CN106432401A - 膜分离制备华蟾素的方法 - Google Patents

Abstract

本案涉及膜分离制备华蟾素的方法，包括：取干蟾皮，洗净剪碎，得净蟾皮；将净蟾皮加入热回流提取罐中，加入提取溶剂，热回流提取3次，合并提取液，得华蟾素醇提液；将华蟾素醇提液减压浓缩至浓缩设备收液器无溶剂冷凝时停止浓缩，得华蟾素醇提浸膏；向华蟾素醇提浸膏加入蒸馏水，得华蟾素浸膏水溶液；将华蟾素浸膏水溶液放入膜分离装置中，开泵预平衡，待药液循环平衡至药液全部滤过，收集超滤液；将所得超滤液进行减压浓缩收膏，得华蟾素提取物。本案通过对现有华蟾素的提取工艺的改进，引入了膜分离提取技术，实现了对有效物质的高效提取，提高了产率，满足了工业化生产的需要，为膜分离提取技术在华蟾素生产中的应用打下基础。

Description

膜分离制备华蟾素的方法

技术领域

本发明涉及一种中药提取工艺，具体涉及一种膜分离制备华蟾素的方法。

背景技术

华蟾素来源于中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufomelanostictus Schneider)的皮经过提取分离得到，是我国自行研制的二类新药和国家中药保护品种，具有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖、抗乙肝病毒的药理作用，在抗肿瘤、治疗慢性乙型肝炎以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。

华蟾素注射液、口服液、片剂均为我国自行研制、独家生产的国家中药保护品种。在多年的研究和生产经验积累中发现，华蟾素的提取工艺对临床疗效的影响起着至关重要的作用。目前已报道的华蟾素提取工艺主要有水提醇沉法、醇提水沉法，但这些传统方法对华蟾素有效成分的提取效率低，从而导致生产成本偏高，因此需要探索一种基于膜分离技术制备华蟾素的工艺来提高有效成分含量，提高生产效率。

发明内容

针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种膜分离制备华蟾素的方法，以达到提高有效成分含量，提高生产效率的目的。

本发明的技术方案概述如下：

一种膜分离制备华蟾素的方法，其包括以下步骤：

S1：取干蟾皮，洗净晾干，剪碎，得净蟾皮；

S2：将净蟾皮加入热回流提取罐中，加入提取溶剂，热回流提取3次，合并提取液，得华蟾素醇提液；

S3：将华蟾素醇提液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浓缩设备收液器无溶剂冷凝时停止浓缩，得华蟾素醇提浸膏；

S4：向华蟾素醇提浸膏加入蒸馏水，过滤，得华蟾素浸膏水溶液；

S5：华蟾素浸膏水溶液放入膜分离装置中，开泵预平衡，超滤液和截留液返回循环药液，待药液循环平衡30min，至药液全部滤过，收集超滤液；

S6：将S5所得超滤液进行减压浓缩，在80℃浓缩收膏，得华蟾素提取物。

优选的是，所述的膜分离制备华蟾素的方法，其中，S2中，所述提取溶剂为75％的乙醇溶液。

优选的是，所述的膜分离制备华蟾素的方法，其中，S2中，所述净蟾皮与提取溶剂的质量比为1∶5-10。

优选的是，所述的膜分离制备华蟾素的方法，其中，S3中，浓缩温度为45-55℃，浓缩时的真空度为-0.07～-0.09MPa。

优选的是，所述的膜分离制备华蟾素的方法，其中，S4中，所述蒸馏水的加入量是华蟾素醇提浸膏质量的5倍。

优选的是，所述的膜分离制备华蟾素的方法，其中，S5中，超滤膜截留分子量为800，操作压力为0.6-0.8MPa，分子截留温度为20-40℃。

优选的是，所述的膜分离制备华蟾素的方法，其中，S6中，减压浓缩的真空度为-0.08MPa。

本发明的有益效果是：本案通过对现有华蟾素的提取工艺的改进，引入了膜分离提取技术，实现了对有效物质的高效提取，提高了产率，满足了工业化生产的需要，为膜分离提取技术在华蟾素生产中的应用打下基础。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

1、本案方法

(1)取干蟾皮，洗净后晾干，剪碎，得净蟾皮；

(2)将净蟾皮加入热回流提取罐中，加入75％的乙醇溶液为提取溶剂，蟾皮：溶剂＝1:5-10(w/w)，80℃热回流提取3次，合并提取液，得华蟾素醇提液；

(3)将华蟾素醇提液减压浓缩回收乙醇，浓缩温度45-55℃，真空度-0.07～-0.09MPa，浓缩至浓缩设备受液器无溶剂冷凝时停止浓缩，得华蟾素醇提浸膏；

(4)向华蟾素醇提浸膏加入5倍量(w/w)的蒸馏水，过滤，得华蟾素浸膏水溶液；

(5)华蟾素浸膏水溶液放入膜分离装置中，开泵预平衡，超滤液和截留液返回循环药液，待药液循环平衡30min，至药液全部滤过，收集超滤液；超滤膜截留分子量为800(g/mol)，操作压力0.8MPa，分子截留温度30℃；

因为华蟾素中有效成分的(数均)分子量均在800以下，而醇提的杂质主要为蛋白质、脂肪、多糖等大分子物质，因此选择超滤膜的截留分子量为800；

(6)将步骤(5)所收集的超滤液减压浓缩，真空度-0.08MPa，80℃浓缩收膏，得华蟾素提取物；

(7)重复5次实验，按照3.2测定提取液中吲哚类生物碱的含量。

2、传统水煎提取方法

取干蟾皮100g，洗净，加水5～6倍，煎煮二次，第一次45分钟，第二次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1～1.2(85±5℃)，冷却至40℃，加乙醇使含醇量达60％，搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加乙醇使含醇量达85％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得华蟾素提取物。重复5次实验，按照3.2测定提取液中吲哚类生物碱的含量。

3、检测方法(国家药品标准)

3.1标准曲线：

取5-羟色胺盐酸盐对照品15.03mg，置100ml量瓶中，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，得对照品溶液。

精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置10ml量瓶中，加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸(2→3)溶液5ml，摇匀，加纯化水至刻度，摇匀，室温放置35min，照分光光度法(《中国药典》2010版，附录VB)，以纯化水为空白，在555nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对应浓度为横坐标，绘制标准曲线图。所得曲线的回归方程为Y＝0.0389X+0.0276，R＝0.9994，表明吲哚类生物碱在0.139～0.608μg·ml^-1浓度范围内线性关系良好。

3.2华蟾素浸膏中吲哚类生物碱含量测定

精密量取华蟾素浸膏适量，离心，稀释至合适倍数，然后按3.1项下规定的方法，自“加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸(2→3)溶液”起，依法测定吸收度，由标准曲线回归方程计算得出供试品溶液吲哚类生物碱的含量。

4、制备方法比较

表1 100g原料所得提取物中吲哚类生物碱的含量比较

序号	本案方法(mg)	传统方法(mg)
			1	59.59	23.76
2	60.86	21.40
			3	60.64	22.04
4	59.61	21.12
			5	60.80	20.22
平均值	60.30	21.71

由表1可见，本案方法可显著提高华蟾素提取物吲哚类生物碱的含量，显著提高华蟾素提取物中有效成分的含量。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (7)

1.一种膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：取干蟾皮，洗净晾干，剪碎，得净蟾皮；

S2：将净蟾皮加入热回流提取罐中，加入提取溶剂，热回流提取3次，合并提取液，得华蟾素醇提液；

S3：将华蟾素醇提液减压浓缩回收乙醇，浓缩至浓缩设备收液器无溶剂冷凝时停止浓缩，得华蟾素醇提浸膏；

S4：向华蟾素醇提浸膏加入蒸馏水，过滤，得华蟾素浸膏水溶液；

S5：华蟾素浸膏水溶液放入膜分离装置中，开泵预平衡，超滤液和截留液返回循环药液，待药液循环平衡30min，至药液全部滤过，收集超滤液；

S6：将S5所得超滤液进行减压浓缩，在80℃浓缩收膏，得华蟾素提取物。

2.根据权利要求1所述的膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，S2中，所述提取溶剂为75％的乙醇溶液。

3.根据权利要求1所述的膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，S2中，所述净蟾皮与提取溶剂的质量比为1∶5-10。

4.根据权利要求1所述的膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，S3中，浓缩温度为45-55℃，浓缩时的真空度为-0.07～-0.09MPa。

5.根据权利要求1所述的膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，S4中，所述蒸馏水的加入量是华蟾素醇提浸膏质量的5倍。

6.根据权利要求1所述的膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，S5中，超滤膜截留分子量为800，操作压力为0.6-0.8MPa，分子截留温度为20-40℃。

7.根据权利要求1所述的膜分离制备华蟾素的方法，其特征在于，S6中，减压浓缩的真空度为-0.08MPa。