CN108210506B - pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用 - Google Patents
pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108210506B CN108210506B CN201711407665.4A CN201711407665A CN108210506B CN 108210506 B CN108210506 B CN 108210506B CN 201711407665 A CN201711407665 A CN 201711407665A CN 108210506 B CN108210506 B CN 108210506B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- nano
- cis
- photosensitizer
- drug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 51
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 39
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims abstract description 31
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 43
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 33
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 33
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 29
- FMJUDUJLTNVWCH-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxy-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound CCOC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FMJUDUJLTNVWCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- -1 cis-aconitic anhydride modified adriamycin Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 claims description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 claims description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- ASUGWWOMVNVWAW-UHFFFAOYSA-N 1-(2-methoxyethyl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound COCCN1C(=O)C=CC1=O ASUGWWOMVNVWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N Doxorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002918 doxorubicin hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N chlorin Chemical group C\1=C/2\N/C(=C\C3=N/C(=C\C=4NC(/C=C\5/C=CC/1=N/5)=CC=4)/C=C3)/CC\2 SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N 0.000 claims 1
- JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 28
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 abstract description 17
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 abstract description 4
- 238000003333 near-infrared imaging Methods 0.000 abstract description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 6
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 4
- OYINILBBZAQBEV-UWJYYQICSA-N (17s,18s)-18-(2-carboxyethyl)-20-(carboxymethyl)-12-ethenyl-7-ethyl-3,8,13,17-tetramethyl-17,18,22,23-tetrahydroporphyrin-2-carboxylic acid Chemical group N1C2=C(C)C(C=C)=C1C=C(N1)C(C)=C(CC)C1=CC(C(C)=C1C(O)=O)=NC1=C(CC(O)=O)C([C@@H](CCC(O)=O)[C@@H]1C)=NC1=C2 OYINILBBZAQBEV-UWJYYQICSA-N 0.000 description 3
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 3
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 3
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000012984 biological imaging Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000004035 chlorins Chemical class 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0036—Porphyrins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用,所述纳米药物递送载体包括金纳米团簇GNCs,与所述金纳米团簇GNCs表面连接的光敏剂、对pH敏感的化疗药物以及靶向多肽,其可用于制备肿瘤治疗或成像药物。与现有技术相比,本发明合成的纳米药物载体上连接有光敏剂,该光敏剂可以用于动物的近红外成像和光动力治疗,此外,该纳米药物递送系统能很好的靶向到肿瘤部位,并且通过酸性敏感键将化疗药物释放到肿瘤细胞,同时因其上连接有光敏剂可以对肿瘤进行光动力治疗从而实现对肿瘤的联合治疗并有效的抑制肿瘤的生长。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药肿瘤治疗药物领域,尤其是涉及一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用。
背景技术
近年来,癌症的发病率逐渐升高。化疗和放疗在当前癌症治疗中扮演越来越重要的角色。然而化疗和放疗常伴随许多明显的副作用,如身体衰弱,消化障碍,免疫功能下降等,且患者生存质量差。由于纳米药物载体能提高药物的吸收、稳定性,具有一定的组织靶向性,能够减少化疗和放疗的副作用。因此利用纳米材料来递送化疗药物和放疗药物受到国内外学者的广泛关注。金纳米团簇是近年来合成的一种新型的纳米粒子,粒径为2纳米左右,通过功能化修饰后容易与放化疗药物结合,具有良好的生物相容性和红色荧光性能,因此其在纳米医学领域吸引了越来越多的关注,包括生物成像、传感器、药物传输和癌症治疗等。
纳米药物载体递送系统虽然具有靶向,穿透性强等优势。但有可能在到达目的部位前释放药物,或在到达靶区后不能及时有效释放药物。而肿瘤部位的微环境与正常组织差别较大。因此利用肿瘤微环境设计纳米药物载体系统可能提高药物在肿瘤的部位的有效释放,从而达到更好的治疗效果。如基质金属蛋白酶(MMPs)属于锌和钙黏着家族成员,通常与癌症扩散、转移和血管生成有关,在肿瘤细胞高度表达。因此基质金属蛋白酶可被用于设计肿瘤微环境靶向纳米药物载体。肿瘤细胞的pH值为弱酸性,正常组织的生理pH值是呈中性。而利用此特性亦设计酸性响应性纳米药物未见相关报道。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用。本发明主要解决的技术问题为利用肿瘤微环境与正常组织的区别设计肿瘤微环境响应型纳米药物递送系统,通过荧光成像发现该纳米药物递送系统能够靶向到肿瘤部位,且在近红外光的照射下肿瘤的生长受到了抑制。因此该纳米药物递送系统可以用于肿瘤的治疗和成像。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
本发明的目的之一在于提出了一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体,其主要包括金纳米团簇GNCs,与所述金纳米团簇GNCs表面连接的光敏剂、对pH敏感的化疗药物以及靶向多肽。
优选的,所述的光敏剂为二氢卟吩e6(Ce6)。
优选的,所述对pH敏感的化疗药物为顺式乌头酸酐修饰的阿霉素(DOX)。
优选的,所述靶向多肽为mPEG连接的多肽。
优选的,所述纳米药物递送载体中,光敏剂的含量为2-8mg/Kg,对pH敏感的化疗药物的含量为5-10mg/Kg,靶向多肽的含量为3-12mg/kg。
优选的,所述的金纳米团簇GNCs通过采用GSH(谷胱甘肽)和TBAB(四正丁基硼氢化铵)还原氯金酸制成。
光敏剂限定的种类为二氢卟吩e6(Ce6),用于光动力治疗以及荧光成像,化疗药物是阿霉素DOX用于对肿瘤细胞进行化学治疗,靶向多肽序列是CPLGVRGRGDS,用作最终合成的载体的靶向。金纳米团簇表面的羧基是有限的,约18个,DOX,Ce6和mPEG修饰的多肽都是通过共价键结合到金纳米团簇上,因此这三种物质的含量过高会影响其他成分与金纳米团簇的结合,当其与金纳米团簇的摩尔比高于18:1时,会超过金纳米团簇的上载极限。当含量过低时,影响靶向和治疗效果。
本发明的目的之二在于提出了一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体的制备方法,其具体可包括以下步骤:
(1):合成金纳米团簇GNCs;
(2):取mPEG-马来酰亚胺和多肽溶于二甲亚砜中,反应,分离,干燥,即得到mPEG-多肽;
(3):取化疗药物、顺式乌头酸酐、三乙胺和吡啶,混合,反应,分离,纯化,干燥,即得到对pH敏感的顺式乌头酸酐修饰的化疗药物;
(4):将光敏剂与步骤(3)制得的顺式乌头酸酐修饰的化疗药物分别用EDC/NHS活化处理后,滴加到步骤(1)所制得的金纳米团簇GNCs水溶液中,室温避光搅拌,透析,得到接有光敏剂和顺式乌头酸酐修饰的化疗药物的纳米载体;
(5):最后,将步骤(2)所得mPEG-多肽用EDC/NHS活化后,加入到步骤(4)制得的含光敏剂和顺式乌头酸酐修饰的化疗药物的纳米载体溶液中,避光搅拌,透析纯化,干燥,即得到最后目的产物。
优选的,步骤(1)中金纳米团簇GNCs具体通过以下方法合成:
按照以下氯金酸量为计量基准,取150mM的GSH溶液4ml加入到10ml浓度为20nM的氯金酸溶液中,剧烈搅拌5min,随后,再加入预冷后的6ml浓度为0.186M的TBAB溶液,快速搅拌10min,静置,纯化,即得到。
优选的,步骤(2)中mPEG-马来酰亚胺和多肽的摩尔比为1:1.2;
反应条件为在30℃下剧烈搅拌24h。
优选的,步骤(3)中,所述的化疗药物为阿霉素。
优选的,步骤(3)中,混合反应的过程具体为:
先取摩尔比为1:2的盐酸阿霉素与三乙胺溶于二甲亚砜中,避光搅拌,纯化,干燥,得到DOX;
然后,将制得的DOX分散于吡啶中,再逐滴加入顺式乌头酸酐溶液,控制DOX、吡啶与顺式乌头酸酐的添加量比为20mg:2ml:25mg,搅拌过夜,即完成反应。此混合反应过程中,搅拌的温度为优选为4℃。
优选的,步骤(4)中,光敏剂、顺式乌头酸酐修饰的化疗药物和金纳米团簇的添加量之比摩尔比为3:3:1。
优选的,步骤(5)中,mPEG-多肽与含光敏剂和顺式乌头酸酐修饰的化疗药物的纳米载体的摩尔比为1-3:1。
优选的,最后制得的纳米药物递送载体的粒径为50-100nm。
本发明中各步骤的反应温度要适中,温度过高药物失效,过低影响反应的发生
本发明的目的之三在于提出了一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体在制备肿瘤治疗或成像药物上的应用,所述的纳米药物递送载体主要包括金纳米团簇GNCs,与所述金纳米团簇GNCs表面连接的光敏剂、对pH敏感的化疗药物以及靶向多肽。
优选的,所述的光敏剂为二氢卟吩e6(Ce6)。
优选的,所述对pH敏感的化疗药物为顺式乌头酸酐修饰的阿霉素(DOX)。
优选的,所述靶向多肽为mPEG连接的多肽。
优选的,所述纳米药物递送载体中,光敏剂的含量为2-8mg/Kg,对pH敏感的化疗药物的含量为5-10mg/Kg,靶向多肽的含量为3-12mg/kg。
优选的,所述的金纳米团簇GNCs通过采用GSH(谷胱甘肽)和TBAB(四正丁基硼氢化铵)还原氯金酸制成。
优选的,治疗的肿瘤细胞为非小细胞癌细胞、胃癌细胞或肝癌细胞中的一种。
优选的,治疗时,所述纳米药物递送载体采用尾静脉注射方式注入,同时,在肿瘤部位采用能量密度为50-100mW/cm2的近红外激光照射30min。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
(1)本发明以GNCs为载体,将光敏剂和化疗药物通过化学键连接到GNCs上,然后将mPEG修饰的多肽连接到含有光敏剂和化疗药物的载体上用于动物的近红外成像及联合治疗。
(2)本发明中所用的纳米载体的制备条件温和,步骤简单,容易操作。
(3)本发明中所制备的纳米药物载体具有很好的生物相容性。
(4)本发明中所制备的纳米药物载体是近红外成像,背景低,干扰少,穿透深度深。
(5)本发明中所制备的纳米药物载体含有靶向多肽,靶向效果好。
(6)本发明中所制备的纳米药物载体的靶向多肽可进一步带领纳米药物载体进入肿瘤细胞,因此靶向效果好。
(7)本发明中所制备的纳米药物载体中化疗药物与载体的连接是通过pH敏感键连接的,而肿瘤区域是偏酸性的,因此在纳米药物载体到达肿瘤区域后才释放。所以对正常组织的副作用小。此外,本发明中所制备的纳米药物载体连接的光敏剂在近红外光的刺激下才会产生ROS,在纳米药物载体到达肿瘤部位后再配合近红外光照射,产生的ROS可作用于肿瘤细胞,从而进一步抑制肿瘤的生长。
附图说明
图1是本发明的纳米药物递送载体的结构示意图。
图2是本发明的纳米药物递送载体的制备方法流程图。
图3是本发明的纳米药物递送载体的TEM表征图片
图4是本发明的纳米药物递送载体的水动力学粒径分布图片。
图5是不同药物组分的紫外吸收图片。
图6是不同药物组分的荧光光谱图片。
图7是本发明的纳米药物递送载体用于联合治疗肺癌细胞A549的MTT结果图片。
图8是本发明的纳米药物递送载体的动物组织荧光成像图片。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不限于以下的实施例。
如图1所示的基于金纳米团簇制备的pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体,其核心为GNCs,然后在其表面连接上二氢卟吩e6(Ce6),顺式乌头酸酐修饰的阿霉素(DOX)以及多肽修饰的聚乙二醇。
上述纳米药物递送载体的制备过程可参见图2所示,具体工艺条件详见下述实施例1-实施例3。
实施例1
金纳米团簇GNCs的制备与纯化:
(1-1)金纳米团簇的制备:
首先,将174mL去离子水加入到250mL锥形瓶中,然后继续加入新鲜配置的20mM氯金酸10ml,在加入新配置的150mM的谷胱甘肽4ml并剧烈搅拌5分钟。随后,在上述溶液中加入预冷的TBAB溶液6ml(0.186M)快速搅拌10分钟,而后于冰上静置。2个小时后用盐酸调节pH值到3.0左右继续于冰上放置12小时。
(1-2)金纳米团簇的纯化:
如实施例一合成的金纳米团簇中加入氯化钠和甲醇,然后9000rpm离心10分钟,除去不溶的杂质,完成初次纯化。其次,将初次纯化的金纳米团簇置于透析袋中用去离子水透析3天并冷冻真空干燥。
实施例2
(2-1)合成对pH敏感的顺式乌头酸酐修饰的DOX。
盐酸阿霉素和三乙胺以摩尔比为1:2溶于二甲亚砜中避光搅拌过夜,透析纯化后冷冻真空干燥获得DOX。
然后将20mg DOX溶于2ml吡啶超声1分钟。2.5ml顺乌头酸酐(10mg/ml)逐滴加入到DOX溶液中于4℃下搅拌过夜。接着,加入4ml氯仿和4ml(5%)碳酸氢钠水溶液。将此溶液转移到烧瓶中,通过旋转蒸发除去有机相,如此重复三次,离心沉淀去除杂质,上清用盐酸调pH值调到2.5-3.0。最后,4℃下离心沉淀,溶液通过冷冻真空干燥获取终产物顺乌头酸酐修饰的DOX。
(2-2)将Ce6和顺乌头酸酐修饰的DOX连接到金纳米团簇上形成Ce6-DOX-GNCs。
Ce6和DOX分别用EDC和NHS活化后,逐滴加入到1ml金纳米团簇水溶液中,并保证Ce6、顺乌头酸酐修饰的DOX和金纳米团簇的摩尔比为3:3:1,室温温和避光搅拌过夜。形成的纳米药物载体置于透析袋(MWCO,3500Da)中纯水避光透析3天。
实施例3
(3-1)合成mPEG-修饰的多肽
5ml(1mg/ml)多肽逐滴加入到溶于二甲亚砜的马来酰亚胺修饰的mPEG中,避光剧烈搅拌24小时,产物通过透析纯化,得到mPEG-修饰的多肽。
(3-2)将mPEG-修饰的多肽连接到Ce6-DOX-GNCs上形成CDGM NPs纳米颗粒。
mPEG修饰的多肽(5mg)溶于1ml二甲亚砜中,然后加入10mg EDC和10mg NHS并于室温搅拌3个小时。并将其加入到1ml含Ce6-DOX-GNCs水溶液中避光搅拌24小时,保证mPEG-多肽与Ce6-DOX-GNCs的摩尔比为3:1。然后通过超纯水透析纯化2天。最终获得的含有mPEG-修饰的多肽的纳米药物载体通过冷冻真空干燥,即得到最后目的产物纳米药物递送载体CDGMNPs。
图3-6分别表示了上述实施例1-3中所制得的产物的TEM表征图、水动力学粒径分布、紫外吸收图谱以及荧光光谱,从图3和4中可以看出,合成的载体的粒径大小约50-100nm。图5表明合成的靶向载体含有Ce6的特征吸收峰665nm和DOX的吸收峰488nm,由此可以看出Ce6和DOX成功连接到了金纳米团簇上。图6则说明合成的pH敏感的药物递送系统含有DOX和Ce6的荧光,且Ce6的荧光强度几乎和游离的Ce6相同。因此Ce6和载体的连接不影响其荧光成像效果实施例4
评价Ce6与DOX混合物(Mix),以及CDGM NPs在激光照射下对非小细胞型肺癌A549的治疗效果。
为检测Mix以及合成的纳米药物载体CDGM NPs对非小细胞型肺癌的治疗效果。将A549细胞(5000个/孔)种植于96孔板,孵育24h。去掉培养液,替换含有PBS,Mix或CDGM NPs的培养液。暗处培养12h,630nm激光照射Mix和CDGM NPs组。激光功率为100mW/cm2照射10分钟。暗处培养12小时后,MTT法检测细胞活性。
图7结果显示:在不同Ce6剂量下,CDGM NPs组光动力治疗和化疗联合治疗的疗效高于单纯混合的Ce6和DOX组(Mix)。
实施例5
评价CDGM NPs用于肿瘤的荧光成像。
为构建A549皮下肺癌模型,雌性BALB/c裸鼠(5周龄),用注射器于裸鼠臀部皮下注射一定数量的A549细胞,待肿瘤长至约200mm3即可用于成像。150μL Ce6-GNCs-DOX(CDGNPs)和CDGM NPs尾静脉分别注入皮下肺癌模型中,每组三只,用于裸鼠的荧光成像。采集图像用小动物荧光成像系统Bruker In-Vivo F PRO imaging system仪器。36小时后杀死裸鼠,取心肝脾肺肾采集Ce6荧光信号。从图8可以看出,CDG NPs处理组中,肝脏部位有很强的荧光信号,说明CDG NPs靶向肿瘤能力较差。然而,在CDGM NPs处理组肿瘤部位能观察到很强的荧光信号,表明CDGM NPs有很强的靶向肿瘤的能力。
实施例6
与实施例3有所不同的是,本实施例中,mPEG-多肽与Ce6-DOX-GNCs的摩尔比为1:1。
实施例7
与实施例3有所不同的是,本实施例中,mPEG-多肽与Ce6-DOX-GNCs的摩尔比为2:1。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改,并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此,本发明不限于上述实施例,本领域技术人员根据本发明的揭示,不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体的制备方法,其特征在于,纳米药物递送载体由金纳米团簇GNCs,与所述金纳米团簇GNCs表面连接的光敏剂、对pH敏感的化疗药物以及靶向多肽组成;所述的光敏剂为二氢卟吩e6;所述对pH敏感的化疗药物为顺式乌头酸酐修饰的阿霉素;所述靶向多肽为mPEG连接的多肽,靶向多肽序列是CPLGVRGRGDS;所述纳米药物递送载体中,光敏剂的含量为2-8 mg/Kg,对pH敏感的化疗药物的含量为5-10 mg/Kg,靶向多肽的含量为3-12 mg/Kg;
该制备方法包括以下步骤:
(1):合成金纳米团簇GNCs;
(2):取mPEG-马来酰亚胺和多肽溶于二甲亚砜中,反应,分离,干燥,即得到mPEG-多肽;
(3):取化疗药物、顺式乌头酸酐、三乙胺和吡啶,混合,反应,分离,纯化,干燥,即得到对pH敏感的顺式乌头酸酐修饰的化疗药物;
(4):将光敏剂与步骤(3)制得的顺式乌头酸酐修饰的化疗药物分别用EDC/NHS活化处理后,滴加到步骤(1)所制得的金纳米团簇GNCs水溶液中,室温避光搅拌,透析,得到接有光敏剂和顺式乌头酸酐修饰的化疗药物的纳米载体;
(5):最后,将步骤(2)所得mPEG-多肽用EDC/NHS活化后,加入到步骤(4)制得的含光敏剂和顺式乌头酸酐修饰的化疗药物的纳米载体溶液中,避光搅拌,透析纯化,干燥,即得到最后目的产物。
2.根据权利要求1所述的pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体的制备方法,其特征在于,步骤(1)中金纳米团簇GNCs具体通过以下方法合成:
按照以下氯金酸量为计量基准,取150mM的GSH溶液4ml加入到10ml浓度为20nM的氯金酸溶液中,剧烈搅拌5min,随后,再加入预冷后的6ml浓度为0.186M的TBAB溶液,快速搅拌10min,静置,纯化,即得到。
3.根据权利要求1所述的pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体的制备方法,其特征在于,步骤(2)中mPEG-马来酰亚胺和多肽的摩尔比为1:1.2;
反应条件为在30℃下剧烈搅拌24h。
4.根据权利要求1所述的pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,所述的化疗药物为阿霉素;
混合反应的过程具体为:
先取摩尔比为1:2的盐酸阿霉素与三乙胺溶于二甲亚砜中,避光搅拌,纯化,干燥,得到DOX;
然后,将制得的DOX分散于吡啶中,再逐滴加入顺式乌头酸酐溶液,控制DOX、吡啶与顺式乌头酸酐的添加量比为20mg:2ml:25mg,搅拌过夜,即完成反应。
5.根据权利要求1所述的pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体的制备方法,其特征在于,步骤(4)中,光敏剂、顺式乌头酸酐修饰的化疗药物和金纳米团簇的摩尔比为3:3:1;
步骤(5)中,mPEG-多肽与含光敏剂和顺式乌头酸酐修饰的化疗药物的纳米载体的摩尔比为1~3:1。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711407665.4A CN108210506B (zh) | 2017-12-22 | 2017-12-22 | pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711407665.4A CN108210506B (zh) | 2017-12-22 | 2017-12-22 | pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108210506A CN108210506A (zh) | 2018-06-29 |
CN108210506B true CN108210506B (zh) | 2020-08-25 |
Family
ID=62648485
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711407665.4A Active CN108210506B (zh) | 2017-12-22 | 2017-12-22 | pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108210506B (zh) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109232719B (zh) * | 2018-09-21 | 2021-06-29 | 中国科学院理化技术研究所 | 一种pH响应的抗菌肽及其制备方法和应用 |
CN110075296B (zh) * | 2019-03-26 | 2020-09-11 | 浙江大学 | 具有肝癌靶向和放疗增敏特性的金纳米花及其制备与应用 |
CN113750247A (zh) * | 2020-06-04 | 2021-12-07 | 中国科学院宁波工业技术研究院慈溪生物医学工程研究所 | 一种肿瘤靶向药物、其制备方法和应用 |
CN112618714B (zh) * | 2020-11-30 | 2022-02-22 | 四川大学 | 一种Anti-FLT1多肽介导合成的金团簇及其制备方法和用途 |
CN114010783B (zh) * | 2021-11-03 | 2022-10-18 | 大连理工大学 | 一种基于共价有机框架材料的多功能富硼纳米靶向制剂及制备方法和应用 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102421418A (zh) * | 2009-03-09 | 2012-04-18 | 得克萨斯系统大学评议会 | 在药物递送中有用的中空金纳米球(HAuNSs)和装载HAuNSs的微球体 |
CN104888217B (zh) * | 2009-06-12 | 2018-10-16 | 鹿特丹伊拉斯谟大学医疗中心 | 用于癌症光动力学治疗的靶向纳米光药物 |
US9642925B2 (en) * | 2010-12-07 | 2017-05-09 | Sanford Research/USD | Magnetic nanoparticle formulations, methods for making such formulations, and methods for their use |
CN103768080B (zh) * | 2013-12-30 | 2017-04-05 | 浙江工业大学 | 一种抗耐药肿瘤的靶向制剂、制备方法及应用 |
CN104758948B (zh) * | 2015-04-25 | 2017-09-22 | 郑州大学 | 基于金纳米星的多功能抗肿瘤靶向诊断治疗药物的制备方法及应用 |
CN104826127B (zh) * | 2015-04-25 | 2017-09-22 | 郑州大学 | 光热和光动联合抗肿瘤的以叶酸介导的金纳米星为载体的药物传递系统的制备方法及应用 |
CN105288620B (zh) * | 2015-10-16 | 2018-08-17 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种用于肿瘤靶向治疗的金纳米花的制备方法 |
CN105749280A (zh) * | 2016-04-07 | 2016-07-13 | 沈阳大学 | 一种协同化疗与光动力治疗的肿瘤靶向纳米给药系统的制备及应用 |
CN106512002B (zh) * | 2016-10-21 | 2019-10-15 | 天津大学 | 集ct成像与光疗于一体的多功能纳米杂化物及制备方法 |
-
2017
- 2017-12-22 CN CN201711407665.4A patent/CN108210506B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108210506A (zh) | 2018-06-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108210506B (zh) | pH响应和多肽靶向的纳米药物递送载体及其制备和应用 | |
Yang et al. | Recent advances in nanosized metal organic frameworks for drug delivery and tumor therapy | |
Huang et al. | Nanoscale metal–organic frameworks for tumor phototherapy | |
US11752210B2 (en) | Sensitizing composition using electromagnetic waves for thermal therapy of cancers, and cancer therapy using same | |
US20040068207A1 (en) | Active oxygen generator containing photosensitizer for ultrasonic therapy | |
CN103599068B (zh) | 纳米载药胶束和抗癌药物及其制备方法 | |
CN109498548B (zh) | 一种蛋白质与光敏剂共传递pH响应性聚氨基酸纳米凝胶及其制备方法 | |
CN108409756A (zh) | 一种基于喜树碱类的异二聚体多功能前药及其制备方法和应用 | |
CN110123741B (zh) | 一种铁交联透明质酸纳米凝胶、其制备方法以及用途 | |
Gao et al. | AuNRs@ MIL-101-based stimuli-responsive nanoplatform with supramolecular gates for image-guided chemo-photothermal therapy | |
CN103936883A (zh) | 含巯基壳聚糖衍生物及复合物纳米粒子及制备方法 | |
CN109464676B (zh) | 一种壳寡糖光敏靶向纳米粒的制备方法及产品 | |
CN104013960A (zh) | 一种靶向光热治疗用水溶性复合物及其制备方法与应用 | |
Wang et al. | Light-activated nanomaterials for tumor immunotherapy | |
Kang et al. | Applications of nanocomposites based on zeolitic imidazolate framework-8 in photodynamic and synergistic anti-tumor therapy | |
CN110917349B (zh) | 一种碗状isp复合功能性纳米粒子及其制备方法和应用 | |
CN110251672B (zh) | 一种纳米诊疗剂及其制备方法与应用 | |
CN110115763B (zh) | 一种近红外光激活的多功能脂质体及其制备方法与应用 | |
CN109550050B (zh) | 一种负载黑色素的二氧化钼载药复合物及其制备和应用 | |
CN104817688B (zh) | 一种表面电荷可转变的纳米凝胶及其制备方法以及一种表面电荷可转变的纳米凝胶载药颗粒 | |
CN111040180A (zh) | 一种生物级联反应式光动力集成生物聚合物及其制备方法和应用 | |
CN110575544A (zh) | 一种以叶酸修饰壳聚糖为载体的阿霉素纳米微粒的制备方法 | |
CN108610460B (zh) | 一种活性氧刺激响应型纳米凝胶药物载体及其制备方法和应用 | |
CN111135298B (zh) | 一种双亲性氟硼二吡咯类化合物及其制备方法和用途 | |
CN113599517A (zh) | 一种响应型紫杉醇二聚体和光敏剂共组装纳米靶向给药系统及制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |