CN106350508A - 哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用 - Google Patents

哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106350508A
CN106350508A CN201610903601.2A CN201610903601A CN106350508A CN 106350508 A CN106350508 A CN 106350508A CN 201610903601 A CN201610903601 A CN 201610903601A CN 106350508 A CN106350508 A CN 106350508A
Authority
CN
China
Prior art keywords
buffer
genome dna
oviductus ranae
add
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610903601.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106350508B (zh
Inventor
石林春
刘建辉
宋经元
刘金欣
唐先明
刘景波
姚辉
周建国
王福宾
于海龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harbin Food And Drug Inspection And Testing Center
Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Original Assignee
Harbin Food And Drug Inspection And Testing Center
Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harbin Food And Drug Inspection And Testing Center, Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC filed Critical Harbin Food And Drug Inspection And Testing Center
Priority to CN201610903601.2A priority Critical patent/CN106350508B/zh
Publication of CN106350508A publication Critical patent/CN106350508A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106350508B publication Critical patent/CN106350508B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C12N15/101—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by chromatography, e.g. electrophoresis, ion-exchange, reverse phase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种哈蟆油基因组DNA提取方法，包括取哈蟆油药材，加入含酸活性水对样品进行复性，加入缓冲液ATL和蛋白酶K裂解样品；加入脂肪组织去除液酚/氯仿/异戊醇去除脂肪及蛋白；加入洗涤液洗涤，通过吸附柱吸附DNA，最终洗脱获得高纯度基因组DNA。本发明还提供了哈蟆油基因组DNA的提取试剂盒及应用。本发明的提取方法能有效提取哈蟆油药材中基因组DNA，获得高纯度的基因组DNA，为DNA条形码技术得到更为广泛的应用提供了良好的基础。

Description

哈蟆油基因组DNA提取方法、试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及中药材基因组DNA提取领域，具体涉及一种哈蟆油基因组DNA提取方法、试剂盒及其应用。
背景技术
中药鉴定是研究中药品种、质量，制定中药标准，寻找和扩大药源的前提和基础。中药四大传统鉴定方法为基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定。传统鉴定方法的理论基础建立于分类群的性状特征分析，这些性状特征是与生物生长阶段和环境紧密相关的表现型，鉴定结果易受主观和客观因素影响。而基因组DNA序列是物种遗传本质决定的，也是不同生物的不可变“身份证”，这为动植物分类和鉴定提供了本质依据。
DNA条形码(DNA barcoding)技术是通过PCR技术扩增基因组序列中一段通用DNA片段，对PCR扩增的通用DNA片段进行比较分析完成物种快速、准确的识别和鉴定，在物种鉴定方面显示了广阔的应用前景。目前，利用COI序列对动物类药材进行鉴定已经取得了广泛的成功。
但中国药典动物药材哈蟆油样本为不新鲜的干材样本，富含黏液质、胶质和半纤维素等物质，使用现有商品DNA提取试剂盒提取哈蟆油DNA时，在加入裂解液后哈蟆油药材高度膨胀，膨胀度高达55倍以上，水浴离心后无上清液或极少上清液，无法进行后续哈蟆油药材DNA提取步骤。此外，哈蟆油干材中基因组DNA片段化、氧化降解严重。所以，利用现有商品DNA提取试剂盒难以提取哈蟆油干材样本基因组DNA，从而无法进行后续的DNA条形码鉴定等工作。
因此，本领域技术人员致力于开发一种获得高纯度基因组DNA的哈蟆油基因组DNA提取方法，以为该药材的DNA条形码鉴定及其他应用提供良好的基础。
发明内容
有鉴于现有技术中哈蟆油基因组DNA提取时哈蟆油药材的高度膨胀、基因组DNA的片段化及氧化严重，难以有效提取基因组DNA的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种有效地、获得高纯度基因组DNA的哈蟆油基因组DNA提取方法。
为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种哈蟆油基因组DNA提取方法，该方法包括以下步骤：
1)取哈蟆油药材，加入缓冲液FB，研磨至无明显颗粒并混匀，其中，缓冲液FB为含酸活性水；
2)加入缓冲液ATL和蛋白酶K，混匀，以裂解样品，其中，缓冲液ATL含十二烷基磺酸钠、甘氨酸和乙二胺四乙酸钠；
3)加入缓冲液AL，混匀，其中，缓冲液AL含甘氨酸和乙二胺四乙酸钠；
4)加入脂肪组织去除液：酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心获得第一上清液；
5)在第一上清液中加入氯仿/异戊醇，混匀，离心获得第二上清液；
6)在第二上清液中加入无水乙醇，混匀；
7)将上一步所得溶液加入吸附柱中，离心；
8)向吸附柱中加入缓冲液AW1，离心，其中，缓冲液AW1含盐酸胍和异丙醇；
9)向吸附柱中加入缓冲液AW2，离心，其中，缓冲液AW2含叠氮钠和异丙醇；
10)向吸附柱中加入TE或者ddH2O，离心获得DNA。
进一步地，步骤1)中所述含酸活性水为含0.1％～2％盐酸的水。
进一步地，步骤2)中缓冲液ATL为1％～2.5％的十二烷基磺酸钠、10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
优选地，步骤2)中裂解样品时，在56℃孵育至澄清。
进一步地，步骤3)中缓冲液AL为10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
进一步地，步骤8)中缓冲液AW1含36％～50％盐酸胍和20％～50％异丙醇。
进一步地，步骤9)中的缓冲液AW2含0.1％～1％叠氮钠和20％～50％异丙醇。
本发明的第二方面提供了一种哈蟆油基因组DNA提取试剂盒，该试剂盒至少包括：对样品进行复性的含酸活性水；裂解样品的含十二烷基磺酸钠、甘氨酸和乙二胺四乙酸钠的缓冲液；含盐酸胍和异丙醇的洗涤液AW1及含叠氮钠和异丙醇的洗涤液AW2。
进一步地，该试剂盒还包括研磨杵、吸附柱、收集管、蛋白酶K和缓冲液TE。
本发明第三方面提供了上述哈蟆油基因组DNA提取方法或上述哈蟆油基因组DNA提取试剂盒在使用DNA条形码技术鉴定哈蟆油中的应用。
本发明的优势在于，实现对哈蟆油药材，尤其是干燥哈蟆油药材的有效抽提从而获得高纯度基因组DNA。其中，使用含酸活性水实现了对哈蟆油组织的有效复性；联合脂肪组织去除液去除样本中的脂肪组织，减少对后续基因组DNA抽提的影响；使用本发明的抽提方法能使基因组DNA充分释放并实现高效纯化。具体地，含酸活性水使脂肪组织充分溶胀形成类似新鲜样品的结构，在十二烷基磺酸钠、甘氨酸和乙二胺四乙酸钠的作用下使组织细胞的蛋白质和基因组DNA结合的组蛋白充分变性，将蛋白酶K的效能发挥到最大，使基因组DNA样品结合到纯化柱后方便蛋白杂质被洗涤液洗脱下来。使用该方法，DNA提取浓度均达到50ng/μL以上，OD260/280达到或接近1.8～2.0之间，纯度较高。利用抽提获得的DNA，能实现DNA条形码鉴定技术100％的扩增成功率，这为DNA条形码技术得到更为广泛的应用提供了良好的基础。
附图说明
图1是采用本发明实施例2中提取获得DNA进行PCR扩增检测后的电泳图。其中，CK为PCR的阴性对照。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明作进一步地说明，应理解这些实施例仅作为例证的目的，不用于限制本发明的保护范围。
实施例1 获得高纯度基因组DNA的哈蟆油药材基因组DNA提取方法
确立哈蟆油药材基因组DNA提取标准方法，该提取方法为：
1.取哈蟆油药材5mg，加入500μl缓冲液FB，研磨至无明显颗粒并混匀。其中缓冲液FB为含酸活性水，具体为含0.1％～2％盐酸的水。
2.加入360μl缓冲液ATL和40μl蛋白酶K(20mg/mL)，涡旋混匀，用以裂解样品。优选地使用涡旋混合仪混匀，56℃孵育至溶液澄清，每小时颠倒混合样品2～3次，或者使用水浴振荡器，通常1个小时可裂解完全。
其中缓冲液ATL含1％～2.5％的十二烷基磺酸钠、10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
3.可选地，加入4μl RNase A(100mg/ml)，涡旋混匀，室温放置2～5min，以去除RNA污染。
4.加入400μl缓冲液AL，涡旋混匀，以促进DNA溶解于水相。其中缓冲液AL含10～20mM甘氨酸和10mmol乙二胺四乙酸钠。
5.加入700μl脂肪组织去除液：酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，振荡混匀，离心获得上清液，去除脂肪及蛋白杂质。
6.在上清液中加入700μl氯仿/异戊醇(24:1)，振荡混匀，离心获得上清液，从而去除残留的酚。
7.上清液加入等体积无水乙醇，振荡混匀并静置，制造高盐环境，以促进后续基因组DNA和吸附柱的结合。
8.将上一步所得溶液加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，离心，丢弃废液和收集管。
9.将吸附柱放入新的收集管中，加入500μl缓冲液AW1洗涤去除杂质，离心后丢弃废液和收集管。其中，缓冲液AW1含36％～50％盐酸胍和20％～50％异丙醇。
10.将吸附柱放入新的收集管中，加入500μl缓冲液AW2洗涤去除杂质，离心后丢弃废液和收集管。其中，缓冲液AW2含0.1％～1％叠氮钠和20％～50％异丙醇。
11.将吸附柱放入1.5ml离心管，向吸附柱中加入50μl TE或者ddH2O，离心获得DNA。
实施例2 大样本验证
为了验证实施例1中确定的获得高纯度基因组DNA的哈蟆油基因组DNA提取方法、试剂组成及浓度的普遍有效性，利用多种哈蟆油样本，进行验证，具体为：
1)实现对不同产地(黑龙江省、吉林省和辽宁省)的哈蟆油药材和中国药品生物制品检定所的标准对照哈蟆油药材进行DNA提取以获得高纯度基因组DNA。
2)实现对不同商品规格(线油和块油)的哈蟆油药材进行DNA提取以获得高纯度基因组DNA。
1.取哈蟆油药材约5mg，加入500μl缓冲液FB，使用研磨杵反复研磨30秒左右，至无明显颗粒并混匀。其中缓冲液FB为含酸活性水，具体为含0.1％～2％盐酸的水。
其中，哈蟆油药材分别为：
取材地点为黑龙江的样品：S1、S2、S3；其中S1、S2为线油，S3为块油；
取材地点为吉林的样品：S4、S5、S6；其中S4、S5为线油，S6为块油；
取材地点为辽宁的样品：S7、S8、S9；其中S7、S8为线油，S9为块油；
中国药品生物制品检定所的标准对照哈蟆油药材：SB，为粉末。
2.加入360μl缓冲液ATL和40μl蛋白酶K(20mg/mL)裂解样品，使用涡旋混合仪混匀30秒左右，56℃孵育至溶液澄清(通常1个小时可裂解完全)，每小时颠倒混合样品2～3次，或者使用水浴振荡器。其中缓冲液ATL为1％～2.5％的十二烷基磺酸钠、10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
3.可选地，加入4μl RNase A(100mg/ml)，涡旋混匀，室温放置2～5min，以除去RNA。
4.加入400μl缓冲液AL，涡旋混匀30sec。其中缓冲液AL为10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
5.加入700μl酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，在涡旋混合器上剧烈振荡混匀30sec，室温下以最高速度离心5min
6.小心将上清液转移至一新的离心管，加入700μl氯仿/异戊醇(24:1)，在涡旋混合器上剧烈振荡混匀30sec，室温下以最高速度离心5min
7.加入等体积无水乙醇，在涡旋混合器上剧烈振荡混匀30sec，室温下静置2～5min。
8.将上一步所得溶液加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，12 000rpm离心1min，丢弃废液和收集管。
9.将吸附柱放入新的收集管中，加入500μl缓冲液AW1，14 000rpm离心1min，丢掉废液和收集管。其中，缓冲液AW1含36％～50％盐酸胍和20％～50％异丙醇。
10.将吸附柱放入新的收集管中，加入500μl缓冲液AW2，14 000rpm离心3min，丢掉废液和收集管。其中，缓冲液AW2含0.1％～1％叠氮钠和20％～50％异丙醇。
11.将吸附柱放入1.5ml离心管，向吸附柱中加入50μl TE或者ddH2O室温下放置1min，8 000rpm离心1min，获得提取的DNA。
提取获得的DNA的浓度(OD值)及纯度(OD260/280)如表1所示：
表1 高纯度哈蟆油样品提出的DNA的浓度及纯度
样本号 称样量(mg) OD值 OD260/280
S1 5.2 58.2 1.79
S2 5.4 54.6 1.71
S3 5.1 78.2 1.77
S4 5.7 111.4 1.75
S5 5.7 120.4 1.69
S6 5.6 134.7 1.84
S7 4.6 102.7 1.88
S8 4.9 236.2 1.94
S9 5.2 218 1.91
SB 5.4 205.4 1.93
由此可见，利用上述方法及相关试剂抽提获得的DNA，具有较高浓度及纯度，非常适合用于进行进一步的实验或分析研究。
实施例3哈蟆油高纯度基因组DNA提取试剂盒
该试剂盒包括以下成分：
1.吸附柱/收集管；
2.缓冲液FB：含0.1％～2％盐酸的水
3.缓冲液ATL：1％～2.5％十二烷基磺酸钠，10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠；
4.缓冲液AL：10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
5.缓冲液AW1：36％～50％盐酸胍和20％～50％异丙醇；
6.缓冲液AW2：0.1％～1％叠氮钠和20％～50％异丙醇
7.缓冲液TE
8.蛋白酶K：20mg/mL
9.研磨杵
实施例4
采用实施例2中提取的哈蟆油基因组DNA进行PCR扩增检测。
配制PCR体系，其中模版为实施例2中提取获得DNA。运行PCR扩增程序。PCR产物进行DNA电泳检测，结果如图1所示，提取的所有样品都扩增出了条带，并且条带明亮，说明抽提获得的DNA适用于进行后续的PCR扩增，为进一步地研究提供了基础。

Claims (10)

1.一种哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)取哈蟆油药材，加入缓冲液FB，研磨至无明显颗粒并混匀，其中，缓冲液FB为含酸活性水；
2)加入缓冲液ATL和蛋白酶K，混匀，以裂解样品，其中，缓冲液ATL含十二烷基磺酸钠、甘氨酸和乙二胺四乙酸钠；
3)加入缓冲液AL，混匀，其中，缓冲液AL含甘氨酸和乙二胺四乙酸钠；
4)加入脂肪组织去除液：酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心获得第一上清液；
5)在所述第一上清液中加入氯仿/异戊醇，混匀，离心获得第二上清液；
6)在所述第二上清液中加入无水乙醇，混匀；
7)将上一步所得溶液加入吸附柱中，离心；
8)向吸附柱中加入缓冲液AW1，离心，其中，缓冲液AW1含盐酸胍和异丙醇；
9)向吸附柱中加入缓冲液AW2，离心，其中，缓冲液AW2含叠氮钠和异丙醇；
10)向吸附柱中加入TE或者ddH2O，离心获得DNA。
2.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，步骤1)中所述含酸活性水为含0.1％～2％盐酸的水。
3.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，步骤2)中缓冲液ATL为1％～2.5％的十二烷基磺酸钠、10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
4.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，步骤2)中裂解样品时，在56℃孵育至澄清。
5.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，步骤3)中缓冲液AL为10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠。
6.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，步骤8)中的缓冲液AW1含36％～50％盐酸胍和20％～50％异丙醇。
7.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，步骤9)中的缓冲液AW2含0.1％～1％叠氮钠和20％～50％异丙醇。
8.一种哈蟆油基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包括：对样品进行复性的含盐酸的水；裂解样品的含十二烷基磺酸钠、甘氨酸和乙二胺四乙酸钠的缓冲液；含盐酸胍和异丙醇的洗涤液AW1及含叠氮钠和异丙醇的洗涤液AW2。
9.如权利要求8所述的哈蟆油基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括研磨杵、吸附柱、收集管、蛋白酶K和缓冲液TE。
10.如权利要求1所述的哈蟆油基因组DNA提取方法或如权利要求8所述的哈蟆油基因组DNA提取试剂盒在使用DNA条形码技术鉴定哈蟆油中的应用。
CN201610903601.2A 2016-10-17 2016-10-17 哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用 Active CN106350508B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610903601.2A CN106350508B (zh) 2016-10-17 2016-10-17 哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610903601.2A CN106350508B (zh) 2016-10-17 2016-10-17 哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106350508A true CN106350508A (zh) 2017-01-25
CN106350508B CN106350508B (zh) 2019-01-18

Family

ID=57866769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610903601.2A Active CN106350508B (zh) 2016-10-17 2016-10-17 哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106350508B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104630201A (zh) * 2013-11-08 2015-05-20 中国中医科学院中药研究所 药材快速dna提取试剂盒

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104630201A (zh) * 2013-11-08 2015-05-20 中国中医科学院中药研究所 药材快速dna提取试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何春燕等: "《医学生物化学实验指导》", 30 September 2010, 湖北科学技术出版社 *
范燕楠等: "哈蟆油膨胀度检查法的实验改进", 《中南药学》 *
邵鹏柱等: "《中药分子鉴定》", 31 August 2004, 复旦大学出版社 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106350508B (zh) 2019-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101665785B (zh) 一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法
CN101270357A (zh) 一种从深度加工型中药或中药材中提取dna的方法
CN107475248A (zh) 一种植物基因组dna快速提取方法
CN108642048A (zh) 一种可应用于从动物组织中高通量提取基因组dna的试剂盒及提取方法
Randles et al. Circularity of the ribonucleic acids associated with cadang-cadang disease
CN102628039B (zh) 一种通用植物总rna提取法
CN108950067A (zh) 检测对虾虹彩病毒的lamp引物组、试剂盒及其方法
CN102115739B (zh) 分离核酸的方法、试剂及套组
CN101445827B (zh) 鉴别川牛膝道地药材的核苷酸序列和方法
Sharma et al. Analysis of proteomic diversity and calcium binding protein (s) in seeds of horse gram (Macrotyloma uniflorum) cultivars from Uttarakhand
CN106350508A (zh) 哈蟆油基因组dna提取方法、试剂盒及其应用
CN111944802A (zh) 真菌核酸提取裂解液及提取核酸的试剂盒及方法
CN107034213A (zh) 一种花生组织的dna快速提取方法
CN106350510A (zh) 快速提取哈蟆油基因组dna的方法、试剂盒及其应用
CN109880822A (zh) 一种山桐子高质量dna提取方法
CN110777083A (zh) 一种从酵母细胞中提取外泌体的方法
CN101812509A (zh) 中药中马种源性成分的pcr鉴定方法
CN111269284B (zh) 同步分离细胞质和细胞核中蛋白质和rna的试剂及方法
Riol et al. Optimized lymphocyte protein extraction performed simultaneously with DNA and RNA isolation: application to the study of factors affecting DNA, RNA, and protein recovery from lymphocytes of the oldest individuals
CN111778237A (zh) 一种动物深加工制品的高纯核酸提取方法及试剂体系
CN101514221A (zh) 一种从动物胰脏中提取核糖核酸的方法
CN102559862B (zh) 普洱茶微生物菌群中的优势真菌及其谱图
CN105695446B (zh) 一种提取大豆种子全基因组dna的方法
CN109735644A (zh) 鉴别或辅助鉴别甘草的引物对及其应用
CN104450967A (zh) 检测水貂阿留申病毒的特异性引物及其在筛选健康水貂中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant