CN106265738A - 一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106265738A
CN106265738A CN201610995365.1A CN201610995365A CN106265738A CN 106265738 A CN106265738 A CN 106265738A CN 201610995365 A CN201610995365 A CN 201610995365A CN 106265738 A CN106265738 A CN 106265738A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
used medicine
stock solution
external used
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610995365.1A
Other languages
English (en)
Inventor
李祥宇
于新东
王苏鸣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Mingda Biological Technology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Mingda Biological Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Mingda Biological Technology Co Ltd filed Critical Shanghai Mingda Biological Technology Co Ltd
Priority to CN201610995365.1A priority Critical patent/CN106265738A/zh
Publication of CN106265738A publication Critical patent/CN106265738A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用，所述外用药物的主要成分为NK细胞原液，所述NK细胞原液是由NK细胞进行扩增培养获得的，将NK细胞原液与不同的药物辅料混合，可制成外用液体制剂或外用膏状制剂。该外用药物通过皮肤喷雾或涂抹给药，使用方便，相比于现有技术，具有广谱性、起效快、无刺激、无毒副作用、无抗药性等优势。

Description

一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法 和应用
技术领域
本发明涉及的是生物制药领域，尤其涉及一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用。
背景技术
病原体感染性皮肤病包括真菌感染性皮肤病、细菌感染性皮肤病和病毒感染性皮肤病，其中：皮肤真菌感染是指病原真菌入侵导致皮肤以及粘膜的感染。毛发和指甲等皮肤附属器的一大类感染性疾病，在临床上属于多发性感染，常见的有手、足癣和股癣等，临床表现主要为鳞屑型水疱，损害多发生于一侧，最初为数量不一的小水疱，疱液干涸后脱屑，范围日渐扩大，久之脱屑处皮肤粗糙增厚，皮纹宽深，失去正常的光泽和柔韧性，触之有粗砂感。
手癣、足癣是最常见的浅部真菌病，在全世界广泛流行，中国南方地区发病较北方多。夏秋季发病率高，常表现为夏重冬轻或夏病冬愈。根据临床特点不同，手足癣可分为三型，水疱鳞屑型、角化过度型、浸渍糜烂型。
花斑癣是由糠秕马拉色菌感染表皮角质层引起的一种浅表真菌病。本病起初损害为围绕毛孔的圆形点状斑疹，以后逐渐增至甲盖大小。皮疹无无炎性反应，偶有轻度瘙痒感，好发生于胸背部，一般以青壮年男性多见。病程慢性，冬季皮疹减少或消失，但夏天又可复发。
癣菌疹是由癣病皮损中的真菌引起过敏反应而发生皮疹的一种疾病。如果癣病皮损很活跃，局部红肿明显，真菌可侵入真皮通过局部血管进入血循环。若此时机体非常敏感会立即产生相应的抗体，并与皮肤上的真菌抗原相结合而发生过敏反应，使皮肤表现出各种皮疹。
细菌性感染皮肤病：在皮肤表面普遍存在着金黄色和表皮葡萄球菌，因此皮肤最多见的感染系由葡萄球菌引起，如疖、毛囊炎等。严重的感染可发展到皮下组织形成蜂窝组织炎或痈等。其次可见大肠杆菌和产气荚膜杆菌感染，除后者感染皮下有气发展较快外，其他感染局部皮肤均有红、肿、热、涨、痛，或有脓肿形成，蜂窝组织炎会伴有发烧、畏寒、全身倦怠、头痛或关节痛等，血液检查时，血中白细胞会明显的上升。
脓疱疮是一种常见的急性化脓性皮肤病。具有接触传染和自体接种感染的特性，易在儿童中流行。病原菌主要为凝固梅阳性的金黄葡萄球菌或乙型溶血链球菌单独或混合感染。夏、秋季节气温高、湿度大，皮肤浸渍等，都易使病菌侵入皮肤繁殖，为促发本病创造有利条件。
病毒性皮肤病是由病毒感染引起的，主要表现为皮肤粘膜损害的疾病，病毒感染后也可通过免疫机制引起病毒疹。常表现为：疣状增生、水疱和发疹等三种类型。单纯性疱疹亦称为发热性水疱，是由单纯疱疹病毒所致的疼痛性感染，可在全身出现，水疱形成后，破损产生渗出液，其后产生黄白色的痂壳最终脱落。溃疡通常持续7～10天。通常单纯疱疹并不严重，但对于患有艾滋病或免疫系统因其他疾病或药物受抑制时，这种感染可能是致命的。对于通常在分娩时接触病毒的婴儿来说，感染可能传播到其他器官，会导致严重并发症甚至死亡。
针对病原体感染的皮肤病，目前治疗真菌皮肤病市场上流行使用复方苯甲酸软膏、3％克霉唑霜、1％益康唑霜、2％咪康唑霜以及真菌抗生素等。细菌性皮肤用药多采用0.5％新霉素软膏、莫匹罗星软膏、利福平软膏或红霉素软膏，以及相应抗生素等。对于单纯性疱疹一般使用冰块及使用对症药物来减轻疼痛。找一些含有麻醉因子的药物如酚及润滑剂来减少破溃、软化瘢痕。有些药物长期使用具有毒副作用，并且治疗效果单一，不具备广谱性，治疗真菌药膏不能治疗细菌和病毒皮肤病，反之亦然，因此，开发一种具有广谱性，同时对细菌、真菌、病毒性皮肤病效果显著，且无刺激无毒副作用的产品尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法，以解决现有药物治疗效果单一、疗程长、疗效不够理想、有刺激性和存在毒副作用等技术问题。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物，所述外用药物包括质量百分比为20％-100％的NK细胞原液。
进一步地，所述外用药物为一种液体制剂，命名为SNK液，所述SNK液的组分及其质量百分比包括：NK细胞原液85.0-95.0％、甘油3.0-5.0％、硼砂0.05-0.08％、透明质酸0.05-0.1％、羟苯乙酯0.01-0.03％，溶剂为水。
进一步地，所述外用药物为一种膏状制剂，命名为SNK膏，所述SNK膏的组分及其质量百分比包括：NK细胞原液80.0-85.0％、卡波姆941为0.1-1.5％、甘油为1.0-2.0％、三乙醇胺1.0-2.5％、对羟基苯甲酸乙酯0.01-0.5％、余量为水。
本发明还提供了上述治疗病原体感染性皮肤病的外用药物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取NK细胞进行扩增培养，获得NK细胞原液；
(2)将NK细胞原液与外用药物辅料混合，制备获得所述外用药物。
进一步地，若所述药物为液体制剂时，所述NK细胞原液的质量百分比为85.0-95.0％，所述辅料及其质量百分比为：甘油3.0-5.0％、硼砂0.05-0.08％、透明质酸0.05-0.1％、羟苯乙酯0.01-0.03％，溶剂为水；若所述药物为膏状制剂时，所述NK细胞原液的质量百分比为80.0-85.0％，所述辅料及其质量百分比包括：卡波姆941为0.1-1.5％、甘油为1.0-2.0％、三乙醇胺1.0-2.5％、对羟基苯甲酸乙酯0.01-0.5％、余量为水。
进一步地，所述NK细胞扩增培养的方法，包括以下步骤：
步骤一：取新鲜血液，提取血液中的外周血单核细胞(以下简称PBMC)；
步骤二：在RPMI-1640基础培养基中加入200U/ml的白介素IL-2、80U/ml的庆大霉素和10％重量百分比的胎牛血清，获得NK细胞培养液；
步骤三：取3.0×107-4.0×107个PBMC于一细胞培养瓶中，加入20-30ml的NK细胞培养液和2ml的浓度为1.0×107个/ml的NK扩增试剂，获得起始培养液；
步骤四：将NK细胞接种于起始培养液中培养1-2天，培养期间根据细胞生长状态添加NK细胞培养液；当培养至第3天时，将培养液离心，获得的细胞沉淀中加入NK细胞培养液继续培养；
步骤五：当NK细胞数量达1.5×108个/瓶以上时，加入2支NK扩增试剂和NK细胞培养液进行扩大培养，培养过程中根据细胞生长状态增加NK细胞培养液并进行分袋培养，使细胞浓度在1.0×106个/ml，当培养至第12天时，控制加液量，使细胞浓度为2.0×106个/ml；
步骤六：继续培养至第14天后，收集细胞培养液，获得NK细胞原液。
本发明还提供了上述外用药物在作为病原体感染性皮肤病治疗药物中的应用。
进一步地，将NK细胞原液与不同的外用药物辅料混合，可制备获得外用液体制剂和外用膏状制剂，在使用上述外用药物治疗病原体感染性皮肤病时，先用外用液体制剂涂抹或喷液至患处，再用外用膏状制剂涂抹患处，进行混合治疗，可保持药效能够很好地让皮肤吸收，达到最佳治疗效果，混合使用数次后，症状即可减轻或消失。
本发明的原理为：NK细胞(natural killer cell，自然杀伤细胞)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。本生物制剂采用NK细胞原液治疗病原体感染性皮肤病，NK细胞原液的主要成分是NK细胞分泌的生长因子，包括MIP-1α、MIP-1β、RANTES、单核细胞趋化蛋白、白介素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、干扰素以及穿孔素等。本生物制剂的治疗机理之一是NK细胞分泌的各种因子可以直接与病原物真菌、细菌和病毒结合，从而抑制病原菌的繁殖。另外，NK细胞分泌的炎症因子被皮肤吸收后，诱导机体产生体液免疫及细胞免疫反应，提高了皮肤自身的抵抗能力，并同时加快修复受损的组织和细胞，从而达到治疗的效果。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、广谱性，对浅部真菌皮肤病治疗有非常显著的疗效，在花斑癣、癣菌疹治疗上有显著效果；由细菌引起的脓疱疮、毛囊炎、疖肿，蜂窝组织炎等同样非常有效；由病毒引起的单纯疱疹也具有一定疗效；
2、起效快：皮肤喷雾或涂抹给药、吸收快速、杀菌迅速，效果明显；
3、无刺激：毒理学表明，对皮肤、伤口无刺激性；
4、无毒副作用：药理学表明，使用安全可靠，无毒副作用；
5、无抗药性：由于细胞因子制品，使其无抗药性，长期使用效果不减；
6、使用方便：药物直接涂或喷于患处，操作方便等优势。
具体实施方式
实施例1
1、材料：
本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。
2、方法
2.1制备NK细胞原液
步骤一：PBMC提取：
将新鲜血液于740g离心10分钟，获得上层淡黄色血浆和下层血细胞，将下层血细胞与生理盐水按照体积比1：1混合，取50ml离心管，将稀释的血细胞悬液铺在15ml淋巴细胞分离液上，400g离心30分钟。收集中间白色膜状细胞层，加入生理盐水洗涤，400g离心10分钟，弃上清液，重复洗涤一次。最后用适量培养液重悬细胞沉淀，即获得PBMC。
步骤二：NK细胞培养液的制备：
在Gibco RPMI Medium 1640basic培养液(购买于美国GIBCO公司)中加入200U/ml的白介素IL-2、80U/ml的庆大霉素和10％重量百分比的Gibco FBS(购买于美国GIBCO公司)，获得NK细胞培养液。
步骤三：NK细胞起始培养液的制备：
取3.0×107-4.0×107个PBMC于一T75培养瓶中，加入20-30ml的NK细胞培养液和1支NK扩增试剂，其中，所述NK扩增试剂为一种CD8α-白介素21-CD137复合物(参见中国专利文献CN102154207A)，可直接通过市场购买的方式获得，本发明使用的NK扩增试剂的产品规格为2ml/支，浓度为1×107个/ml。
步骤四：NK细胞起始培养：
将NK细胞接种于上述T75培养瓶中培养，其中：
第1、2天注意观察细胞状态。如果细胞密度无明显变化，细胞状态良好可不处理。细胞密度明显加大，可加NK细胞培养液10ml。
第3天将培养液离心，获得的细胞沉淀转移至新的T75培养瓶中，并加入30ml的NK细胞培养液继续培养。
第4天观察细胞，若细胞状态良好，细胞密度较小，可不做处理，如果细胞密度过大，可酌情加NK细胞培养液。
第5天，若第4天未处理，且细胞状态良好，密度大，则加入NK细胞培养液20ml。
第6天观察细胞，根据细胞密度添加培养液30-50ml。
步骤五：NK细胞扩大培养：
第7天计数，若细胞数量大于1.5×108个/瓶，则加入2支NK扩增试剂，若细胞数量在30-60百万，则长至第8天再添加NK扩增试剂。然后添加NK细胞培养液，使总细胞浓度在1.0×106个/ml。随培养体积逐步增大，可转入T175培养方瓶扩大体积培养，培养液体积大于120ml或细胞数量大于2.0×108个/瓶时，则可以转移至培养袋培养。
第8-11天每天观察，使得细胞浓度在1.0×106个/ml左右，通过计数添加培养液，使得细胞浓度在1.0×106个/ml。
第12-14天每天观察，当细胞数量大于3.0×109个/袋，并且体积大于1200ml时，将细胞分为2袋。
步骤六：收集NK细胞原液：
当细胞生长至所需数量时即可进行收集使用或冻存。一般情况下，14或15天收集细胞，因为此时细胞处于对数生长期，状态最好，越往后细胞状态会缓慢下滑，此时细胞可到3×109个以上，NK细胞(CD3-CD56+)纯度可达到80％以上。
2.2制备SNK液：
按重量计，取NK细胞原液85.0％、甘油5.0％、硼砂0.08％、透明质酸0.1％、羟苯乙酯0.03％，溶剂为无菌水，混匀后灭菌分装，获得所述SNK液。
2.3制备SNK膏：
按重量计，取NK细胞原液80.0％、卡波姆941为1.5％、甘油为2.0％、三乙醇胺3.0％、对羟基苯甲酸乙酯0.5％和无菌水，混匀后灭菌分装，获得所述SNK膏。
3、临床验证
将临床实验分成3组进行，具体为：
实验组1：选若干患有浅部真菌性皮肤病患者、细菌性皮肤病患者和病毒性皮肤病患者，包括足癣8例、花斑癣5例、癣菌疹5例、脓疱疮6例、毛囊炎6例、疖肿8例、蜂窝组织炎6例、单纯疱疹5例，带状疱疹4例，用SNK液进行涂抹或喷液治疗，每天使用2-3次，统计临床治疗结果。
实验组2：选若干患有浅部真菌性皮肤病患者、细菌性皮肤病患者和病毒性皮肤病患者，包括足癣8例、花斑癣5例、癣菌疹5例、脓疱疮6例、毛囊炎6例、疖肿8例、蜂窝组织炎6例、单纯疱疹5例，带状疱疹4例，用SNK膏进行涂抹治疗，每天使用2-3次，统计临床治疗结果。
实验组3：选若干患有浅部真菌性皮肤病患者、细菌性皮肤病患者和病毒性皮肤病患者，包括足癣8例、花斑癣5例、癣菌疹5例、脓疱疮6例、毛囊炎6例、疖肿8例、蜂窝组织炎6例、单纯疱疹5例，带状疱疹4例，用SNK液和SNK膏进行混合治疗，每天使用2-3次，统计临床治疗结果。
上述实验组1-3中，对于浅部真菌性皮肤病，均进行刮取鳞屑及甲屑进行真菌直接镜检，并作出明确诊断后，作为实验病例。
结果如下表1所示：
表1：SNK液和SNK膏临床实验结果统计表
临床实验可看出，本发明的SNK液和SNK膏均具有广谱性，对多种浅部真菌性皮肤病和多种细菌性皮肤病具有显著的治疗效果，其中对于足癣(脚气病)治疗效果非常显著，轻度患者连续用药三至五天痊愈，重度患者均在七日内痊愈；在花斑癣、癣菌疹治疗上也有显著效果等；由细菌引起的脓疱疮、毛囊炎、疖肿，蜂窝组织炎等非常有效；而由病毒引起的单纯疱疹和带状疱疹也同样有效果，比如，由单纯疱疹病毒引起的口腔溃疡或生殖器疱疹等口腔或生殖器疾病，适用于本发明。3组实验患者中均未出现任何副作用。其中：第一组和第二组分别为SNK液和SNK膏，SNK液和SNK膏中由于NK细胞原液的含量不同，疗效稍微有差别，SNK液比膏效果好。当SNK液和SNK膏一起使用时(先涂SNK液，再涂SNK膏)，既可保证SNK液中的活性因子高效和持久被皮肤所吸收，又可提高疗效，两者联合使用疗效最佳。
实施例2
本实施例提供了一种SNK液，按重量计，所述SNK液由NK细胞原液95.0％、甘油3.0％、硼砂0.05％、透明质酸0.05％、羟苯乙酯0.01％和适量的无菌水组成，其中，所述NK细胞原液的制备方法同实施例1。
选若干患有浅部真菌性皮肤病患者、细菌性皮肤病患者和病毒性皮肤病患者，包括手癣2例、毛囊炎3例、单纯疱疹3例，用上述SNK液直接喷洒于患处进行治疗，每天使用2-3次，统计临床治疗结果。
结果发现：上述SNK液对真菌引起的手癣治疗效果非常显著，严重患者5-6天即可痊愈；对细菌引起的毛囊炎治疗效果也很好，轻度患者4-5天后可痊愈，重度患者7天内明显好转；对病毒引起的单纯疱疹也有一定效果，治疗4-5天后，症状有明显好转。
实施例3
本实施例提供了一种SNK膏，按重量计，所述SNK膏由NK细胞原液85.0％、卡波姆941为0.1％、甘油为1.0％、三乙醇胺1.0％、对羟基苯甲酸乙酯0.01％和适量无菌水组成。
选若干患有浅部真菌性皮肤病患者、细菌性皮肤病患者和病毒性皮肤病患者，包括手癣2例、脓疱疮1例、带状疱疹2例，用上述SNK膏直接涂抹于患处进行治疗，每天使用2-3次，统计临床治疗结果。
结果发现，所述SNK膏对手癣的治疗效果非常显著，连续使用5天可痊愈，对脓包疮的治疗效果显著，连续使用7天可痊愈，对带状疱疹有一定效果，连续使用10天症状明显好转。
实施例4
本实施例提供了一种SNK液，按重量计，所述SNK液由NK细胞原液20％，甘油5％和适量的无菌水组成，利用所述SNK液治疗足癣、毛囊炎和单纯疱疹，结果发现，该SNK液对上述三种疾病均有一定治疗效果，患者使用7天后症状均有一定好转。
实施例5
本实施例提供了一种SNK液，按重量计，所述SNK液由NK细胞原液50％，甘油5％和适量无菌水组成，利用所述SNK液治疗手癣患者7天后，基本痊愈。
实施例6
本实施例提供了一种SNK液，所述SNK液为100％的NK细胞原液，利用所述SNK液治疗足癣、毛囊炎和单纯疱疹，结果发现，该SNK液对足癣的治疗效果非常显著，重度患者治疗6天后痊愈，对毛囊炎治疗效果显著，重度患者治疗5天后痊愈，对单纯疱疹具有一定治疗效果，重度患者治疗5天后症状缓解。
理论上，药物中的NK细胞原液的含量越高，活性因子含量越高，效果越好，但考虑到使用方便性和增加皮肤渗透性和保护性的情况下，需要在NK细胞原液基础上添加了一些辅助成分，实施例6中采用100％的NK细胞原液进行治疗，其临床实验结果与实施例1的SNK液及膏相比，在治疗效果上并无很大差别。
以上为本发明一种详细的实施方式和具体的操作过程，是以本发明技术方案为前提下进行实施，但本发明的保护范围不限于上述的实施例。

Claims (8)

1.一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物，其特征在于，所述外用药物包括质量百分比为20％-100％的NK细胞原液。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物，其特征在于，所述外用药物为一种液体制剂，其组分及其质量百分比包括：NK细胞原液85.0-95.0％、甘油3.0-5.0％、硼砂0.05-0.08％、透明质酸0.05-0.1％、羟苯乙酯0.01-0.03％，溶剂为水。
3.根据权利要求1所述的一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物，其特征在于，所述外用药物为一种膏状制剂，其组分及其质量百分比包括：NK细胞原液80.0-85.0％、卡波姆941为0.1-1.5％、甘油为1.0-2.0％、三乙醇胺1.0-2.5％、对羟基苯甲酸乙酯0.01-0.5％、余量为水。
4.一种如权利要求1-3所述的用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取NK细胞进行扩增培养，获得NK细胞原液；
(2)将NK细胞原液与外用药物辅料混合，制备获得所述外用药物。
5.根据权利要求4所述的一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物的制备方法，其特征在于，若所述药物为液体制剂时，所述NK细胞原液的质量百分比为85.0-95.0％，所述辅料及其质量百分比为：甘油3.0-5.0％、硼砂0.05-0.08％、透明质酸0.05-0.1％、羟苯乙酯0.01-0.03％，溶剂为水；若所述药物为膏状制剂时，所述NK细胞原液的质量百分比为80.0-85.0％，所述辅料及其质量百分比包括：卡波姆941为0.1-1.5％、甘油为1.0-2.0％、三乙醇胺1.0-2.5％、对羟基苯甲酸乙酯0.01-0.5％、余量为水。
6.根据权利要求4所述的一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物的制备方法，其特征在于，所述NK细胞扩增培养的方法，包括以下步骤：
步骤一：取新鲜血液，提取血液中的外周血单核细胞PBMC；
步骤二：在RPMI-1640基础培养基中加入200U/ml的白介素IL-2、80U/ml的庆大霉素和10％重量百分比的胎牛血清，获得NK细胞培养液；
步骤三：取3.0×107-4.0×107个PBMC于一细胞培养瓶中，加入20-30ml的NK细胞培养液和2ml的浓度为1.0×107个/ml的NK扩增试剂，获得起始培养液；
步骤四：将NK细胞接种于起始培养液中培养1-2天，培养期间根据细胞生长状态添加NK细胞培养液；当培养至第3天时，将培养液离心，获得的细胞沉淀中加入NK细胞培养液继续培养；
步骤五：当NK细胞数量达1.5×108个/瓶以上时，加入2支NK扩增试剂和NK细胞培养液进行扩大培养，培养过程中根据细胞生长状态增加NK细胞培养液并进行分袋培养，使细胞浓度在1.0×106个/ml，当培养至第12天时，控制加液量，使细胞浓度为2.0×106个/ml；
步骤六：继续培养至第14天后，收集细胞培养液，获得NK细胞原液。
7.一种如权利要求1-3所述的外用药物在作为病原体感染性皮肤病治疗药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的一种外用药物在作为病原体感染性皮肤病治疗药物中的应用，其特征在于，将NK细胞原液与外用药物辅料混合，制备获得外用液体制剂和外用膏状制剂，先用外用液体制剂，再用外用膏状制剂，混合作用于患处。
CN201610995365.1A 2016-11-11 2016-11-11 一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用 Pending CN106265738A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610995365.1A CN106265738A (zh) 2016-11-11 2016-11-11 一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610995365.1A CN106265738A (zh) 2016-11-11 2016-11-11 一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106265738A true CN106265738A (zh) 2017-01-04

Family

ID=57721171

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610995365.1A Pending CN106265738A (zh) 2016-11-11 2016-11-11 一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106265738A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102256608B (zh) * 2008-12-18 2013-12-04 阿波科学有限公司 含有血单核细胞培养物的上清液的药物制剂
CN105754941A (zh) * 2016-04-18 2016-07-13 广州复大医疗股份有限公司 一种外周血nk细胞的体外诱导扩增培养方法
CN105925527A (zh) * 2016-05-19 2016-09-07 成都百赛泰科生物科技有限公司 一种用于制备nk细胞的试剂盒及其应用方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102256608B (zh) * 2008-12-18 2013-12-04 阿波科学有限公司 含有血单核细胞培养物的上清液的药物制剂
CN105754941A (zh) * 2016-04-18 2016-07-13 广州复大医疗股份有限公司 一种外周血nk细胞的体外诱导扩增培养方法
CN105925527A (zh) * 2016-05-19 2016-09-07 成都百赛泰科生物科技有限公司 一种用于制备nk细胞的试剂盒及其应用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
宗金宝等: "NK细胞与皮肤病", 《中国麻风皮肤病杂志》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104829738B (zh) 草叶马尾藻多糖提取物在改善肠道菌群防治糖尿病中的应用
US9662349B2 (en) Dietary composition having mixed polysaccharides derived from lucid ganoderma, lycium barbarum and polygonatum sibiricum and method of its preparation
CN102600443B (zh) 一种提高免疫力的组合物、制法及应用
CN1883560A (zh) 一种含金莲花的中药复方制剂及其制备方法
CN105017438B (zh) 一种白背三七多糖及其在制备用于免疫调节和抗肿瘤的药物和功能食品中的应用
CN102743739A (zh) 一种蟑螂多肽类物质的制备方法及其抗疱疹病毒医药用途
CN1682842A (zh) 一种消炎解毒的中药组合物及其制备方法和用途
CN103041341A (zh) 用于治疗结核性渗出性胸膜炎的中药组合物及其制备方法
CN101259160B (zh) 治疗禽类病毒性疾病的复方制剂及其制备方法
CN102988469A (zh) 一种防治流感病毒感染的中药组合物及其制备方法和用途
CN106344613A (zh) 一种nk细胞原液在制备治疗皮肤病药物中的应用
CN101475627A (zh) 一种抗猪瘟转移因子的制备
CN106389467A (zh) 一种用于治疗皮炎和湿疹类皮肤病的外用药物及其制备方法和应用
CN108210598A (zh) 一种治疗鸭病毒性肝炎的中药组合物及其制备方法
CN106265738A (zh) 一种用于治疗病原体感染性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用
CN106265737A (zh) 一种用于治疗皮肤附属器及瘙痒性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用
CN102008705B (zh) 一种用于感冒早期的药食两用姜枣营卫颗粒
CN106344612A (zh) 一种用于治疗自身免疫性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用
CN101391065A (zh) 一种用于治疗急慢性盆腔炎的复方木鳖子花椒汤
CN1164267C (zh) 绿原酸的医学用途及它的制剂
CN109223910A (zh) 抗感冒金银花艾条制备方法和应用
CN106389477A (zh) 一种土生戈登氏菌的全细胞植物油提取物的制备方法和应用
CN102526493B (zh) 一种抗肺痨的药物及其制备方法
CN106491645A (zh) 一种用于治疗物理性皮肤病及动物性皮肤病的外用药物及其制备方法和应用
CN102068537B (zh) 陈皮甘草制备防治鼻咽癌的保健食品和药品的生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170104

RJ01 Rejection of invention patent application after publication