.25M的NaCl)洗脱产生浓缩的PPSB。PPSB相比于血浆可被浓缩了4-16倍之间，如通过凝血酶原(因子II)浓度所确定。通常，混合物包含与阴离子交换柱结合的所有维生素K依赖性凝结酶原(诸如FVII、FIX、蛋白质C和蛋白质S，以及FX)、它们相关联的共酶原(FV和FVIII)和共洗脱的任何其它蛋白质。用于制备混合物的PPSB还可以进一步浓缩，例如相比于血浆最高浓缩至50倍。
不受理论的约束，维生素K依赖性凝结酶原小分子抑制剂(例如NaCitrate、EDTA)用于螯合钙离子并防止包含FII、FV和FX的任何凝血酶原复合物的过早活化或任何其它Ca2+依赖性过程，诸如因子X酶(Tenase)复合物(FVIII和FIX)活化或FXIII活化。
“浓缩纤维蛋白原”涉及纤维蛋白原浓度，该纤维蛋白原浓度高于血液或血浆中的纤维蛋白原浓度(纤维蛋白原浓度大于约2mg/ml至4mg/ml并且最高至约200mg/ml)。浓缩纤维蛋白原包括，例如以下浓度的纤维蛋白原：约20mg/ml至40mg/ml；约15mg/ml至40mg/ml；约10mg/ml至200mg/ml；10mg/ml至150mg/ml；20mg/ml至150mg/ml；约30mg/ml；或约25mg/ml至120mg/ml。浓缩纤维蛋白原可以通过任何来源制备，例如，哺乳动物来源(例如，源于人血浆或猪血浆)或者可为重组的。在一些实施方案中，浓缩纤维蛋白原是冷凝蛋白质。
在一些实施方案中，纤维蛋白原由血浆提供，例如浓缩纤维蛋白原制备，并且按以下比例混合血浆源：约3:1至约1:3(w/v、v/v或w/w)、或约2:1至约1:2(w/v、v/v或w/w)、或约1:1(w/v、v/v或w/w)。“血浆源”可以是分馏得到的血浆、混合血浆、贫含冷沉淀物血浆、回收血浆、以及通过血浆取出法收集的人血液中的液体部分。在一个实施方案中，血浆为凝血酶耗尽的血浆和/或因子耗尽的血浆。
在一个实施方案中，该混合物通过将小分子抑制剂包括在混合物内而为稳定的，所述小分子抑制剂包括但不限于可逆丝氨酸蛋白酶活性位点抑制剂，诸如精氨酸、赖氨酸、苯甲脒或它们的组合和/或钙螯合剂，例如，柠檬酸根离子、草酸根离子，例如浓度为5mM至25mM的EDTA、EGTA或此类钙螯合剂的组合。在一些实施方案中，钙螯合剂为例如由柠檬酸钠提供的柠檬酸根离子。在一些实施方案中，混合物包含约1mM至约50mM或约5mM至约25mM的柠檬酸钠。在一些实施方案中，混合物包含约0.1mM至约2.5mM的EDTA和/或EGTA。在一些实施方案中，混合物包含约0.1％至约5％(w/v)的精氨酸。在一些实施方案中，混合物包含约0.1％至约5％(w/v)的赖氨酸。在一些实施方案中，混合物包含约0.1mM至约10mM的苯甲脒。
在一些实施方案中，该混合物中的小分子抑制剂包含1mM至2mM的EDTA、10mM的NaCitrate和1％(w/v)的盐酸精氨酸。
在一些实施方案中，使用40mM至50mM的CaCl2预平衡树脂床。因此，在一个实施方案中，混合物穿过树脂床之后，混合物中CaCl2浓度在35mM至45mM范围内，基于至少90％的缓冲液交换效率。
在另一个实施方案中，混合物穿过树脂床之后，混合物中的抑制剂浓度降至混合物中小分子抑制剂初始浓度的10％以下，例如，低于0.1mM至0.2mM EDTA、1mM NaCitrate和0.1％(w/v)盐酸精氨酸。
在一个实施方案中，本文提到的其它小分子可逆抑制剂的浓度在混合物穿过树脂床之后降至其在混合物中初始浓度的10％以下。
在一些实施方案中，混合物包含纤维蛋白原；至少包括因子II、因子IX和因子X的维生素K依赖性凝结酶原；和至少一种维生素K依赖性凝结酶原的至少一种小分子可逆抑制剂，其中混合物不含添加的不可逆凝血酶抑制剂。
在一些实施方案中，混合物不含钙，并且含有纤维蛋白原和因子II以及任选的因子X。
纤维蛋白原可由初始血液组合物制备。血液组合物可为全血或血液级分，即全血制品，诸如血浆。纤维蛋白原可为自体的、人来源(包括汇集血浆)或非人来源。还可能的是，纤维蛋白原通过重组方法来制备或可被化学改性。
在本发明的一个实施方案中，纤维蛋白原溶液包含作为来源于血浆的蛋白质溶液的生物活性组分(BAC)，纤维蛋白原溶液可还包含纤维蛋白溶解剂诸如氨甲环酸和/或稳定剂，诸如精氨酸、赖氨酸、它们药学上可接受的盐、或它们的混合物。BAC可来源于冷析出物，尤其是浓缩的冷析出物。
术语“冷析出物”是指可得自由全血制备的冷冻血浆的血液组分。当将冷冻血浆在寒冷条件下(通常在0-4℃的温度下)解冻，导致形成含有纤维蛋白原和因子XIII的析出物时，可获得冷析出物。析出物可例如通过离心来收集并溶解于合适的缓冲液中，诸如含有120mM的氯化钠、10mM的柠檬酸三钠、120mM的甘氨酸、95mM的盐酸精氨酸的缓冲液。BAC的溶液可包含附加因子，诸如像因子VIII、纤粘蛋白、血管性血友病因子(vWF)、玻连蛋白等，例如US 6,121,232和WO9833533中所述。BAC的组合物可包含稳定剂，诸如氨甲环酸和盐酸精氨酸。BAC的溶液中氨甲环酸的量可为约80mg/ml至约110mg/ml。
在一些实施方案中，冷析出物是因子VIII耗尽的冷冻血浆。
在另一个实施方案中，例如5μg/ml或更低的纤溶酶原，例如使用如US 7,125,569、EP 1,390,485和WO02095019中所述的方法，将BAC组合物中纤溶酶原和纤溶酶的浓度降低至等于或低于15μg/ml。在本发明的另一个实施方案中，当将BAC组合物中纤溶酶原和纤溶酶的浓度降低时，组合物不含有氨甲环酸或抑肽酶。
纤维蛋白原溶液可为含有BAC2组分(来自)或任何其它纤维蛋白原的溶液，诸如经纯化的重组纤维蛋白原或从血浆产生的冷析出物。
在一个实施方案中，使包含酶原和纤维蛋白原的混合物穿过装填有多孔树脂的容器。混合物中的酶原和纤维蛋白原将太大以至于不能进入树脂的孔并且将快速地穿过容器。相比之下，混合物中的小分子，例如起抑制作用的小分子，将沿一条更曲折的路线行进，因为它们能够进入并再离开树脂的孔，因此大大减缓了它们穿过树脂床的迁移速率。另外还可以使用小分子诱导剂诸如磷脂、脑磷脂和/或二价阳离子(例如，钙阳离子)预平衡树脂。那些使树脂预平衡的诱导剂享有显著“领先”的优点，并由此与酶原和纤维蛋白原一起离开树脂。
在该实施方案中，术语“诱导剂”是指可引发、促进和/或加速酶原转化成活性酶的试剂。本文的术语“诱导剂”可与术语“引发剂”和“活化剂”互换使用。
在一个实施方案中，树脂可包括由已知的活化凝血途径的材料例如二氧化硅构成的珠粒，并且/或者树脂珠粒可共价结合到可促进、加速和/或活化凝血途径的分子，例如磷脂。在一个实施方案中，前述珠粒的总体积(占树脂床总体积)为至多10％(v/v)。
第二个示例涉及包含纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体和可逆的纤维蛋白聚合阻断剂(本文也称“抑制剂”)，例如GPRP肽的混合物。在一个实施方案中，混合物的pH为中性，例如约6-8的pH或约6.5-7.5的pH或约6.7-7.2的pH。结果示出，相对于纤维蛋白单体和/或低聚体，GPRP肽的浓度过量约340以上摩尔时，防止聚合是有效的。因此，在一个实施方案中，GPRP肽在混合物中以相对于纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体过量约340摩尔的量存在。
在一个实施方案中，此类液体混合物在环境温度下稳定至少14天，该环境温度选自约20℃、21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
不受理论束缚，GPRP肽能够与纤维蛋白分子结合，从而阻断了缔合和聚合。
可逆的纤维蛋白聚合阻断剂可为分子量小于约1,000道尔顿(“如本文所定义的小分子”)的试剂。在一些实施方案中，试剂为分离的肽、它们的衍生物或盐，此类试剂能够可逆地结合纤维蛋白分子并且防止或延迟纤维蛋白聚合。在一些实施方案中，可逆纤维蛋白聚合阻断剂包含小化学分子或分离的肽。可逆纤维蛋白聚合阻断剂可为对纤维蛋白的亲和力低并且对纤维蛋白聚合不具有永久性作用的结合试剂。因此，通常使混合物穿过树脂床将导致试剂/抑制剂浓度的下降，引发和/或加速聚合以及凝块形成。
“GPRP肽”意指SEQ ID NO:1中所列出的四个或更多个连续氨基酸序列的肽，明确地说，序列Gly-Pro-Arg-Pro。GPRP肽可包含四聚体(GPRP，SEQ ID NO:1)、它们的衍生物或类似物。GPRP肽可为长度为4至12个氨基酸的残基或长度为4至8，优选地4、5、6、7或8个氨基酸。
GPRP肽的氨基酸序列可存在一处或多处取代、添加和/或缺失，包括一个或多个非天然存在的氨基酸。优选地，衍生物表现出与参考序列至少约50％同一性，优选地至少约70％同一性，更优选地与本文所述的参考序列至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。肽衍生物可包括对天然序列的修饰，诸如缺失、添加和取代(一般来讲在性质上是保守的)，只要肽保持所需的活性即可，例如可逆地抑制纤维蛋白聚合。在一些实施方案中，GPRP肽包括包含Gly-Pro-Arg-Pro四肽氨基酸序列的肽、它们的衍生物或盐。在一些实施方案中，GPRP肽为具有SEQ ID NO:1中所列出的氨基酸序列的四肽，或其衍生物或盐。在一些实施方案中，GPRP肽为由SEQ IDNO:1中所列出的氨基酸序列组成的四肽，或其衍生物或盐。在各种实施方案中，术语“GPRP肽”包括选自由具有选自以下的氨基酸序列的肽或其衍生物或盐的肽：SEQ ID NO:1-SEQID NO:42(SEQ ID NO:1；SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5；SEQ IDNO:6；SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9；SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13；SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15；SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17；SEQ IDNO:18；SEQ ID NO:19；SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21；SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23；SEQ IDNO:24；SEQ ID NO:25；SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27；SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29；SEQ IDNO:30；SEQ ID NO:31；SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33；SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35；SEQ IDNO:36；SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39；SEQ ID NO:40；SEQ ID NO:41；和SEQID NO:42)。在各种实施方案中，GPRP肽包含如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列或其衍生物或盐。在各种实施方案中，GPRP肽选自具有选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:42的氨基酸序列的肽或其衍生物或盐。在各种实施方案中，GPRP肽选自由选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:42的氨基酸序列组成的肽或其衍生物或盐。在一些实施方案中，GPRP肽为GPRP肽酰胺。SEQ ID NOS:1-42中示出的任何肽序列可以是肽酰胺。如上所述，SEQ ID NOS:1-42中示出的任何肽序列中的氨基酸序列可具有一处或多处取代、添加和/或缺失。缩写、系统命名和常见氨基酸的式均为本领域的技术人员所熟知(Darnell James E.编著的Molecular Cell Biology，Scientific American Books,Inc.，1986，第54页)。
在本示例的一些实施方案中，混合物还包含经凝血酶活化的因子XIII(因子XIIIa)。在此类实施方案中，混合物可还包括钙螯合剂，例如，以防止因子XIIIa介导的纤维蛋白交联，其取决于钙的存在。钙螯合剂可为柠檬酸根离子、草酸盐离子，例如浓度为5mM至25mM的EDTA、EGTA、或此类钙螯合剂的组合。在各种实施方案中，钙螯合剂为例如柠檬酸钠所提供的柠檬酸根离子。在一些实施方案中，混合物包含约1mM至约50mM的柠檬酸钠。在一些实施方案中，混合物包含约0.1mM至约2.5mM的EDTA和/或EGTA。
在一些实施方案中，使包含纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体以及GPRP肽的混合物穿过装填有多孔树脂的容器。混合物中的纤维蛋白分子将太大以至于不能进入树脂的孔并且将快速地穿过树脂床并离开装置。相比之下，混合物中的小抑制剂分子例如GPRP肽，将沿一条更曲折的路线行进，因为它们能够进入并再离开树脂的孔，因此大大减缓了它们穿过树脂床的迁移速率。
在一个实施方案中，试剂/抑制剂在穿过装置后的浓度受控于使用所需最终浓度的试剂，例如GPRP肽，预平衡树脂床。不受机制的束缚，通过使树脂床具有固定浓度的试剂，人们可控制纤维蛋白聚合或纤维蛋白凝块形成速率。
单体、二聚体和/或低聚体纤维蛋白可通过以下方式获得：使含有例如上述溶液的水性纤维蛋白原在可允许纤维蛋白原裂解为纤维蛋白的条件下接触凝血酶和/或凝血酶类似酶。此类酶的示例为裂解纤维蛋白肽A(FpA)的蛇毒酶，如巴曲酶(Batroxobin)。在此类实施方案中，纤维蛋白的制备在纤维蛋白聚合受到抑制的条件下进行，例如在存在GPRP或其它可逆纤维蛋白聚合阻断剂下。在另一个实施方案中，纤维蛋白在抑制聚合(例如通过降低温度)的条件下从纤维蛋白原获得，并且稍后添加GPRP肽。
凝血酶可在溶液中是游离的或被固定在珠粒上。如果凝血酶被固定在珠粒上，例如以分批的形式或在柱中的珠粒，并且纤维蛋白原溶液穿过/接触珠粒，那么所得的混合物可包含残余量的凝血酶。在一些实施方案中，混合物基本上不含凝血酶，例如具有小于约一(1)IU/ml的凝血酶。在一个实施方案中，用于获得纤维蛋白的凝血酶是无菌溶液剂，pH6.8-7.2，试剂含有高纯度人凝血酶。凝血酶是高度特异性蛋白酶，可将纤维蛋白原转化为纤维蛋白。凝血酶溶液可包含：用于注入的人凝血酶(800-1200IU/ml)、氯化钙、人白蛋白、甘露糖醇、乙酸钠和水。在一个实施方案中，凝血酶通过色谱分离纯化贫含冷沉淀物血浆中的凝血酶原，然后使用氯化钙，例如如美国专利5,143,838所述，进行活化制备，该专利以引用方式并入本文。
根据本发明所使用的纤维蛋白原和凝血酶组分可成为双液体纤维蛋白封闭剂组分的一部分。所述组分可以从人类或哺乳动物血浆制备。然而，也可通过重组方法制备所述组分。
在一个实施方案中，混合物还包含精氨酸，例如浓度最高至4％(w/v)的盐酸精氨酸。
在一些实施方案中，液体混合物包含浓度为1至13％(w/v)的纤维蛋白和GPRP肽或其它可逆的纤维蛋白聚合阻断剂；其中阻断剂或GPRP均以相对于纤维蛋白摩尔过量超过100倍以上的量存在于混合物中。在各种实施方案中，纤维蛋白以1至13％(w/v)的浓度存在于混合物中。在各种实施方案中，纤维蛋白以1至4％(w/v)或3.5至13％(w/v)的浓度存在于混合物中。
在一些实施方案中，GPRP肽以相对于纤维蛋白摩尔过量超过约340倍的量存在。
在一些实施方案中，GPRP肽以相对于纤维蛋白摩尔过量约340倍至460倍的量存在。在一些实施方案中，混合物基本上不含添加的凝血酶。
在一个实施方案中，使混合物穿过树脂床降低纤维蛋白聚合阻断剂，例如GPRP，相对于纤维蛋白的浓度，并且比率为等于或小于340。
在一个实施方案中，使混合物穿过树脂床降低纤维蛋白聚合阻断剂，例如GPRP，相对于纤维蛋白的浓度，并且比率为等于或小于100，诸如比率为1-60，例如3、4、11、11.3、17、22.7、23、34、45、56.7或57。
混合物在接触树脂床之后，GPRP浓度可根据预期用途降低。通常，对于止血，将为有利的是获得小于一分钟的凝结时间。在一个实施方案中，混合物穿过数树脂床将混合物中的GPRP浓度降至相对于纤维蛋白等于或小于100倍的摩尔过量或等于或小于34倍的摩尔过量。
对于移植物固定，将为有利的是获得大约15分钟的凝结时间。在一个实施方案中，混合物中的GPRP浓度被降低至相对于纤维蛋白等于或小于100倍的摩尔过量或等于或小于56倍的摩尔过量。
其它除去或稀释选项包括将GPRP-互补部分添加到树脂床中。树脂床中的互补部分可基本上为亲合力方法。
另选地或除此之外，混合物中的GPRP可通过添加肽例如GPRP肽的互补部分或能够置换与纤维蛋白结合的GPRP的抗体来中和和/或阻断。
第三个示例涉及在酸性介质中含有纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体的混合物，例如，如美国专利8,367,802中所述。
在其中低pH使混合物稳定的此类实施方案中，抑制性小分子为例如，水合氢离子(H3O+)。通过使用根据本发明的装置/系统，小分子的浓度可如上所述得到降低。另选地或除此之外，可通过使用根据本发明的装置/系统来提高羟基离子(OH-)的浓度以中和酸性水合氢离子。
图3是用于通过使用根据本发明的装置来制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的示例性方法的流程图，装置包括混合物(例如，稳定的混合物和/或含有(i)纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体或(ii)纤维蛋白原和因子II的混合物)。
“表面”为人们期望形成凝块的位置或方位。表面取决于封闭剂的使用。纤维蛋白封闭剂可用于例如止血、组织固定、移植物固定、创伤愈合和吻合。表面可为受伤表面。表面可为受治疗者的出血或未出血部位。表面还可为身体之外的工作表面。本文所公开的装置、系统方法和套件可在内部和在外部递送纤维蛋白封闭剂以用于组织和器官移植物固定、封闭外科创伤、包括提供止血的血管外科和吻合，诸如动脉、胃肠和气管吻合。
表面可以是可裸眼视力可见的皮肤的外表面以及为生物体内部解剖结构一部分的体内部分的表面。外表面包括但不限于面部、咽喉、头皮、胸部、背部、耳朵、颈、手、肘、臀、膝盖的皮肤以及其它皮肤部位。体内部分的示例包括但不限于暴露于外部环境和内部器官的体腔或解剖学开口，诸如鼻孔；唇；耳朵；生殖器区域，包括子宫、阴道和卵巢；肺；肛门；脾；肝；和心肌。
套件可以独立元件的形式提供，元件可通过组装形成本发明的装置/套件。在一个实施方案中，树脂单独提供，并且随后装填入容器中并且/或者根据所使用液体混合物的组合物指明的要求预平衡。
对于装置的组装，树脂珠粒能够以经润湿的预平衡颗粒或干燥颗粒的形式提供。在后一种实施方案中，套件包含平衡缓冲液，并且可通过使用体积是树脂床体积3至6(例如5)倍的缓冲液穿过装置来平衡树脂床。
在一个实施方案中，纤维蛋白混合物、纤维蛋白原和因子II混合物和/或树脂床的液相均以固体形式提供并且在组装装置/系统前用水性溶液重构。因此，套件可包含至少一个具有用于重构的水性溶液的储存器。合适的储存器包括例如安瓿、小瓶、注射器和试管。储存器可由例如玻璃、金属或塑料制成。套件可包括使用说明。
纤维蛋白混合物或纤维蛋白原与因子II混合物的重构可通过添加不同体积的药学上可接受的载体进行。树脂的液相的重构可在包含本文所述小分子溶质的液体溶液中进行。
术语“重构”是指其中固体被转变为液体形式的过程。重构产物可为通过向先前被除去液体的干固体中添加水性液体得到的液体产物。
另选地，纤维蛋白混合物、纤维蛋白原和因子II混合物和/或树脂床的液相可以冷冻形式提供，例如在-18℃或更低温度下，并且在组装装置/系统前进行解冻。
术语“药学上可接受的载体”是指适于人或其它动物使用的任何稀释剂或媒介物。载体可选自本领域已知的任何载体，诸如但不限于磷酸盐缓冲液(PBS)、盐水、氯化钠溶液、氯化钙溶液、乳酸林格氏溶液(LR)、5％右旋糖的生理盐水溶液以及注射用水。
在一个实施方案中，方法包括使混合物190穿过树脂床160的步骤。在步骤1中，液体混合物例如作为稳定混合物提供在储存器(例如，注射器筒124)内。在步骤2中，储存器(例如124)内部被布置成与容器158内部流体连通并且/或者与树脂床160流体连通。
在一个非限制性示例中，容器158的近侧和凹口处于被覆盖或密封状态，并且在步骤2中，(i)该覆盖物或密封被去除，并且(ii)注射器筒124的远侧末端126插入近侧和凹口内，例如承窝128，使得注射器筒124和容器158的内部空间彼此流体连同。例如，注射器筒124和容器158可彼此附接(例如可拆卸地附接)，并且可在步骤2中彼此附接。在步骤3中，液体混合物从储存器(例如注射器筒)排出，并被迫使流动穿过树脂床160。穿过树脂床160导致纤维蛋白凝块的形成，凝结时间(TCLOT)在环境温度下为至多1小时，该环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
经由其远侧端194穿过树脂床(例如离开容器158)后，可将纤维蛋白封闭剂施加至表面，例如手术部位的表面，步骤4。
可将远侧端194附接到施涂尖端，通过该施涂尖端将纤维蛋白封闭剂输送至表面。
根据本发明的装置在用合适的预平衡缓冲液(例如根据待施加的混合物)洗涤后，可用于混合物的再次穿过。
在一些实施方案中，储存器，例如注射器筒124和/或容器158可为各种尺寸以便能够采用不同的用量和混合物:树脂比例关系。
在一些实施方案中，要进行重大缓冲液交换时，即去除大部分小分子并将其替换为其它小分子，填充树脂床由大约60-70％(v/v)固体材料和由小分子溶质构成的另外30-40％(v/v)液体溶液构成。在一些实施方案中，在穿过树脂床之前液体混合物的体积，与树脂床中液相的体积基本相同。通常，当一定体积的含蛋白质的液体混合物190被驱动穿过如上所述装置时，小分子被替换和被交换。因此，蛋白质溶液从装置流出时的体积与穿过树脂床160之前的体积基本类似并且蛋白质成分变化极小或没有变化，然而溶质/小分子均已在穿过树脂时发生了交换。
在一些实施方案中，使用缓冲溶液预平衡树脂。该缓冲溶液可诸如在含有维生素K依赖性凝结酶原和纤维蛋白原的混合物中，具有能够支持活化酶原例如因子II的此类性质以引发凝血酶生成。在一个实施方案中，容器158中的缓冲液包含诸如由浓度范围为约8mM至30mM的氯化钙；磷脂；脑磷脂；以及它们的组合提供的钙离子。
在一个实施方案中，树脂包括由已知的活化凝血途径的材料例如二氧化硅构成的珠粒并且/或者树脂珠粒共价结合到能够促进、加速和/或活化凝结作用途径的分子，例如磷脂。在一个实施方案中，前述珠粒的总比例为至多10％(v/v)。
在另一个实施方案中，装置与含有使用抑制性纤维蛋白聚合阻断剂进行稳定的单体、二聚体和/或低聚体纤维蛋白的混合物190配合使用。在一个实施方案中，装置中的平衡缓冲液包含CaCl2、精氨酸和固定浓度的抑制剂，例如GPRP，0mM至20mM、或0.1mM至5mM、或1mM至3mM浓度范围的它们的盐或衍生物。通常，“凝胶过滤”或“缓冲液交换”均为其中固相(装置中的树脂)为高度多孔的色谱法模型。较大的分子，诸如蛋白质，过大而无法被捕获在孔内。另一方面，小分子抑制剂因此被大幅延迟，并被预平衡树脂的小分子(例如钙离子)高效替换。很明显，尽管蛋白质组分可被加入装置并将被快速排出装置，但是该方法通常不会使蛋白质从混合物中被去除。在一个实施方案中，该装置的使用允许对含有高度浓缩的纤维蛋白原、相关蛋白质的混合物的施用。在一个实施方案中，混合物包含血浆蛋白，诸如因子XIII、因子VIII、纤粘蛋白、玻连蛋白等。
所有数值均旨在包括+/-10％。
当数值前面为术语“约”时，术语“约”旨在指示+/-10％。
下面介绍装置的若干实施方案。
实施例
在实施例1和实施例2中，利用市售凝胶过滤离心柱(一次性PD-10脱盐柱，产品代码：17-0851-01，GE Healthcare，Sweden)证实以下理念：使用缓冲液交换以去除小分子抑制剂和/或将小分子活化剂添加至单组份纤维蛋白密封剂液体混合物中，以便由该液体混合物生成纤维蛋白封闭剂。使用该柱的原因是制造商保证它是用于交换小分子的高效柱，不会损失蛋白质(小分子交换率>90％)。通常，当混合物穿过预平衡后的脱盐柱时，高效的缓冲液交换将导致包含至少90％浓度的预平衡缓冲液洗脱后混合物(例如，穿过柱后得到的混合物)，并且/或者使混合物中小分子抑制剂的浓度降至混合物中小分子抑制剂初始浓度的10％以下。
然而，该柱和其它已知柱均为长并且细的(在这种情况下，高度:宽度比率为>3)。为使混合物穿过柱，需要较长的处理时间(当利用重力作用时)或较大的力(例如，使用离心机)。这些柱通常不兼容手持装置(例如，注射器)。不受机制的束缚，本发明的装置包括树脂床，该树脂床为几何分布的，使得其可被人拇指肌肉力量所施加的力操纵同时也能提供有效的缓冲液交换。
当在下述实验中使用市售柱时，使2.5ml液体混合物穿过。根据制造商的说明制备和平衡市售柱。树脂床的体积(如制造商所给定)为8.3ml(本文也称为“树脂床”)。液体混合物的体积为树脂床体积的30.1％。
用于一次性PD-10脱盐柱中的树脂与Sephadex G-25介质(产品代码：17-0033-01；GE Healthcare，Sweden)的完全相同并具有以下特征：基质：交联葡聚糖；分离机制：根据尺寸；润湿颗粒尺寸范围：38μm至235μm；干燥颗粒尺寸：>50μm；排阻限(Mr)：5000；化学稳定性：所有常用缓冲液；工作pH范围：2至13。
在以下所有实施例中，混合物在穿过树脂床时处于22℃至37℃温度范围内并且pH为约7.0。
实施例1：使用凝胶过滤柱从包含纤维蛋白原和因子II的液体混合物形成纤维蛋
白凝块。
以下实施例旨在示出引发和/或加速纤维蛋白凝块形成可通过改变小分子浓度来实现。为此，如通过凝血酶原(因子II)浓度所确定(相比于血浆)制备了5倍浓缩的维生素K依赖性凝结酶原提取物，如本领域中所述(Production of plasma proteins fortherapeutic use.Joseph Bertolini,Neil Goss,John Curling.2013 Wiley Press)。该提取物(PPSB浓缩物)包含因子II、VII、IX和X以及辅因子因子V和其它使用该方法共洗脱的蛋白质。
简而言之，通过将冷冻耗尽的人血浆填塞在DEAE阴离子交换柱上并用还包含10mM的柠檬酸钠(NaCitrate)的浓缩盐溶液(0.25M的NaCl)洗脱产生浓缩的PPSB。PPSB相比于血浆被浓缩了4-16倍之间，如通过凝血酶原(因子II)浓度所确定。
混合物包含通常与阴离子交换柱结合的所有维生素K依赖性凝结酶原(诸如FVII、FIX、蛋白质C和蛋白质S，以及FX)、它们相关联的共酶原(FV和FVIII)和共洗脱的任何其它蛋白质。
维生素K依赖性凝结酶原抑制剂(例如NaCitrate、EDTA)用于螯合钙离子并防止包含FII、FV和FX的任何凝血酶原复合物的过早活化或任何其它Ca2+依赖性过程，诸如因子X酶(Tenase)复合物(FVIII和FIX)活化或FXIII活化。
将该提取物与纤维蛋白原浓缩溶液(BAC2组分；来自纤维蛋白封闭剂的纤维蛋白原组分)按体积比一比一混合，最终得到大约3.5％(w/v)的纤维蛋白原和每mg纤维蛋白原大约0.14国际单位(IU)的因子II。该混合物中包含的小分子抑制剂为：1mM至2mM的EDTA、10mM aCitrate和1％(w/v)盐酸精氨酸。
为有效去除这些小分子抑制剂并添加钙离子诱导剂，使用了可商购获得的缓冲液交换离心柱(一次性PD-10脱盐柱，产品代码：17-0851-01，GE Healthcare)，该缓冲液交换离心柱的特征在于有效置换所选蛋白质混合物中90％的小分子(缓冲液)组分。使用CaCl2(40-50mM)或无钙的缓冲溶液对柱进行预平衡。
根据制造商的说明对混合物执行缓冲液交换过程。通过倒置含有经过缓冲液交换的提取物的管评价凝结。
结果示出，通过用CaCl2预平衡的柱的混合物在小于30分钟内自发凝结(图4A)，然而通过缺乏CaCl2的缓冲液的溶液即使在数天之后也不凝结(图4B)。
另外，在不去除小分子抑制剂并且不使用缓冲液交换技术的下，还通过向试管的相同混合物中直接添加CaCl2来测试纤维蛋白凝块形成。凝结时间为120分钟以上。
该实验示出，在专用装置中使用缓冲液交换技术可用于引发并且/或者加速稳定的液体混合物形成纤维蛋白凝块。
实施例2：使用凝胶过滤柱从包含纤维蛋白和GPRP的液体混合物形成纤维蛋白凝 块。
以下实施例旨在示出引发和/或加速纤维蛋白凝块形成可通过去除小分子抑制剂来实现。
纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体按以下方式生成：
第一，制备3.5％(w/v)纤维蛋白原和40mM GPRP[相对于纤维蛋白原存在较大摩尔过量(>350)]的混合物。发现此摩尔比足以维持混合物稳定。
将GPRP(Gly-Pro-Arg-Pro；由Sigma定制；肽呈冻干形式供应(250mg)并且溶解于100mM的二水合柠檬酸三钠中；pH＝7产生1M的GPRP)。
接下来添加凝血酶(在纤维蛋白密封剂中)以在GPRP存在的条件下从纤维蛋白原(最终浓度10IU/ml或100IU/ml)生成纤维蛋白。实施例1中所用的市售柱(PD-10)也可用于去除GPRP肽。将柱用包含20mM的乙酸钠pH 7.0；25mM的氯化钙的缓冲液预平衡。
将纤维蛋白浓度估计为等于纤维蛋白原浓度。
使2.5ml的液体混合物经受缓冲液交换程序，并且通过将含有缓冲液交换的混合物的管倒置来评价纤维蛋白凝块形成。
剩余的液体混合物维持在环境室温下(约22℃至24℃)达24小时的时间段以估计凝块是否能够在不去除GPRP的条件下形成。
图5A示出由GPRP抑制的纤维蛋白溶液，该溶液未经受缓冲液交换程序，在受测时间段内和受测条件下维持液体形式。图5B示出了穿过柱并去除GPRP抑制剂后的聚合混合物。
该实验示出，在专用装置中使用缓冲液交换技术还可用于通过去除抑制剂引发和/或加速纤维蛋白凝块形成。
实施例3：使包含纤维蛋白原和因子II的液体混合物穿过根据本发明的装置的效 果。
在本实施例中，将本发明的装置改变混合物中小分子浓度的效率与市售柱进行比较，其中市售柱的效率已知为>90％，并且已在实施例1和实施例2中示出，在形成纤维蛋白凝块中是有效的。
为此，将市售GE PD-10缓冲液交换柱与根据本发明的装置的两个实施方案进行比较，所述两个实施方案利用与市售柱相同的缓冲液交换树脂(Sephadex G25介质；产品代码：17-0033-01；GE Healthcare，Sweden)并且树脂床几何形状如下：
1. 25mm直径(宽度)、13mm高度(6.4ml树脂床体积)–高宽比为0.52。
2. 25mm直径(宽度)、25mm高度(12.3ml树脂床体积)–高宽比为1。
如图1所示的装置由尺寸适于适应上述树脂床体积的两个不同容器158组装。滤纸150和滤纸170为Watmann滤纸，每侧均与内径26mm的柱支撑筛网邻接；产品代码：18-9377-01；GE Healthcare，Sweden)。一个支撑筛网定位在滤纸150的近侧；并且另一个支撑网格定位在滤纸170的远侧。
使用10ml的典型注射器120。根据制造商的说明制备和平衡市售柱。
用5倍树脂床体积并且包含50mM CaCl2、20mM NaAcetate、pH 7.0的缓冲液穿过装置5次平衡树脂床。
使含有相比于血浆2.5倍浓缩酶原提取物，和3.5％(w/v)纤维蛋白原的混合物[通过将5倍浓缩的酶原提取物与浓缩纤维蛋白原溶液(BAC2组分)按一比一体积比混合制备]穿过柱(2.5ml)并穿过装置(2ml或4ml)以交换缓冲液从而引发纤维蛋白凝块形成。
所用的混合物体积等于树脂床体积的30-35％。通过混合物流动的停止估计纤维蛋白凝块形成。
柱和装置形成纤维蛋白凝块的时间为25分钟至30分钟。当根据本发明的装置用于再次穿过混合物时，用预平衡缓冲液洗涤后，观察到形成纤维蛋白凝块时间缩短。不受理论的束缚，液体穿过树脂床可导致树脂床的压缩。
表1示出使用根据本发明的装置和市售柱后的纤维蛋白凝块形成时间。
表1：使用根据本发明的装置和市售柱后的纤维蛋白凝块形成时间。
上述结果示出，本发明的装置的效率与受测市售柱的效率相当。此外，该结果示出，树脂床的压缩度影响纤维蛋白凝块形成时间。
实施例4：钙离子诱导剂浓度对纤维蛋白凝块形成速率的影响。
在以下实验中，探究了酶原(PPSB浓缩物)中作为诱导剂加速纤维蛋白凝块形成的钙离子(CaCl2浓度)和实施例1中所述的含纤维蛋白原的混合物(从BAC2制备)的浓度范围。在该实施例中，制备了相比于血浆10倍(10IU FII/ml)浓度的酶原混合物，并与如上的相同纤维蛋白原溶液以相同的体积比混合(最终为相比于血浆5倍浓度的酶原和3.5％(w/v)纤维蛋白原)。没有使用EDTA。在该实验中，使用钙耗尽PT(凝血酶原时间)试剂执行凝结的引发,该钙耗尽PT(凝血酶原时间)试剂包含组织因子和磷脂；以及通常分别存在于出血/受伤表面和经血小板活化的表面的凝结引发剂。通过使用组织因子和磷脂两者模拟出血表面。将递增浓度的CaCl2补充到混合物中，并且使用Start4凝结分析仪(Diagnostica Stago)测量凝结时间。
图6示出，在CaCl2浓度为约8mM至约30mM之间时获得了快速凝结(<20秒)。在规定参数内(凝结测量所允许的最长时间–999秒)，不添加钙离子时未观察到凝结。
这些结果示出，优选地增加混合物中钙离子的浓度，凝结发生速率加快。
结果还示出，用设定的钙离子浓度预平衡树脂床可用作控制纤维蛋白凝块形成速率的方法。
实施例5：通过调节混合物中小分子GPRP抑制剂浓度控制纤维蛋白凝块形成速率。
在以下实验中，测试了调节GPRP抑制剂浓度对纤维蛋白凝块形成速率的影响。将不同浓度(0.1mM、0.2mM、0.5mM、1mM、1.5mM、2mM、3mM、4mM和5mM)的GPRP添加到含有纤维蛋白原的溶液(固定浓度为3％w/v，通过用40mM柠檬酸盐缓冲液稀释的BAC2组分制备)中。
所有这些(比率为至多约57:1)均低于长期稳定(例如在环境温度下稳定至少14天，该环境温度选自约20℃、21℃、22℃、23℃、24℃和25℃)纤维蛋白单体所需的最小比率。已证实，要获得长期稳定，混合物中GPRP以相对于纤维蛋白单体大于100倍摩尔过量的量存在，例如相对于纤维蛋白单体大于约340倍或约340倍至460倍摩尔过量。
为生成纤维蛋白单体、二聚体和/或低聚体，向混合物中添加凝血酶；添加10％体积的凝血酶组分得到100国际单位/毫升(IU/ml)的最终浓度。通过混合物在试管倒置时的流动停止来测量纤维蛋白凝块形成速率。结果如表2所示。
表2：混合物中GPRP相对于纤维蛋白的浓度和混合物的聚合时间(凝结时间)。
图7示出纤维蛋白的聚合速率与GPRP的浓度之间存在对数关系。GPRP:纤维蛋白的摩尔比大于340:1时，14天以上未观察到聚合(在受测纤维蛋白原浓度40mM GPRP下)。
结果指示，用设定的GPRP浓度预平衡树脂床可用作控制纤维蛋白凝块形成速率的方法。
本文所引用的所有参考文献全文以引用方式并入本文中。对参考文献的引用不应理解为是承认其为现有技术。
本文所用冠词“一个”和“一种”是指一个或不止一个(即至少一个)冠词的语法对象。以举例的方式，“元件”是指一个元件或不止一个元件。
本文所用的术语“包括”是指“包括但不限于”并可与短语“包括但不限于”互换使用。本文所用术语“包括”是指“包括但不限于”并可与短语“包括但不限于”互换使用。除非上下文中明确地指出，否则本文所用术语“或”是指“和/或”并可与术语“和/或”互换使用。本文所用术语“诸如”是指“诸如但不限于”并可与短语“诸如但不限于”互换使用。如本文所用，术语“包含”、“包括”、“含有”、“具有”及其语法变体应视为指定所述特征、整数、步骤或组分，但不排除一种或多种另外特征、整数、步骤、组分或其组的添加。这些术语涵盖术语“由……组成”和“基本上由……组成”。
已经以举例的方式利用其实施方案的具体实施方式对本发明进行了描述，该具体实施方式不旨在限定本发明的范围。所述实施方案包括不同的特征结构，并不是所有的特征结构在本发明实施方案中都是必需的。本发明的一些实施方案仅利用特征结构中的一些或特征结构的可能组合。本领域人员将会想到在所述实施方案中描述的本发明实施方案的变型以及在所述实施方案中提到的包括不同特征结构组合的本发明实施方案。
Claims (36)
1.一种用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的装置，所述装置包括：
a. 包括筒（124）和柱塞（122）的注射器（120），其中所述筒包含一定量的无细胞液体混合物（190），所述无细胞液体混合物包含：
I. 纤维蛋白或
II. 纤维蛋白原和因子II；以及
b. 树脂床（160），所述树脂床设置在容器（158）内，使得当所述注射器筒内部与所述树脂床流体连通时，通过所述柱塞将所述混合物排出所述筒，迫使所述混合物穿过所述容器内的所述树脂床，从而导致（i）所述混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂浓度的降低和/或（ii）所述混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂浓度的提高，其中
(A) 在经所述容器的所述穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间（T CLOT ）在环境温度下为至多1小时，所述环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃；并且
(B) 所述抑制剂和所述诱导剂为小分子。
2.根据权利要求1所述的装置，其中在使所述液体混合物穿过所述树脂床之前，所述注射器筒内的所述液体混合物稳定至少两周。
3.根据权利要求1或2所述的装置，其中所述树脂床为填充床。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的装置，所述装置还包括施涂尖端，所述施涂尖端能够与所述容器的远端流体连通，使得当流体连通时，所述纤维蛋白封闭剂经所述施涂尖端递送至所述表面。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的装置，其中所述筒和所述容器彼此机械地联接，使得它们各自的内部由可移除的隔挡和/或（i）隔膜、（ii）单向滤件、（iii）阀和（iv）旋塞阀中的至少一者来分离。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的装置，其中使所述液体混合物穿过所述树脂床所需的大部分所述力由人拇指的肌肉力量提供。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的装置，其中（i）所述凝结时间（T CLOT ）为至多50分钟，或至多40分钟，或至多30分钟，或至多20分钟和/或（ii）至少5秒，或至少10秒，或至少30秒，或至少1分钟，或至少5分钟，或至少10分钟，或至少15分钟。
8. 根据权利要求1至7中任一项所述的装置，其中以下项之间的比率为约1：
i. 穿过所述树脂床之前所述混合物中30+kDa蛋白质的浓度；与
ii. 穿过所述树脂床之后所述纤维蛋白封闭剂中30+kDa蛋白质的浓度。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的装置，所述装置被构造成使得在至多1分钟，或至多45秒，或至多30秒，或至多15秒，或至多10秒，或至多5秒，或至多3秒，或至多1秒的保留时间之后由所述液体混合物制备纤维蛋白封闭剂。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的装置，所述装置被构造成使得将所述液体混合物排出所述筒，迫使所述混合物在所述树脂床横截面上以基本均匀的方式流动穿过所述树脂床。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的装置，其中所述装置包括至少一个网片，所述网片被构造成将所述流动分配到所述树脂床上并且/或者将所述树脂珠粒保留在所述床内。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的装置，其中所述树脂床驻留在所述容器内，使得所述液体混合物穿过网格并随后途中穿过滤纸（150）到达所述树脂床，所述网格被构造成在所述施压期间提供机械支撑以及将所述流动分散到所述滤纸上，并且所述滤纸被构造成将所述流动分配到所述树脂床上并将所述树脂珠粒保留在所述床内。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的装置，其中所述树脂床的高度（161）为至多10cm，或至多7.5cm，或至多5cm，或至多2.5cm，或至多2cm，或至多1.5cm，或至多1cm。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的装置，其中所述树脂床的高度（161）为至少0.5cm。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的装置，其中所述树脂床的宽度（162）为至多5cm，或至多2.5cm，或至多1.3cm。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的装置，其中所述树脂床的高度（161）与所述树脂床的特征宽度（162）之间的比率为至多2.5，或至多2，或至多1.5，或至多1或至多0.75和/或至少0.5。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的装置，其中所述注射器筒内所述液体混合物的所述量具有至少0.5ml，或至少1ml和/或至多15ml，或至多10ml，或至多5ml的体积。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的装置，所述装置被构造成使得在至多60秒的时间段内施加至所述柱塞的至多30牛顿的力足以迫使所述筒内储存的大部分所述液体混合物以至多60秒的保留时间穿过所述树脂床。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的装置，其中所述树脂床为用所述诱导剂预平衡的。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的装置，其中（i）所述注射器筒内所述液体混合物的体积与（ii）所述树脂床的体积之间的体积比在约0.1至约10的范围内。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的装置，其中（i）所述注射器筒内所述液体混合物的体积与（ii）所述树脂床的体积之间的体积比在约0.2至约5的范围内。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的装置，其中（i）所述注射器筒内所述液体混合物的体积与（ii）所述树脂床的体积之间的体积比在约0.3至约1的范围内。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的装置，其中所述液体混合物包含纤维蛋白原和因子II。
24.根据权利要求23所述的装置，其中所述抑制剂为丝氨酸蛋白酶活性位点抑制剂。
25.根据权利要求23或24所述的装置，其中所述抑制剂为钙螯合剂。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的装置，其中所述诱导剂为磷脂、脑磷脂和/或二价阳离子。
27.根据权利要求1至22中任一项所述的装置，其中所述液体混合物包含单体、二聚体和/或低聚体形式的纤维蛋白。
28.根据权利要求27所述的装置，其中将所述液体混合物维持在中性pH下，并且其中所述抑制剂为GPRP肽或其它可逆的纤维蛋白聚合阻断剂。
29.根据权利要求27所述的装置，其中将所述液体混合物维持在酸性pH下，并且其中所述抑制剂为水合氢离子（H3O+）。
30.根据权利要求29所述的装置，其中所述诱导剂为羟基离子（OH-）。
31.一种用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的系统，所述系统包括：
a. 设置在储存器内的一定量无细胞液体混合物（190），所述无细胞液体混合物包含：
I. 纤维蛋白或
II. 纤维蛋白原和因子II；以及
b. 设置在容器（158）内的树脂床（160），所述容器能够与所述储存器流体连通，其中当流体连通时，所述混合物经所述容器的穿过（i）降低所述混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或（ii）提高所述混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，使得所述混合物经所述容器的所述穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间（T CLOT ）在环境温度下为至多1小时，所述环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃，其中所述抑制剂和所述诱导剂为小分子。
32.根据权利要求31所述的系统，其中所述储存器为注射器的筒（124）。
33.一种套件，所述套件包括：
a. 设置在储存器内的一定量无细胞液体混合物（190），所述无细胞液体混合物包含：
I. 纤维蛋白或
II. 纤维蛋白原和因子II；以及
b. 设置在容器（158）内的树脂床（160），所述容器能够与所述储存器流体连通，使得当所述储存器与所述容器流体连通时，所述混合物经所述容器的所述穿过（i）降低所述混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或（ii）提高所述混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，使得所述混合物经所述容器的所述穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间（T CLOT ）在环境温度下为至多1小时，所述环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃，其中所述抑制剂和所述诱导剂为小分子。
34.一种用于制备并向表面递送纤维蛋白封闭剂的方法，所述方法包括：
a. 提供一定量的无细胞液体混合物（190），所述无细胞液体混合物包含：
I. 纤维蛋白或
II. 纤维蛋白原和因子II；以及
b. 使所述混合物穿过树脂床（160）以便（i）降低所述混合物中纤维蛋白凝块形成抑制剂的浓度和/或（ii）提高所述混合物中纤维蛋白凝块形成诱导剂的浓度，使得所述混合物经所述树脂的所述穿过之后形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间（T CLOT ）在环境温度下为至多1小时，所述环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃；其中所述抑制剂和所述诱导剂为小分子。
35. 一种被构造成由液体混合物生成纤维蛋白封闭剂的装置，所述液体混合物包含纤维蛋白原和因子II，所述混合物储存在所述装置的贮存器内，其中
(i) 所述装置以不易堵塞并且不易堵死的装置操作；并且
(ii) 形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间（T CLOT ）在环境温度下高达约1小时，所述环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
36.一种被构造成由液体混合物生成纤维蛋白封闭剂的装置，所述液体混合物包含纤维蛋白和可逆的纤维蛋白聚合阻断剂，所述混合物储存在所述装置的贮存器内，其中
(i) 所述液体混合物中的所述纤维蛋白为单体、二聚体和/或低聚体形式；
(ii) 所述装置以不易堵塞并且不易堵死的装置操作；并且
(iii) 形成纤维蛋白凝块，其中凝结时间（T CLOT ）在环境温度下在约5秒至约1小时的范围内，所述环境温度选自21℃、22℃、23℃、24℃和25℃。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201461970929P | 2014-03-27 | 2014-03-27 | |
| US61/970929 | 2014-03-27 | ||
| IL231792 | 2014-03-27 | ||
| IL231792A IL231792A0 (en) | 2014-03-27 | 2014-03-27 | Device and method for the preparation and administration of one-component fibrin glue |
| PCT/IL2015/000018 WO2015145416A1 (en) | 2014-03-27 | 2015-03-25 | Device and method for preparing and administering one-component fibrin sealant |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106456719A true CN106456719A (zh) | 2017-02-22 |
| CN106456719B CN106456719B (zh) | 2020-02-14 |
Family
ID=51418150
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201580016739.4A Expired - Fee Related CN106456719B (zh) | 2014-03-27 | 2015-03-25 | 制备和施用单组份纤维蛋白封闭剂的装置和方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10433825B2 (zh) |
| EP (1) | EP3122260A1 (zh) |
| JP (1) | JP6479846B2 (zh) |
| CN (1) | CN106456719B (zh) |
| AU (1) | AU2015237745B2 (zh) |
| BR (1) | BR112016022175A2 (zh) |
| CA (1) | CA2943928A1 (zh) |
| IL (2) | IL231792A0 (zh) |
| WO (1) | WO2015145416A1 (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL230151A0 (en) * | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One-component fibrin glue containing a polymerization inhibitor |
| IL231792A0 (en) | 2014-03-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Device and method for the preparation and administration of one-component fibrin glue |
| IL234246A0 (en) * | 2014-08-21 | 2014-11-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Stabilized thrombin |
| EP3934542A1 (en) * | 2019-03-06 | 2022-01-12 | Gambro Lundia AB | Device and method for the delivery of a thrombin activated fibrin sealant |
| CN110361531B (zh) * | 2019-08-02 | 2023-04-11 | 天津医科大学总医院 | 一种检测微粒促凝活性的实验方法 |
| EP4216928A1 (en) * | 2020-09-23 | 2023-08-02 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Hemostatic formulations and uses thereof |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6121422A (en) * | 1996-11-05 | 2000-09-19 | Bayer Corporation | Method and device for delivering fibrin glue |
| CN105899242A (zh) * | 2013-12-24 | 2016-08-24 | 奥姆里克斯生物药品有限公司 | 包含聚合抑制剂的一组分纤维蛋白胶 |
| CN105979960A (zh) * | 2013-12-24 | 2016-09-28 | 奥姆里克斯生物药品有限公司 | 包含酶原的一组分纤维蛋白胶 |
Family Cites Families (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT366916B (de) | 1980-04-02 | 1982-05-25 | Immuno Ag | Vorrichtung zur applikation eines gewebeklebstoffes auf basis von menschlichen oder tierischenproteinen |
| US4627879A (en) | 1984-09-07 | 1986-12-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Fibrin adhesive prepared as a concentrate from single donor fresh frozen plasma |
| DE3622642A1 (de) | 1986-07-05 | 1988-01-14 | Behringwerke Ag | Einkomponenten-gewebekleber sowie verfahren zu seiner herstellung |
| US4978336A (en) | 1987-09-29 | 1990-12-18 | Hemaedics, Inc. | Biological syringe system |
| US4874368A (en) | 1988-07-25 | 1989-10-17 | Micromedics, Inc. | Fibrin glue delivery system |
| DE3843126C3 (de) | 1988-12-22 | 1994-10-06 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates |
| US5104375A (en) | 1989-10-16 | 1992-04-14 | Johnson & Johnson Medical, Inc. | Locking holder for a pair of syringes and method of use |
| US5318524A (en) * | 1990-01-03 | 1994-06-07 | Cryolife, Inc. | Fibrin sealant delivery kit |
| US5219328A (en) | 1990-01-03 | 1993-06-15 | Cryolife, Inc. | Fibrin sealant delivery method |
| DE4014655A1 (de) | 1990-05-08 | 1991-11-14 | Behringwerke Ag | Peptidamide, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende mittel als fibrin/thrombin-gerinnungsinhibitoren |
| US5792835A (en) | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
| CZ280540B6 (cs) | 1991-09-27 | 1996-02-14 | Opperbas Holding B.V. | Tkáňové lepidlo obsahující kryoprecipitát, způsob jeho výroby a použití aprotininu, proteázy z hadího jedu a batroxobinu pro jeho přípravu |
| US5831005A (en) | 1992-09-24 | 1998-11-03 | Chiron Corporation | Synthesis of N-substituted oligomers |
| US5877278A (en) | 1992-09-24 | 1999-03-02 | Chiron Corporation | Synthesis of N-substituted oligomers |
| CN1091315A (zh) | 1992-10-08 | 1994-08-31 | E·R·斯奎布父子公司 | 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法 |
| US5723579A (en) | 1996-02-02 | 1998-03-03 | Bayer Corporation | Fibrinogen binding peptides |
| EP0885020A1 (en) | 1996-02-20 | 1998-12-23 | Cohesion Corporation | Tissue sealant compositions and methods of use thereof |
| DE19636622C1 (de) | 1996-09-10 | 1998-06-10 | Omrix Biopharm Sa | Auftragvorrichtung zum Auftragen eines Mehrkomponenten-Gewebeklebstoffs und Halterung für eine solche Auftragvorrichtung |
| WO1998020931A1 (en) | 1996-11-15 | 1998-05-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Devices and methods for applying a mixture of two or more liquid components to form a biomaterial |
| US6613020B1 (en) | 1996-12-06 | 2003-09-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of applying a mixture of two liquid components as well as a device for carrying out the method |
| FR2757770B1 (fr) | 1996-12-30 | 1999-02-26 | Inoteb | Procede de preparation d'une colle biologique capable de coaguler par simple addition d'ions calcium |
| US6783514B2 (en) | 1997-01-31 | 2004-08-31 | United States Surgical Corporation | Fibrin sealant applicator |
| EP0856317A1 (en) | 1997-01-31 | 1998-08-05 | Omrix Biopharmaceuticals S.A. | A stabilized mixture comprising fibrinogen |
| US6121232A (en) | 1997-01-31 | 2000-09-19 | Omrix Biopharmaceuticals Sa | Stabilized mixture comprising fibrinogen |
| GB9711927D0 (en) | 1997-06-09 | 1997-08-06 | Bristol Myers Squibb Co | Compositions useful as fibrin sealants |
| CA2447789C (en) | 2001-05-21 | 2012-11-06 | Omrix Biopharmaceuticals S.A. | Removal of plasminogen or plasmin from protein solutions |
| US6908899B2 (en) | 2001-08-17 | 2005-06-21 | U.S. Dept. Of Veterans Affairs | Pro-inflammatory fibrinopeptide |
| CN1606447A (zh) | 2001-10-03 | 2005-04-13 | 克里斯托弗·J·伍尔弗顿 | 保存稳定的纤维蛋白原溶液 |
| DE10261126A1 (de) | 2002-08-13 | 2004-03-04 | Aventis Behring Gmbh | Lagerungsstabile, flüssige Fibrinogen-Formulierung |
| US7208087B2 (en) * | 2005-02-15 | 2007-04-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Dual-chamber chromatographic cartridge |
| BRPI0518047B8 (pt) | 2005-11-22 | 2021-06-22 | Omrix Biopharm Sa | dispositivo aplicador para aplicar um fluido de multicomponentes |
| FR2894831B1 (fr) | 2005-12-16 | 2008-02-15 | Lab Francais Du Fractionnement | Colle biologique exempte de thrombine et son utilisation comme medicament. |
| GB0623607D0 (en) | 2006-11-27 | 2007-01-03 | Haemostatix Ltd | Tissue adhesive |
| FR2909180B1 (fr) | 2006-11-29 | 2009-02-20 | Diagnostica Stago Soc Par Acti | Methode de mesure fonctionnelle de l'activite de la thrombomoduline plasmatique. |
| CA2746257C (en) | 2008-12-11 | 2018-01-16 | Baxter International Inc. | Preparations based on fibrinogen and sulfated polysaccharides |
| US8367802B2 (en) | 2009-06-18 | 2013-02-05 | Biomedica Management Corporation | Method to produce fibrin monomer in acid media for use as tissue sealant |
| WO2011006069A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | Georgia Tech Research Corporation | Peptides for binding fibrinogen and fibrin |
| IL231792A0 (en) | 2014-03-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Device and method for the preparation and administration of one-component fibrin glue |
-
2014
- 2014-03-27 IL IL231792A patent/IL231792A0/en unknown
-
2015
- 2015-03-25 AU AU2015237745A patent/AU2015237745B2/en not_active Ceased
- 2015-03-25 EP EP15721043.6A patent/EP3122260A1/en not_active Withdrawn
- 2015-03-25 CN CN201580016739.4A patent/CN106456719B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2015-03-25 BR BR112016022175A patent/BR112016022175A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-03-25 WO PCT/IL2015/000018 patent/WO2015145416A1/en active Application Filing
- 2015-03-25 JP JP2016559269A patent/JP6479846B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-03-25 US US14/668,341 patent/US10433825B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2015-03-25 CA CA2943928A patent/CA2943928A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-08-22 IL IL247425A patent/IL247425B/en active IP Right Grant
-
2019
- 2019-05-15 US US16/412,487 patent/US11020100B2/en active Active
-
2021
- 2021-05-12 US US17/318,740 patent/US11957324B2/en active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6121422A (en) * | 1996-11-05 | 2000-09-19 | Bayer Corporation | Method and device for delivering fibrin glue |
| CN105899242A (zh) * | 2013-12-24 | 2016-08-24 | 奥姆里克斯生物药品有限公司 | 包含聚合抑制剂的一组分纤维蛋白胶 |
| CN105979960A (zh) * | 2013-12-24 | 2016-09-28 | 奥姆里克斯生物药品有限公司 | 包含酶原的一组分纤维蛋白胶 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20210267581A1 (en) | 2021-09-02 |
| JP6479846B2 (ja) | 2019-03-06 |
| BR112016022175A2 (pt) | 2017-10-10 |
| US11020100B2 (en) | 2021-06-01 |
| CA2943928A1 (en) | 2015-10-01 |
| JP2017514554A (ja) | 2017-06-08 |
| US20150272562A1 (en) | 2015-10-01 |
| US20190314006A1 (en) | 2019-10-17 |
| WO2015145416A1 (en) | 2015-10-01 |
| AU2015237745B2 (en) | 2019-08-29 |
| IL231792A0 (en) | 2014-08-31 |
| IL247425B (en) | 2020-11-30 |
| EP3122260A1 (en) | 2017-02-01 |
| CN106456719B (zh) | 2020-02-14 |
| IL247425A0 (en) | 2016-11-30 |
| AU2015237745A1 (en) | 2016-09-15 |
| US10433825B2 (en) | 2019-10-08 |
| US11957324B2 (en) | 2024-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106456719A (zh) | 制备和施用单组份纤维蛋白封闭剂的装置和方法 | |
| CN105979960A (zh) | 包含酶原的一组分纤维蛋白胶 | |
| ES2241030T3 (es) | Preparado farmaceutico para el tratamiento de alteraciones de la coagulacion sanguinea. | |
| ES2476996T3 (es) | Tratamiento local de defectos óseos con matriz de liberación de PTH | |
| KR102410065B1 (ko) | 피브리노겐-결합 펩타이드를 포함하는 펩타이드 덴드리머 | |
| CN105899242B (zh) | 包含聚合抑制剂的一组分纤维蛋白胶 | |
| EP2726115A2 (en) | Procoagulant peptides and their derivatives and uses therefor | |
| ES2684786T3 (es) | Adhesivo biológico libre de trombina y su utilización como medicamento | |
| CA2728939C (en) | Heparin-conjugated fibrin gel and method and kit for preparing the same | |
| EP2049040A2 (en) | Whole blood-derived coagulum device for treating bone defects | |
| CN102724995B (zh) | 富含具有延伸的α链的血纤蛋白原的血纤蛋白原制备物 | |
| ES2968449T3 (es) | Composiciones hemostáticas | |
| IL296230A (en) | preparations to stop bleeding | |
| ES2799829T3 (es) | Proteínas de fusión recombinantes para la prevención o el tratamiento de adherencias en tejidos u órganos |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200214 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |