CN106318913A - 一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法。具体过程为：将经PCR鉴定为血清4型禽腺病毒的病毒接种于鸡肝细胞，通过细胞悬浮培养技术高效扩增血清4型禽腺病毒。本发明本发明利用鸡肝细胞，建立的血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法，能实现对血清4型禽腺病毒高效扩增，与鸡胚接种比较，病毒滴度比鸡胚接种培养病毒高100倍以上(传统鸡胚毒效价小于106.0TCID50/ml)。这一血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法为研制血清4型禽腺病毒疫苗提供了技术，具有很好的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于病毒扩增生物技术领域，具体涉及一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法。
背景技术
禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5种(A-E)，12个血清型。FAdV感染一般引起亚临床状况，而急性感染主要引起包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等。自2013年起，国内鸡群由FAdV引起的包涵体肝炎、心包积液病例逐渐增多。到2015年，FAdV感染在国内多个省份鸡群暴发。目前FAdV暴发不仅发生在3-4周龄肉鸡，还发生于10-20周龄的蛋鸡，给国内养鸡业造成了严重经济损失。
病毒分离鉴定发现，目前高致病性4型FAdV在国内鸡群流行较广泛。然目前尚无针对血清4型FAdV的商品化疫苗。在疫苗的研制中，病毒效价的高低不仅影响免疫效果，而且直接影响疫苗成本及价格。病毒的鸡胚接种是禽用病毒疫苗常用的扩增技术。虽然血清4型FAdV病毒能在鸡胚中生长复制，但是鸡胚中扩增的血清4型FAdV病毒滴度较低，不能满足疫苗生产高效价的要求。另外，血清4型FAdV病毒虽然能在鸡肝细胞中有效复制，但是普通细胞培养也很难满足疫苗的规模化生产要求。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法。本发明的原理和最核心的关键技术是利用鸡肝细胞，通过激流式生物反应器悬浮培养技术高效扩增血清4型禽腺病毒，所培养的4型FAdV病毒滴度高，且满足大规模生产的需求。
实现本发明的技术解决方案是通过提取所述血清4型禽腺病毒基因组DNA，以其病毒DNA为模板，利用特异性引物进行PCR扩增，后将病毒接种于鸡肝细胞，通过细胞悬浮培养技术高效扩增血清4型禽腺病毒。
本发明一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法，具体包括如下步骤：
(1)血清4型禽腺病毒分离鉴定：取疑似血清4型禽腺病毒感染的病死鸡的肝脏，研碎后按1:5的比例加入PBS制成悬液；经0.45um微孔滤器过滤后，经尿囊腔接种8日龄SPF鸡胚，接种后收取尿囊液。取尿囊液400μL于1.5mL指形管内，加入400μL细胞裂解液(50mmol/LTris-HCl pH 8.0，20mmol/L EDTA pH 8.0，2％SDS和蛋白酶K)裂解后，酚：氯仿：异戊醇抽提病毒基因组DNA，并通过乙醇沉淀后溶于30μL灭菌超纯水。取2μL提取的病毒DNA作为模板,利用特异性引物进行PCR扩增，
特异性引物序列为：
上游引物：5’-AATTTCGACCCCATGACGCGCCAGG-3’；
下游引物：5’-TGGCGAAAGGCGTACGGAAGTAAGC-3’
PCR产物于90V电压下经1％琼脂糖凝胶进行电泳。切下PCR特异性产物片段送至南京金斯瑞公司进行序列分析确定为血清4型禽腺病毒。
(2)血清4型禽腺病毒悬浮培养：将病毒接种于鸡肝细胞，利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒。悬浮培养激流式生物反应器主要培养条件参数为：反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个、细胞培养液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2％FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2、病毒接种量MOI为0.1以及病毒收获时间为接种后96小时。
病毒接种于鸡肝细胞之前对鸡肝细胞进行培养，细胞培养液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液，最适PH为7.0-7.2。
简要步骤如下：接种鸡肝细胞后，每隔24h取样测糖耗。当残糖量低于1.5g/L，定量补充葡萄糖或进行换液。细胞生长6天后进行病毒的接种。通过激流袋将灌注袋及激流袋的细胞培养液全部排出，然后在激流袋中加入6L含200ml胎牛血清的DMEM/F12维持液，在灌注袋中接入4L不含血清的4型禽腺病毒(MOI为0.1TCID50)DMEM/F12，吸附1h后，开始循环培养。感染后96小时后收集病毒、分装，并测定病毒效果。结果显示通过悬浮培养扩增的三批血清4型禽腺病毒效价分别达108.16，108.25以及108.0TCID50/ml。
本发明的有益效果体现在：本发明本发明利用鸡肝细胞，建立的血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法，能实现对血清4型禽腺病毒高效扩增，与鸡胚接种比较，病毒滴度比鸡胚接种培养病毒高100倍以上(传统鸡胚毒效价小于106.0TCID50/ml)。这一血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法为研制血清4型禽腺病毒疫苗提供了技术，具有很好的应用价值。
附图说明
图1是PCR扩增血清4型禽腺病毒特异性DNA片段(泳道1：PCR扩增产物；泳道M：1KbDNA Ladder)。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面通过具体的实施例来具体说明本发明的技术方案。
实施例：
1、血清4型禽腺病毒分离鉴定：取疑似禽腺病毒感染的病死鸡的肝脏，研碎后用按1:5的比例加入PBS制成悬液；5000r/min离心15min，取上清液；加入青霉素和链霉素各1000IU/ml，37℃反应30min；经0.45um微孔滤器过滤后，以0.2ml/胚的剂量，经尿囊腔接种8日龄SPF鸡胚，接种后96-120小时后收取尿囊液；－20℃保存。取尿囊液400μL于1.5mL指形管内，加入400μL细胞裂解液(50mmol/L Tris-HCl pH 8.0，20mmol/L EDTA pH 8.0，2％SDS和蛋白酶K)，充分混匀后放置56℃水浴锅作用4小时；加入400uLTris平衡酚，充分混匀后10000r/min离心10分钟，取上清液于另一1.5mL指形管；加入400μL酚：氯仿：异戊醇，充分混匀后10000r/min离心5分钟，取上清液于另一1.5mL指形管；加入800μL无水乙醇，颠倒混匀后放入-20℃孵育30分钟，12000r/min离心15分钟，弃尽上清液；室温自然干燥后向沉淀加入30μL灭菌超纯水和2uLRNA酶，充分溶解后，即得病毒基因组，置-20℃备用。取2μL提取的病毒DNA作为模板,利用特异性引物进行PCR扩增。
(上游引物：5’-AATTTCGACCCCATGACGCGCCAGG-3’；
下游引物：5’-TGGCGAAAGGCGTACGGAAGTAAGC-3’)
PCR扩增反应体系为：模板1μL，5×Buffer10uL，10mM dNTP Mix 1μL，上游引物为10μmol 2uL，下游引物为10μmol 2uL，高保真酶1μL，加入灭菌超纯水至50μL。PCR扩增反应循环参数为：95℃预变性4分钟，随后进行30个循环(95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分钟)，72℃延伸10分钟。PCR结束后，PCR产物在1％的琼脂糖凝胶中进行电泳分析(如图1所示)。切下PCR特异性产物片段送至南京金斯瑞公司进行序列分析。
2、血清4型禽腺病毒悬浮培养：利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒。悬浮培养激流式生物反应器主要培养条件参数为反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个、细胞培养液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2％FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2、病毒接种量MOI为0.1以及病毒收获时间为接种后96小时。简要步骤如下：接种鸡肝细胞后，每隔24h取样测糖耗。当残糖量低于1.5g/L，定量补充葡萄糖或进行换液。当细胞生长6天后进行病毒的接种。通过激流袋将灌注袋及激流袋的细胞培养液全部排出，然后在激流袋中加入6L含200ml胎牛血清的DMEM/F12维持液，在灌注袋中接入4L不含血清的4型禽腺病毒(MOI为0.1TCID50)DMEM/F12，吸附1h后，开始循环培养。在感染后不同时间段收集上清液，分别对三批悬浮培养的血清4型禽腺病毒的生长动力学进行了测定。将感染后96小时收集的上清液收集病毒、分装，并测定病毒效果。结果显示通过悬浮培养扩增的三批血清4型禽腺病毒效价分别达到108.16，108.25以及108.0TCID50/ml。如表1所示：
表1血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增效果
Claims (5)
1.一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法，其特征在于，将血清4型禽腺病毒接种于鸡肝细胞，通过细胞悬浮培养技术高效扩增血清4型禽腺病毒。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，悬浮培养技术是利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒；培养条件参数为激流式生物反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个；细胞培养液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2％FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，病毒接种于鸡肝细胞之前对鸡肝细胞进行培养，细胞培养液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液，最适PH为7.0-7.2。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，接种鸡肝细胞后，每隔24h取样测糖耗，当残糖量低于1.5g/L，定量补充葡萄糖或进行换液。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，当鸡肝细胞生长6天后进行病毒的接种；具体过程为：
1)通过激流袋将灌注袋及激流袋的细胞培养液全部排出，然后在激流袋中加入6L含200ml胎牛血清的DMEM/F12维持液，在灌注袋中接入4L不含血清的4型禽腺病毒(MOI为0.1TCID50)DMEM/F12，吸附1h后，开始循环培养；
2)将感染后96小时收集的上清液收集病毒、分装，并测定病毒效果。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN107603956A (zh) * | 2017-08-24 | 2018-01-19 | 乾元浩生物股份有限公司 | 一种禽腺病毒纸片载体潮汐式悬浮培养方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102994442A (zh) * | 2011-09-08 | 2013-03-27 | 哈药集团技术中心 | 一种利用激流式生物反应器悬浮培养动物细胞的工艺过程及控制方法 |
| CN105368795A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-03-02 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种ⅰ群4型禽腺病毒毒株及其应用 |
| CN105593364A (zh) * | 2013-06-27 | 2016-05-18 | Kcav有限公司 | 新型家禽腺病毒及其疫苗 |
-
2016
- 2016-09-13 CN CN201610821360.7A patent/CN106318913A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102994442A (zh) * | 2011-09-08 | 2013-03-27 | 哈药集团技术中心 | 一种利用激流式生物反应器悬浮培养动物细胞的工艺过程及控制方法 |
| CN105593364A (zh) * | 2013-06-27 | 2016-05-18 | Kcav有限公司 | 新型家禽腺病毒及其疫苗 |
| CN105368795A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-03-02 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种ⅰ群4型禽腺病毒毒株及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王永生: "应用DF-1细胞和激流式生物反应器大规模增殖IBDV的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
| 田博: "规模化悬浮培养哺乳动物细胞生产腺病毒工艺的实验研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107603956A (zh) * | 2017-08-24 | 2018-01-19 | 乾元浩生物股份有限公司 | 一种禽腺病毒纸片载体潮汐式悬浮培养方法 |
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