CN103386130A - Ace抑制剂/噻嗪类利尿剂/5-甲基四氢叶酸药物组合物及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有血管紧张素转化酶抑制剂、噻嗪类利尿剂和5-甲基四氢叶酸的药物组合物及其用途。该药物组合物包括：药用剂量的血管紧张素转化酶抑制剂、药用剂量的噻嗪类利尿剂、药用剂量的5-甲基四氢叶酸和药剂学上可接受的载体。本发明提供了该药物组合物在制备用于治疗高血压以及预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害的药物中的用途；本发明还提供了该药物组合物在制备用于降低高血压引起的脑血管事件危险性的药物中的用途。通过本发明的实施，提供给患者这种特定用途的药物组合物，可以增加患者服药依从性，提高疗效，降低医疗费用。

Description

ACE抑制剂/噻嗪类利尿剂/5-甲基四氢叶酸药物组合物及用途

技术领域

本发明涉及血管紧张素转化酶抑制剂/噻嗪类利尿剂/5-甲基四氢叶酸联合应用的药物组合物及其用途，属于药学领域。

背景技术

高血压是最常见的慢性疾病之一，也是心脑血管病最主要的危险因素，其脑卒中、心肌梗塞、心力衰竭及慢性肾脏病等主要并发症的致残、致死率高，严重消耗医疗资源，给家庭和社会带来沉重负担。高血压的主要治疗目标是最大限度地降低心血管并发症的发生与死亡的总体危险，需要治疗所有可逆性心血管危险因素、亚临床靶器官损害以及各种并存的临床疾病【中国高血压防治指南修订委员会.中国高血压防治指南2010.中华心血管病杂志，2011；39(7)：579～616】。

治疗高血压的常用药物包括五大类：血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙拮抗剂(CCB)、血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)、利尿剂和β受体阻滞剂，或者由这些药物组成的固定剂量的复方制剂。复方制剂或联合用药有其需要和价值，每种药物的剂量不大，药物的治疗作用协同或至少相加，不良反应相互抵消或至少不重叠。ACEI是目前临床上控制高血压的常用药物，它主要抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性，降低血管紧张素II和醛固酮的含量，同时能减少缓激肽降解，促进前列腺素释放，从而舒张血管，降低血压。常见的ACEI有卡托普利、依那普利、贝那普利、赖诺普利、雷米普利、福辛普利、西拉普利、培哚普利等。

在美国高血压防治联合委员会【Chobanian AV，et al.The seventh report of JointNational Committee on Prevention，Detection，Evaluation，and Treatment of HighBlood Pressure：the JNC7Report.JAMA；2003；289(19)：2560～2572】、欧洲心脏学会/高血压学会及我国2010高血压指南推荐的联合用药中，半数以上的用药配伍使用了利尿剂，其中主要是噻嗪类利尿剂，以氢氯噻嗪(Hydrochlorothiazide)最为常用。目前市场上也出现不少噻嗪类利尿剂与与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)抑制剂(包括ACEI、ARB、肾素抑制剂)的复方药物，如：卡托普利/氢氯噻嗪、赖诺普利/氢氯噻嗪、厄贝沙坦/氢氯噻嗪、阿利吉仑/氢氯噻嗪等。

在高血压治疗中，人们对利尿剂的使用经历过波折。1978年噻嗪类利尿剂被世界卫生组织列为一线降压药，常单独应用于治疗轻、中度高血压。但临床应用发现，长期或较大剂量使用噻嗪类利尿剂可引起低血钠、低血钾和低血氯，约30％发生糖耐量异常，还可引起血氨升高。氢氯噻嗪长期使用可影响脂肪酶的活性，使甘油三脂分解代谢减少，甘油三脂升高，导致脂肪代谢紊乱，或引起轻度胆固醇增加。因此，随着CCB、ACEI、ARB等新型抗高血压药的出现，利尿剂的使用显著减少。然而在临床实践中人们发现，以小剂量利尿剂作为基础降压药物，它引起的有效血容量减少可能是其他降压药物发挥疗效的基础，于是又开始重视利尿剂的使用【中华医学会心血管病学分会高血压学组.利尿剂治疗高血压的中国专家共识.中华高血压杂志，2011；19(3)：214～222】。总之，由于噻嗪类利尿剂的不良反应较多，长期或较大剂量使用的利与弊都比较明显。

ACEI与(小剂量)噻嗪类利尿剂组成的复方药物在协同降压方面表现突出，并且ACEI还可抑制噻嗪类利尿剂引起的RAS激活和部分抵消低血钾的副作用，但长期应用仍有可能发生电解质、脂代谢的紊乱，更重要的是，这个组合对靶器官的保护作用没有得到相应增强，相反可能由于对脂代谢影响依旧而有所削弱。如前述，高血压治疗目的主要是降低心血管并发症的危险，降压达标固然重要，但靶器官保护是最终目标，需要治疗各种可逆的心血管危险因素、靶器官损害或并存的疾病。

如何进一步提高噻嗪类利尿剂或含有噻嗪类利尿剂的复方降压药物对高血压患者的靶器官保护作用或减少其不良反应，降低高血压引起的心脑血管事件的风险性，无论从临床意义抑或社会意义来说，都是值得研究和解决的问题。

发明内容

本发明的目的是克服含利尿剂的复方降压药存在的上述不足，提供一种在靶器官保护及降低脑血管事件危险性方面优于这些含利尿剂的复方降压药、而副作用不增加的药物组合物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种药物组合物，包括

(1)药用剂量的血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)；

(2)药用剂量的噻嗪类利尿剂；

(3)药用剂量的5-甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate，5-MTF)；

(4)药剂学上可接受的载体。

上述的“药用剂量”是指《中国高血压防治指南2010》和美国高血压防治联合委员会(JNC-7)中相对应的各种具体降压药的推荐剂量，或各药品说明书规定的剂量范围。

所述ACEI选自卡托普利、依那普利、贝那普利、赖诺普利、雷米普利、福辛普利、西拉普利、培哚普利、咪达普利、喹那普利、地拉普利、螺普利、阿拉普利的一种，含量为1.25～75mg。

所述噻嗪类利尿剂选自氢氯噻嗪、苄氟噻嗪、氯噻酮、吲达帕胺等的一种，含量为1.25～50mg。

所述5-甲基四氢叶酸(5-MTF)的含量为0.2～2.0mg，更加优选0.4～1.2mg。

通过试验研究，ACEI的含量分别为卡托普利(12.5～75mg)、依那普利(5～20mg)、贝那普利(5～30mg)、赖诺普利(5～30mg)、雷米普利(2.5～10mg)、福辛普利(10～30mg)、西拉普利(1.25～5mg)、培哚普利(2～8mg)、咪达普利(2.5～10mg)、喹那普利(10～30mg)、地拉普利(7.5～45mg)、螺普利(6～25mg)、阿拉普利(25～75mg)等，上述物质的活性代谢产物或盐类含量与相应的上述物质含量等同。

通过试验研究，噻嗪类利尿剂的含量分别为氢氯噻嗪(6～25mg)、苄氟噻嗪(1.25～5mg)、氯噻酮(12.5～50mg)、吲达帕胺(1.25～2.5mg)。.

在本发明中，高血压引起的靶器官损害包括左心室肥厚、肾功能不全等。当靶器官损害仍不能给予有效控制，则发展成为更严重的后果，即心脑血管事件，其中脑血管事件包括脑梗塞或脑出血(合称脑卒中)。

本发明人在研究中发现，由ACEI、噻嗪类利尿剂与5-MTF组成的复方药物除对高血压模型动物有更佳的降压作用外，具有显著改善血管内皮功能、降低尿蛋白等功效，提示对靶器官的进一步保护。即当ACEI、噻嗪类利尿剂与5-MTF合用时能协同增强靶器官保护作用，且其协同作用强于仅应用ACEI/噻嗪类利尿剂二联复方降压药。

本发明还提供该药物组合物在制备用于降低高血压引起的脑血管事件危险性的药物中的用途，主要指进一步降低脑卒中的发生率。

本发明提供的药物组合物的剂型包括但不限于普通片剂、双层片剂、多层片剂、缓释片剂、单室控释片剂、双室控释片剂、微孔型控释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、颗粒剂、丸剂、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的pH依赖型胶囊、颗粒剂、口服液、膜剂或贴剂等剂型，其中优选片剂、胶囊或颗粒剂。

本发明的有益效果是：本发明提供的药物组合物具有明显协同作用，其协同作用在于能协同防止高血压引起的靶器官损害，协同降低高血压引起的脑血管事件危险性。本发明还提供了上述药用剂量的ACEI、噻嗪类利尿剂和5-MTF组成的药物组合物在制备用于治疗高血压以及预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害或高血压相关疾病的药物中的用途；进一步，本发明提供了上述药物组合物在制备降低高血压引起的脑血管事件危险性的药物中的用途，尤其本发明选择5-MTF，比传统的叶酸效果更佳。

下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，并非对本发明的限定，凡依照本发明内容进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

具体实施方式

实施例1.制备卡托普利25mg/氢氯噻嗪6mg/5-MTF0.2mg片(1000片量)

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取25g卡托普利、6g氢氯噻嗪、0.2g5-MTF按照等量递增法混合均匀，按照处方量分别加入淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，按等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，用压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含卡托普利25mg、氢氯噻嗪6mg、5-MTF0.2mg。

实施例2.制备依那普利10mg/氢氯噻嗪6.25mg/5-MTF0.4mg片(1000片量)

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取10g依那普利、6.25g氢氯噻嗪、0.4g5-MTF按照等量递增法混合均匀，按照处方量分别加入乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，按等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，用压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含依那普利10mg、氢氯噻嗪6.25mg、5-MTF0.4mg。

实施例3.制备赖诺普利10mg/氢氯噻嗪12.5mg/5-MTF0.8mg片(1000片量)

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取10g赖诺普利、12.5g氢氯噻嗪、0.8g5-MTF按照等量递增法混合均匀，按照处方量分别加入乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和十二烷基硫酸钠，按等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，用压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含赖诺普利10mg、氢氯噻嗪12.5mg、5-MTF0.8mg。

实施例4.制备贝那普利10mg/氢氯噻嗪10mg/5-MTF0.4mg胶囊(1000粒量)

制备方法：将原辅料粉碎80目筛，干燥备用。取10g贝那普利、10g氢氯噻嗪、0.4g5-MTF按照等量递增法混合均匀，分别加入淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，按照等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，装入空心胶囊即得。制备过程中注意避光，制成的胶囊需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的胶囊中每粒含贝那普利10mg、氢氯噻嗪10mg、5-MTF0.4mg。

实施例5.制备雷米普利5mg/氯噻酮12.5mg/5-MTF1.0mg胶囊(1000粒量)

制备方法：将原辅料粉碎80目筛，干燥备用。取5g雷米普利、12.5g氯噻酮、1.0g5-MTF按照等量递增法混合均匀，分别加入淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，按照等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，装入空心胶囊即得。制备过程中注意避光，制成的胶囊需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的胶囊中每粒含雷米普利5mg、氯噻酮12.5mg、5-MTF1.0mg。

实施例6.制备福辛普利10mg/氢氯噻嗪12.5mg/5-MTF0.8mg片(1000片量)

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取10g福辛普利、12.5g氢氯噻嗪、0.8g5-MTF按照等量递增法混合均匀，按照处方量分别加入乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，按等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，用压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含福辛普利10mg、氢氯噻嗪12.5mg、5-MTF0.8mg。

实施例7.制备赖诺普利10mg/吲达帕胺1.25mg/5-MTF0.4mg胶囊(1000粒量)

制备方法：将原辅料粉碎80目筛，干燥备用。取10g赖诺普利、1.25g吲达帕胺、0.4g5-MTF按照等量递增法混合均匀，分别加入淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和低取代羟丙基纤维素，按照等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，装入空心胶囊即得。制备过程中注意避光，制成的胶囊需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的胶囊中每粒含赖诺普利10mg、吲达帕胺1.25mg、5-MTF0.4mg。

实施例8.制备咪达普利5mg/苄氟噻嗪5mg/5-MTF0.4mg片(1000片量)

制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取5g咪达普利、5g苄氟噻嗪、0.4g5-MTF按照等量递增法混合均匀，按照处方量分别加入乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和十二烷基硫酸钠，按等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％7醇溶液制成软材，20目筛制粒，40℃干燥约2h，18目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与硬脂酸镁混合均匀，半成品进行检测，测定含量，用压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含咪达普利5mg、苄氟噻嗪5mg、5-MTF0.4mg。

实施例9.卡托普利/氢氯噻嗪/5-MTF对自发性高血压大鼠的协同降压作用

一、方法

自发性高血压大鼠(SHR)购自中国科学院上海实验动物中心，8周龄后大鼠血压升高，10周龄后显著升高，测定大鼠血压1周(第1、6天)，取血压稳定的大鼠用于实验。高血压大鼠分组和给药剂量见表1，另设正常对照组(n＝12)。动物灌胃给药，每天2次，连续2周。分别测定给药前、末次给药后大鼠血压。

二、结果

给予卡托普利/氢氯噻嗪(5+1.2mg/kg/d)、卡托普利/氢氯噻嗪(5+1.8mg/kg/d)对自发性高血压大鼠有显著的降压作用，5-MTF(0.08mg/kg/d)与卡托普利/氢氯噻嗪(5+1.2mg/kg/d)合用后，对自发性高血压大鼠的降压作用增强，其作用与卡托普利/氢氯噻嗪(5+1.8mg/kg/d)相近，表明5-MTF与卡托普利/氢氯噻嗪合用产生了协同降压作用，因此可减少后者的用量，从而减少副作用。见表1。

表1卡托普利/氢氯噻嗪/5-MTF对自发性高血压大鼠的降压作用(x±s)

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与卡托普利/氢氯噻嗪(5+1.2)组比较，^▲P＜0.05。

实施例10.依那普利/氢氯噻嗪/5-MTF对SHR的协同降压和靶器官保护作用

一、方法

自发性高血压大鼠(SHR)购自中国科学院上海实验动物中心，8周龄后大鼠血压升高，13周龄后显著升高，测定大鼠血压1周(第1、6天)，取血压稳定的大鼠用于实验。高血压大鼠分组和给药剂量见表2。另设正常对照组(n＝12)。灌胃给药，每天2次，连续13周。分别测定给药前、给药后不同时间大鼠血压，末次给药后分别测定24h尿α₁微球蛋白。

二、结果

24小时尿α₁微球蛋白是反映早期肾小管损伤的标记物。5-MTF单独应用对自发性高血压大鼠无明显降压作用，依那普利/氢氯噻嗪(1+1.3mg/-kg)对自发性高血压大鼠有显著的降压作用和靶器官保护作用，5-MTF(0.08mg/kg)与依那普利/氢氯噻嗪合用后，对自发性高血压大鼠的降压作用和靶器官保护作用显著增强，其作用已超过依那普利/氢氯噻嗪组，表明依那普利/氢氯噻嗪与5-MTF合用对高血压大鼠有显著的协同降压和靶器官保护作用，见表2。

表2依那普利/氢氯噻嗪/5-MTF对SHR的协同降压和靶器官保护作用

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与依那普利/氢氯噻嗪组比较，^▲▲P＜0.01

实施例11.赖诺普利/氢氯噻嗪/5-MTF对2K1C高血压大鼠的协同降压和靶器官保护作用

一、方法

用0.2mm银夹狭窄Wistar大鼠单侧(左)肾动脉，8～10周后大鼠血压升高超过150mmHg以上为二肾一夹(2K1C)型高血压动物模型。高血压大鼠随机分组与给药见表3，另设正常对照组(n＝12)。灌胃给药，每天1次，连续13周。分别测定给药前和给药后不同时间血压。末次给药后分别测定24h尿α₁微球蛋白。

二、结果

数据分析见表3。24小时尿α₁微球蛋白是反映早期肾小管损伤的标记物。5-MTF单独应用对2K1C高血压大鼠无明显降压作用和靶器官保护作用，赖诺普利/氢氯噻嗪(1+0.65mg/kg)、赖诺普利/氢氯噻嗪(1+1.3mg/kg)对高血压大鼠有显著的降压作用和靶器官保护作用，5-MTF(0.08mg/kg)与赖诺普利/氢氯噻嗪(1+0.65mg/kg)合用后，对2K1C型高血压大鼠的降压作用和靶器官保护作用显著增强，其效应与赖诺普利/氢氯噻嗪(1+1.3mg/kg)组相近，表明赖诺普利/氢氯噻嗪与5-MTF合用对2K1C高血压大鼠有显著的协同治疗作用。

表3赖诺普利/氢氯噻嗪/5-MTF对2K1C大鼠的协同降压和靶器官保护作用

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与赖诺普利/氢氯噻嗪(1+0.65mg/kg)组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01。

实施例12.贝那普利/氢氯噻嗪/5-MTF对高血压大鼠降压及靶器官保护作用

一、方法

SHR大鼠，体重150～180g，平均分为4组，每组20只，分别为模型组、贝那普利/氢氯噻嗪(1+1mg/kg)、5-MTF0.04mg/kg)组、贝那普利/氢氯噻嗪+5-MTF(1+1+0.04mg/kg)组，另取15只正常大鼠作为正常对照组，给予等容量0.5％CMC溶液。每天2次给药，每周称重一次，根据体重调整药量，连续给药20周。检测指标包括(1)血压：分别测定给药前和给药后不同时间鼠尾血压；(2)心肌羟脯氨酸测定：取左心室游离壁心肌组织，制备成10％心肌组织匀浆，按羟脯氨酸测试盒说明书测定心肌羟脯氨酸含量，按胶原蛋白含量＝羟脯氨酸含量×7.46，换算成胶原蛋白含量。(3)心肌组织常规切片，天狼星红-苦味酸染色，测量心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)。CVF为胶原面积与心肌总面积的比值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积，随机分析5个视野，取均值。PVCA为每一标本测量4支呈横切面的壁内小动脉的周围面积与管腔面积的比值，取均值。(4)肾内小动脉观察：经腹主动脉插管，0.1mg/ml硝普钠充分扩张血管后，用10％的甲醛溶液在10～12kPa下灌注固定，分离左肾，剪下，4％甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋、横切片、HE染色。光学显微镜下选取外径为50～100μm的肾内小动脉，测量其内径、壁厚，计算壁厚内径比。每个标本测量4支横切面的壁内小动脉，取均值。数据处理采用SAS统计软件。

二、结果

(1)对SHR大鼠血压的影响：与正常大鼠比较，SHR大鼠收缩压持续、显著升高(P＜0.01)；给药前除正常对照组外，其他各组血压水平无差异；给药后，与模型组比较，贝那普利/氢氯噻嗪组各时间段收缩压下降显著，5-MTF组20周时收缩压有轻度下降，贝那普利/氢氯噻嗪+5-MTF组各时间段收缩压下降显著，在20周时降压作用较贝那普利/氢氯噻嗪组更为明显，详见表4。

表4贝那普利/氢氯噻嗪/5-MTF对SHR大鼠收缩压SBP(mmHg)的影响

注1：表中括号内数字表示各时间段的动物数(中间有动物死亡)

注2：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与贝那普利/氢氯噻嗪组比较，^▲P＜0.05；

(2)对SHR大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响：与正常对照组比较，SHR大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌间质纤维化指标CVF、心肌血管周围纤维化指标PVCA均显著增加，CVF与PVCA升高几乎同步，表明心肌间质纤维化参与了高血压大鼠心脏重构的病理过程。与模型组比较，贝那普利/氢氯噻嗪组、贝那普利/氢氯噻嗪+5-MTF组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均显著降低。5-MTF组未见明显降低，贝那普利/氢氯噻嗪+5-MTF组较贝那普利/氢氯噻嗪组有显著性差异，表明贝那普利/氢氯噻嗪与5-MTF合用对高血压大鼠心肌保护作用增强，详见表5。

表5贝那普利/氢氯噻嗪/5-MTF对SHR大鼠心肌胶原蛋白含量、CVF和PVCA的影响

注：与正常组比较，^*P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；

与贝那普利/氢氯噻嗪组比较，△P＜0.05。

(3)对SHR大鼠肾内小动脉的影响：高血压大鼠的血管改变，主要表现为血管壁外膜的纤维化，管壁中层增厚(由平滑肌细胞增生、.肥厚和细胞间质增多所致)，内膜玻璃样变，内皮细胞增生，这些变化使血管壁厚度/管腔比值减小。

表6贝那普利/氢氯噻嗪/5-MTF对SHR大鼠肾内小动脉的影响

注：与正常组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；

与贝那普利/氢氯噻嗪组比较，^△P＜0.05。

与正常大鼠比较，SHR大鼠肾小动脉壁厚增加，内径减小，壁厚/内径比增加。与模型组比较，贝那普利/氢氯噻嗪组、贝那普利/氢氯噻嗪+5-MTF组大鼠肾小动脉壁厚降低、内径增加、壁厚/内径比降低，5-MTF组壁厚/内径比亦有降低，贝那普利/氢氯噻嗪+5-MTF组较贝那普利/氢氯噻嗪组的壁厚及壁厚/内径比的降低更显著，表明贝那普利/氢氯噻嗪与5-MTF合用对小动脉硬化有较好的预防或治疗作用。见表6。

实施例13.雷米普利/氯噻酮/5-MTF对2K1C大鼠的协同降压及靶器官保护作用

一、方法

(1)2K1C高血压动物模型制备水合氯醛(320mg/kg)腹腔注射麻醉Wistar大鼠(雌雄各半，150～180g)，沿腹正中线打开腹腔，分离左肾动脉，0.2mm银夹狭窄大鼠左肾动脉，术后8～10周取收缩压≥140mmHg者为高血压大鼠。(2)分组及给药取肾性高血压大鼠98只，均分7组，每组14只，为模型对照组、雷米普利/氯噻酮0.5+1.3mg/kg)组雷米普利/氯噻酮+5-MTF(0.5+1.3+0.04mg/kg)组、雷米普利/氯噻酮+5-MTF(0.5+1.3+0.08mg/kg)组、雷米普利/氯噻酮+5-MTF(0.5+1.3+0.16mg/kg)组、5-MTF(0.08mg/kg)组，另取14只正常大鼠作为正常对照组。每日灌胃给药1次，正常对照组、高血压组给予等容量蒸馏水，连续给药26周。(3)检测指标①血压值：采用尾套法，用非损伤性小动物血压测定仪分别测定给药前、给药第1、5、9、13、18、22、26周大鼠血压，每次测定3次，取平均值。②内皮功能：26周末，取血按试剂盒说明书，测定血浆一氧化氮(NO)、内皮素(ET)水平。③肾功能：26周末，收集尿液，测24h尿肌酐(Scr)、尿蛋白、24h尿α₁微球蛋白；取血，测定血肌酐、尿素氮(BUN)，计算肌酐清除率(Ccr)。④血流动力学指标：末次给药前，20％乌拉坦麻醉，仰位固定，分离右侧颈总动脉，插入一充满肝素生理盐水导管至左心室，通过压力换能器，连接多导生理信号采集处理系统，稳定10min，给药，分别记录末次给药前、药后3小时左室峰压平均值(LVSP)、左室最大变化速率(±dp/dt_max)、左室舒张期末压(LVEDP)。⑤病理检查：取心、肾、脾、脑等脏器，10％福尔马林固定，石蜡包埋、切片、HE染色，光镜检查。(4)统计分析分别计算各组均数和标准差，给药组与对照组进行t检验。

二、结果

(1)雷米普利/氯噻酮+5-MTF对高血压大鼠血压的影响与正常组比较，模型组大鼠血压显著升高，5-MTF组血压轻度降低，其中第5、9周有显著性差异。雷米普利/氯噻酮(0.5+1.3mg/kg)组、雷米普利/氯噻酮(0.5+1.3mg/kg)+5-MTF(0.04～0.16mg/kg)组大鼠血压显著降低，与模型组比较有显著性差异。与雷米普利/氯噻酮组比较，雷米普利/氯噻酮+5-MTF(0.04～0.16mg/kg)组血压进一步降低，其中第9、13、18、22、26周时点比较有显著性差异。表明5-MTF单用有轻度降压作用，雷米普利/氯噻酮能显著降低高血压大鼠血压，5-MTF与雷米普利/氯噻酮长期合用，对肾性高血压大鼠的降压作用进一步增强。

(2)雷米普利/氯噻酮+5-MTF对高血压大鼠血浆NO、ET水平的影响与正常组大鼠比较，高血压组大鼠血浆NO水平显著降低，ET水平显著升高。与高血压模型组比较，5-MTF组、雷米普利/氯噻酮组大鼠血浆NO升高、ET降低。雷米普利/氯噻酮+5-MTF(0.04～0.16mg/kg)组大鼠血浆NO进一步升高，ET进一步降低，表明肾性高血压大鼠已出现内皮细胞功能损伤，雷米普利/氯噻酮、5-MTF对大鼠内皮细胞功能具有保护作用，两者合用使这一保护作用增强，见表7。

表7雷米普利/氯噻酮/5-MTF对2K1C大鼠血浆NO、ET水平的影响(X±SD)

与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；与雷米普利/氯噻酮组比较，^★P＜0.05

(3)雷米普利/氯噻酮+5-MTF对高血压大鼠肾功能的影响与正常大鼠比较，高血压大鼠尿24hα₁-微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。雷米普利/氯噻酮组大鼠尿24hα₁-微球蛋白、尿蛋白降低，Ccr升高，5-MTF单用对肾性高血压大鼠肾功能无明显影响。雷米普利/氯噻酮+不同剂量5-MTF组大鼠尿24hα₁-微球蛋白、尿蛋白进一步降低，Ccr进一步升高，与雷米普利/氯噻酮组比较有显著差异，表明肾性高血压大鼠出现早期肾功能损害，雷米普利/氯噻酮对高血压大鼠的肾功能损害具有保护作用，5-MTF与雷米普利/氯噻酮合用，对肾性高血压大鼠的肾功能保护作用显著增强。见表8～10。

表8雷米普利/氯噻酮/5-MTF对2K1C大鼠尿α₁-微球蛋白的影响(X±SD)

与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲▲P＜0.01；与雷米普利/氯噻酮组比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.01

表9雷米普利/氯噻酮/5-MTF对2K1C大鼠尿白蛋白的影响(X±SD)

与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01；与雷米普利/氯噻酮组比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.05

表10雷米普利/氯噻酮/5-MTF给药26周对2K1C大鼠Scr、BUN、Ccr的影响

与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲▲P＜0.01；与雷米普利/氯噻酮组比较，^★P＜0.05

(4)雷米普利/氯噻酮+5-MTF对肾性高血压大鼠血流动力学的影响与正常组大鼠比较，高血压组大鼠LVSP、LVEDP显著升高，±dp/dtmax下降。雷米普利/氯噻酮组大鼠LVSP、LVEDP显著降低，±dp/dtmax升高；5-MTF单用对肾性高血压大鼠血流动力学无明显影响。雷米普利/氯噻酮+不同剂量5-MTF组大鼠LVSP、LVEDP进一步降低，±dp/dtmax进一步升高，与雷米普利/氯噻酮组比较有显著差异。表明2K1C大鼠心脏前负荷、后负荷增加，心脏收缩、舒张功能障碍，雷米普利/氯噻酮对肾性高血压大鼠的心功能具有保护作用，5-MTF与雷米普利/氯噻酮合用，对肾性高血压大鼠的心功能保护作用显著增强，见表11。

表11雷米普利/氯噻酮/5-MTF对2K1C大鼠血流动力学的影响(X±SD)

与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲▲P＜0.01；与雷米普利/氯噻酮组比较，^★P＜0.05，^★★P＜0.01

(5)组织病理学检查正常组大鼠心、肾、脑、脾均未见明显改变。模型组大鼠心肌细胞肥大，变粗，变长，核大而深染，部分心肌细胞有细胞水肿(表现为浊肿或水样变性)，少数动物冠状动脉硬化；受夹的肾脏大部分肾小球纤维化，玻璃样变或毛细血管球呈分叶状，球囊壁层上皮增生，相应肾小管萎缩，甚至消失；部分肾小球代偿性肥大，肾小管扩张；细动脉及小动脉硬化，间质纤维组织增生，淋巴细胞浸润；另一侧肾病变不明显，肾小球略肥大；脾脏中央动脉玻璃样变；部分动物的脑小动脉硬化，少数见有微血管增生。给药组大鼠上述病变均有不同程度减轻：单用5-MTF对肾性高血压大鼠的靶器官损害有轻度保护作用，雷米普利/氯噻酮对高血压大鼠的靶器官损害有显著的保护作用，5-MTF与雷米普利/氯噻酮合用对肾性高血压大鼠的靶器官保护作用进一步增强。

实施例14.福辛普利/氢氯噻嗪/5-MTF对卒中易感型SHR的保护作用

一、方法

8周龄左右雄性卒中易感型SHR(SHR-SP)大鼠共100只，结合血压数值，随机分为模型组、福辛普利/氢氯噻嗪(1.5+1.2mg/kg)组、5-MTF组0.08mg/kg)、福辛普利/氢氯噻嗪+5-MTF组(1.5+1.2+0.08mg/kg)。饲养条件为：室温22±2℃，相对湿度50％，固形饲料和垫料均由中国医学科学院实验动物繁育场提供，饮用水为纯净水。另设血压正常对照组20只。给药组灌胃给药，每天2次，每周称重一次，根据体重调整药量，连续8周。

观察指标：(1)每日观察动物饮食、存活情况及行为活动，于8周记录各组动物脑卒中发生情况。(2)神经功能分级参照Bederson的神经功能分级标准，分为5级(如下述)，每周观察一次。(3)病理学观察：所有存活动物及死亡后可取得病理组织的大鼠均取脑组织，切片、HE染色，观察脑出血、脑梗塞或混合性脑卒中，计算各组大鼠脑卒中发生率。

[附注]Bederson神经功能分级标准：0级(正常)：无神经功能缺损症状。1级(轻微)：前肢蜷缩或屈曲，主要是持续性腕屈曲或肩内收伴肘部伸展。2级(中度)：前肢持续性蜷缩或屈曲，可见腕、肘全部屈曲、肩部内收或内旋。3级(严重)：持续性肢体蜷缩或屈曲，一侧肢体推力体抗持续性减弱，自主活动时不伴肢体划圈行为。4级(甚重)：双侧肢体持续性蜷缩或屈曲，一侧肢体推力体抗持续性减弱，自主活动时出现肢体划圈行为。

二、结果

本实验过程中，模型组大鼠卒中后出现明显精神萎靡，嗜睡，毛发蓬松、干枯或脱落、无光泽，体重下降，主动活动明显减少，行动迟缓，肢体呈不同程度瘫痪，部分大鼠发病同时伴有抽搐、腹泻、小便失禁、眼球出血等症状，病情严重者数小时内死亡。治疗组的大部分动物神经功能缺损较模型组轻微，精神状态明显优于模型组，自主活动增加，主动觅食、饮水，体重下降不明显，毛发也较模型组顺滑有光泽。

模型组20只大鼠中有16只发生脑卒中，脑卒中灶及周围均可见小动脉透明变性或纤维素样坏死，管壁增厚，管腔狭窄，有的管腔内可见微血栓形成，管周渗血。福辛普利/氢氯噻嗪组20只大鼠有14只发生脑卒中，14只动物具有脑卒中病理表现，与模型组比较未见显著差异。5-MTF组20只大鼠有13只发生脑卒中，12只有脑卒中病理表现，与模型组比较脑卒中发生率有所降低。福辛普利/氢氯噻嗪+5-MTF组20只大鼠中有9只发生脑卒中，9只有脑卒中病理表现，其脑卒中发生率明显降低。无论与模型组比较还是与福辛普利/氢氯噻嗪组及5-MTF组比较，福辛普利/氢氯噻嗪+5-MTF组均显示更优的脑卒中预防疗效，详见表12。

表12福辛普利/氢氯噻嗪/5-MTF给药8周对SHR-SP大鼠脑卒中的影响

注：与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05；与福辛普利/氢氯噻嗪组比较，^△P＜0.05

比较4周及8周时各组大鼠卒中神经功能分级。总体来说，模型组动物卒中分级明显高于正常对照组，符合SHR-SP动物要求；与模型组比较，5-MTF组的神经功能改善不明显，而福辛普利/氢氯噻嗪组、福辛普利/氢氯噻嗪+5-MTF组则显示动物神经功能各个分级的较为明显的改善(P＜0.05)，尤以福辛普利/氢氯噻嗪+5-MTF组更显著，详见下表13及14。

表13福辛普利/氢氯噻嗪/5-MTF给药4周对大鼠脑卒中神经功能分级比较(只)

注：与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05；与福辛普利/氢氯噻嗪组比较，^△P＜0.05

表14福辛普利/氢氯噻嗪/5-MTF给药8周对大鼠脑卒中神经功能分级比较(只)

注：与正常组比较，^**P＜0.01；与模型组比较，^▲P＜0.05；与福辛普利/氢氯噻嗪组比较，^△P＜0.05。

Claims (10)

1.一种药物组合物，包括：

(1)药用剂量的血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)；

(2)药用剂量的噻嗪类利尿剂；

(3)药用剂量的5-甲基四氢叶酸；

(4)药剂学上可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述ACEI选自卡托普利、依那普利、贝那普利、雷米普利、福辛普利、西拉普利、培哚普利、赖诺普利、喹那普利、地拉普利、螺普利、咪哒普利、阿拉普利中的一种，含量为1.25～75mg。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述噻嗪类利尿剂选自氢氯噻嗪、苄氟噻嗪、氯噻酮、吲哒帕胺中的一种，含量为1.25～50mg。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述5-甲基四氢叶酸含量为0.2～2mg。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的制药剂型为口服制剂，包括片剂、胶囊或颗粒剂等。

6.权利要求1～4中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗高血压的药物中的用途。

7.权利要求1～4中任一项所述的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害的药物中的用途。

8.权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的靶器官损害包括左心室肥厚、肾功能减退等。

9.权利要求1～4中任一项所述的药物组合物在制备用于降低高血压引起的脑血管事件危险性的药物中的用途。

10.权利要求9所述的用途，其特征在于：所述降低高血压引起的脑血管事件危险性是指降低脑梗塞或脑出血(合称脑卒中)的发生率。