CN106359094A - 一种快速诱导马铃薯微型薯的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：(1)配制含蔗糖，琼脂，萘乙酸，吲哚丁酸，香豆素，活性炭的马铃薯诱导培养基；(2)将复壮后的马铃薯无菌苗剪切为带有1‑3个腋芽的茎段，将腋芽以下部分接种于马铃薯诱导培养基中；在22℃‑28℃，暗培养28‑30天，得到马铃薯微型薯。本发明的马铃薯诱导培养基，用于马铃薯微型薯的快速诱导以及培养，可以快速的获得马铃薯微型薯，而且获得微型薯周期短，微型薯结薯多，结薯率达100％，品质好，为马铃薯原种获得与保存及种薯规模化生产奠定了良好的基础。

Description

一种快速诱导马铃薯微型薯的方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术育种领域，具体涉及一种快速诱导马铃薯微型薯的方法。

背景技术

马铃薯(Solanum tuberosum)属于茄科茄属，是能结块茎的一种草本植物，属于多倍体作物。马铃薯是仅次于玉米、小麦和水稻的四大粮食作物之一，同时又是植物分子遗传学研究的重要模式植物之一。马铃薯功能较多，有适合作主食的，也有适合作为蔬菜食用的，具有产业链长等优点，是轻工业、食品加工业和医药制造业不可缺少的重要原材料之一。为了提高马铃薯的经济价值，快速诱导马铃薯微型薯成为国内外马铃薯基础及应用研究的重点方向之一。马铃薯微型薯是指利用组织培养技术，在培养瓶内通过诱导形成的体积较小的块茎。马铃薯微型薯具有体积小，重量轻，生产不受季节限制，易储藏，繁殖速度高于常规田间生产，栽培成活率高等突出优点，并且用于优良种质的保存，运输和推广较其他形式更加便捷，而且离体条件下诱导马铃薯块茎的形成也是研究马铃薯块茎形成机理较为理想的方法。微型薯还在当今马铃薯基因工程研究中作为基因转移的受体。但是由于马铃薯为无性繁殖作物，多年连续种植会出现产量下降品质变劣等退化现象，严重威胁马铃薯种植生产，利用快速的马铃薯微型薯作种是增产的有效途径。

20世纪80年代初，用组培法诱导马铃薯微型薯获得成功。此后，在近30多年的时间里，各国学者做了大量的研究工作，为马铃薯微型薯诱导积累了丰富的宝贵资料。马铃薯地上地下均可获得较大的生物量，块茎便于贮藏和运输等。马铃薯再生株系的快繁、微型薯诱导的研究，为马铃薯原种获得与保存及种薯规模化生产奠定了较好的基础。而在马铃薯微型薯生产中，要求生产的微型薯产量高，质量好，成本低，这是马铃薯微型薯生产的基本要求。但是一般的MS培养基不易使马铃薯结薯，而且生长周期较长、获得的微型薯品质较低。植物生长调节物质一直都是微型薯诱导培养基中必不可少的成分，它们通过参与植株的代谢而改变其正常的营养生长过程，最终使处于旺盛生长的马铃薯脱毒苗诱导形成微型薯。迄今有关马铃薯微型薯诱导的方法的报道虽然很多，但是大多数诱导时间较长，多在40-50天时收获，也有在60天收获的，而且获得的微型薯数量少、品质等不理想。因此亟需一种能快速诱导马铃薯微型薯的方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种快速诱导马铃薯微型薯的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种快速诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

配制蔗糖终浓度为90-110g/L，琼脂终浓度为6-8g/L，萘乙酸终浓度为0.1mg/L，吲哚丁酸终浓度为0.1mg/L，香豆素终浓度为20mg/L，活性炭终浓度为5mg/L，pH＝5.8，余量为双蒸水的马铃薯诱导培养基；

(2)将复壮后的马铃薯无菌苗剪切为带有1-3个腋芽的茎段，将腋芽以下部分接种于马铃薯诱导培养基中；在22℃-28℃，暗培养28-30天，得到马铃薯微型薯。

马铃薯的品种优选Desiree、大西洋或中农303，还可以选择其它营养含量与上述品种相类似的马铃薯品种。

本发明的优点：

本发明充分考虑了诱导方式、诱导时间以及诱导条件等对马铃薯微型薯发生的影响，在MS培养基的基础上添加适当比例的激素以及活性炭等，本发明的马铃薯诱导培养基，用于马铃薯微型薯的快速诱导以及培养，可以快速的获得马铃薯微型薯，而且获得微型薯周期短，微型薯结薯多，结薯率达100％，品质好，为马铃薯原种获得与保存及种薯规模化生产奠定了良好的基础。

附图说明

图1为复壮后的马铃薯无菌苗图。

图2为用本发明的方法快速诱导获得的Desiree马铃薯微型薯图。

图3为用本发明的方法快速诱导获得的大西洋马铃薯微型薯图。

图4为用本发明的方法快速诱导获得的中农303马铃薯微型薯图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明

各实施例中步骤所选用的马铃薯均采用市售的马铃薯。

NAA：萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid)。

IBA：吲哚丁酸(beta-indolebutyric acid)。

MS固体培养基(市售)。

实施例1

复壮后的马铃薯无菌苗的培养，包括如下步骤：

将田间Desiree、大西洋和中农303马铃薯健壮苗，分别剪切成2-3cm的茎段，先用体积浓度为75％的乙醇水溶液浸泡消毒30s，用水洗2次(也可以是3次)，然后用体积浓度为5％的次氯酸钠水溶液浸泡消毒10min，用水洗2次(也可以是3次)，接种到MS固体培养基上，在25℃、16hr光照/8hr黑暗，一个月左右即可长成完整的马铃薯无菌苗(生长势较弱)。

马铃薯无菌苗放置于含400mg/L矮壮素的MS固体培养基上，在25℃、16hr光照/8hr黑暗培养20天，得到复壮后的马铃薯无菌苗(见图1)。

实施例2

一种快速诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

配制蔗糖终浓度为100g/L，琼脂终浓度为7g/L，萘乙酸终浓度为0.1mg/L，吲哚丁酸终浓度为0.1mg/L，香豆素终浓度为20mg/L，活性炭终浓度为5mg/L，pH＝5.8，余量为双蒸水的马铃薯诱导培养基；

具体配制过程为：向锥形瓶中加入蔗糖，琼脂，萘乙酸，吲哚丁酸，香豆素和活性炭，先用500mL双蒸水搅拌均匀，用双蒸水定容至1000mL，用1M的NaOH水溶液调节pH至5.8，将锥形瓶用封口膜封好口，放置于灭菌锅中进行高温高压灭菌(121℃，20min)。

(2)将复壮后的Desiree马铃薯无菌苗剪切为带有2个腋芽的茎段，将3个茎段的腋芽以下部分接种于60mL马铃薯诱导培养基中；在22℃，暗培养，5天后腋芽处膨大，15天后开始有马铃薯微型薯形成，培养29天，得到马铃薯微型薯，见图2，结薯率达100％。设立三组平行实验(实验组1-3)。见表1-1。

对照1

一种诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

在MS液体培养基中加入蔗糖使终浓度为30g/L，加入琼脂使终浓度为7g/L，调节pH至5.8，置于高压灭菌锅中灭菌(121℃，20min)待用。

(2)将复壮后的Desiree马铃薯无菌苗剪切为带有2个腋芽的茎段，将3个茎段的腋芽以下部分接种于60mL步骤(1)的马铃薯诱导培养基中；在22℃，暗培养，29天，设立三组平行实验(对照组1-3)。见表1-2。

表1-1

实验组编号	1	2	3
				微型薯个数	14	12	13

表1-2

对照组编号	1	2	3
				微型薯个数	3	2	2

实施例3

一种快速诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

配制蔗糖终浓度为90g/L，琼脂终浓度为6g/L，萘乙酸终浓度为0.1mg/L，吲哚丁酸终浓度为0.1mg/L，香豆素终浓度为20mg/L，活性炭终浓度为5mg/L，pH＝5.8，余量为双蒸水的马铃薯诱导培养基；

具体配制过程同实施例2的具体配制过程；

(2)将复壮后的大西洋马铃薯无菌苗剪切为带有1个腋芽的茎段，将3个茎段的腋芽以下部分接种于60mL马铃薯诱导培养基中；在28℃，暗培养，5天后腋芽处膨大，15天后开始有马铃薯微型薯形成，培养30天，得到马铃薯微型薯，见图3,结薯率达100％。设立三组平行实验(实验组4-6)，见表2-1。

对照2

一种诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

在MS液体培养基中加入蔗糖使终浓度为30g/L，加入琼脂使终浓度为7g/L，调节pH至5.8，置于高压灭菌锅中灭菌(121℃，20min)待用。

(2)将复壮后的大西洋马铃薯无菌苗剪切为带有1个腋芽的茎段，将3个茎段的腋芽以下部分接种于60mL步骤(1)的马铃薯诱导培养基中；在28℃，暗培养，30天,设立三组平行实验(对照组4-6)。见表2-2。

表2-1

实验组编号	4	5	6
				微型薯个数	13	11	12

表2-2

对照组编号	4	5	6
				微型薯个数	2	3	3

实施例4

一种快速诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

配制蔗糖终浓度为110g/L，琼脂终浓度为8g/L，萘乙酸终浓度为0.1mg/L，吲哚丁酸终浓度为0.1mg/L，香豆素终浓度为20mg/L，活性炭终浓度为5mg/L，pH＝5.8，余量为双蒸水的马铃薯诱导培养基；

具体配制过程内实施例2；

(2)将复壮后的中农303马铃薯无菌苗剪切为带有3个腋芽的茎段，将3个茎段的腋芽以下部分接种于60mL马铃薯诱导培养基中；在25℃，暗培养，5天后腋芽处膨大，15天后开始有马铃薯微型薯形成，培养28天，得到马铃薯微型薯，见图4,结薯率达100％。设立三组平行实验(实验组7-9)。见表3-1。

对照3

一种诱导马铃薯微型薯的方法，包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

在MS液体培养基中加入蔗糖使终浓度为30g/L，加入琼脂使终浓度为7g/L，调节pH至5.8，置于高压灭菌锅中灭菌(121℃，20min)待用。

(2)将复壮后的中农303马铃薯无菌苗剪切为带有3个腋芽的茎段，将3个茎段的腋芽以下部分接种于60mL步骤(1)的马铃薯诱导培养基中；在25℃，暗培养，28天，设立三组平行实验(对照组7-9)。见表3-2。

表3-1

实验组编号	7	8	9
				微型薯个数	15	13	14

表3-2

对照组编号	7	8	9
				微型薯个数	4	2	3

Claims (2)

1.一种快速诱导马铃薯微型薯的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)马铃薯诱导培养基的配制：

配制蔗糖终浓度为90-110g/L，琼脂终浓度为6-8g/L，萘乙酸终浓度为0.1mg/L，吲哚丁酸终浓度为0.1mg/L，香豆素终浓度为20mg/L，活性炭终浓度为5mg/L，pH＝5.8，余量为双蒸水的马铃薯诱导培养基；

(2)将复壮后的马铃薯无菌苗剪切为带有1-3个腋芽的茎段，将腋芽以下部分接种于马铃薯诱导培养基中；在22℃-28℃，暗培养28-30天，得到马铃薯微型薯。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是马铃薯的品种为Desiree、大西洋或中农303。