CN106310290B - 一种肿瘤靶向性热敏前药及其制备方法与应用 - Google Patents

一种肿瘤靶向性热敏前药及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种肿瘤靶向性热敏前药及其制备方法与应用，该前药由通式X‑(Y‑Z)n描述：X为白蛋白；Z为含氨基的抗肿瘤药物；Y为生物可降解的含两个以上羧基的白蛋白‑药物间隔物，且Y含有偶氮基团；X中的氨基与Y中的一羧基通过酰胺键相连；Z中的氨基与Y中的另外羧基中的一个通过酰胺键相连；n为0.05与15之间的数。该前药主要应用于热化疗领域，该类前药为热响应前药，其可通过热响应机制可使白蛋白‑药物键合物在肿瘤部位定点释放，大大增加药物作用部位如细胞质和细胞核中的浓度，克服肿瘤的耐药性，减少化疗的毒副作用。

Description

一种肿瘤靶向性热敏前药及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种肿瘤靶向性热敏前药及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
癌症严重危害着人类的生命健康，被认为是仅次于心脑血管的致人死亡的主要原因(China Cancer，2009，18，88-89)。在中国，癌症已成为疾病死因之首，发病率和死亡率还在攀升，癌症已成为非常重要的公共健康问题。由于难以早期发现，其治疗一直是医学领域的难点。目前广泛使用的许多化疗药物都存在难溶于水及在水中稳定性差等缺点，且化疗药物在抑制和杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞同样有杀伤作用，尤其是对增殖较为迅速的正常细胞，如骨髓造血细胞和胃肠道粘膜上皮细胞等。这是目前影响用药剂量、治疗效果和患者生活质量的严重问题(Ann.Surg.，1999，229，790-800)。因此，迫切需要开发新的治疗癌症的方式。
人血清白蛋白(HSA)是人体血液中的主要蛋白，该蛋白由585个氨基酸构成，是人体循环系统内的含量最多的可溶性蛋白，在血液中的浓度为34～54g/L。HSA在调节胶体渗透压、营养和促进伤口愈合等方面起着巨大作用，广泛用于肝硬化腹水、烧伤、休克等的临床治疗。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种肿瘤靶向性热敏前药，该前药应用于热化疗，配合肿瘤热疗可有效抑制肿瘤的生长，为癌症的治疗提供了一种新的方式。
本发明的另一目的在于提供所述肿瘤靶向性热敏前药的制备方法。
本发明的再一目的在于提供含所述肿瘤靶向性热敏前药的药物组合物。
本发明的再一目的在于提供所述肿瘤靶向性热敏前药及含其的组合物的应用。
为此，本发明一方面提供一种肿瘤靶向性热敏前药(白蛋白‐药物键合物)，其中，该前药由以下通式描述：
X-(Y-Z)n
X为白蛋白；
Z为含氨基的抗肿瘤药物；
Y为生物可降解的含两个以上羧基的白蛋白-药物间隔物，且Y含有偶氮基团；
X中的氨基与Y中的一羧基通过酰胺键相连；
Z中的氨基与Y中的另外羧基中的一个通过酰胺键相连；
n为0.05与15之间的数；优选n为0.05～6之间的数，进一步优选0.05～5之间的数。
优选地，Y为生物可降解的含两个羧基的白蛋白-药物间隔物，Z中的氨基与Y中的另一通过酰胺键相连。
本发明所述肿瘤靶向性热敏前药应用于热疗与化疗结合(即热化疗)抗肿瘤领域，同时，其有效克服了现有技术中化疗药物难溶于水、在水中稳定性差及毒性大的缺陷。
本发明采用白蛋白这种内源性的生物大分子来键合药物，该热敏前药(白蛋白-药物键合物)中药物分子连接在白蛋白上，具体而言，该热敏前药由3部分组成：白蛋白、生物可降解的含两个以上羧基的白蛋白-药物间隔物及含氨基的抗肿瘤药物。由于肿瘤组织细胞膜表面富含gp60、gp30、gp18等白蛋白受体，为白蛋白-药物键合物(白蛋白热敏前药)提供了一种主动靶向肿瘤组织的能力，因此本发明前药具有肿瘤靶向性。另外，该热敏前药中的间隔物可使药物与白蛋白形成稳定的且暂时的结合，使其在血液循环中保持一定的稳定性，而在温度刺激的作用下又可通过水解使药物基团重新断裂下来，即本发明热敏前药具有一定的稳定性和可水解性。此类热响应机制可使白蛋白-药物键合物(白蛋白热敏前药)在肿瘤部位定点释放，大大增加药物作用部位如细胞质和细胞核中的浓度，克服肿瘤的耐药性，减少化疗的毒副作用。该化合物具有生物相容性好的特点，其热敏感响应性能够实现药物的特异性释放，化合物发生断裂后，药物发挥抗肿瘤作用，白蛋白可自然降解，可降低体内载体的蓄积，并且可同时负载多个含氨基的抗肿瘤药物，可根据实际需要，调节负载含氨基的抗肿瘤药物的数目以达到最佳的治疗效果。本发明有助于推动热化学治疗的研究与发展，同时为癌症的临床诊断和治疗提供新理论和新方法。
实验研究表明本发明所述肿瘤靶向性热敏前药在正常温度及中温条件下对正常细胞无毒，而在中温条件下对肿瘤细胞存在明显的毒性，动物实验表明本发明所述肿瘤靶向性热敏前药结合热疗可显著抑制肿瘤的生长。
根据本发明的具体实施方式，在本发明所述肿瘤靶向性热敏前药中，Y包括4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)或2,2'-偶氮双(N-(2-羧基乙基)-2-甲基丙脒)(2,2'-azobis(N-(2-carboxyethyl)-2-methylpropionamidine)等。
根据本发明的具体实施方式，在本发明所述肿瘤靶向性热敏前药中，X包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、猪血清白蛋白和重组血清白蛋白等中的一种或多种；优选人血清白蛋白。
根据本发明的具体实施方式，在本发明所述肿瘤靶向性热敏前药中，Z包括阿霉素、表阿霉素、甲氨蝶呤、柔红霉素和去甲氧基柔红霉素或它们的盐等中的一种或多种；优选阿霉素。
根据本发明的具体实施方式，在本发明所述肿瘤靶向性热敏前药中，其中：
X为人血清白蛋白；
Z为阿霉素；
Y为4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)；
n为0.05与15之间的数，优选n为0.05～6之间的数，进一步优选0.05～5之间的数。
另一方面，本发明提供肿瘤靶向性热敏前药的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(a)将所述含两个以上羧基的白蛋白-药物间隔物溶于有机溶剂，加入活化羧基的活性试剂及稳定活化后羧酸的活化基团稳定剂进行反应；优选地，所述白蛋白-药物间隔物、所述活性试剂与缩合剂的摩尔比为0.001～10:0.001～10:0.001～10，进一步优选0.1～5：0.1～5：0.1～10；
(b)将所述含氨基的抗肿瘤药物加入到步骤(a)反应后的反应液中进入反应并提纯；优选地，步骤(a)中所述含两个以上羧基的白蛋白-药物间隔物与所述含氨基的抗肿瘤药物的摩尔比为0.001～10:0.001～10，进一步优选0.1～5：0.2～10；
(c)将步骤(b)提纯后的产物溶于有机溶剂中，加入活化羧基的活性试剂及稳定活化后羧酸的活化基团稳定剂进行反应得混合溶液；
(d)将白蛋白溶于pH为6.0～7.4的缓冲溶液(例如PBS水溶液)中，并向其中加入所得混合溶液，后处理得所述肿瘤靶向性热敏前药；优选地，步骤(a)中所述含两个以上羧基的白蛋白-药物间隔物与白蛋白的摩尔质量比为0.001～10mmol:0.67～67g，进一步优选0.1～2mmol：6.7～67g；
优选地，所述后处理包括对步骤(d)所得产物进行纯化，并进行冷冻干燥。
步骤(a)的作用是活化白蛋白-药物间隔物中的一个羧基，步骤(b)是使活化后的间隔物与抗肿瘤物中的氨基反应，以使Y与Z以酰胺键连接；步骤(c)的作用是活化白蛋白-药物间隔物中的另外羧基，步骤(d)是使活化另外羧基的物质与白蛋白中的氨基反应，以使X与Y以酰胺键连接。本发明所述方法简便、反应条件温和、重现性好，可以实现规模化生产，具有非常重要的实用价值。
根据本发明的具体实施方式，在本发明所述方法中，步骤(a)或步骤(c)中所述的活化试剂包括NHS和/或硫代-NHS(Sulfo-NHS)。
根据本发明的具体实施方式，在本发明所述方法中，步骤(a)或步骤(c)中所述的活化基团稳定剂包括EDC、DCC、DIC和CDI中的一种或多种。
在步骤(a)及步骤(c)中还可加入适量的催化剂以加快羧酸的活性，例如吡啶等。步骤(a)及步骤(c)中的优选在极性非质子性溶剂中反应，例如DMSO等。步骤(a)～步骤(d)中的反应时间、反应温度可进一步优化。步骤(a)～步骤(d)优选在惰性环境下进行。本发明所述方法可通过控制白蛋白、间隔物与抗肿瘤药物的比例，反应时间、试剂的浓度、反应的条件(加热温度、时间)，制备载药量不同的肿瘤靶向性热敏前药。
优选地，本发明所述方法按如下步骤进行：
(a)将0.001～10mmol所述含两个以上羧基的白蛋白-药物间隔物(优选4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸))溶于0.1～100mL二甲基亚砜，再加入0.001～10mmol NHS和0.001～10mmol EDC及1～200μL吡啶，氮气保护下室温反应0.5～48h；
(b)将0.001～10mmol所述抗肿瘤药物(优选盐酸阿霉素)加入步骤(a)反应后的反应溶液中，氮气保护下室温避光反应0.5～48h，并提纯；
(c)将步骤(b)提纯后的产物溶于0.1～100mL二甲基亚砜中，再加入0.001～10mmol NHS和0.001～10mmol EDC及1～200μL吡啶，氮气保护下室温反应0.5～48h得混合溶液；
(d)将0.0067～67g白蛋白溶液1～1000mlPBS中，并向其中加入步骤(c)所得混合溶液，氮气保护下室温搅拌反应0.5～48h；
(e)对步骤(d)所得产物进行提纯，冷冻干燥得所述肿瘤靶向性热敏前药。
再一方面，本发明提供一种药物组合物，该药物组合物含治疗有效量的本发明所述肿瘤靶向性热敏前药。
再一方面，本发明提供所述肿瘤靶向性热敏前药或所述药物组合物在制备用于治疗肿瘤的热化疗药物中的应用。
本发明所述热敏前药或含其的组合物应用于热化疗，在具体应用时，当将治疗有效量的热敏前药或药物组合物给予受体后，需辅助热疗以达到治疗目的，例如使用高频电磁波、超声波、热水浴等使组织加热，达到杀死癌细胞的温度，致使肿瘤组织变形坏死，继而使瘤体缩小或消除，在不损伤人体正常组织的情况下，以治疗恶性肿瘤。
根据本发明的具体实施方式，本发明所述肿瘤包括结肠癌、直肠癌、脑瘤、肺癌、表皮鳞癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肾细胞癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、肝癌、皮肤癌、甲状腺癌、头颈癌、前列腺癌、神经胶质瘤及鼻咽癌中的一种或多种。
综上所述，本发明主要提供了一种肿瘤靶向性热敏前药，该前药主要应用于热化疗领域，该类前药为热响应前药，其可通过热响应机制可使白蛋白-药物键合物在肿瘤部位定点释放，大大增加药物作用部位如细胞质和细胞核中的浓度，克服肿瘤的耐药性，减少化疗的毒副作用。本发明有助于推动热化学治疗的研究与发展，同时为癌症的临床诊断和治疗提供新理论和新方法。
附图说明
图1为实施例6所得到的细胞毒性图；
图2为实施例7所得到的细胞毒性图；
图3为实施例7所得肿瘤生长曲线图。
图4为白蛋白-阿霉素键合物与阿霉素本身在水溶液中的溶解性测试结果图。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合具体实施例对本发明的技术方案进行以下详细说明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。
实施例1
(1)准确称取0.00028g(0.001mmol)4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)，将其溶于0.1mL二甲基亚砜，再加入0.00012g(0.001mmol)NHS和0.00019g(0.001mmol)EDC及1μL吡啶，氮气保护下室温反应0.5h。
(2)将0.00054g(0.001mmol)盐酸阿霉素加入上述反应溶液中，氮气保护下室温避光反应0.5h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的一端羧基与盐酸阿霉素的氨基反应)。
(3)采用过硅胶柱色谱分离的方法对产物进行提纯并真空干燥。
(4)将步骤(3)干燥后的产物溶于0.1mL二甲基亚砜，再加入0.00012g(0.001mmol)NHS和0.00019g(0.001mmol)EDC及1μL吡啶，氮气保护下室温反应0.5h得混合溶液。
(5)将0.0067g人血清白蛋白溶于1mL PBS中，并向其中加入以上混合溶液，氮气保护下室温搅拌反应0.5h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的另一端羧基与白蛋白的氨基反应)得本实施例白蛋白-阿霉素键合物。
(6)采用透析的方法(PBS 7.4)对产物进行提纯，将收集的物质于-20℃冰箱预冻2h，转移至-80℃冰箱冷冻24h，冷冻干燥机中冷冻干燥48h，得到冻干粉。采用荧光光谱法测定化合物中阿霉素的含量，n＝0.055。
实施例2
(1)准确称取2.8g(10mmol)4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)，将其溶于100mL二甲基亚砜，再加入1.2g(10mmol)NHS和1.9g(10mmol)EDC及200μL吡啶，氮气保护下室温反应48h。
(2)将5.4g(10mmol)盐酸阿霉素加入上述反应溶液中，氮气保护下室温避光反应48h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的一端羧基与盐酸阿霉素的氨基反应)。
(3)采用过硅胶柱色谱分离的方法对产物进行提纯并真空干燥。
(4)将步骤(3)干燥后的产物溶于100mL二甲基亚砜，再加入1.2g(10mmol)NHS和1.9g(10mmol)EDC及200μL吡啶，氮气保护下室温反应48h得混合溶液。
(5)将0.67g人血清白蛋白溶于1000mL PBS中，并向其中加入以上混合溶液，氮气保护下室温搅拌反应48h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的另一端羧基与白蛋白的氨基反应)得本实施例白蛋白-阿霉素键合物。
(6)采用透析的方法(PBS 7.4)对产物进行提纯，将收集的物质于-20℃冰箱预冻2h，转移至-80℃冰箱冷冻24h，冷冻干燥机中冷冻干燥48h，得到冻干粉。采用荧光光谱法测定化合物中阿霉素的含量，n＝3.1。
实施例3
(1)准确称取0.28g(1mmol)4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)，将其溶于100mL二甲基亚砜，再加入0.24g(2mmol)NHS和0.19g(1mmol)EDC及20μL吡啶，氮气保护下室温反应24h。
(2)将0.54g(1mmol)盐酸阿霉素加入上诉反应溶液中，氮气保护下室温避光反应24h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的一端羧基与盐酸阿霉素的氨基反应)。
(3)采用过硅胶柱色谱分离的方法对产物进行提纯并真空干燥。
(4)将产物溶于100mL二甲基亚砜，再加入0.12g(1mmol)NHS和0.19g(1mmol)EDC及20μL吡啶，氮气保护下室温反应24h得混合溶液。
(5)将6.7g人血清白蛋白溶于100mL PBS中，并向其中加入以上混合溶液，氮气保护下室温搅拌反应24h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的另一端羧基与白蛋白的氨基反应)得本实施例白蛋白-阿霉素键合物。
(6)采用透析的方法对产物进行提纯，将收集的物质于-20℃冰箱预冻2h，转移至-80℃冰箱冷冻24h，冷冻干燥机中冷冻干燥48h，得到冻干粉。采用荧光光谱法测定化合物中阿霉素的含量，n＝0.45。
实施例4
(1)准确称取0.00028g(0.001mmol)4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)，溶于0.1mL二甲基亚砜，再加入0.00012g(0.001mmol)NHS和0.00019gEDC(0.001mmol)及1μL吡啶，氮气保护下室温反应0.5h。
(2)将0.000454g(0.001mmol)甲氨蝶呤加入上述反应溶液中，氮气保护下室温避光反应0.5h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的一端羧基与甲氨蝶呤的氨基反应)。
(3)采用过硅胶柱色谱分离的方法对产物进行提纯并真空干燥。
(4)将步骤(3)所得产物溶于0.1mL二甲基亚砜，再加入0.00012g(0.001mmol)NHS和0.00019g(0.001mmol)EDC及1μL吡啶，氮气保护下室温反应0.5h得混合溶液。
(5)将0.0067g人血清白蛋白溶于1mL PBS中，并向其中加入以上混合溶液，氮气保护下室温搅拌反应0.5h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的另一端羧基与白蛋白的氨基反应)得本实施例白蛋白-甲氨蝶呤键合物。
(6)采用透析的方法对产物进行提纯，将收集的物质于-20℃冰箱预冻2h，转移至-80℃冰箱冷冻24h，冷冻干燥机中冷冻干燥48h，得到冻干粉。采用HPLC测定化合物中阿霉素的含量，n＝0.065。
实施例5
(1)准确称取2.8g(10mmol)4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)，溶于100mL二甲基亚砜，再加入1.2g(10mmol)NHS和1.9g(10mmol)EDC及200μL吡啶，氮气保护下室温反应48h。
(2)将5.64g(10mmol)柔红霉素加入上述反应溶液中，氮气保护下室温避光反应48h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的一端羧基与柔红霉素的氨基反应)。
(3)采用过硅胶柱色谱分离的方法对产物进行提纯并真空干燥。
(4)将步骤(3)所得产物溶于100mL二甲基亚砜，再加入1.2g(10mmol)NHS和1.9g(10mmol)EDC及200μL吡啶，氮气保护下室温反应48h得混合溶液。
(5)将67g人血清白蛋白溶于1000mL PBS中，并向其中加入以上混合溶液，氮气保护下室温搅拌反应48h(4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)的另一端羧基与白蛋白的氨基反应)得本实施例白蛋白-柔红霉素键合物。
(6)采用透析的方法对产物进行提纯，将收集的物质于-20℃冰箱预冻2h，转移至-80℃冰箱冷冻24h，冷冻干燥机中冷冻干燥48h，得到冻干粉。采用荧光光谱法测定化合物中阿霉素的含量，n＝0.48。
实施例6：比较白蛋白-阿霉素键合物对两株脑胶质瘤细胞C6，U87和内皮细胞bEnd.3的细胞毒性作用。
本实施例使用的C6，U87，bEnd.3皆属于脑胶质瘤研究中常用细胞株，均能通过市场购买获得。将实施例3获得的白蛋白-阿霉素键合物用DMEM培养基等比例稀释成适当浓度，采用噻唑蓝(MTT)快速比色法测定白蛋白-阿霉素键合物对C6，U87，bEnd.3的细胞毒性作用。
将对数生长期的C6，U87，bEnd.3细胞以1～5×104个/孔加入96孔板中，过夜培养至贴壁，然后分别用含有相应浓度的白蛋白-阿霉素键合物DMEM培养基在37℃培养48h，每孔加入20μl MTT(5mg/ml)，37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中孵育4h，吸出培养基，加入150μl DMSO，10min后490nm酶标仪检测，并绘制细胞毒性图，所得结果如图1所示，从图1中可以看到明显对细胞的无明显杀伤作用，证明白蛋白-阿霉素键合物对细胞无毒。
实施例7：白蛋白-阿霉素键合物与热疗联合作用。
本实施例使用的C6，U87，bEnd.3皆属于脑胶质瘤研究中常用细胞株，均能通过市场购买获得。将实施例3获得的白蛋白-阿霉素键合物用DMEM培养基等比例稀释成适当浓度，采用噻唑蓝(MTT)快速比色法测定白蛋白-阿霉素键合物对C6，U87，Bend3的细胞毒性作用。
将对数生长期的C6，U87，bEnd.3细胞以1～5×104个/孔加入96孔板中，过夜培养至贴壁，然后分别用含有相应浓度的白蛋白-阿霉素键合物DMEM培养基于37℃培养47h 42℃培养1h，每孔加入20μl MTT(5mg/ml)，37℃，5％CO2及饱和湿度的培养箱中孵育4h，吸出培养基，加入150μl的DMSO，10min后490nm酶标仪检测，并绘制细胞毒性图，所得结果如图2所示，对比图1及图2可以看出白蛋白-阿霉素键合物对C6，U87细胞的有明显杀伤作用，对bEnd.3细胞的无明显杀伤作用，证明白蛋白-阿霉素键合物在中温条件下对正常无毒，而对肿瘤细胞存在明显的毒性。
实施例8
本实施例动物肿瘤模型热化疗联合治疗实验的具体方案：24只6～8周裸鼠(Balb/c)，6只一组，共分4个实验组进行脑胶质瘤实体肿瘤的建模，4个实验组分别为：生理盐水组(阴性对照)；聚焦超声组(温度控制在42℃，20min)；白蛋白-阿霉素键合物组；白蛋白-阿霉素键合物和聚焦超声组(温度控制在42℃，20min)。在肿瘤模型长至50mm3后，将白蛋白-阿霉素键合物溶液(CDOX＝2mg/kg)通过尾静脉注射到小鼠体内，采用聚焦超声选择性对小鼠肿瘤组织进行超声，观察肿瘤生长状况并绘制肿瘤生长曲线，所得结果如图3所示，从图3中可以看出白蛋白-阿霉素键合物和聚焦超声组较其他组可显著抑制肿瘤生长。
配制0.1mg/ml(以阿霉素的量计算)的阿霉素和白蛋白-阿霉素键合物(实施例2)的PBS7.4的水溶液，于24小时候用照相机对这两种溶液进行拍照，所得结果如图4所述，从图4中可以看出阿霉素发生了沉淀，而白蛋白-阿霉素键合物在水中的呈透明状，溶解性显著提高。
最后说明的是：以上实施例仅用于说明本发明的实施过程和特点，而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，均应涵盖在本发明的保护范围当中。

Claims (24)

1.一种肿瘤靶向性热敏前药，其中，该前药由以下通式描述：
X-(Y-Z)n
X为白蛋白；
Z为含氨基的抗肿瘤药物或其盐；
Y为4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)或2,2'-偶氮双(N-(2-羧基乙基)-2-甲基丙脒)；
X中的氨基与Y中的一羧基通过酰胺键相连；
Z中的氨基与Y中的另外羧基中的一个通过酰胺键相连；
n为0.05与15之间的数。
2.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，n为0.05～6之间的数。
3.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，n为0.05～5之间的数。
4.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，Y为生物可降解的含两个羧基的白蛋白-药物间隔物，Z中的氨基与Y中的另一羧基通过酰胺键相连。
5.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，X包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、猪血清白蛋白和重组血清白蛋白中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，X为人血清白蛋白。
7.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，Z包括阿霉素、表阿霉素、甲氨蝶呤、柔红霉素和去甲氧基柔红霉素或它们的盐中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，Z为阿霉素。
9.根据权利要求1所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中：
X为人血清白蛋白；
Z为阿霉素；
Y为4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)；
n为0.05与15之间的数。
10.根据权利要求9所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，n为0.05～6之间的数。
11.根据权利要求9所述的肿瘤靶向性热敏前药，其中，n为0.05～5之间的数。
12.权利要求1～11中任一项所述的肿瘤靶向性热敏前药的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(a)将所述含两个羧基的白蛋白-药物间隔物溶于有机溶剂，加入活化羧基的活性试剂及稳定活化后羧酸的活化基团稳定剂进行反应；
(b)将所述含氨基的抗肿瘤药物或其盐加入到步骤(a)反应后的反应液中进入反应并提纯；(c)将步骤(b)提纯后的产物溶于有机溶剂中，加入活化羧基的活性试剂及稳定活化后羧酸的活化基团稳定剂进行反应得混合溶液；
(d)将白蛋白溶于pH为6.0～7.4的缓冲溶液中，并向其中加入步骤(c)所得混合溶液，后处理得所述肿瘤靶向性热敏前药。
13.根据权利要求12所述的制备方法，其中，所述白蛋白-药物间隔物、所述活性试剂与活化基团稳定剂的摩尔比为0.001～10:0.001～10:0.001～10。
14.根据权利要求12所述的制备方法，其中，所述白蛋白-药物间隔物、所述活性试剂与活化基团稳定剂的摩尔比为0.1～5：0.1～5：0.1～10。
15.根据权利要求12所述的制备方法，其中，步骤(a)中所述含两个羧基的白蛋白-药物间隔物与所述含氨基的抗肿瘤药物的摩尔比为0.001～10:0.001～10。
16.根据权利要求12所述的制备方法，其中，步骤(a)中所述含两个羧基的白蛋白-药物间隔物与所述含氨基的抗肿瘤药物的摩尔比为0.1～5：0.2～10。
17.根据权利要求12所述的制备方法，其中，步骤(a)中所述含两个羧基的白蛋白-药物间隔物与白蛋白的摩尔质量比为0.001～10mmol:0.67～67g。
18.根据权利要求12所述的制备方法，其中，步骤(a)中所述含两个羧基的白蛋白-药物间隔物与白蛋白的摩尔质量比为0.1～2mmol：6.7～67g。
19.根据权利要求12所述的制备方法，其中，所述后处理包括对步骤(d)所得产物进行纯化，并进行冷冻干燥。
20.根据权利要求12所述的制备方法，其中，步骤(a)或步骤(c)中所述的活性试剂包括EDC、DCC、DIC和CDI中的一种或多种。
21.根据权利要求12所述的制备方法，其中，步骤(a)或步骤(c)中所述的活化基团稳定剂包括NHS和/或硫代-NHS。
22.一种药物组合物，其含治疗有效量的权利要求1～11中任一项所述肿瘤靶向性热敏前药。
23.权利要求1～11中任一项所述肿瘤靶向性热敏前药或权利要求22中所述药物组合物在制备用于治疗肿瘤的热化疗药物中的应用。
24.根据权利要求23所述的应用，其中，所述肿瘤包括结肠癌、直肠癌、脑瘤、肺癌、表皮鳞癌、膀胱癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肾细胞癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、肝癌、皮肤癌、甲状腺癌、头颈癌、前列腺癌、神经胶质瘤及鼻咽癌中的一种或多种。
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