CN106310267A - 脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素受体阻断剂与叶酸的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种由脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、叶酸类化合物和可药用载体组成的药物组合物，其中脑啡肽酶抑制剂主要选自沙库比曲(sacubitril)，含量10～100mg，ARB选自缬沙坦、坎地沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦等，含量4～600mg，叶酸类化合物含量0.1～5mg。本发明提供了该药物组合物在用于制备治疗慢性心力衰竭的药物中的用途；本发明还提供了该药物组合物在用于制备预防由慢性心衰或基础疾病高血压引起脑卒中的药物中的用途。通过本发明的实施，提供给患者这种特定用途的药物组合物，还可以增加患者服药依从性，提高疗效。

Description

脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素受体阻断剂与叶酸的组合物

技术领域

本发明涉及脑啡肽酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂与叶酸的药物组合物及其用途，属于药学领域。

背景技术

高血压是最常见的慢性疾病之一，也是心脑血管病最主要的危险因素，其脑卒中、心肌梗塞、心力衰竭及慢性肾脏病等主要并发症的致残、致死率高，严重消耗医疗资源，给家庭和社会带来沉重负担。高血压的主要治疗目标是最大限度地降低心血管并发症的发生与死亡的总体危险，需要治疗所有可逆性心血管危险因素、亚临床靶器官损害以及各种并存的临床疾病【中国高血压防治指南修订委员会.中国高血压防治指南2010.中华心血管病杂志，2011；39(7)：579】。

心力衰竭(简称心衰)是高血压后期的常见并发症，其病理机制是心室泵血或充盈功能低下，心排血量不能满足机体代谢的需要，组织、器官血液灌注不足，出现肺循环和/或体循环淤血，其实也是各种心脏病发展到严重阶段的临床综合症，也称为充血性心力衰竭。心衰的特点是左室肥厚或扩张，导致神经内分泌失常、循环功能异常，出现典型的临床症状，如心悸气促、呼吸困难、体液潴留(浮肿)、乏力(特别是运动时)等。慢性心衰是指持续存在的心力衰竭状态，可以稳定、恶化或失代偿。

心衰是心血管病患者丧失劳动力及死亡的重要原因之一，全球估计有2600万人患有心衰。据世界卫生组织的统计资料，心衰的发生率已达1.9％，人类终生患病几率达20％，心衰的两年病死率为37％，6年死亡率高达82％。在美国，卫生统计显示国家医疗费用支出的1-2％用于心衰治疗。我国心衰发病率亦比较高，心衰患病率预计在1.26％，估计约400万人左右。

临床上治疗心衰的常用药物包括利尿剂、强心苷类、非苷类正性肌力药、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)抑制剂、β受体阻断剂等。血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(AngiotensinⅡReceptor Blocker,ARB)本是治疗高血压的常用药物，主要通过阻断血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与相应受体AT₁的结合而发挥药理作用。AngⅡ是RAAS中最关键的一种生物学效应物，它和特异性受体AT₁的结合可介导血管平滑肌收缩、抗利尿激素及醛固酮分泌释放(钠水潴留)、交感神经儿茶酚胺释放增多等一系列生物学作用,导致血压升高。因此，选择性阻断AT₁受体是治疗高血压的有效途径之一。目前临床上ARB类药物主要有：氯沙坦(Losartan)、缬沙坦(Valsartan)、厄贝沙坦(Irbesartan)、替米沙坦(Telmisartan)、坎地沙坦(Candesartan)、奥美沙坦(OlmesartanMedoxomil)、他索沙坦(Tasosartan)和依普沙坦(Eprosartan)等。

心衰的病理生理机制涉及RAAS激活、醛固酮增加等，故ARB不仅用于治疗高血压，同时也是治疗心衰(尤其是伴有低射血分数时)的基础药物。左心室肥厚是心衰的重要病理基础，ARB亦能逆转高血压患者的心脏肥厚，其逆转心室重构作用主要通过降低心室前后负荷、抑制AngⅡ的增生作用和交感神经活性、抑制醛固酮诱导的心脏肥厚等【中华医学会心血管病学分会.中国慢性心力衰竭诊断治疗指南2007.中华心血管病杂志，2007,35(12)：1～29】。

2015年7月上旬美国FDA批准诺华公司的LCZ696上市，该药由缬沙坦(valsartan)和沙库比曲(sacubitril，又称AHU377)以1：1摩尔比组成固定剂量组合，是一个口服有效、双重作用的血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(angiotensin receptor-neprilysininhibitor,ARNi)，用于治疗高血压和心衰。LCZ696有血流动力学和神经激素效应，其中缬沙坦则通过阻断特异受体AT₁而抑制AngⅡ的作用，而沙库比曲(又称AHU377)是一种脑啡肽酶抑制剂的前药，可增强利钠肽(又称心钠素，简称ANP)、缓激肽的作用。脑啡肽酶是一种中性内肽酶，降解几种内源性血管活性肽，包括ANP、缓激肽和肾上腺髓质素。抑制脑啡肽酶即可以增加这些物质的水平，对抗血管收缩、钠潴留、心肌重构和神经内分泌的过度激活。目前市场上的脑啡肽酶抑制剂口服制剂有消旋卡多曲，主要用于治疗儿童腹泻，也有企业在开发用于镇痛的脑啡肽酶抑制剂。脑啡肽酶抑制的重要效应是ANP的浓度增加，ANP具有强大的扩血管、排钠、利尿、抑制RAAS和抑制交感神经系统兴奋进而降低循环血量、减轻心脏负荷以及调节水电解质平衡的作用，是体内最重要的RAAS拮抗激素。

LCZ696的Ⅲ期临床试验是有史以来在心衰患者中开展的最大规模临床研究，其数据显示，LCZ696可显著降低心血管死亡或心衰住院风险。但是，该临床试验受试人群中NYHA分级为4级的患者只有不到1％，这可能会限制其在晚期心衰患者中的使用；其次，受试者中只有约7％的患者进行心脏再同步化治疗(CRT)，这使人们不得不质疑受试者是否在随机化分配时已接受了最佳的心衰治疗。因此，LCZ696虽然为心衰的治疗带来新的希望，但尚存在一些不足。

由于导致循环系统的淤血或血流缓慢，持续存在的慢性心力衰竭可能产生一些并发症，如血栓形成，这可进一步演变成血栓脱落和栓塞，如发生部位在脑部，则易导致脑卒中。而高血压本身即是脑卒中的重要危险因素。无论是慢性心衰还是高血压，其治疗目的主要是降低心血管并发症的危险，也即是说靶器官保护是最终目标，需要治疗各种可逆的心血管危险因素、靶器官损害或并存的疾病。因此，如何进一步提高LCZ696及同类药物对慢性心衰的疗效或获益/风险比，以及如何提高对高血压伴心衰患者的靶器官保护、从而降低脑卒中事件风险，无论从临床意义抑或社会意义来说，都是值得研究和需要解决的问题。

叶酸类化合物包括叶酸、5-甲基四氢叶酸、甲酰四氢叶酸、亚叶酸、左亚叶酸钙等，它们均属于水溶性维生素，经由肠道吸收，由尿排出体外，在人体内存留时间短暂，很少蓄积，所以必须经常从体外摄取以满足营养和代谢需要。人体内叶酸缺乏时影响同型半胱氨酸的代谢，目前认为高同型半胱氨酸血症是一种心血管危险因素，与血管内皮损伤、诱导血栓形成等有关，也是脑卒中的危险因素之一。因此，在“脑啡肽酶抑制剂+ARB”基础上增加叶酸类化合物将可能改进前者组合的功效，提高其作为治疗心衰(尤其基础疾病为高血压时)药物的临床价值。

发明内容

本发明的目的是克服LCZ696类药物存在的不足，提供一种在靶器官保护及降低脑卒中事件危险性方面表现更优的复方药物组合物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种药物组合物，包括：

(1)药用剂量的脑啡肽酶抑制剂；

(2)药用剂量的血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)；

(3)药用剂量的叶酸类化合物；

(4)药剂学上可接受的载体。

上述的“药用剂量”是指《中国慢性心力衰竭诊断治疗指南2007》中相对应的各种具体药物的推荐剂量，或各药品说明书规定的剂量范围。

所述脑啡肽酶抑制剂选自沙库比曲(AHU377)，含量为10～100mg。

所述ARB选自缬沙坦、坎地沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、他索沙坦、依普沙坦、氯沙坦及其活性代谢产物、酯类或盐类的一种，含量为4～600mg。

通过进一步研究，ARB的含量分别为缬沙坦(80～320mg)、坎地沙坦(4～32mg)、替米沙坦(20～120mg)、厄贝沙坦(75～300mg)、奥美沙坦(20～80mg)、他索沙坦(25～300mg)、依普沙坦(200～600mg)、氯沙坦(25～100mg)，上述物质活性代谢产物、酯类或盐类含量与相应的上述物质含量等同。

所述叶酸的含量为0.1～5.0mg，更加优选0.2～2.0mg。

在本发明中，引起心衰的基础疾病以原发性高血压为主，由它引起的靶器官损害包括左心室肥厚、肾功能不全、动脉痉挛和硬化等。当靶器官损害仍不能给予有效控制，则发展成为更严重的后果，尤其动脉硬化，在高血压基础上可进一步导致脑血管事件，包括脑出血或脑梗塞，两者通常合称为脑卒中。

本发明人在研究中发现，由脑啡肽酶抑制剂AHU377、ARB与叶酸组成的复方药物除对心衰模型动物有极佳的治疗作用外，还具有显著改善血管内皮功能、动脉弹性及减少尿蛋白等功效，提示对靶器官的显著保护作用。即当AHU377、ARB与叶酸合用时能协同增强对患者的靶器官保护作用，且这一协同作用明显强于LCZ696。

本发明还提供该药物组合物在用于制备降低高血压引起的脑血管事件危险性的药物中的用途,主要指降低脑卒中的发生风险。

术语“药用剂量”是指为达到有效控制或治疗疾病的目的，临床医生根据患病个体病情严重程度对患病个体施与药物的剂量。应当理解本发明提供的药物药用剂量不是对本发明的限制，而是对本发明的优选，通常情况下，在该剂量优选范围内，该药物能够对患病个体产生有效的治疗效果。患病个体是指患有疾病的独立存在的生命体，在本发明中，生命体尤指人类。应当理解，现有技术中，人类药用剂量或药用剂量范围可与哺乳动物，如大鼠、小鼠等进行换算以得出适合相应动物适用的药用剂量或剂量范围。

本发明提供的药物组合物中的化合物在相同的制剂中可以同时施与患病个体，也可分别地相继施与患病个体。若是相继施与患病个体，则第二个(或附加的)活性成分施与的延迟不应当导致活性成分联合带来的有益效果的损失。若是同时施与患病个体，组合物中的化合物可以混合存在于同一个药物制剂形式中，也可以以同样的制剂形式分别独立存在。若是以同样的制剂形式分别独立存在，则药物组合物可以变通的以“组合药盒”形式存在。“组合药盒”是一种盒状容器，内置一种或多种剂量形式的药物组合及其使用说明书，在本发明中优选所述的脑啡肽酶抑制剂AHU377、ARB类药物的一种与叶酸类化合物。

本发明的另一个目的是提供含有药用剂量的AHU377或其它脑啡肽酶抑制剂的一种、药用剂量的ARB及其活性代谢产物或其盐类中的一种、叶酸类化合物和可药用载体的药物组合物在用于制备治疗心衰的药物中的用途，更具体地说，是提供在用于制备治疗心衰(尤其由高血压引起的心衰)、预防脑卒中的药物中的用途。

本发明提供的药物组合物的剂型包括但不限于普通片剂、双层片剂、多层片剂、缓释片剂、单室控释片剂、双室控释片剂、微孔型控释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、颗粒剂、丸剂、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的pH依赖型胶囊、颗粒剂、口服液、膜剂或贴剂等剂型，其中优选片剂、胶囊或颗粒剂。

本发明的有益效果是：本发明提供的药物组合物具有明显协同作用，即协同治疗慢性心力衰竭、预防脑卒中的作用。本发明还提供了上述药用剂量的AHU377或其它脑啡肽酶抑制剂、ARB和叶酸类化合物组成的药物组合物在用于制备治疗心力衰竭的药物中的用途；进一步，本发明提供了上述药物组合物在用于制备预防基础疾病—高血压引起的脑卒中的药物中的用途。

下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，并非对本发明的限定，凡依照本发明内容进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

具体实施方式

实施例1.制备AHU377 20mg/缬沙坦80mg/叶酸0.4mg片(1000片量)

制备方法：将辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取20g AHU377、80g缬沙坦、0.4g叶酸按照等量递增法混合均匀，按照处方量分别加入微晶纤维素、胶态二氧化硅和交联聚维酮，用2％羟丙基甲基纤维素溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，20目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁、滑石粉混合均匀，半成品进行检测，测定含量，用压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。

实施例2.制备AHU377 40mg/坎地沙坦16mg/叶酸0.8mg片(1000片)

制备方法：辅料为直压辅料，干燥备用。取处方量的叶酸、坎地沙坦及微晶纤维素30g按照等量递增法混合均匀，得到混粉1；称取剩余处方量的微晶纤维素、乳糖、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅，与AHU377按等量递增法充分混匀，得到混粉2；将混粉1和混粉2与处方量的山愈酸甘油酯混合均匀，得最终混粉中间体，检测混粉中间体，压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。

实施例3.制备AHU377 50mg/替米沙坦60mg/叶酸0.8mg胶囊(1000粒量)

制备方法：将原辅料粉碎80目筛，干燥备用。取50g AHU377、60g替米沙坦、0.8g叶酸按照等量递增法混合均匀，分别加入乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，混合均匀，用2％羟丙甲纤维素溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，装入空心胶囊即得。

实施例4.AHU377/缬沙坦/叶酸组方对心衰大鼠的治疗作用

一、方法：

1.动物：Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重200--240g，购自中国科学院上海实验动物中心。

2.造模方法：采用腹主动脉缩窄法(心脏后负荷增加)制作慢性心衰大鼠模型。大鼠行4％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，每公斤体重注射40mg，剑突下腹正中切口，分层打开腹腔，在肾动脉分支以上钝性游离腹主动脉，将7#注射器针头平行置于腹主动脉上，用4#手术丝线将腹主动脉和注射器一同结扎，然后缓慢将注射器撤出，关腹，分层缝合。使大鼠腹主动脉直径缩窄为0.7mm。正常对照组开腹后将手术丝线穿过腹主动脉，除不缩窄腹主动脉以外，其他操作与手术组完全相同。正常喂养3周，测定血液动力学指标，以确定慢性心衰模型是否成功。

3.分组给药及指标检测：将上述造模成功后的心衰大鼠随机分组，另设正常对照组大鼠10只，各组给药剂量情况见表2。采用灌胃给药，每天1次，连续3周。分别测定给药前、给药后不同时间大鼠心率(HR)、射血前期(PEP)、左室舒张时间(LVET)、每搏心输出量(SV)、每分心输出量(CO)。采用无创性心功能血流动力学监测系统。接好心电图的肢体导联，同步记录心电图和心阻抗—阶微分图。记录8-10个心动周期，求其平均值。系统自动采用Kubicek公式计算相关指标。另取大鼠静脉血1ml，用来检测血浆ANP浓度(ELISA法)。

4.统计学处理：所有实验数据，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组间均数比较用t检验，计数资料用卡方检验。全部数据采用SPSS 10.0软件进行分析。

二、结果：

1、造模情况：(1)一般情况：于手术后第3周观察大鼠一般情况，以评价心衰程度，结果显示：腹主动脉缩窄法造成大鼠3周后出现明显心衰症状，模型组大鼠活动明显减少，爪背紫绀，水肿，尿量减少，与正常对照组有显著差异。(2)流动力学变化：第3周手术组和对照组大鼠心功能变化情况见表2。模型组HR由381±52.4次/分上升到471±57.8次/分，LVET由80.3±24.0ms缩短至52.5±22.3ms，SV和CO均显著下降，提示模型组大鼠手术后3周心脏功能明显下降，而对照组心功能各项指标均无变化。组间比较HR、LVET、CO、SV均有显著性差异，说明模型组造模成功。(3)病理观察：模型组电镜所见：心肌T—管及肌浆网池均呈高度至极度扩张成大串，有处大串连接成蔟。心肌线粒体于肌膜下增生成蔟、有的线粒体灶性溶解。心肌肌膜局部溶解、水肿，局部肌纤维溶解。散在的肌纤维有小灶性溶解。心肌束间微血管扩张，内皮细胞胞饮泡增多。正常对照组电镜所见：为正常心肌组织，均符合下列条件：核常染色质和异染色质分明，有大圆核仁。有丰富核仁协同染色质，有染色质周围及间颗粒。核周间隙狭窄而一致。线粒体完整，大而嵴清晰。心肌T—管及肌浆网少而不扩张。肌膜下无水肿。

表1 第3周手术组和对照组大鼠心功能变化情况

每组第3周测量值分别与本组第1周比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01；

模型组与对照组的比较：^△P＜0.05,^△△P＜0.01。

2、AHU377/缬沙坦/叶酸与LCZ696的比较：经3周治疗后，与模型组比较，LCZ696组、AHU377/缬/叶组心衰大鼠第6周的血流动力学均得到显著改善，表现为心率及PEP下降、LVET及CO上升，LCZ696组、AHU377/缬/叶组大鼠的血浆ANP浓度亦明显增高，均提示对心衰的显著治疗作用。此外，与LCZ696组比较，AHU377/缬/叶组PEP下降、CO上升更为显著，提示对心衰的治疗作用有一定优势。

表2 第6周各组大鼠心功能及血浆ANP情况比较(n＝10)

【注】AHU377/缬/叶组表示AHU377+缬沙坦+叶酸组。

与对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较：^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；

与LCZ696组比较：^#P＜0.05。

三、讨论：

本研究采用腹主动脉缩窄法制作慢性心衰大鼠模型。心衰时血液动力学异常是产生临床充血症状的病理生理基础。左室功能障碍引起CO降低和左室舒张时间延长，前者导致组织器官血液灌注不足，后者引起肺血管嵌压升高。采用缩窄大鼠腹主动脉，造成压力负荷病理性增高，心脏作功增加，引起左心衰，最终导致全心衰。实验结果显示：腹主动脉缩窄3周后出现明显心衰症状，与正常对照组有显著性差异。模型组大鼠活动明显减少，爪背紫绀、水肿，与对照组比较有显著性差异。提示造模组大鼠心功能下降，全身血液灌注减少。心脏功收缩和舒张功能障碍分别引起CO降低和左室舒张末压力(LVEDP)增高。随着心输出量的减少，激活了各种神经内分泌的调节机制，使外周循环阻力增加，外周血液重新分配。

实验结果显示：模型组HR显著加快；LVET缩短，SV和CO均显著下降，提示模型组大鼠手术后3周心脏功能明显下降，而对照组心功能各项指标均无变化，说明造模成功。本实验采用无创性心功能血流动力学监测系统，在大鼠清醒状态下测量心功能血液动力学指标，克服了在麻醉状态下使用创伤性测量方法，从而避免了动物所处状态(清醒或麻醉)以及操作方法(有创或无创)不同而造成的对大鼠心功能的干扰。模型组大鼠手术3周后心脏收缩和舒张功能均明显降低，说明模型组大鼠心脏收缩和舒张功能明显下降。

本研究初步证实AHU377+缬沙坦+叶酸三联组方组在对心衰的显著疗效：经3周治疗后，与模型组比较，AHU377/缬/叶组心衰大鼠第6周的血流动力学均得到显著改善，表现为心率及PEP下降、LVET及CO上升，大鼠血浆ANP浓度亦明显增高，这些结果的综合提示对心衰的显著治疗作用。此外，与LCZ696组比较，AHU377/缬/叶组PEP下降、CO上升更为显著，提示本组方对心衰的治疗作用还有一定优势。

实施例5.AHU377/坎地沙坦/叶酸对卒中易感型高血压大鼠靶器官的保护作用

一、方法：

8周龄左右雄性卒中易感型自发性高血压(SHR-SP)大鼠共60只，根据是否给予治疗干预，分为模型组、坎地沙坦+AHU377+叶酸组(相应剂量：2.4+5+0.08mg/kg)、坎地沙坦+AHU377组(相应剂量：2.4+5mg/kg)。饲养条件：室温22±2℃；相对湿度50％；饮用水为纯净水。另设WKY对照组，20只。灌胃给药，每天1次，每周称重一次，根据体重调整药量，连续8周。观察指标：(1)每日观察动物饮食、存活情况及行为活动，于8周记录各组动物脑卒中发生情况。(2)神经功能分级参照Bederson的神经功能分级标准，分为如下5级，每周观察一次：0级(正常)：无神经功能缺损症状；1级(轻微)：前肢蜷缩或屈曲,主要是持续性腕屈曲或肩内收伴肘部伸展；2级(中度)：前肢持续性蜷缩或屈曲,可见腕、肘全部屈曲、肩部内收或内旋；3级(严重)：持续性肢体蜷缩或屈曲,一侧肢体推力体抗持续性减弱,自主活动时不伴肢体划圈行为；4级(甚重)：双侧肢体持续性蜷缩或屈曲,一侧肢体推力体抗持续性减弱,自主活动时出现肢体划圈行为。(3)病理学观察：所有存活动物及死亡后可取得病理组织的大鼠均取脑组织，切片、HE染色，观察脑出血或脑梗塞情况，计算各组大鼠脑卒中发生率。

二、结果：

本实验过程中，模型组大鼠卒中后出现明显精神萎靡，嗜睡，毛发蓬松、干枯或脱落、无光泽，体重下降，主动活动明显减少，行动迟缓，肢体呈不同程度瘫痪，部分大鼠发病同时伴有抽搐、腹泻、小便失禁、眼球出血等症状，病情严重者数小时内死亡。治疗组的大部分动物神经功能缺损较模型组轻微，精神状态明显优于模型组，自主活动增加，主动觅食、饮水，体重下降不明显，毛发也较模型组顺滑有光泽。

模型组有2只、坎地沙坦+AHU377+叶酸组有1只、坎地沙坦+AHU377组有1只动物死亡后被其他动物食掉，未能取脑组织进行病理检查。

模型组20只大鼠中有16只发生脑卒中，其中死亡5只，除2只动物于夜间死亡后未能及时取得组织外，其他18只动物均进行了病理组织学观察，共16只有脑卒中病理表现发生，其中脑出血5只，脑梗死6只，混合性中风5只。脑卒中灶及周围均可见小动脉透明变性或纤维素样坏死，管壁增厚，管腔狭窄，有的管腔内可见微血栓形成，管周渗血。坎地沙坦+AHU377组20只大鼠有12只发生脑卒中，于实验结束时死亡2只，其中1只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，9只有脑卒中病理表现，与模型组比较脑卒中发生率明显降低(P<0.05)。坎地沙坦+AHU377+叶酸20只大鼠中有8只发生脑卒中，实验结束时死亡2只，其中1只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，8只有脑卒中病理表现，其脑卒中发生率明显降低，与模型组比较均具有极显著差异(P<0.01)，见表3。

表3 坎地沙坦+AHU377+叶酸给药8周对SHR-SP大鼠脑卒中的影响

注：与对照组比较，^**P<0.01；与模型组比较，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01；与坎地沙坦+AHU377组比较，^#P<0.05。

经4周、8周的给药干预后，与模型组比较，坎地沙坦+AHU377+叶酸组及坎地沙坦+AHU377组大鼠的神经功能分级均有明显改善(P<0.05或0.01)。鉴于表3已非常明确显示模型组与对照组之间脑卒中发生率的巨大差异(说明造模成功)，故在下表4、表5分析中模型组与对照组将不需比较，而重点是比较后三组间神经功能分级3-4级的差异。结果表明，两个治疗组在4周时的神经功能改善作用基本相当，而8周时坎地沙坦+AHU377+叶酸组的改善作用更为显著(表5)。

表4 坎地沙坦+AHU377+叶酸给药4周对SHR-SP大鼠脑卒中神经功能分级比较(只)

注：与模型组比较，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

表5 坎地沙坦+AHU377+叶酸给药8周对SHR-SP大鼠脑卒中神经功能分级比较(只)

注：与模型组比较，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01；与坎地沙坦+AHU377组比较，^#P<0.05。

通过本实验研究可得出初步结论：坎地沙坦+AHU377+叶酸的三联组方能够明显降低卒中易感型自发性高血压(SHR-SP)大鼠脑卒中的发生率及促进脑卒中后神经功能的恢复，其效果优于坎地沙坦+AHU377的二联组方，提示叶酸发挥一定药理作用。

Claims (10)

1.一种药物组合物，由药用剂量的脑啡肽酶抑制剂、药用剂量的血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、药用剂量的叶酸类化合物和药学上可接受的载体组成。其中脑啡肽酶抑制剂的含量为10～150mg，ARB及其活性代谢产物的含量为4～600mg，叶酸类化合物的含量为0.1～5mg。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述脑啡肽酶抑制剂选自沙库比曲(sacubitril，又称AHU377)，含量为10～100mg。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述ARB选自缬沙坦、坎地沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、他索沙坦、依普沙坦、氯沙坦及其活性代谢产物、酯类或盐类的一种，含量为4～600mg。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述叶酸类化合物包括叶酸、5-甲基四氢叶酸、甲酰四氢叶酸钙、叶酸盐、其它可在体内释放或生成叶酸的物质，含量为0.1～5mg，优选含量为0.2～2mg。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述脑啡肽酶抑制剂为AHU377，所述ARB为缬沙坦，所述叶酸类化合物为叶酸或5-甲基四氢叶酸。其中，AHU377的含量为10～100mg，ARB的含量为80～320mg，叶酸或5-甲基四氢叶酸的含量为0.2～2mg。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述脑啡肽酶抑制剂为AHU377，所述ARB为坎地沙坦，所述叶酸类化合物为叶酸或5-甲基四氢叶酸。其中，AHU377的含量为10～100mg，ARB的含量为4～32mg，叶酸或5-甲基四氢叶酸的含量为0.2～2mg。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述脑啡肽酶抑制剂为AHU377，所述ARB为替米沙坦，所述叶酸类化合物为叶酸或5-甲基四氢叶酸。其中，AHU377的含量为10～100mg，ARB的含量为20～120mg，叶酸或5-甲基四氢叶酸的含量为0.2～2mg。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的制药剂型为口服制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、肠溶胶囊、缓释胶囊、含有微丸的胶囊、口服液等剂型。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的药物组合物用于制备治疗慢性心力衰竭的药物中的应用，特别适用于由基础疾病高血压导致的慢性心力衰竭的药物中的应用。

10.根据权利要求1～8中任一项所述的药物组合物用于制备预防心力衰竭患者发生脑卒中的药物中的应用。