CN106431877A - 一种从甘草渣制备甘草查尔酮a的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种从甘草渣制备甘草查尔酮A的方法，其制备方法包含以下步骤：甘草渣以饱和石灰水回流提取，提取液静置后，以大孔树脂吸附，以含水低级醇洗脱，洗脱液浓缩后，加入一定量的低级醇，加入NaOH溶液至溶液澄清，加酸沉淀，沉淀再以有机溶剂结晶。本发明有工艺简单，成本低，提取率高，不使用有机溶剂，对环境污染小，利于大生产。

Description

一种从甘草渣制备甘草查尔酮A的方法
技术领域
本发明涉及一种从甘草渣制备甘草查尔酮A的方法。
背景技术
甘草查尔酮A（Licochalcone A）是甘草黄酮中的一种，其结构如下：
甘草查尔酮A 是一种黄酮类化合物，主要来源于甘草中，具有抗寄生物、抗菌、抗肿瘤等作用。文献《Licochalcone A induces apoptosis in malignant pleuralmesothelioma through downregulation of Sp1 and subsequent activation ofmitochondria-related apoptotic pathway》，《Licochalcone-A sensitizes humanesophageal carcinoma cells to TＲAIL-mediated apoptosis by proteasomaldegradation of XIAP》，《Licochalcone A inhibits the migration and invasion ofhuman lung cancer cells via inactivation of the Akt signaling pathway withdownregulation of MMP-1/-3 expression》表明甘草查尔酮A 对多种肿瘤细胞有抑制作用，文献《甘草查尔酮A 抑制小鼠黑色素瘤B16F10 细胞增殖机制研究》报道了甘草查尔酮A抑制B16F10 细胞增殖机制可能是通过使B16F10细胞G1期阻滞，进而诱导细胞分化和凋亡。
随着甘草查尔酮A越来越多的药理活性受到广泛关注，如何实现甘草查尔酮A的工业化制备以及如何控制其成本问题变得越发紧迫。由于甘草查尔酮在甘草中含量较低，需经多个纯化步骤才能得到纯度较高的甘草查尔酮A，导致甘草查尔酮A的成本居高不下。另一方面，因制备甘草酸系列化合物而废弃的甘草渣，每年大约有数百吨之多，如能将其加以利用，则可极大地提高甘草资源的附加值和综合利用率。经检测发现，在从甘草中提取甘草酸时由于采用水提工艺，甘草查尔酮A由于极性较小，并未被提取出来，仍存留于甘草渣中，如以甘草渣为原料制备甘草查尔酮A则原料成本可以大大降低，且由于之前的水提将其中很多杂质提取出来，甘草查尔酮A的含量得到较大提高，更有利于分离纯化。
《甘草查尔酮分离纯化工艺的研究》（宁夏工程技术，4（4），2005，363-365）报道的甘草查尔酮A纯化制备方法，包括乙醇浸泡，石灰水除杂，大孔树脂吸附，Na2CO3和乙酸乙酯反复萃取，聚酰胺柱层析，硅胶柱层析等步骤，最后重结晶得到甘草查尔酮A，该工艺极其繁琐，难以实现工业化，且甘草查尔酮A得率极低，成本极高，且硅胶柱层析中使用大量有机溶剂，不利于环境保护。《高速逆流色谱法纯化甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲》（现代中药研究与实践，18，2004，53-56）报道了95%乙醇超声提取，2%NaOH除杂，2%盐酸沉淀，高速逆流萃取纯化得到甘草查尔酮A，该方法中由于采用高速逆流萃取，对于设备和溶剂系统要求很高，且消耗大量有机溶剂，不仅大大增加了工业化生产难度，产品成本也大大提高，且易引起环境污染等问题。中国专利《高纯度甘草查尔酮A的制备方法，CN200710052521.1》报道了一种高纯度甘草查尔酮A的制备方法，其工艺步骤为：提取，浓缩、萃取、柱层析分离、有机溶剂结晶即可获得高纯度甘草查尔酮A。由于其中采用有机溶剂萃取来除杂，不可避免的使用大量有机溶剂造成环境保护的压力，且该工艺采用的提取方式，如为低有机相溶剂提取则提取率极低，如为高有机相提取则必然导致成本的极大提升。
发明内容
本发明提供一种从甘草渣制备甘草查尔酮A的方法。
本发明具体的技术方案：甘草渣以饱和石灰水回流提取，提取液静置后，以大孔树脂吸附，以含水低级醇洗脱，洗脱液浓缩后，加入一定量的低级醇或水，加入NaOH溶液至溶液澄清，加酸沉淀，沉淀再以有机溶剂结晶。
上述提取所用方法为：甘草渣以4-20BV饱和石灰水回流提取1-5次，优选的为6-15BV，提取3-5次；更优选的为8BV，提取5次。
上述静置所用时间为8-48小时，优选的为10-36小时；更优选的为16小时。
上述所用大孔树脂为D101大孔树脂、AB-8、HP20等极性或非极性大孔树脂，优选的为D101大孔树脂。
上述大孔树脂洗脱溶剂包括可与水互溶的低级醇，如甲醇、乙醇、异丙醇等，低级醇与水的比例为30%-100%，优选的为40-80%；更优选的为60%。
上述洗脱液浓缩的体积为与药材重量比为1：2-3:1，优选的为1:2-2:1；更优选的为1:1。
上述加入浓缩液中的低级醇或水，其中低级醇为与水互溶的醇，如甲醇、乙醇、异丙醇等，加入比例为与浓缩液体积比为1：10-1:1，优选的为1:5-1:2；更优选的为1:3。
上述加入NaOH溶液为2%-10%（w/v）的稀溶液，加入的量为至溶液刚好澄清，优选的为3%-8%；更优选的为5%。
上述加入盐酸溶液为5-38%（w/v）的溶液，加入的量为至溶液的pH为1-5，盐酸溶液优选的为10-38%，更优选的为35%-38%； pH优选的为2-4， pH更优选的为2-3。
上述的结晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、异丙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷等有机溶剂。所得结晶纯度不低于95%，优选的为石油醚-乙酸乙酯。
发明的优点：本发明所制备的提取物工艺简单，适合于大生产中应用；本发明所采用的起始原料为甘草渣为废弃物，成本极低；本发明所采用的提取溶剂为饱和石灰水，成本极低，且提取率较高；本发明所采用的工艺步骤中除结晶步骤使用少量有机溶剂外，其余步骤均避免使用有机溶剂，不仅大大降低成本，且不会造成环境污染。
附图说明
图1甘草查尔酮A HPLC图。
具体实施方式
实施例1
甘草渣10Kg，以饱和石灰水回流提取5次，每次体积为80L，合并提取液，静置过夜后，以10LD101大孔树脂柱吸附，水洗30L，再以60%乙醇洗脱50L，将60%乙醇洗脱液浓缩至10L，加入3L95%乙醇，再加入5%NaOH溶液至溶液澄清，加入35%盐酸并不停搅拌至pH=2-3产生大量沉淀，过滤，沉淀烘干后再以乙酸乙酯-石油醚重结晶4次，即得到甘草查尔酮A结晶，经检测，含量为98.2%。
实施例2
甘草渣5Kg，以饱和石灰水回流提取2次，每次体积为20L，合并提取液，静置8小时后，以3L AB-8大孔树脂柱吸附，水洗9L，再以30%乙醇洗脱30L，将30%乙醇洗脱液浓缩至2.5L，加入0.25L95%异丙醇，再加入2%NaOH溶液至溶液澄清，加入5%盐酸并不停搅拌至pH=1产生大量沉淀，过滤，沉淀烘干后再以氯仿-甲醇重结晶3次，即得到甘草查尔酮A结晶，经检测，含量为95.0%。
实施例3
甘草渣1Kg，以饱和石灰水回流提取4次，每次体积为10L，合并提取液，静置48小时后，以10LD101大孔树脂柱吸附，水洗30L，再以甲醇洗脱30L，将甲醇洗脱液浓缩至3L，加入3L水，再加入10%NaOH溶液至溶液澄清，加入5%盐酸并不停搅拌至pH=5产生大量沉淀，过滤，沉淀烘干后再以异丙醚-丙酮重结晶5次，即得到甘草查尔酮A结晶，经检测，含量为97.7%。

Claims (18)

1.一种甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）提取步骤
甘草渣以4-20BV饱和石灰水回流提取1-5次；
（2）洗脱步骤
提取液静置8-48小时，以D101大孔树脂、AB-8、HP20等极性或非极性大孔树脂吸附，以含水低级醇如甲醇、乙醇、异丙醇等，（低级醇与水的比例为30%-100%）洗脱；
（3）浓缩步骤
洗脱液浓缩；
（4）分离步骤
加入一定量的低级醇或水，加入NaOH 2%-10%（w/v）的稀溶液至溶液澄清，加5-38%盐酸，加入的量为至溶液的pH为1-5使沉淀；
（5）结晶步骤
沉淀再以有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、异丙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷等有机溶剂结晶。
2.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述提取步骤中：甘草渣以6-15BV饱和石灰水回流提取3-5次。
3.如权利要求1或2所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述提取步骤中： 甘草渣以8BV饱和石灰水回流提取5次。
4.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述洗脱步骤中：静置所用时间为8-48小时。
5.如权利要求1或4所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述洗脱步骤中：静置所用时间为10-36小时。
6.如权利要求1或4所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述洗脱步骤中：静置所用时间为16小时。
7.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述洗脱步骤中：以D101大孔树脂吸附，洗脱液低级醇与水的比例为40-80%。
8.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述洗脱步骤中：洗脱液低级醇与水的比例为60%。
9.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述浓缩步骤中：洗脱液浓缩的体积为与药材重量比为1：2-3:1。
10.如权利要求1或9所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述浓缩步骤中：洗脱液浓缩的体积为与药材重量比为1:2-2:1。
11.如权利要求1或9或10所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述浓缩步骤中：洗脱液浓缩的体积为与药材重量比为1:1。
12.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述分离步骤中：加入浓缩液中的低级醇或水，加入比例为与浓缩液体积比为1：10-1:1，入NaOH 3%-8%（w/v）的稀溶液至溶液澄清，加入盐酸溶液为10-38%（w/v）的溶液，加入的量为至溶液的pH为2-4。
13.如权利要求1或12所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述分离步骤中：加入浓缩液中的低级醇或水，加入比例为与浓缩液体积比为1:5-1:2。
14.如权利要求1或12或13所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述分离步骤中：加入浓缩液中的低级醇或水，加入比例为与浓缩液体积比为1:5-1:2。
15.如权利要求1或12所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述分离步骤中：入NaOH 5%（w/v）的稀溶液至溶液澄清。
16.如权利要求1或12所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述分离步骤中：加入盐酸溶液为35%-38%（w/v）的溶液，加入的量为至溶液的pH为2-3。
17.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述结晶步骤中：所得结晶纯度不低于95%。
18.如权利要求1所述的甘草查尔酮A的制备方法，其特征在于，所述结晶步骤中：结晶溶剂为石油醚-乙酸乙酯。
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