CN106344883A - 一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下：青蒿、萹蓄、仙鹤草、白头翁、姜黄、肉桂。本发明还涉及抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂的制备方法。本发明根据中兽医理论和球虫病的发病特点，从鸡发病的病症特点出发，研制出一种抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物，该方以清热解毒，燥湿杀虫，止痢止血为组方原则，进行组方，并对多个成方进行抗柔嫩艾美尔球虫疗效试验，经筛选获得。

Description

一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物
技术领域
本发明涉及一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，属于禽疾病治疗技术领域。
背景技术
鸡球虫病是由7种艾美耳属球虫寄生于肠道特定部位的上皮细胞而引起的一种专性细胞内寄生虫病。是危害鸡，尤以15～50日龄鸡最易感染，死亡率可达80％。临床上以血痢、贫血和消瘦等为特征。病愈的雏鸡生长发育受阻，成年鸡多为带虫者，但增重和产蛋受到一定影响。目前鸡球虫病在全世界分布十分广泛、危害极其严重，全世界每年因预防和治疗球虫病造成的费用高达30多亿美元，给集约化养禽业健康稳定的发展造成了威胁。
从球虫病的临床症状和发病季节分析，环境秽浊，湿热蕴蒸造成球虫感染，疫毒灼伤肠道脉络而便血。治则宜清热解毒，燥湿杀虫，止痢止血。
中国专利文献CN 105168331 A(申请号201510556821.8)公开了一种防治鸡球虫病的中药煎剂及其制备方法。本发明是蒲公英5g、大青叶5g、黄芪3g、苦参3g、青蒿2g、甘草2g。利用水煎煮提取法，通过过滤、离心、沉淀等方法除去提取液中的杂质，制备口服液，用于预防和治疗鸡球虫病。
中国专利文献CN105031245A(申请号201510536220.0)公开了一种抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物，原料药如下：苦参、常山、萹蓄、苦楝皮、白头翁、黄精、白芍。该方以清热燥湿、凉血止血为主，辅以补虚为组方原则，经筛选获得，经实际使用，对鸡球虫病具有显著的治疗效果。
然而上述专利在治疗鸡球虫病时，由于其剂型的限制，方中各中药的有效成分无法保证最大程度的被提取和吸收，其效果无法满足实际的需求。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种抗球虫效果好的抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物。
一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下，均为重量份：
青蒿280～320份、萹蓄90～110份、仙鹤草45～55份、白头翁25～35份、姜黄25～35份、肉桂24～28份。
根据本发明优选的，原料药如下，均为重量份：
青蒿300份、萹蓄100份、仙鹤草50份、白头翁30份、姜黄30份、肉桂26份。
上述抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物颗粒剂的制备方法，步骤如下：
(1)按照每克青蒿与40～60mL石油醚的比例混合后，在温度为55～65℃、旋转速度550～650r/min的条件下提取2～3h，制得青蒿素，然后与β-环糊精超声包合，制得青蒿素环糊精；
(2)将姜黄与乙醇溶液按质量体积比1:(25～30)的比例混合，单位g/mL，在25～35℃条件下浸提1.5～3h，制得姜黄素，然后与β-环糊精超声包合，制得姜黄素环糊精；
(3)将肉桂粉碎后加重量8～12倍的水，超声预处理15～25min，然后水蒸气蒸馏法提取3～5h，制得肉桂油，然后与β-环糊精超声包合，制得肉桂油环糊精；
(4)采用水提法提取萹蓄、仙鹤草、白头翁中的有效成分，制得干浸膏，然后将干浸膏与葡萄糖混合后，以乙醇溶液作为润湿剂制粒，经干燥，制得混合颗粒；
(5)将步骤(1)制得的青蒿素环糊精、步骤(2)制得的姜黄素环糊精、步骤(3)制得的肉桂油环糊精和步骤(4)制得的混合颗粒混合均匀，制得抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中，青蒿素与β-环糊精的质量比为1:2，包合温度为50℃，超声时间60min，超声功率200W。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中，姜黄素与β-环糊精的摩尔比为1:1，包合温度为50℃，包合溶剂为体积百分比浓度40％的乙醇溶液，超声时间120min，超声功率200W。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中，乙醇体积百分比浓度为70％。
根据本发明优选的，所述步骤(3)中，肉桂粉碎至粒度为50目。
根据本发明优选的，所述步骤(3)中，所述包合中，β-环糊精:水的质量比为1:17.5，肉桂油:β-环糊精质量比为1:8，包合温度为50℃，采用超声包合15min，超声功率200W。
根据本发明优选的，所述步骤(4)中，所述干浸膏与葡萄糖的质量比为1:1，乙醇溶液质量浓度为75％，用量为干浸膏质量的20～40％；干燥温度为80℃。
上述个制备步骤如超声包合等，条件无特殊说明，均可采用本领域的常规技术操作和条件。
方剂药理分析：
本发明所述的一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，青蒿，有清虚热，解暑，截疟，杀虫，萹蓄清热燥湿热兼杀虫，共为君药；仙鹤草、白头翁具有清热解毒、凉血止痢等作用，为臣药；姜黄具有活血行气、通经止痛等功效，其中所含姜黄素在球虫疫苗免疫过程中能够修复肠道损伤、提升肠道健康，为佐药；肉桂具有补火助阳，温里去寒，活血止痛的功效，还有鼓舞气血生长之功效，为使药。
有益效果
1、本发明根据中兽医理论和球虫病的发病特点，从鸡发病的病症特点出发，研制出一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，该方以清热解毒，燥湿杀虫，止痢止血为组方原则，进行组方，并对多个成方进行抗柔嫩艾美尔球虫疗效试验，经筛选获得；
2、本发明研制的抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，通过临床试验报告得出青萹颗粒剂0.12％饮水给药对鸡球虫病模型具有显著的预防效果，青萹颗粒剂0.24％饮水给药对人工鸡球虫病具有显著的治疗效果，抗球虫指数分别为179.96和181.56。
3、本发明采用中药有效成分提取及包合技术制备成的抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物颗粒剂，其重要成分青蒿素、姜黄素和肉桂油等通过提取包合后，优化最佳制粒工艺制成青萹颗粒剂，可更有效的控制药剂质量，显著提高药物的疗效，具有广阔的市场前景。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的保护范围。
实施例1
一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下：
青蒿3000g、萹蓄1000g、仙鹤草500g、白头翁300g、姜黄300g、肉桂260g。
上述抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物颗粒剂的制备方法，步骤如下：
(1)按照每克青蒿与50mL石油醚的比例混合后，在温度为60℃、旋转速度600r/min的条件下提取2.5h，制得青蒿素，然后与β-环糊精包合，青蒿素与β-环糊精的质量比为1:2，包合温度为50℃，超声包合时间60min，超声功率200W，制得青蒿素环糊精；
(2)将姜黄与质量浓度为70％的乙醇溶液按质量体积比1:28的比例混合，单位g/mL，在30℃条件下浸提2h，制得姜黄素，然后与β-环糊精包合，姜黄素与β-环糊精的摩尔比为1:1，包合温度为50℃，包合溶剂为体积百分比浓度40％的乙醇溶液，超声包合时间120min，超声功率200W，制得姜黄素环糊精；
(3)将肉桂粉碎至粒度为50目，加重量10倍的水，超声预处理20min，然后水蒸气蒸馏法提取4h，制得肉桂油，然后与β-环糊精包合，β-环糊精:水的质量比为1:17.5，肉桂油:β-环糊精为1:8，包合温度为50℃，超声包合时间15min，超声功率200W，制得肉桂油环糊精；
(4)采用水提法提取萹蓄、仙鹤草、白头翁中的有效成分，制得干浸膏，然后将干浸膏与葡萄糖按质量比1:1混合后，以质量浓度为75％乙醇溶液作为润湿剂制粒，乙醇溶液用量为干浸膏质量的20％，该湿润剂用量可使物料能手捏成团，轻压则散；经80℃干燥，制得混合颗粒；
(5)将步骤(1)制得的青蒿素环糊精、步骤(2)制得的姜黄素环糊精、步骤(3)制得的肉桂油环糊精和步骤(4)制得的混合颗粒混合均匀，制得抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂。
经检测，步骤(1)中青蒿素得率为23.07％，步骤(4)中颗粒剂成型率为98.48％。
实施例2
一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下：
青蒿2800g、萹蓄1100g、仙鹤草450g、白头翁350g、姜黄250g、肉桂280g。
制备方法同实施例1。
实施例3
一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下：
青蒿3200g、萹蓄900g、仙鹤草550g、白头翁250g、姜黄350g、肉桂240g。
制备方法同实施例1。
实施例4
一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下：
青蒿3100g、萹蓄1000g、仙鹤草520g、白头翁280g、姜黄320g、肉桂250g。
制备方法同实施例1。
对比例1
中药组合物，原料药如下：
青蒿3000g、仙鹤草500g、何首乌500g、白头翁300g、肉桂260g。
分别按实施例1所述的方法制备青蒿素环糊精、肉桂油环糊精，采用水提法提取仙鹤草、何首乌和白头翁的药效成分并制备成混合颗粒，混合均匀，制得颗粒剂。
对比例2
中药组合物，原料药如下：
青蒿2000g、白头翁1500g、常山2000g、仙鹤草1000g、苦参1500g。
分别按实施例1所述的方法制备青蒿素环糊精，采用水提法提取仙鹤草、常山、苦参和白头翁的药效成分并制备成混合颗粒，混合均匀，制得颗粒剂。
对比例3
中药组合物，原料药如下：
蒲公英5000g、大青叶5000g、黄芪3000g、苦参3000g、青蒿2000g、甘草2000g。
分别按实施例1所述的方法制备青蒿素环糊精，采用水提法提取蒲公英、大青叶、黄芪、苦参和甘草的药效成分并制备成混合颗粒，混合均匀，制得颗粒剂。
对比例4
按中国专利文献CN105031245A(申请号201510536220.0)实施例1的的方法制备超微粉。
试验例
选用1日龄健康AA肉仔鸡饲养在消毒后的垫料上，饲喂泰安市六和乐林饲料有限公司的雏鸡料。实验前显微镜检查粪便无球虫卵囊。于14日龄称重并随机分成9组，每组10只。施用实施例1～4制得的方剂，分别编为I～IV组，对比例1～4制得的方剂，分别编为Ⅴ～VIII组，IX为感染不给药组，X为空白对照组，分组当天在对应组饲料中添加质量百分比为3％剂量的药物。16日龄时，对试验雏鸡感染柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊8×104个/羽。接种球虫后观察和记录各组鸡的精神、食欲及粪便排出情况。感染后第5d开始每天检查粪便，记录血粪情况，直至扑杀。第5～8d进行粪便卵囊计数，第8d剖检，重点检查盲肠病变。统计存活率、增重率、病变值、卵囊值等，计算抗球虫指数。
实验结果：
实施例1～4组和对比例组都有一定的抗球虫作用。而以实施例1组的抗球虫效果较好；且实施例1组的抗球虫指数为172.8，其它方剂的抗球虫效果均为中等。(表1)
表1不同中药复方对鸡柔嫩艾美尔球虫的筛选结果
抗球虫临床试验
预防试验：7日龄时，选取140只健康AA肉仔鸡(体重差别不超过±5g)，随机分为7组，每组20只，逐只称重。I组为阴性对照组，不感染不用药。II组为阳性对照组，III为鸡球虫散1％拌料给药组，IV、V、VI组为实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂0.04％，0.08％和0.12％饮水给药组，VII为化学药物饮水给药组“球净”0.025％。各用药组分别于分组后第2天在饮水中添加对应的药物，每天定时饲喂至试验结束，并除阴性对照组外，第14天每只鸡经口接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊5.0×104个。每天观察鸡的饮食情况、粪便情况，第21天称重、捕杀，观察盲肠病变并记分，同时采取盲肠内容物测定OPG值(盲肠卵囊数)。
治疗试验：14日龄时，选取140只健康罗曼公雏(体重差别不超过±59)，随机分为7组，每组20只，逐只称重。I组为阴性对照组、II为阳性对照组，III为鸡球虫散2％拌料给药组，IV、V、VI组为实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物0.08％，0.16％和0.24％饮水给药组，VII为化学药物“球净”0.05％饮水给药组。各用药组分别于分组后，接种当天开始用药，在饮水中添加对应的药物，每天定时饲喂至试验结束，并除阴性对照组外，每只鸡经口接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊5.0×104个。每天观察鸡的饮食情况、粪便情况，第8天称重、捕杀，观察盲肠病变并记分，同时采取盲肠内容物测定OPG值(盲肠卵囊数)。
1.对鸡球虫病预防试验
1.1临床症状
在接种后第4天，除不感染不给药组外，其它试验组鸡只均出现不同程度的下痢。第4天下午，感染不给药组、鸡球虫散拌料给药组、实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂0.04％饮水给药组开始有鸡只排出血便，病鸡是精神萎顿，羽毛松乱，两翅下垂，拥挤一起，病鸡少食或废食，嗦囊胀满。第5天下午，球虫感染组所有鸡只都出现不同程度的血便，其中，感染不给药组组血便最严重，当天死亡5只鸡，鸡球虫散和实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒0.04％饮水给药组饮水给药组当天均有4只鸡死亡。病死鸡剖解，可见盲肠明显肿大见，肠管里面有大量血凝块，第7天血便最为严重。在整个试验期间不感染不给药组采食、饮水、排便及精神状态末见异常，试验结束时未在粪便中检出球虫卵囊。
1.2抗球虫指数
各组抗球虫指数(ACI)见表2。鸡球虫散1％拌料给药组中抗球虫指数为160.02；实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂浓度0.04％，0.08％和0.12％饮水给药组抗球虫指数分别160.89、173.63和179.96；“球净”0.025％饮水给药组抗球虫指数为163.93。
表2对鸡球虫病预防试验结果
2.对鸡球虫病治疗试验
2.1临床症状
在接种后第4天，除不感染不给药组外，其它试验组鸡只均出现不同程度的下痢。第4天上午，感染不给药组和实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒0.08％饮水给药组开始有鸡只排出血便，病鸡精神沉郁，嗜睡，采食量减少。第5天，球虫感染组所有鸡只都出现不同程度的血便，其中，感染不给药组和实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物0.08％饮水给药组饮水给药组血便最严重，这两组当天均出现鸡只死亡。病死鸡剖检，可见盲肠明显肿大，肠管里面有大量出血(血凝块)，第6天血便最为严重。在整个试验期间不感染不给药组采食、饮水、排便及精神状态未见异常，试验结束时未在粪便中检出球虫卵囊。
2.2抗球虫指数
各组抗球虫指数见表3。鸡球虫散2％拌料给药组中抗球虫指数为164.34；实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂浓度0.08％、0.16％和0.24％饮水给药组抗球虫指数分别159.32、172.91和181.56；“球净”0.05％饮水给药组抗球虫指数为168.12。
表3对鸡球虫病治疗试验结果
2.2.3生化指标检测结果
表4生化检测结果显示，实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物各剂量组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、胆固醇(TC)以及甘油三酯(TG)等指标均无差异。说明该药并无明显的肝脏毒性。
表4各试验组鸡肝功能指标的变化
2.2.4病理变化
试验结束时(22日龄)处死各组试验鸡进行剖检。感染鸡球虫的主要病变分布在盲肠。病理组织切片结果表明，胸肌缺血现象消失；盲肠肿胀减轻且盲肠芯少量；盲肠壁平滑肌未见或轻微增粗、肠腺体结构清晰、肠绒毛充血现象消失。
结论
实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物颗粒剂0.12％饮水预防用药对鸡球虫病模型具有显著的预防效果、实施例1制得的抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物颗粒剂0.24％饮水治疗用药对人工鸡球虫病具有显著的治疗效果，抗球虫指数分别为179.96和181.56。

Claims (9)

1.一种抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物，原料药如下，均为重量份：
青蒿280～320份、萹蓄90～110份、仙鹤草45～55份、白头翁25～35份、姜黄25～35份、肉桂24～28份。
2.如权利要求1所述的纯中药组合物，其特征在于，原料药如下，均为重量份：
青蒿300份、萹蓄100份、仙鹤草50份、白头翁30份、姜黄30份、肉桂26份。
3.权利要求1所述抗柔嫩艾美尔球虫的纯中药组合物颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)按照每克青蒿与40～60mL石油醚的比例混合后，在温度为55～65℃、旋转速度550～650r/min的条件下提取2～3h，制得青蒿素，然后与β-环糊精超声包合，制得青蒿素环糊精；
(2)将姜黄与乙醇溶液按质量体积比1:(25～30)的比例混合，单位g/mL，在25～35℃条件下浸提1.5～3h，制得姜黄素，然后与β-环糊精超声包合，制得姜黄素环糊精；
(3)将肉桂粉碎后加重量8～12倍的水，超声预处理15～25min，然后水蒸气蒸馏法提取3～5h，制得肉桂油，然后与β-环糊精超声包合，制得肉桂油环糊精；
(4)采用水提法提取萹蓄、仙鹤草、白头翁中的有效成分，制得干浸膏，然后将干浸膏与葡萄糖混合后，以乙醇溶液作为润湿剂制粒，经干燥，制得混合颗粒；
(5)将步骤(1)制得的青蒿素环糊精、步骤(2)制得的姜黄素环糊精、步骤(3)制得的肉桂油环糊精和步骤(4)制得的混合颗粒混合均匀，制得抗柔嫩艾美尔球虫的中药组合物颗粒剂。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，青蒿素与β-环糊精的质量比为1:2，包合温度为50℃，超声时间60min，超声功率200W。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，姜黄素与β-环糊精的摩尔比为1:1，包合温度为50℃，包合溶剂为体积百分比浓度40％的乙醇溶液，超声时间120min，超声功率200W。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，乙醇体积百分比浓度为70％。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，肉桂粉碎至粒度为50目。
8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述包合中，β-环糊精:水的质量比为1:17.5，肉桂油:β-环糊精质量比为1:8，包合温度为50℃，采用超声包合15min，超声功率200W。
9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述干浸膏与葡萄糖的质量比为1:1，乙醇溶液质量浓度为75％，用量为干浸膏质量的20～40％；干燥温度为80℃。
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