CN106377772A - 一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂 - Google Patents

一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂 Download PDF

Info

Publication number
CN106377772A
CN106377772A CN201610879403.7A CN201610879403A CN106377772A CN 106377772 A CN106377772 A CN 106377772A CN 201610879403 A CN201610879403 A CN 201610879403A CN 106377772 A CN106377772 A CN 106377772A
Authority
CN
China
Prior art keywords
immunoadsorbent
circulating tumor
blood
carrier
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610879403.7A
Other languages
English (en)
Inventor
温珍珍
李文忠
欧来良
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Pullard Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Tianjin Pullard Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Pullard Biotechnology Co Ltd filed Critical Tianjin Pullard Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610879403.7A priority Critical patent/CN106377772A/zh
Publication of CN106377772A publication Critical patent/CN106377772A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Abstract

一种用于清除血液中循环肿瘤细胞的免疫吸附剂，所述的免疫吸附剂，以天然高分子为载体，以生物交联剂或化学交联剂为手臂，以循环肿瘤细胞特异性抗原的单克隆或多克隆抗体为配基，通过生物或化学的合成方法将载体‑手臂‑配基结合，制备得到具有特异性清除血液中肿瘤细胞的免疫吸附剂。本发明通过将肿瘤特异性抗原的单克隆或多克隆抗体偶联到吸附剂载体上，透过血液灌流的方式，特异性清除血液中的肿瘤细胞，达到治疗或预防癌症转移目的。

Description

一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种基于体外循环，用于清除血液中循环肿瘤细胞的免疫吸附剂。
技术背景
转移是癌症的主要病理特征之一，是癌症致死的重要原因，肿瘤转移90％以上是通过血液转移而发生，因此，必须阻断或延缓肿瘤细胞经血液转移的途径。当前，癌症已成为继心脑血管疾病之后的人类第二死因，2000年，世界共有癌症新发病例1040万，死亡病例650万；预计到2030年，这些数字将大幅上升，新发病例将达到2640万，死亡病例达到1640万。目前，我国每年约有300万癌症新发病例，死亡病例200万。调查表明：“肿瘤病人死亡，90％是肿瘤的复发转移导致，还有一部分是因为病人的其他并发症，肿瘤并发症往往也都和肿瘤转移有关，因此肿瘤转移始终是肿瘤防治的重大课题及研究难点。”
手术、放疗、化疗是当前肿瘤治疗的主要手段，手术可切除已形成肿块的癌细胞，放疗、化疗可以杀死全部或部分成年癌细胞，而对未成熟癌细胞作用较小。放、化疗的副作用使病人的免疫功能更为低下，反而诱导幼年癌细胞从休眠状态被激活，迅速裂变、突变、形成新的成年癌细胞，这就是癌转移复发的根本原因。化疗药物的靶向性不足，致使化疗药物不仅杀伤肿瘤细胞，也杀伤正常细胞，从而降低了患者机体的免疫功能，甚至直接摧毁患者的免疫系统，影响化疗的治疗效果。临床经验表明，在肿瘤患者的免疫力未恢复之前，单纯通过直接杀死癌细胞的治疗方法不仅是徒劳的，而且是有害的，其结果是加速了患者的死亡！世界卫生组织统计，对比1990年与2000年十年间的肿瘤患者死亡率，不仅没有下降，反而上升了17％的实际数据，得出了为什么医学科技水平越来越先进，肿瘤治疗技术和药物也越来越多，而肿瘤患者的死亡率却不降反升的结论：因为我们还没有真正认识肿瘤，还没有找到根治肿瘤的利器！
生物技术的进步，使生物疗法(Biotherapy,BT)成为继手术、化疗、放疗之后的第四种肿瘤疗法，该疗法于80年代开始应用于临床治疗，其通过提高患者自体免疫力来治疗肿瘤，抑制其生长或是减轻其它疗法所带来的副作用。单克隆抗体的出现，将生物疗法提升到更高的高度，单抗药物在非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌以及结直肠癌的治疗中已经发挥了重要的作用。但是单抗疗法也具有自身的缺陷，非人源型抗体的免疫原性、肿瘤抗原的异质性、昂贵的费用等都是急需要解决的重要问题。
血液净化疗法在临床疑难重症如肝衰竭、自身免疫性疾病、极性中毒等的治疗中发挥着越来越重要的作用，也有望成为癌症治疗中的第五种疗法。体外循环净化系统用于循环肿瘤细胞清除专利较少，主要基于肿瘤细胞大小(201410137735.9)来实现肿瘤细胞的分离，但这种基于大小分离肿瘤细胞的方式，效率较低，临床应用也存在诸多困难。也有人采用纳米磁珠偶联抗体来分离循环肿瘤细胞(CN102258818A)，但纳米磁珠的分离及纳米材料的潜在毒性，是临床应用所面临的重要问题。
针对以上疗法所面临的不足，有必要开发出一种简单、适宜于临床应用的循环肿瘤细胞清除装置，用以辅助治疗癌症。
发明内容
本发明目的是克服现有技术存在的上述不足，提供一种可用于清除血液中循环肿瘤细胞的超大孔免疫吸附剂。
本发明技术方案
本发明提供的用于体外全血灌流以清除血液中循环肿瘤细胞的免疫吸附剂，以天然高分子或合成高分子为载体，以生物交联剂或化学交联剂为手臂，以肿瘤细胞表面特异性抗原的单克隆或多克隆抗体为配基，通过生物或化学的合成方法将载体-手臂-配基结合，制备得到具有特异性清除血液中循环肿瘤细胞的免疫吸附剂。
所述的天然高分子载体是丝素蛋白、壳聚糖或丝素蛋白与壳聚糖的复合物的超大孔微球。因为他们具有较好的生物相容性，容易制成超大孔球状载体，其含有大量供反应的活性位点(羟基或胺基等)。
所述的吸附剂载体为球形，粒径在100-1000um，以400-800um范围最佳。平均孔径在10-50um之间，以15-30范围最佳。
所述的生物交联剂是具有异型双功能基的交联剂，具体是DPS(3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)、DCC(二环己基碳化二亚胺)或PMPI(N-[p-Maleimidophenyl]isocyanate)等；化学交联剂是戊二醛或乙二胺。
所述的单克隆或多克隆抗体，是来源于目前所知的所有肿瘤表面抗原的抗体，特别是来源于循环肿瘤细胞所表达的特异性抗原的抗体，包括但不限于Ep-CAM、EGFR、Vimentin、MUC16、PSA等。
所述的免疫吸附剂载体上，单克隆或多克隆抗体配基的含量10-50ug/g(湿球)。
所述的生物或化学的合成方法，是指目前通过文献可知的所有合成方法和反应条件。
本发明提供的免疫吸附剂可用于全血灌流清除血液中的循环肿瘤细胞。
该吸附剂不仅可以用于清除循环血液中的循环肿瘤细胞，也可以用于术后预防癌症的转移。
本发明的优点和有益效果：
本发明通过将肿瘤表面特异性抗原的单克隆或多克隆抗体偶联到吸附剂载体上，通过血液灌流的方式，特异性清除血液中的循环肿瘤细胞，可降低肿瘤经血液途径转移的风险。
具体实施方式
本发明所涉及免疫吸附剂可以通过以下方式实现：
①吸附剂载体微球制备：将丝素蛋白或/和壳聚糖按一定比例溶于水或醇-水溶液中，通过相转化法制备吸附剂载体微球。
②吸附剂载体手臂接枝：将一定浓度的交联剂溶液，加入到一定量吸附剂载体的容器内，一定条件下进行反应，制备得到带有活性手臂的吸附剂载体微球。
③免疫吸附剂的制备：将一定浓度的肿瘤抗体(Ep-CAM，EGFR等)溶液，加入到装有一定量带有活性手臂吸附剂的容器内，一定条件下进行反应，制备得到免疫吸附剂。
本发明将血液净化技术应用到癌症复发的预防与治疗领域，通过将单克隆抗体偶联到吸附剂载体上，避免了异源性抗体用于肿瘤治疗所引起的免疫反应，也避免了放、化疗对正常免疫系统的损害，通过抗原-抗体特异性识别作用，清除血液中的癌细胞，减少原发性癌症因血液转移而造成的转移癌的发生，为癌症治疗提供了一种辅助治疗方法。
实施例1
壳聚糖载体微球制备：取壳聚糖10g，加200ml含1％醋酸的水溶液中，该溶液经18号针头被泵入到含有8％(Wt％)NaOH的水溶液中，经相转化过程，即制备得到壳聚糖载体微球，微球粒径在300-500um之间，平均孔径在20um。
免疫吸附剂制备：取上述壳聚糖载体微球10g，加入预先配制好的1mg/ml浓度的DPS(3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)20ml，室温反应30分钟，吸弃反应液，PBS清洗3次，每次5分钟，即得到具有可与抗体键合的活性载体微球，然后将预先配制好的10ug/ml的EGFR溶液20ml，和活性载体微球在25℃反应1小时，得到EGFR配基免疫吸附剂，载体上配基的含量为20ug/g(湿球)，即免疫吸附剂1。
循环肿瘤细胞吸附试验：取一定量非小细胞肺癌A549细胞(预先用活细胞染料DiI标记)500个，加入到含10ml正常人血液的已肝素化的50ml离心管中，然后再加入上述制备的EGFR配基的免疫吸附剂1ml，缓慢震荡(30次/分钟)60分钟，取上清，于荧光显微镜下观察并计数显红色荧光的细胞数，结果见表1。
实施例2：
丝素蛋白载体微球制备：取经脱脂处理的丝素蛋白10g，溶于200ml的水溶液中，该溶液经18号针头被泵入到含有液氮的容器中，经相转化制备得到球形丝素蛋白微球，立即将该微球放入低温冻干机中，冷冻干燥48小时，即制备得到丝素蛋白微球载体。微球粒径在500-800um之间，平均孔径在25um。
免疫吸附剂制备：取上述丝素蛋白载体微球5g，加入预先配制好的0.5mg/ml浓度的PMPI(N-[p-Maleimidophenyl]isocyanate)10ml，室温反应60分钟，吸弃反应液，PBS清洗3次，每次5分钟，即得到具有可与抗体键合的活性载体微球，然后将预先配制好的5ug/ml的Ep-CAM溶液10ml，和活性载体微球在25℃反应1小时，得到Ep-CAM配基免疫吸附剂，载体上配基的含量为10ug/g(湿球)，即免疫吸附剂2。
循环肿瘤细胞吸附试验：取一定乳腺癌MCF7细胞(预先用活细胞染料DiI标记)500个，加入到含10ml正常人血液的已肝素化的50ml离心管中，然后再加入上述制备的Ep-CAM配基的免疫吸附剂1ml，缓慢震荡(30次/分钟)60分钟，取上清，于荧光显微镜下观察并计数显红色荧光的细胞数，结果见表1。
实施例3
壳聚糖载体微球制备：取壳聚糖4g，加100ml含1.5％醋酸的水溶液中，该溶液经18号针头被泵入到含有8％(Wt％)NaOH的水溶液中，经相转化过程，即制备得到壳聚糖载体微球，微球粒径在400-800um之间，平均孔径在22um。
免疫吸附剂制备：取上述壳聚糖载体微球3g，加入预先配制好的10mg/ml浓度的戊二醛20ml，室温反应45分钟，吸弃反应液，PBS清洗5次，每次5分钟，即得到具有可与抗体键合的活性载体微球，然后将预先配制好的10ug/ml的Ep-CAM溶液20ml，和活性载体微球在25℃反应1小时，得到Ep-CAM配基免疫吸附剂，载体上配基的含量为50ug/g(湿球)，即免疫吸附剂3。
循环肿瘤细胞吸附试验：取一定量结肠癌HCT116细胞(预先用活细胞染料DiI标记)500个，加入到含10ml正常人血液的已肝素化的50ml离心管中，然后再加入上述制备的Ep-CAM配基的免疫吸附剂1ml，缓慢震荡(30次/分钟)60分钟，取上清，于荧光显微镜下观察并计数显红色荧光的细胞数，结果见表1。
表1：吸附剂对循环血液中肿瘤细胞的清除率

Claims (6)

1.一种用于体外全血灌流以清除血液中循环肿瘤细胞的免疫吸附剂，其特征在于，该吸附剂以天然高分子或合成高分子为载体，以生物交联剂或化学交联剂为手臂，以肿瘤细胞特异性抗原的单克隆或多克隆抗体为配基，通过生物或化学的合成方法将载体-手臂-配基结合，制备得到具有特异性清除血液中循环肿瘤细胞的免疫吸附剂。
2.根据权利要求1所述的免疫吸附剂，其特征在于所述的天然高分子载体是丝素蛋白、壳聚糖或由壳聚糖与丝素蛋白构成的复合物的超大孔微球，微球粒径在100-1000um之间，平均孔径在10-50um之间。
3.根据权利要求1所述的免疫吸附剂，其特征在于所述的生物交联剂是具有异型双功能基的交联剂，具体是DPS(3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)、DCC(二环己基碳化二亚胺)或PMPI(N-[p-Maleimidophenyl]isocyanate)；化学交联剂是戊二醛或乙二胺。
4.根据权利要求1所述的免疫吸附剂，其特征在于所述的单克隆或多克隆抗体，是来源于循环肿瘤细胞所表达的特异性抗原的抗体，具体是Ep-CAM、EGFR、Vimentin、MUC16或PSA，但不限于这些抗体。
5.根据权利要求1所述的免疫吸附剂，其特征在于所述的生物或化学的合成方法，是指目前通过文献可知的所有合成方法和反应条件，且抗体在免疫吸附剂上的偶联量以湿球计在10ug-50ug/g。
6.一种权利要求1所述的免疫吸附剂的应用，可用于全血灌流，清除血液中的循环肿瘤细胞。
CN201610879403.7A 2016-10-09 2016-10-09 一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂 Pending CN106377772A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610879403.7A CN106377772A (zh) 2016-10-09 2016-10-09 一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610879403.7A CN106377772A (zh) 2016-10-09 2016-10-09 一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106377772A true CN106377772A (zh) 2017-02-08

Family

ID=57936255

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610879403.7A Pending CN106377772A (zh) 2016-10-09 2016-10-09 一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106377772A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107261155A (zh) * 2017-05-19 2017-10-20 苏州大学 靶向循环肿瘤细胞的长循环纳米粒及其制备和应用
CN109821513A (zh) * 2019-03-09 2019-05-31 河南工业大学 一种靶向过滤癌细胞的细胞印迹聚合物微球及其制备方法
CN111632202A (zh) * 2020-06-29 2020-09-08 南开大学 肿瘤细胞粘附材料及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102441363A (zh) * 2011-09-28 2012-05-09 南开大学 一种用于清除血液中癌细胞的吸附剂

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102441363A (zh) * 2011-09-28 2012-05-09 南开大学 一种用于清除血液中癌细胞的吸附剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张允清: "《常见肿瘤放化疗方法与技巧》", 30 September 2016, 济南出版社 *
王璐等: "《生物医用纺织品》", 30 November 2011, 中国纺织出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107261155A (zh) * 2017-05-19 2017-10-20 苏州大学 靶向循环肿瘤细胞的长循环纳米粒及其制备和应用
CN109821513A (zh) * 2019-03-09 2019-05-31 河南工业大学 一种靶向过滤癌细胞的细胞印迹聚合物微球及其制备方法
CN111632202A (zh) * 2020-06-29 2020-09-08 南开大学 肿瘤细胞粘附材料及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106377772A (zh) 一种用于清除循环肿瘤细胞的免疫吸附剂
CN108226485B (zh) 肝星状细胞分离纯化用的复合免疫磁珠及其制备方法
CN107802646A (zh) 一种肿瘤治疗药物
CN107510842B (zh) 一种具有光热效果的复合光热剂的制备方法
CN110343663A (zh) 一种从脐带血分离总有核细胞与单个核细胞的方法
CN102600521A (zh) 一种清除血液中病原体的装置和方法
CN114073767B (zh) 一种靶向响应型治疗纳米颗粒及其制备方法与应用
CN105125576B (zh) 一种用于治疗癌症的药物组合物
Horn et al. An immunological approach to the therapy of cancer?
CN104815360A (zh) 循环肿瘤细胞过滤治疗仪
CN111450252A (zh) 一种用于靶向堵塞肿瘤血管的药物及其制备方法与应用
CN112755182A (zh) 一种特异性激活免疫系统的纳米材料的制备和应用
CN102441363A (zh) 一种用于清除血液中癌细胞的吸附剂
CN112755185A (zh) 一种聚多巴胺包裹的载药二硫化钼纳米片及其制备和应用
CN103285826A (zh) 一种用于抑制肿瘤生长与转移的血液净化吸附剂及其应用
CN111840658A (zh) 一种静脉留置针导管及其制备方法和应用
CN110152021B (zh) 一种具备癌细胞内靶向给药能力的药物载体系统及其制备方法
CN101961512A (zh) 一种乙型肝炎病毒亲和吸附柱及其制备方法
CN106606783B (zh) 一种靶向共递释光敏剂与化疗药物的药物递释系统
CN104127887B (zh) Fe5C2纳米颗粒在制备生物成像探针中的应用
CN115737895B (zh) 一种用于抗肝癌的磁性栓塞微球及其制备方法与应用
CN107625744B (zh) 一种核壳结构纳米胶囊及其制备方法和应用
CN114525127B (zh) 一种碳量子点纳米组装体的制备方法及其应用
CN115192708A (zh) 负载抗肿瘤药物的纳米复合材料、纳米载药体系及制备与应用
CN102319439B (zh) 一种带磁性微球的药物及用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170208