CN106417019A - 一种刺葡萄种苗的繁殖方法及培养基 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物栽培技术领域，具体而言，涉及一种刺葡萄种苗的繁殖方法及培养基。所述培养基的主要成分为干燥的幼嫩葡萄枝叶、绿茶及三七的提取液；按重量份计，所述提取液由干燥的幼嫩葡萄枝叶8～12份、绿茶15～25份以及三七0.05～0.15份经混合、粉碎、过筛、热水浸提后制得。将刺葡萄外植体接种于所述的刺葡萄种苗培养基中培养至苗高5cm～10cm后经炼苗即得种苗。此方法简单易行，且成苗率非常之高。

Description

一种刺葡萄种苗的繁殖方法及培养基

技术领域

本发明涉及植物栽培技术领域，具体而言，涉及一种刺葡萄种苗的繁殖方法及培养基。

背景技术

刺葡萄(Vitis davidii Foex)是葡萄科葡萄属东亚种群的一种野生种质资源，原产于我国的湖南、云南、广东、江西、浙江等省，是多年生落叶藤本植物。

刺葡萄的果实不仅味美可口，而且营养价值很高。成熟的浆果中含有15％～25％葡萄糖、维生素、蛋白质、矿物质钾、磷、铁等，此外它还含有多种具有生理功能的物质。经科学证明，刺葡萄能比阿斯匹林更好地阻止血栓形成，并且能降低人体血清胆固醇水平，降低血小板的凝聚力，对预防心脑血管病有一定作用，刺葡萄中含有一种抗癌微量元素(白藜芦醇)，可以防止健康细胞癌变，阻止癌细胞扩散，刺葡萄汁可以帮助器官植手术患者减少排异反应，促进早日康复。除此之外，其对黑痘病、白腐病、炭疽病等具有很强的抗性，因此，刺葡萄已成为耐湿热、抗病育种的宝贵资源。

刺葡萄作为野生葡萄品种，因其耐高温、高湿、低光照和高抗病性，在南方已有多年的品种选育和栽培历史，成为南方葡萄栽培的优良品种。目前，刺葡萄的繁育大都采用传统的扦插方法，其种苗的成苗率较低，大都在10％左右；而且，由于种苗的根系欠发达，移栽后生长缓慢但刺葡萄枝条扦插生根率极差，育苗技术滞后，使该行业的发展受到限制。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种刺葡萄种苗培养基，该培养基非常适合刺葡萄外植体的培养，可大幅提高刺葡萄繁殖的成苗率。

本发明的第二目的在于提供一种能够繁殖出根系发达、移栽后生长较快、且种苗成苗率高，适合刺葡萄繁殖的方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种刺葡萄种苗培养基，所述培养基的主要成分为干燥的幼嫩葡萄枝叶、绿茶及三七的提取液；

可选的，按重量份计，所述提取液由干燥的幼嫩葡萄枝叶8～12份、绿茶15～25份以及三七0.05～0.15份经混合、粉碎、过筛、热水浸提后制得。

三种成分可为刺葡萄种苗提供充足的有机质。干燥的幼嫩葡萄枝叶中理论上含有刺葡萄生长的全部养分，可以起到“落叶归根”的施肥效果。而绿茶具有抗氧化功能，在外植体的培养过程中，酚类化合物易发生氧化而造成褐变，影响外植体的成苗率；而绿茶可以降低多酚氧化酶的活性，从而减轻褐变。三七为我国常用的一味中草药，含人参皂甙Rb1、黄酮甙、槲皮素、β-谷甾醇等活性成分。三七中的有效成分可以刺激外植体细胞的生长与分化，从而更好的促进种苗成活。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗培养基，所述培养基含有40g/L～60g/L的魔芋精粉。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗培养基，所述提取液的制备方法为：

按重量份计，将干燥的幼嫩葡萄枝叶8～12份、绿茶15～25份以及三七0.05～0.15份混合、粉碎、过筛得到混合料，将所述混合料热水浸提后过滤即得。

一种刺葡萄种苗的繁殖方法，包括如下步骤：

将刺葡萄外植体接种于如上所述的刺葡萄种苗培养基中培养至苗高5cm～10cm后经炼苗即得种苗。

本方法利用刺葡萄种苗培养基，采用腋芽离体育苗，繁殖系数高，繁殖速度快，变异性小。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，所述外植体取自6～7月龄刺葡萄的饱满腋芽；所述腋芽保留有一段原枝条的韧皮部，所述韧皮部的长×宽×厚为(8mm～12mm)×(2mm～4mm)×(0.3mm～0.7mm)。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，将刺葡萄外殖体接种于如上所述的刺葡萄种苗培养基中时，每株刺葡萄外殖体占地面积为≥0.8cm²。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，所述培养的条件为：

于3℃～8℃、空气相对湿度60％～70％、黑暗条件下培养25～35天；

随后于18℃～24℃、空气相对湿度60％～70％、光照强度500lx～1500lx、光照时间14～18小时的条件下培养30～60天。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，炼苗期每株苗占地面积为≥40cm²。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，所述炼苗为漂浮炼苗。

可选的，如上所述的刺葡萄的繁殖方法，所述漂浮炼苗所用的培养基质为腐叶土、葡萄叶、珍珠岩经粉碎过10～30目筛得到的混合物；

可选的，按质量份计，所述培养基质包括腐叶土0.7～1.3份、葡萄叶0.4～0.6份、珍珠岩0.2～0.4份。

可选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，炼苗期的培养条件为：

基质含水量为60％～70％，光照强度在800lx～1200lx，日平均温度16℃～20℃，每日光照时间8h～12h，炼苗时间25～35天。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明采用腋芽离体育苗，配合刺葡萄种苗培养基，可以培养得到根系发达、整齐度高、抗逆性强、栽后成活率高、返苗快、不带病菌的刺葡萄壮苗；

本方法繁殖系数高，繁殖速度快，变异性小，是一种值得推广的、适合规模化应用的刺葡萄繁殖方法。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本发明提供的刺葡萄种苗培养基，所述培养基的主要成分为干燥的幼嫩葡萄枝叶、绿茶及三七的提取液；

优选的，按重量份计，所述提取液由干燥的幼嫩葡萄枝叶8～12份、绿茶15～25份以及三七0.05～0.15份经混合、粉碎、过筛、热水浸提后制得。

进一步优选的，所述热水浸提具体为：加入所述混合料质量25～35倍的水，85℃～95℃提取2小时。

三种成分可为刺葡萄种苗提供充足的有机质。干燥的幼嫩葡萄枝叶中理论上含有刺葡萄生长的全部养分，可以起到“落叶归根”的施肥效果。而绿茶具有抗氧化功能，在外植体的培养过程中，酚类化合物易发生氧化而造成褐变，影响外植体的成活率；而绿茶可以降低多酚氧化酶的活性，从而减轻褐变。三七为我国常用的一味中草药，含人参皂甙Rb1、黄酮甙、槲皮素、β-谷甾醇等活性成分。三七中的有效成分可以刺激外植体细胞的生长与分化，从而更好的促进种苗成活。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗培养基，所述培养基含有40g/L～60g/L的魔芋精粉。

魔芋精粉是魔芋经加工后制成的精粉，主要含葡甘聚糖，其特点是具有很强的吸水性，吸水膨胀80～100倍。膨胀后的葡甘聚糖，在加热的碱液中则转化为不可逆的凝胶。利用这一特性，代替琼脂制备培养基，可降低生产成本。

一种刺葡萄种苗的繁殖方法，包括如下步骤：

将刺葡萄外植体接种于如上所述的刺葡萄种苗培养基中培养至苗高5cm～10cm后经炼苗即得种苗。

本方法利用刺葡萄种苗培养基，采用腋芽离体育苗，繁殖系数高，繁殖速度快，变异性小。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，所述外植体取自6～7月龄刺葡萄的饱满腋芽；所述腋芽保留有一段原枝条的韧皮部，所述韧皮部的长×宽×厚为(8mm～12mm)×(2mm～4mm)×(0.3mm～0.7mm)。

优选的，所述外植体的取材时间在每年的6～7月进行。

刺葡萄是合轴分枝，它的卷须属于茎卷须，由顶芽形成，顶芽形成卷须后纵向生长由腋芽代替，所以其腋芽较多，用其繁殖比较方便快速。

韧皮部是维管植物的运输组织，腋芽带着生枝条的韧皮部可保证外植体的营养吸收顺畅。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，将刺葡萄外殖体接种于如上所述的刺葡萄种苗培养基中时，每株刺葡萄外殖体占地面积为≥0.8cm²；更优选的，每株刺葡萄外殖体占地面积为≥1cm²；更优选的，每株刺葡萄外殖体占地面积为1cm²。

保留合理的间距可保证每一株外植体都能接受都足够的光照和营养，且若种的过于密集也有可能导致湿度不易调节或局部温度过高。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，所述培养的条件为：

于3℃～8℃、空气相对湿度60％～70％、黑暗条件下培养25～35天；

随后于18℃～24℃、空气相对湿度60％～70％、光照强度500lx～1500lx、光照时间14～18小时的条件下培养30～60天。

先进行暗培养，在暗环境下可以促进培养基中光敏性生长素的积累，有利于刺葡萄生根；而长日照则能促进刺葡萄的其他器官的分化。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，炼苗期每株苗占地面积为≥40cm²；更优选的，炼苗期每株苗占地面积为≥50cm²；更优选的，炼苗期每株苗占地面积为50cm²。

由于外植体的培养一直处在水分充足，营养丰富的环境当中，这种优越的环境和大田相比差异巨大。因此当幼苗生长达到一定的标准时，必须采取炼苗措施来调整幼苗的生长机理，增强幼苗的抗逆能力，使其能够适应大田生长的环境要求。炼苗是在保护幼苗的情况下，采取放风、降温、适当控水等措施对幼苗强行锻炼的过程，使其定植后能够迅速适应陆地的不良环境条件，缩短缓苗时间，增强对低温、大风等的抵抗能力。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，所述炼苗为漂浮炼苗。

漂浮炼苗具有集约化程度高、省时省工、技术操作简单等优点。

优选的，如上海所述的刺葡萄的繁殖方法，所述漂浮炼苗所用的培养基质为腐叶土、葡萄叶、珍珠岩经粉碎过10～30目筛得到的混合物；

腐叶土又称腐殖土，是植物枝叶在土壤中经过微生物分解发酵后形成的营养土。腐叶土和葡萄叶可以为刺葡萄种苗提供生长所需的有机质和养分，而珍珠岩的透气性较好，既能作为填料，又能为种苗补充一些矿质元素。

进一步优选的，按质量份计，所述培养基质包括腐叶土0.7～1.3份、葡萄叶0.4～0.6份、珍珠岩0.2～0.4份。

优选的，如上所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，炼苗期的培养条件为：

基质含水量为60％～70％，光照强度在800lx～1200lx，日平均温度16℃～20℃，每日光照时间8h～12h，炼苗时间25～35天。

优选的，所述炼苗的方法为剪叶炼苗、剪根炼苗、控水炼苗、揭膜炼苗中的一种或多种的组合。

实施例1

本实施例提供了一种刺葡萄种苗的繁殖方法及该方法所用的培养基。

1、培养基制备：将干燥的幼嫩葡萄枝叶：绿茶：三七按质量比为8：25：0.05的比例混合、粉碎、过20目筛，用30倍的水，在90℃提取2小时，过滤，在滤液中加入40g/L的魔芋精粉，混匀，装入长×宽×高为20×20×15的透光聚四氟培养盒，培养基高度2cm，于121℃灭菌30分钟，置于立体培养架冷却备用。

2、外殖体准备：6月取材。取饱满腋芽，腋芽带着生枝条的韧皮部，韧皮部长×宽×厚为8mm×4mm×0.7mm，70％酒精水溶液消毒15秒，无菌水清洗3次备用。

3、接种：于无菌环境下，将2中所述外殖体接种1中所述培养基表面，株×行距为0.8cm×0.8cm。

4、培养条件：于温度3℃～8℃、空气相对湿度60％、黑暗条件下培养35天；随后于温度18℃、空气相对湿度70％、光照强度500lx、光照时间14小时的条件下培养60天，培养至苗高5～10cm。

5、炼苗：采用聚苯乙烯泡沫穴盘基质漂浮炼苗，基质为腐叶土、葡萄叶、珍珠岩经粉碎过10目筛的比例混合物，其质量比为0.7：0.4：0.2，穴盘孔数为250穴/m²，每穴栽种1苗，基质含水量为60％，光照强度在800lx，日平均温度20℃，每日光照时间12h，炼苗时间35天。

实施例2

本实施例提供了一种刺葡萄种苗的繁殖方法及该方法所用的培养基。

1、培养基制备：将干燥的幼嫩葡萄枝叶：绿茶：三七按质量比为12：15：0.15的比例混合、粉碎、过40目筛，用30倍的水，在90℃提取2小时，过滤，在滤液中加入60g/L的魔芋精粉，混匀，装入长×宽×高为20×20×15的透光聚四氟培养盒，培养基高度2cm，于121℃灭菌30分钟，置于立体培养架冷却备用。

2、外殖体准备：7月取材。取饱满腋芽，腋芽带着生枝条的韧皮部，韧皮部长×宽×厚为12mm×2mm×0.3mm，70％酒精水溶液消毒20秒，无菌水清洗3次备用。

3、接种：于无菌环境下，将2中所述外殖体接种1中所述培养基表面，株×行距为1.2cm×1.2cm。

4、培养条件：于温度3℃～8℃、空气相对湿度70％、黑暗条件下培养25天；随后于温度24℃、空气相对湿度60％、光照强度1500lx、光照时间18小时的条件下培养30天，培养至苗高5～10cm。

5、炼苗：采用聚苯乙烯泡沫穴盘基质漂浮炼苗，基质为腐叶土、葡萄叶、珍珠岩经粉碎过30目筛的比例混合物，其质量比为1.3：0.6：0.4，穴盘孔数为150穴/m²，每穴栽种1苗，基质含水量为70％，光照强度在1200lx，日平均温度16℃，每日光照时间8h，炼苗时间25天。

实施例3

本实施例提供了一种刺葡萄种苗的繁殖方法及该方法所用的培养基。

1、培养基制备：将干燥的幼嫩葡萄枝叶：绿茶：三七按质量比为10：20：0.1的比例混合、粉碎、过30目筛，用30倍的水，在90℃提取2小时，过滤，在滤液中加入50g/L的魔芋精粉，混匀，装入长×宽×高为20×20×15的透光聚四氟培养盒，培养基高度2cm，于121℃灭菌30分钟，置于立体培养架冷却备用。

2、外殖体准备：7月取材。取饱满腋芽，腋芽带着生枝条的韧皮部，韧皮部长×宽×厚为10mm×3mm×0.5mm，70％酒精水溶液消毒15秒，无菌水清洗3次备用。

3、接种：于无菌环境下，将2中所述外殖体接种1中所述培养基表面，株×行距为1cm×1cm。

4、培养条件：于温度3℃～8℃、空气相对湿度65％、黑暗条件下培养30天；随后于温度21℃、空气相对湿度65％、光照强度1000lx、光照时间16小时的条件下培养45天，培养至苗高5～10cm。

5、炼苗：采用聚苯乙烯泡沫穴盘基质漂浮炼苗，基质为腐叶土、葡萄叶、珍珠岩经粉碎过10～30目筛的比例混合物，其质量比为1：0.5：0.3，穴盘孔数为200穴/m²，每穴栽种1苗，基质含水量为65％，光照强度在1000lx，日平均温度18℃，每日光照时间10h，炼苗时间30天。

实验例

将公布号为CN103053377A，公布日为2013.04.24日，专利名为“一种刺葡萄的繁殖方法”的申请文件作为对比例，与本申请的实施例进行比较，结果如表1所示。

表1各项目效果比较

从上表可知，使用本发明提供的刺葡萄繁殖方法，不仅成苗率大幅度提高，且产量也有了非常大的提升。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种刺葡萄种苗培养基，其特征在于，所述培养基的主要成分为干燥的幼嫩葡萄枝叶、绿茶及三七的提取液；

优选的，按重量份计，所述提取液由干燥的幼嫩葡萄枝叶8～12份、绿茶15～25份以及三七0.05～0.15份经混合、粉碎、过筛、热水浸提后制得。

2.根据权利要求1所述的刺葡萄种苗培养基，其特征在于，所述培养基含有40g/L～60g/L的魔芋精粉。

3.一种刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

将刺葡萄外植体接种于权利要求1或2所述的刺葡萄种苗培养基中培养至苗高5cm～10cm后经炼苗即得种苗。

4.根据权利要求3所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，所述外植体取自6～7月龄刺葡萄的饱满腋芽；所述腋芽保留有一段原枝条的韧皮部，所述韧皮部的长×宽×厚为(8mm～12mm)×(2mm～4mm)×(0.3mm～0.7mm)。

5.根据权利要求3所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，将刺葡萄外殖体接种于权利要求1或2所述的刺葡萄种苗培养基中时，每株刺葡萄外殖体占地面积为≥0.8cm²。

6.根据权利要求3所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，所述培养的条件为：

于3℃～8℃、空气相对湿度60％～70％、黑暗条件下培养25～35天；

随后于18℃～24℃、空气相对湿度60％～70％、光照强度500lx～1500lx、光照时间14～18小时的条件下培养30～60天。

7.根据权利要求3所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，炼苗期每株苗占地面积为≥40cm²。

8.根据权利要求3所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，所述炼苗为漂浮炼苗。

9.根据权利要求8所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，所述漂浮炼苗所用的培养基质为腐叶土、葡萄叶、珍珠岩经粉碎过10～30目筛得到的混合物；

优选的，按质量份计，所述培养基质包括腐叶土0.7～1.3份、葡萄叶0.4～0.6份、珍珠岩0.2～0.4份。

10.根据权利要求9所述的刺葡萄种苗的繁殖方法，其特征在于，炼苗期的培养条件为：

基质含水量为60％～70％，光照强度在800lx～1200lx，日平均温度16℃～20℃，每日光照时间8h～12h，炼苗时间25～35天。