CN106421249A - 治疗白癜风的外用制剂及其制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物主要由补骨脂、防风、蒺藜、白芷、白鲜皮、乌梢蛇、紫草、自然铜、红花、血竭以及冰片经加工制备而成。该外用制剂从中医辨证论治的角度治疗白癜风，具有祛风补血，解除风邪，加速皮肤着色的功效。

Description

治疗白癜风的外用制剂及其制法

技术领域

本发明属于中药领域，特别涉及一种治疗白癜风的中药组合物和外用制剂及其制法。

背景技术

白癜风是一种常见的皮肤病，局部色素脱色，影响美容，易诊而难治。世界上所有的种族都可罹患，古称“白驳风”，为气血两亏，风湿二邪侵袭肌肤所致。此症面及颈项，肉色变白，状类斑点，并不痒痛，由风邪相搏于皮肤致令气血失和，施治宜早，若循日久，甚者延及遍体

目前，治疗白癜风病的药物包括中成药和外用药剂，如专利CN103230584A公开了一种钴、铜、硒中药元素维生素外治白癜风的药酒，其中包括的中药流浸膏由下料配方组成：(1)乌梢蛇、防风、白蒺藜、肉桂、五加皮、天麻、羌活、牛膝、桔壳各、熟地黄；(2)生补骨脂、白蒺藜、菟丝子、沙苑子、决明子、骨碎补、白鲜皮、肉桂、斑蝥；(3)补骨脂、密陀僧、前胡、防风、制白附子、制雄黄；(4)党参、黄芪、白术、茯苓、紫草、白蒺藜、何首乌、苍术、麦冬、墨旱莲、丹参、桃仁、红花、补骨脂、生甘草、自然铜；(5)白芷、浮萍、威灵仙、苍术、刺蒺藜、丹参、旱莲草、紫草、沙苑蒺藜、何首乌、补骨脂。但是这些中药制剂的原料药种类较多，原料药之间并没有都发生协同作用，且过多中药原料的混合容易出现副作用，反而影响了中药组合物的整体疗效。此外，现有的中药组合物多数是将所用原料直接粉碎入药，没有对原料内的活性成分进行提取分离，非有效成分没有除去，杂质较多，使中药组合物的组方过大，不利于患者服用，进一步影响中药组合物的疗效。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种治疗白癜风的外用制剂，该外用制剂从中医辨证论治的角度治疗白癜风，具有祛风补血，解除风邪，加速皮肤着色的功效。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物主要由下列重量份的原料药经加工制备而成：

中医认为白癜风是由于气血亏虚，兼风邪外袭，营卫失和，引起黑色素缺失的；从辨证论治角度出发，中医采用补气补血，祛风散邪的药物可有效改善白癜风的皮肤状况。本发明上述11味中药配方的有效成分可以直接作用于皮肤，增强皮肤抵抗力，从而促进黑色素细胞增殖，上调络氨酸酶活性；具有较好的治疗白癜风的功效。

本发明所提供的组合物还可包括下列重量份的原料药：

桂枝10-35 芍药10-25 乌梅10-25

透骨草10-38 芡实10-25 胡桃10-25。

通过这六位味药的添加，进一步补充患者皮肤所需元素，均衡维生素，清除人体自由基，提高人体免疫力，从而增强了皮肤细胞活力，达到彻底治疗白癜风。其相对于直接补充微量元素的方案更为安全；原因在于人体无法通过皮肤来补充矿物质和大多的微量元素，少有的几种强还原金属能够破坏皮肤结构进入真皮层，但不是通过吸收，而是穿透皮肤，这种方式容易对皮肤造成伤害；此外，直接通过皮肤补充微量元素的方法不易对皮肤吸收的微量元素的量进行控制，极容易皮肤吸收过量，反而对身体造成伤害。本发明通过中药原料对皮肤维生素进行补充，辅以外涂药后局部日光浴或紫外线照射15-30分钟的方法，使皮肤自身合成微量元素，从而安全治疗白癜风。

在中药组合物的其中一个优选方案中，所述中药组合物由下列重量份的原料药经加工制备而成：

在外用制剂的一个优选方案中，所述外用制剂为外用水剂，所述中药组合物和辅料的重量分数比为2-6:1；所述辅料由如下重量份数的成分组成：52-100份的二甲基亚砜、35-70份的硅油脂肪醇以及35-70份的聚乙二醇。

在外用制剂的另一个优选方案中，所述外用制剂为外用凝胶剂，所述中药组合物和辅料的重量分数比为1-5:3；所述辅料主要由如下重量份数的成分组成：75-150份的聚乙二醇多嵌段共聚物、60-120份的结冷胶、30-75份的松香甘油酯以及30-60份的液体石蜡。其中，聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶共同使用，使凝胶剂更好的成型，提高凝胶剂的稳定性；可显著增加胶束的增溶作用，使药物有效成分更易被皮肤吸收，同时还具有更优的力学强度；松香甘油酯和液体石蜡的添加则提高药物对皮肤的粘附性和保湿性。

为进一步提高本发明外用凝胶剂的皮肤吸收效果，所述辅料还包括如下重量份数的成分：5-30份的十四烷基硫酸钠、3-18份的杜香萜烯以及15-60份的枸橼酸钠。其中十四烷基硫酸钠和杜香萜烯的联合使用提高药物透皮吸收效果，进一步增强了中药组合物的生物利用度。

更进一步的，所述辅料还包括如下重量份数的成分：5-22份的小豆蔻提取物、15-60苦参提取物以及5-30份的蓖麻油。该方案中添加的小豆蔻提取物一方面进一步促进药物吸收作用，另一方面与苦参提取物和蓖麻油协同，提高药物抑菌抗菌能力，提高皮肤免疫力，且延长药物保质期；还具有保湿补气的作用。

本发明另一方面还提供了治疗白癜风的外用制剂的制备方法，

所述制备方法包括以下步骤：

1)称取重量份数原料，采用乙醇和醋酸水进行提取、浓缩，烘干后研磨，制得中药组合物的细粉；

2)凝胶基质的制备

2.1)将重量份数的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶加入适量蒸馏水振荡、分散，随后浸泡至其充分溶胀；

2.2)将重量份数的枸橼酸钠、苦参提取物以及蓖麻油溶于适量蒸馏水中，使混合物溶解；

2.3)将步骤2.1)和步骤2.2)的溶液混合，并加入松香甘油酯、液体石蜡、十四烷基硫酸钠、杜香萜烯以及小豆蔻提取物，搅拌均匀，制成凝胶基质；

3)将步骤1)的中药组合物细粉和步骤2)的凝胶基质混合，置于超微粉碎机中粉碎，过微孔过滤膜，然后加水适量，搅拌均匀，灭菌，无菌灌装，即得所述治疗白癜风的外用凝胶剂。。

上述制备方法中，将中药组合物和凝胶基质制成超微粉状，使药物中的植物细胞内的有效成分充分释放出来，提高药物中有效成分的溶出速度和溶出率，从而提高药材的生物利用度。该工艺方法简单易操作，具有很高的实用性。

进一步的方案中，所述步骤1)包括以下步骤：

1.1)称取重量份数的补骨脂、白鲜皮、芍药、透骨草，粉碎后搅拌均匀，以每克生药加入12U纤维素酶，充分搅拌，用50％的乙醇回流3次，后浓缩置冰箱过夜，离心得到浸膏，然后用甲醇热溶，加活性炭回流，趁热过滤，滤液在电热套上蒸取甲醇，待析出沉淀，后加入冷甲醇，迅速抽滤后沉淀，用醇溶解，静置，过滤，在温度为45℃、压力为-0.05MPa条件下进行真空干燥，制得粗粉1；

1.2)称取重量份数的防风、蒺藜、乌梢蛇、血竭、自然铜、冰片以及胡桃，粉碎后过筛，使用75％的乙醇回流提取2h，过滤，滤渣再用75％的乙醇回流提取两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩至相对密度1.05-1.10的浸膏，浸膏烘干后制得粗粉2；

1.3)称取重量份数的白芷、紫草、红花、桂枝、乌梅以及芡实，用85％乙醇液提取2次，提取液上大孔树脂层析柱吸附，用6倍柱体积的25％的乙醇洗脱，洗液弃掉，继续用6倍柱体积的70％的乙醇洗脱，洗脱液收集，减压浓缩，冷却后用醇溶解，静置，过滤，再次减压浓缩，冷却后粉碎，即得粗粉3；

1.4)称取重量份数的自然铜，加pH4醋酸水煎煮两次，每次1h，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.00-1.15g/ml的稠膏，浸膏烘干后制得粗粉4；

1.5)将粗粉1、粗粉2、粗粉3以及粗粉4混合均匀，置研磨机研磨成粒径为1-100μm的细粉，即得中药组合物。

其中，所述步骤2.1)的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶的浸泡温度为22℃。

本发明外用制剂的中药有效成分可直接作用于皮肤，增强皮肤抵抗力，从而促进黑色素细胞增殖，上调络氨酸酶活性；具有较好的治疗白癜风的功效。本发明制备外用制剂的方法中，将各中药原料药内的有效成分提取出来，减少没有发挥作用的成分的用量，进一步提高了中药组合物的疗效；且工艺操作简单，达到提高有效成分的收率和纯度的目的，在实现在节约成本的同时，保持收率高、产品品质好、工艺简单等优点，适合工业化生产。

本发明所述原料药的来源如下：

补骨脂：又名：破故纸，婆固脂，胡韭子。属蔷薇目，豆科一年生直立草本，以果实入药。

防风：本品为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。

蒺藜：为蒺藜科一年生或多年生草本植物蒺藜Tribulus terrestris L.的成熟果实。

白芷：为伞形科植物糙叶独活的根。

白鲜皮：为芸香科多年生草本植物白鲜和狭叶白鲜的根皮。

乌梢蛇：为游蛇科动物乌梢蛇除去内脏的全体。

紫草：为紫草科紫草属Lithospermum erythrorhizon的全株。

自然铜：为硫化物类铁矿族矿物黄铁矿。

红花：为桔梗目菊科红花属Carthamus tinctorius L.的花。

血竭：为棕榈科植物麒麟竭Daemonorops draco Bl.果实渗出的树脂精加工制成。

冰片：为由菊科艾纳香Blumea balsami fera(L.)DC.茎叶或樟科植物龙脑樟Cinnamomumcamphora(L)presl枝叶经水蒸汽蒸馏并重结晶而得。

桂枝：为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝。

芍药：属毛茛目，芍药科芍药属多年生草本。

乌梅：为蔷薇科植物梅的干燥未成熟果实。

透骨草：为凤仙花科植物凤仙花的茎。

芡实：为睡莲科植物芡Euryale ferox Salisb.的干燥成熟种仁。

胡桃：胡桃科植物核桃楸Juglans Mandshurica Maxim.，以种仁、青果和树皮入药。

具体实施方式

实施例1

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物主要由下列原料药经加工制备而成：

实施例2

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物由下列原料药经加工制备而成：

中药组合物的制法：称取实施例所述重量的原料置于酒精中浸泡1-3d后，过滤，取药液，即得中药组合物。

实施例3

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物的原料药为：

中药组合物的制法：

1.1)称取重量份数的补骨脂、白鲜皮、芍药、透骨草，粉碎后搅拌均匀，以每克生药加入12U纤维素酶，充分搅拌，用50％的乙醇回流3次，后浓缩置冰箱过夜，离心得到浸膏，然后用甲醇热溶，加活性炭回流，趁热过滤，滤液在电热套上蒸取甲醇，待析出沉淀，后加入冷甲醇，迅速抽滤后沉淀，用醇溶解，静置，过滤，在温度为45℃、压力为-0.05MPa条件下进行真空干燥，制得粗粉1；

1.2)称取重量份数的防风、蒺藜、乌梢蛇、血竭、自然铜、冰片以及胡桃，粉碎后过筛，使用75％的乙醇回流提取2h，过滤，滤渣再用75％的乙醇回流提取两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩至相对密度1.05-1.10的浸膏，浸膏烘干后制得粗粉2；

1.3)称取重量份数的白芷、紫草、红花、桂枝、乌梅以及芡实，用85％乙醇液提取2次，提取液上大孔树脂层析柱吸附，用6倍柱体积的25％的乙醇洗脱，洗液弃掉，继续用6倍柱体积的70％的乙醇洗脱，洗脱液收集，减压浓缩，冷却后用醇溶解，静置，过滤，再次减压浓缩，冷却后粉碎，即得粗粉3；

1.4)称取重量份数的自然铜，加pH4醋酸水煎煮两次，每次1h，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.00-1.15g/ml的稠膏，浸膏烘干后制得粗粉4；

1.5)将粗粉1、粗粉2、粗粉3以及粗粉4混合均匀，置研磨机研磨成粒径为1-100μm的细粉，即得中药组合物。

实施例4

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物的原料药为：

中药组合物的制法：按照实施例4所述的制法制备。

实施例5

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物的原料药为：

中药组合物的制法：按照实施例4所述的制法制备。

实施例6

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物的原料药为：

中药组合物的制法：按照实施例4所述的制法制备。

实施例7外用水剂

一种治疗白癜风的外用水剂，制备所述外用水剂的原料为：

组合物：选用实施例2的组合物732g；

辅料：二甲基亚砜52g、硅油脂肪醇35g、聚乙二醇35g。制法：

a)制备得所述组合物：按照实施例2制法制得中药组合物药液；

b)将组合物药液和二甲基亚砜、硅油脂肪醇和聚乙二醇混合均匀，密封，即得本发明治疗白癜风的外用水剂。

实施例8外用水剂

一种治疗白癜风的外用水剂，制备所述外用水剂的原料为：

组合物：选用实施例1的组合物480g；

辅料：二甲基亚砜100g、硅油脂肪醇70g、聚乙二醇70g。

制法：按照实施例7所述的方法制备。

实施例9外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例5的组合物325g；

辅料：聚乙二醇多嵌段共聚物75g、结冷胶60g、松香甘油酯30g、液体石蜡30g。

制法：

1)称取重量份数原料，采用乙醇进行提取、浓缩，烘干后研磨，制得中药组合物的细粉；

2)凝胶基质的制备

2.1)将重量份数的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶加入适量蒸馏水振荡、分散，随后浸泡至其充分溶胀；

2.3)将步骤2.1)的溶液混合，并加入松香甘油酯、液体石蜡，搅拌均匀，制成凝胶基质；

3)将步骤1)的中药组合物细粉和步骤2)的凝胶基质混合，置于超微粉碎机中粉碎，过微孔过滤膜，然后加水适量，搅拌均匀，灭菌，无菌灌装，即得所述治疗白癜风的外用凝胶剂。

实施例10外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例4的组合物160g；

辅料：聚乙二醇多嵌段共聚物150g、结冷胶120g、松香甘油酯75g、液体石蜡60g、十四烷基硫酸钠30g、杜香萜烯18g以及枸橼酸钠60g。制法：

1)称取重量份数原料，采用乙醇进行提取、浓缩，烘干后研磨，制得中药组合物的细粉；

2)凝胶基质的制备

2.1)将重量份数的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶加入适量蒸馏水振荡、分散，随后浸泡至其充分溶胀；

2.3)将步骤2.1)的溶液混合，并加入松香甘油酯、液体石蜡、十四烷基硫酸钠、杜香萜烯以及枸橼酸钠，搅拌均匀，制成凝胶基质；

3)将步骤1)的中药组合物细粉和步骤2)的凝胶基质混合，置于超微粉碎机中粉碎，过微孔过滤膜，然后加水适量，搅拌均匀，灭菌，无菌灌装，即得所述治疗白癜风的外用凝胶剂。

实施例11外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例5的组合物450g；

辅料：聚乙二醇多嵌段共聚物115g、结冷胶95g、松香甘油酯46g、液体石蜡45g、十四烷基硫酸钠30g、杜香萜烯18g、枸橼酸钠60g、小豆蔻提取物22g、苦参提取物60g以及蓖麻油30g。

制法：

1)制备得中药组合物；

2)凝胶基质的制备

2.1)将重量份数的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶加入适量蒸馏水振荡、分散，随后浸泡至其充分溶胀，其中浸泡温度为22℃；

2.2)将重量份数的枸橼酸钠、苦参提取物以及蓖麻油溶于适量蒸馏水中，使混合物溶解；

2.3)将步骤2.1)和步骤2.2)的溶液混合，并加入松香甘油酯、液体石蜡、十四烷基硫酸钠、杜香萜烯以及小豆蔻提取物，搅拌均匀，制成凝胶基质；

3)将步骤1)的中药组合物细粉和步骤2)的凝胶基质混合，置于超微粉碎机中粉碎，过微孔过滤膜，然后加水适量，搅拌均匀，灭菌，无菌灌装，即得所述治疗白癜风的外用凝胶剂。

实施例12外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例6的组合物400g；

辅料：聚乙二醇多嵌段共聚物110g、结冷胶90g、松香甘油酯50g、液体石蜡45g、十四烷基硫酸钠5g、杜香萜烯3g、枸橼酸钠15g、小豆蔻提取物5g、苦参提取物15g以及蓖麻油5g。

制法：按照实施例11所述的制法进行制备。

对照实施例1

一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，所述中药组合物由下列原料药经加工制备而成：

补骨脂45g 防风35g 蒺藜38g

白芷45g 白鲜皮25g 乌梢蛇25g

紫草10g 自然铜10g 红花10g。

中药组合物的制法：称取实施例所述重量的原料置于酒精中浸泡1-3d后，过滤，取药液，即得中药组合物。

对照实施例2外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例5的组合物325g；

辅料：松香甘油酯30g、液体石蜡30g。

制法：

制法：除未添加聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶外，其他步骤与实施例9相同。

对照实施例3外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例5的组合物325g；

辅料：聚乙二醇多嵌段共聚物75g、松香甘油酯30g、液体石蜡30g。制法：

制法：除未添加结冷胶外，其他步骤与实施例9相同。

对照实施例4外用凝胶剂

一种治疗白癜风的外用凝胶剂，制备所述外用凝胶剂的原料为：

组合物：选用实施例5的组合物450g；

辅料：聚乙二醇多嵌段共聚物115g、结冷胶95g、松香甘油酯46g、液体石蜡45g、十四烷基硫酸钠30g、杜香萜烯18g、枸橼酸钠60g、小豆蔻提取物22g。

制法：除未添加苦参提取物以及蓖麻油外，其他步骤与实施例11相同。

对照实施例5药酒

采用专利CN103230584 A所述的药酒，药酒由下列重量配比组成：

①乌梢蛇180g，防风、白蒺藜、肉桂、五加皮各60g，天麻、羌活、牛膝、桔壳各90g，熟地黄120g；

②生补骨脂300g，白蒺藜、菟丝子、沙苑子、决明子、骨碎补、白鲜皮各150g，肉桂90g，斑蝥20g；

③补骨脂、密陀僧各30g，前胡20g，防风10g，制白附子15g，制雄黄6g；

④党参、黄芪、白术、茯苓、紫草、白蒺藜、何首乌、苍术、麦冬、墨旱莲、丹参、桃仁、红花、补骨脂、生甘草、自然铜各等份；

⑤白芷、浮萍、威灵仙、苍术、刺蒺藜、丹参、旱莲草、紫草、沙苑蒺藜、何首乌、补骨脂各分用量相同；

以上①-⑤中药方剂动物药烘干、研碎与其他中药混合，再用常规二氧化碳萃取或用60％乙醇提取的方法提取，滤液经薄膜蒸发，回收乙醇，并浓缩成1∶1，即每毫升含源生药1g，相对密度为1.03-1.05的流浸膏备用；随后按照重量配比为4:14.5的流浸膏与55％优质白酒混合均匀，即得药酒。

试验例1实施例1&实施例3组合物的体外药效试验

筛选模型：正常人黑素细胞，HaCat细胞

细胞培养方法：取正常儿童环切包皮，选用加入CT，bFGF，TPA的DMEM培养基常规原代培养一周，HaCat常规DMEM培养，共培养体系以黑素细胞∶HaCat细胞＝1∶3接种于96孔板，传代培养24h后，加入不同浓度的药物和对照，48h后进行测定分析相关指标。阳性对照药为8-mop(日本东京化成)，浓度为5ug/ml。

细胞增殖的测定使用MTT法；酪氨酸酶活性的测定使用多巴氧化法；黑素含量用NaOH法；结果见表1。

表1实施例1&实施例3组合物对黑素细胞、共培养体系细胞的影响(n＝6)

【注】*为正常对照组P＜0.05；**为与正常对照组比较P＜0.01。

含高良姜素有效部位对黑素细胞迁移功能的影响：

取transwell，在上表面涂布50ul人纤维连接蛋白(FN)(10ug/ml，)，在干燥的孵箱中干燥2h，在24孔培养板中加入600ulDMEM培养基(10％牛血清FBS)，将预处理过的Transwell放入孔中，药物处理过的细胞胰酶消化后用DMEM(不含FBS)稀释为1×105/ml，取200ul加入Transwell小室的上室放入培养箱培养18h，取出Transwell，用棉签擦去上室细胞和FN，缓冲液(PBS)洗2遍，将小室放入醋酸∶甲醇＝1∶3的固定液中固定30min，晾干，放入吉姆萨中染色10min，PBS洗涤3遍，晾干后将小室放在载玻片上，置于显微镜下观察细胞，换不同视野拍照，每组8张，细胞计数。结果见表2。

表2实施例1&实施例3组合物对黑素细胞迁移能力的影响(n＝8)

【注】*为正常对照组P＜0.05；**为与正常对照组比较P＜0.01。

含高良姜素有效部位对黑素细胞粘附能力的影响：

96孔板，每孔20ulFN(5ug/ml)，室温晾干，将药物预处理过细胞制备成5×104/ml的细胞悬液，每孔100ul，每组6个重复孔培养1h，吸去上清，加入10％三氯乙酸50ul，4℃固定1h，蒸馏水冲洗5遍，晾干。2％结晶紫染色10min，蒸馏水冲洗晾干。每孔加入2％SDS100ul震荡5min，570nm测定OD值，结果见表3。

表3实施例1&实施例3组合物对黑素细胞粘附能力的影响(n＝6)

【注】*为正常对照组P＜0.05；**为与正常对照组比较P＜0.01。

结果分析：结果表明含实施例1和实施例3的组合物均可使黑素细胞增殖，酪氨酸酶活性提高，黑素含量增加，并以共培养体系更为明显，其中实施例3的效果更为明显；说明实施例1和实施例3组合物均可通过刺激角质形成细胞分泌相关细胞因子作用于黑素细胞使得黑素合成增多，其中实施例3的效果更为明显。

试验例2实施例1&实施例3组合物的体表药效试验

通过涂抹给药观察实施例1和实施例3组合物对黑色豚鼠皮肤基底层黑素细胞，酪氨酸酶活性表达的影响。

1.动物模型的建立：

黑色豚鼠背部每天涂抹5％氢醌，每次0.5ml，每天2次，涂抹30天；常规制作石蜡切片观察发现，黑色豚鼠皮肤基底层黑色素细胞，基底层含黑素颗粒细胞，酪氨酸酶表达减弱。模型成功。

2.组合物对黑色豚鼠皮肤增色作用

黑色豚鼠84只，随机分为6组；脱去背部黑色毛5cm×5cm，其中第1组涂抹生理盐水，其余6组采用等量5％氢醌脱色，连续涂抹30天。

I组(正常对照组)动物脱毛区涂抹生理盐水0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。而后每天涂抹生理盐水2ml，连续30天。

II组(模型组)动物脱毛区涂抹5％氢醌0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。

III组(阳性对照组)动物脱毛区涂抹氢醌5％0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。而后隔天涂抹复方卡力孜然酊适量，一日3-4次，搽药30分钟后，局部日光浴或紫外线照射15～30分钟。

IV组(实施例1组)动物脱毛区涂抹氢醌5％0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。而后隔天实施例1组合物适量，一日3-4次，搽药30分钟后，局部日光浴或紫外线照射15～30分钟。

V组(实施例3组)动物脱毛区涂抹氢醌5％0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。而后隔天实施例3组合物适量，一日3-4次，搽药30分钟后，局部日光浴或紫外线照射15～30分钟。

VI组(对照实施例1组)动物脱毛区涂抹氢醌5％0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。而后隔天对照实施例1组合物适量，一日3-4次，搽药30分钟后，局部日光浴或紫外线照射15～30分钟。

VII组(对照实施例5组)动物脱毛区涂抹氢醌5％0.5ml，每天2次，连续涂抹30天。而后隔天对照实施例5组合物适量，一日3-4次，搽药30分钟后，局部日光浴或紫外线照射15～30分钟。

结果处理：给药结束后，处死动物，取皮肤组织，常规石蜡包埋，切片后分别进行Dopa-氧化酶染色、Lillie染色、DAB-H2O2染色以及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(S-P)常规染色，光镜下(400×)观察。

3.表皮黑素细胞的观察：

皮肤切片Dopa-氧化酶染色后置于光镜下观察，每个标本观察10个视野，计算每100个表皮基底细胞中MC的平均数量。SPSS 12.0软件统计分析。结果见表4。

表4实施例1&实施例3组合物对豚鼠表皮黑素细胞数的影响(n＝10)

【注】*为与模型组比较P＜0.05；**为与模型组比较P＜0.01。

4.含黑素颗粒的基底细胞计数：

皮肤切片Lillie染色后置于光镜下观察，每个标本观察10个视野，计算每100个表皮基底细胞中含黑素颗粒的基底细胞的平均数量。SPSS12.0软件统计分析。结果见表5。

表5实施例1&实施例3组合物对豚鼠表皮含黑素颗粒基底细胞数的影响(n＝10)

【注】*为与模型组比较P＜0.05；**为与模型组比较P＜0.01。

5.酪氨酸酶含量观察：

采用二级计分法对酪氨酸酶阳性表达情况进行判定，酪氨酸酶阳性产物定位于细胞的细胞质内，为黄色或棕黄色颗粒。阳性细胞计数＜5％为0分；5％-25％为1分；25％-50％为2分；50％-75％为3分；＞75％为4分。按染色强度分类：淡黄色1分；黄或深黄2分；褐或棕黄色3分。两者相加小于2分为阴性(-)，2-3分为阳性(+)，4-5分为中等阳性(2+)，6-7分为强阳性(3+)。各组动物皮肤之间的阳性率比较均采用Wilcoxon秩和检验，P≤0.05为差异有显著性差异。结果见表6。

表6实施例1&实施例3组合物对豚鼠表皮酪氨酸酶强度的影响

【注】*为与模型组比较P＜0.05；**为与模型组比较P＜0.01。

试验例3实施例11治疗白癜风临床疗效观察

1.白癜风患者70例，男30例，女40例，年龄8-75岁；病程1-12月35例，1-5年22例，6-30年13例；临床分型：泛发型10例，散发性12例，局限型33例，节段性15例；临床分期：进展期41例，稳定期29例。随机分为两组，经统计学处理，两组无显著性差异(P＞0.05)。治疗组38例，给予涂抹实施例11所述外用凝胶剂；对照组32例，涂抹阳性对照药复方卡力孜然酊；两组别均给药一日3-4次，搽药30分钟后，局部日光浴或紫外线照射15～30分钟。

2.疗效判定标准

痊愈：白斑全部消退，恢复正常肤色；

显效：白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积占皮损面积≥50％；

有效：白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积占皮损面积10％-50％；

无效：白斑无变化或缩小，恢复正常肤色的面积占皮损面积＜10％.

数据处理及统计方法，使用Epi Info version 6.04b软件Epitable过程作数据处理及分析。

3.结果见表7。

表7两组白癜风患者临床疗效观察

结果：相较于模型组的治疗效果，本发明实施例11的外用凝胶剂治疗白癜风的效果更佳。

试验例4本发明外用凝胶剂的稳定性试验

1.加速试验

取本发明实施例9、实施例11所述的凝胶剂，分别分成3批，分别编号为样品1、样品2和样品3，样品4、样品5和样品6，取对照实施例2、对照实施例3和对照实施例4的凝胶剂作为对照品，将样品和对照品均在30℃±5℃下，相对湿度为65％±5％的条件下放置6个月，在试验期间1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，按中国药典中的规定，检测凝胶剂的性状，试验结果见表8；

表8实施例的三批样品和对照品的加速试验结果

以上结果表明：对照实施例2的凝胶剂与对照实施例3相比较可知，添加聚乙二醇多嵌段共聚物利于凝胶剂的成型。实施例9的凝胶剂放置6个月后，凝胶剂的形状表现为均匀、凝胶状，与对照实施例3的凝胶剂对比较为稳定，表明同时添加聚乙二醇多嵌段共聚物与结冷胶，可提高凝胶剂的稳定性。实施例11的凝胶剂经6个月加速试验后检测，其性状与0月比较均基本上无明显的变化；与对照实施例4的凝胶剂对比，表现为无菌、均匀、凝胶状，表明添加的苦参提取物以及蓖麻油具有很好的抑菌作用。

2.长期试验

取本发明实施例9、实施例11所述的凝胶剂，分别分成3批，分别编号为样品1、样品2和样品3，样品4、样品5和样品6，取对照实施例2和对照实施例3的凝胶剂作为对照品，将样品和对照品均在30℃±5℃下，相对湿度为65％±5％的条件下放置24个月，在试验期间0个月、3个月、6个月、12个月、18个月、24个月末取样，按中国药典中的规定，检测凝胶剂的性状。

实验结果表明，对照实施例2的凝胶剂与对照实施例3相比较可知，添加聚乙二醇多嵌段共聚物利于凝胶剂的成型。实施例9的凝胶剂放置6个月后，凝胶剂的形状表现为均匀、凝胶状，与对照实施例2的凝胶剂对比较为稳定；即同时添加聚乙二醇多嵌段共聚物与结冷胶，可提高凝胶剂的稳定性。实施例11的凝胶剂经6个月加速试验后检测，其性状与0月比较均基本上无明显的变化；与对照实施例3的凝胶剂对比，表现为无菌、均匀、凝胶状，表明添加的苦参提取物以及蓖麻油具有很好的抑菌作用。

3.结论

本实施例11的凝胶剂经6个月加速试验、24个月长期稳定性实验考察，其性状项目指标与0月比较均基本无明显变化，符合其治疗标准，产品质量稳定。

Claims (10)

1.一种治疗白癜风的外用制剂，由中药组合物和辅料制备而成，其特征在于，所述中药组合物主要由下列重量份的原料药经加工制备而成：

2.如权利要求1所述治疗白癜风的外用制剂，其特征在于，制备所述中药组合物还包括下列重量份的原料药：

桂枝10-35 芍药10-25 乌梅10-25

透骨草10-38 芡实10-25 胡桃10-25。

3.如权利要求2所述治疗白癜风的外用制剂，其特征在于，所述中药组合物由下列重量份的原料药经加工制备而成：

4.如权利要求1-3中任一项所述治疗白癜风的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂为外用水剂，所述中药组合物和辅料的重量分数比为2-6:1；所述辅料由如下重量份数的成分组成：52-100份的二甲基亚砜、35-70份的硅油脂肪醇以及35-70份的聚乙二醇。

5.如权利要求1-3中任一项所述治疗白癜风的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂为外用凝胶剂，所述中药组合物和辅料的重量分数比为1-5:3；所述辅料主要由如下重量份数的成分组成：75-150份的聚乙二醇多嵌段共聚物、60-120份的结冷胶、30-75份的松香甘油酯以及30-60份的液体石蜡。

6.如权利要求5所述治疗白癜风的外用制剂，其特征在于，所述辅料还包括如下重量份数的成分：5-30份的十四烷基硫酸钠、3-18份的杜香萜烯以及15-60份的枸橼酸钠。

7.如权利要求6所述治疗白癜风的外用制剂，其特征在于，所述辅料还包括如下重量份数的成分：5-22份的小豆蔻提取物、15-60份的苦参提取物以及5-30份的蓖麻油。

8.一种如权利要求7所述的外用制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1)称取重量份数原料，采用乙醇和醋酸水进行提取、浓缩，烘干后研磨，制得中药组合物的细粉；

2)凝胶基质的制备

2.1)将重量份数的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶加入适量蒸馏水振荡、分散，随后浸泡至其充分溶胀；

2.2)将重量份数的枸橼酸钠、苦参提取物以及蓖麻油溶于适量蒸馏水中，使混合物溶解；

2.3)将步骤2.1)和步骤2.2)的溶液混合，并加入松香甘油酯、液体石蜡、十四烷基硫酸钠、杜香萜烯以及小豆蔻提取物，搅拌均匀，制成凝胶基质；

3)将步骤1)的中药组合物细粉和步骤2)的凝胶基质混合，置于超微粉碎机中粉碎，过微孔过滤膜，然后加水适量，搅拌均匀，灭菌，无菌灌装，即得所述治疗白癜风的外用凝胶剂。

9.如权利要求8所述的外用制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)包括以下步骤：

1.1)称取重量份数的补骨脂、白鲜皮、芍药、透骨草，粉碎后搅拌均匀，以每克生药加入12U纤维素酶，充分搅拌，用50％的乙醇回流3次，后浓缩置冰箱过夜，离心得到浸膏，然后用甲醇热溶，加活性炭回流，趁热过滤，滤液在电热套上蒸取甲醇，待析出沉淀，后加入冷甲醇，迅速抽滤后沉淀，用醇溶解，静置，过滤，在温度为45℃、压力为-0.05MPa条件下进行真空干燥，制得粗粉1；

1.2)称取重量份数的防风、蒺藜、乌梢蛇、血竭、自然铜、冰片以及胡桃，粉碎后过筛，使用75％的乙醇回流提取2h，过滤，滤渣再用75％的乙醇回流提取两次，合并提取液，离心后将上清液减压浓缩至相对密度1.05-1.10的浸膏，浸膏烘干后制得粗粉2；

1.3)称取重量份数的白芷、紫草、红花、桂枝、乌梅以及芡实，用85％乙醇液提取2次，提取液上大孔树脂层析柱吸附，用6倍柱体积的25％的乙醇洗脱，洗液弃掉，继续用6倍柱体积的70％的乙醇洗脱，洗脱液收集，减压浓缩，冷却后用醇溶解，静置，过滤，再次减压浓缩，冷却后粉碎，即得粗粉3；

1.4)称取重量份数的自然铜，加pH4醋酸水煎煮两次，每次1h，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.00-1.15g/ml的稠膏，浸膏烘干后制得粗粉4；

1.5)将粗粉1、粗粉2、粗粉3以及粗粉4混合均匀，置研磨机研磨成粒径为1-100μm的细粉，即得中药组合物。

10.一种如权利要求6所述的外用制剂的制备方法，所述步骤2.1)的聚乙二醇多嵌段共聚物和结冷胶的浸泡温度为22℃。