CN106257276A - 一种英加韦林及其制剂的杂质检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种英加韦林及其制剂的杂质检测方法，所述方法为高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以有机相与水相的混合溶剂作为流动相进行梯度洗脱，测定英加韦林及其制剂中的十个杂质。该方法工艺简单、成本低廉，采用梯度洗脱的方法，能够有效的测定并分离英加韦林及其制剂中的十个重要杂质，检测方法科学、合理、客观，从而能够更好的控制英加韦林的质量。

Description

一种英加韦林及其制剂的杂质检测方法
技术领域
本发明属于药物分析领域，特别涉及一种免疫调节剂英加韦林及其制剂的杂质检测方法。
背景技术
英加韦林(Ingavirin，5-{[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-5-羰基戊酸)是一种抗病毒感染及免疫调节剂，其分子式为C10H15N3O3，分子量225.24，结构式为：
英加韦林是由俄最大的制药公司之一的Valenta公司推出的新型抗病毒产品，其对流行性感冒(H3N2亚型、甲型H1N1流感、H5N1)、B型病毒、腺病毒具有较高抗病毒疗效。英加韦林作用机制是通过抑制新合成的病毒NP蛋白从细胞质到细胞核的迁移，从而抑制病毒核复制，这是病毒感染宿主的重要阶段。2009年6月俄罗斯卫生及社会发展部发表通告，将英加韦林作为甲型H1N1流行性感冒的推荐治疗药物，并载入其新发布的《成人甲型H1N1流感防治指南》中。
英加韦林胶囊作为英加韦林目前唯一剂型，通过口服进入人体血液。然而，由于英加韦林在合成过程中由于起始原料组胺二盐酸盐反应不充分易引入一些副产物，这些副产物的性质与英加韦林极为相似，分离难度大，质量难以控制，可能会由于除去不完全而影响药物纯度和质量以及药效活性，增加药物的不良反应。
因此英加韦林杂质的检测及有效分离在英加韦林的合成和制剂过程中的质量控制及临床疗效方面具有重要的意义。
现有技术中对英加韦林以及英加韦林胶囊的质量控制介绍较少，对其重要杂质进行的监控较少，难以很好的评价英加韦林特别是英加韦林胶囊的质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种英加韦林及其制剂的杂质检测方法，具体如下：
一种英加韦林及其制剂的杂质检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法，色谱条件为：
检测器：紫外检测器，检测波长为210-214nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱；
柱温：30-50℃；
流动相：有机相与水相的混合溶剂作为流动相梯度洗脱；
流动相流速为0.5-1.5ml/min；
采用梯度洗脱条件测定英加韦林及其十个杂质，其中，梯度洗脱条件为：
其中，十个杂质分别为：
杂质1：(S)-5-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)乙胺基]-5-羰基戊酸；
杂质2：5-[2-(1H-咪唑-4-基)乙胺基]-5-羰基戊酸乙酯；
杂质3：N1,N5-二(2-(1H-咪唑-4-基)乙基)戊酰胺；
杂质4：5-乙氧基-5-羰基戊酸；
杂质5：N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]乙酰胺；
杂质6：5-[2-(1H-咪唑-4-基)乙胺基]-5-羰基戊酸甲酯；
杂质7：5-甲氧基-5-羰基戊酸；
杂质8：1-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-2,6-二羰基哌啶；
杂质9：2-(1H-咪唑-4-基)乙胺二盐酸盐；
杂质10：1,5-戊二酸。
本检测方法检测的英加韦林杂质含量均在0.05％以下。
上述检测方法中有机相为甲醇或乙腈，所述水相为pH为2.0-6.0的磷酸盐缓冲液，优选pH为2.0-3.0。
上述检测方法中所述检测波长为214nm。
上述检测方法中所述柱温为30℃。
上述检测方法中所述流速为0.8-1.0ml/min。
本发明提供的英加韦林及其制剂的杂质检测方法工艺简单、成本低廉，采用梯度洗脱的方法，能够有效的检测并分离英加韦林及其十个重要杂质，检测方法科学、合理、客观，从而能够更好的控制英加韦林的质量。
具体而言，本发明通过大量实验，采用高效液相色谱法梯度洗脱，在该洗脱条件下，使英加韦林中十种重要的工艺杂质或降解杂质能够完全分离，即适用于英加韦林原料，也适用于英加韦林制剂，为英加韦林及其制剂提供了一种更可靠、更准确的质量控制方法。
附图说明
图1为本发明实施例1的HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述，检测方法参照高效液相法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。
实施例1高效液相色谱法测定英加韦林中杂质
仪器设备样品：
检测器：紫外检测器，检测波长为214nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(Thermo Syncronis C18,4.6×250mm,5μm适用)
柱温：35℃；
流动相：有机相为pH＝2.6的磷酸盐缓冲液；水相为甲醇；
流动相流速：1.5ml/min
按下表进行梯度洗脱，洗脱条件：
检测步骤：取英加韦林适量，精密称定，加初始流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含英加韦林1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密移取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加初始流动相稀释至刻度，即得对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按面积归一化法计算，即得，结果见表1。
表1实施例1的杂质之间分离度
出峰顺序 与后峰分离度
杂质10 27
杂质1 4
杂质5 4
杂质7 7
英加韦林 21
杂质8 7
杂质6 4
杂质4 4
杂质9 7
杂质3 7
杂质2 —
实施例2高效液相色谱法测定英加韦林中杂质
仪器设备样品：
检测器：紫外检测器，检测波长为210nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(Thermo Syncronis C18,4.6×250mm,5μm适用)
柱温：30℃；
流动相：有机相为pH＝2.0的磷酸盐缓冲液；水相为甲醇；
流动相流速：1.5ml/min
按下表进行梯度洗脱，洗脱条件：
测定步骤同实施例1，检测结果见表2.
表2实施例2的杂质之间分离度
出峰顺序 与后峰分离度
杂质10 24
杂质1 5
杂质5 2
杂质7 10
英加韦林 21
杂质8 6
杂质6 4
杂质4 3
杂质9 6
杂质3 6
杂质2 —
实施例3高效液相色谱法测定英加韦林胶囊中杂质
仪器设备样品：
检测器：紫外检测器，检测波长为214nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(Thermo Syncronis C18,4.6×250mm,5μm适用)
柱温：50℃；
流动相：有机相为pH＝3.0的磷酸盐缓冲液；水相为甲醇；
流动相流速：0.5ml/min
按下表进行梯度洗脱，洗脱条件：
检测步骤：取本品装量差异项下的内容物适量，加适量水使英加韦林溶解，并定量稀释制成每1ml约含英加韦林1mg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密移取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加初始流动相稀释至刻度，即得对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按面积归一化法计算，即得，结果见表3。
表3实施例3的杂质之间分离度
出峰顺序 与后峰分离度
杂质10 21
杂质1 4
杂质5 2
杂质7 8
英加韦林 21
杂质8 7
杂质6 3
杂质4 3
杂质9 5
杂质3 6
杂质2 —
实施例4高效液相色谱法测定英加韦林胶囊中杂质。
仪器设备样品：
检测器：紫外检测器，检测波长为214nm；
色谱柱：八烷基硅烷键合硅胶
柱温：35℃；
流动相：有机相为pH＝2.8的磷酸盐缓冲液；水相为甲醇；
流动相流速：1.0ml/min
按下表进行梯度洗脱，洗脱条件：
洗脱条件：
测定步骤同实施例3，结果见表4.
表4实施例4的杂质之间分离度
出峰顺序 与后峰分离度
杂质10 5
杂质1 11
杂质5 3
杂质7 3
英加韦林 12
杂质8 5
杂质6 3
杂质4 3
杂质9 3
杂质3 10
杂质2 —
实施例5高效液相色谱法测定英加韦林胶囊中杂质
仪器设备样品：
检测器：紫外检测器，检测波长为214nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(Thermo Syncronis C18,4.6×250mm,5μm适用)
柱温：35℃；
流动相：有机相为pH＝6.0的磷酸盐缓冲液；水相为甲醇；
流动相流速：1.0ml/min
按下表进行梯度洗脱，洗脱条件：
洗脱条件：
测定步骤同实施例3，检测结果见表5.
表5实施例5的杂质之间分离度
出峰顺序 与后峰分离度
杂质10 5
杂质1 11
杂质5 3
杂质7 3
英加韦林 11
杂质8 5
杂质6 3
杂质4 2
杂质9 3
杂质3 11
杂质2 —

Claims (8)

1.一种英加韦林及其制剂的杂质检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法，色谱条件为：
检测器：紫外检测器，检测波长为210-214nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱；
柱温：30-50℃；
流动相：有机相与水相的混合溶剂作为流动相梯度洗脱；
流动相流速：0.5-1.5ml/min；
采用梯度洗脱条件测定英加韦林及其十个杂质，其中，梯度洗脱条件为：
2.据权利要求1所述的检测方法，其特征在于十个杂质分别为：
杂质1：(S)-5-[1-羧基-2-(1H-咪唑-4-基)乙胺基]-5-羰基戊酸；
杂质2：5-[2-(1H-咪唑-4-基)乙胺基]-5-羰基戊酸乙酯；
杂质3：N1,N5-二(2-(1H-咪唑-4-基)乙基)戊酰胺；
杂质4：5-乙氧基-5-羰基戊酸；
杂质5：N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]乙酰胺；
杂质6：5-[2-(1H-咪唑-4-基)乙胺基]-5-羰基戊酸甲酯；
杂质7：5-甲氧基-5-羰基戊酸；
杂质8：1-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-2,6-二羰基哌啶；
杂质9：2-(1H-咪唑-4-基)乙胺二盐酸盐；
杂质10：1,5-戊二酸。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述有机相为甲醇或乙腈，所述水相为磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于磷酸盐缓冲液的pH为2.0-6.0。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于磷酸盐缓冲液的pH为2.0-3.0。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述检测波长为214nm。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述柱温为30℃。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述流速为0.8-1.0ml/min。
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