CN106248951A - 一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法 - Google Patents

一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106248951A
CN106248951A CN201610539941.1A CN201610539941A CN106248951A CN 106248951 A CN106248951 A CN 106248951A CN 201610539941 A CN201610539941 A CN 201610539941A CN 106248951 A CN106248951 A CN 106248951A
Authority
CN
China
Prior art keywords
zif
gox
solution
pda
galectin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610539941.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106248951B (zh
Inventor
刘景丰
曾永毅
刘小龙
张晓龙
郑爱仙
廖乃顺
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
FUZHOU INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL
Original Assignee
FUZHOU INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by FUZHOU INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL filed Critical FUZHOU INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL
Priority to CN201610539941.1A priority Critical patent/CN106248951B/zh
Publication of CN106248951A publication Critical patent/CN106248951A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106248951B publication Critical patent/CN106248951B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明涉及一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法，该方法通过目标物质结合的酶标复合物上的葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生过氧化氢，再加入亚铁离子溶液产生活性氧来淬灭金纳米簇溶液的荧光，利用荧光光谱仪测定荧光变化进行对目标分子的定量检测。本方法所用荧光金纳米簇发光稳定、对活性氧的响应灵敏，用作检测探针在可控性上更稳定、操作更方便。本方法所构建检测体系具有合成简单、成本低、灵敏度和稳定性高等优点，有望在临床生物分子检测上得到更广泛应用扩展。

Description

一种检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法
(一)技术领域
本发明涉及一种检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法。
(二)背景技术
Galectin-4(半乳糖凝集素-4)是β-半乳糖苷结合蛋白，属凝集素家族成员，它具有CRD结构域，与含β-半乳糖苷的糖蛋白和糖脂具有很高的亲和力，在细胞与细胞、细胞与基质之间起到特异性粘附作用，与肿瘤的转移、浸润、生长和粘附密切相关。研究表明，galectin-4的异常表达与某些癌症有关，例如，在某些发生转移的结肠癌、乳腺癌患者血清中的galectin-4含量显著提高；另外，在胰腺癌、肝细胞癌、胃癌患者中galectin-4含量也是上调的。因为galectin-4在癌细胞转移、生长等方面的重要功能，其有望成为重要的靶标分子用于诊断和治疗，所以开发灵敏的选择的检测galectin-4的方法具有重要应用价值。
酶联免疫分析方法是最为常用的一种免疫分析方法，为了达到更好的检测灵敏度，通过纳米材料载体来提高酶与检测抗体的比率是一种常用且有效的方法。目前，已有许多纳米材料如金纳米材料、碳纳米管、石墨烯纳米片、脂质体等材料被用做酶与抗体的载体。但是，这些固定方法有些存在长时间的、共价的修饰或者复杂的组装过程、所用载体成本高等不足，限制了这些方法的应用。所以，开发一种简单、低成本、高效的酶固定方法，有很大应用价值的。
(三)发明内容
本发明目的是基于简单、低成本、高效的酶固定方法，提供一种合成简单、成本低、灵敏度和稳定性高的检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法。
一种检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法，所述方法包括：
(1)合成荧光金纳米簇；
(2)固定葡萄糖氧化酶：先合成葡萄糖氧化酶-金属有机框架复合物GOx/ZIF-8，然后在GOx/ZIF-8外层包裹聚多巴胺壳层得到GOx/ZIF-8-PDA，再修饰上链霉亲和素得到GOx/ZIF-8-PDA-STV；
(3)目标蛋白检测：
i.酶标板以包被稀释液包被目标蛋白，孵育后，再以洗涤液洗板；
ii.加入封闭液进行封闭，再以洗涤液洗板；
iii.加入生物素标记抗体孵育形成抗原-检测抗体特异反应，再以洗涤液洗板；
iv.再加入步骤(2)所得GOx/ZIF-8-PDA-STV孵育，利用链霉亲和素与生物素特异结合将酶复合物链接至抗体上，再以洗涤液洗板；
v.加入1～100mM的葡萄糖溶液孵育反应，20～37℃反应5～60分钟，生成过氧化氢；
vi.将反应液转移至离心管；
(4)在离心管中，分别加入硫酸亚铁溶液和步骤(1)合成的荧光金纳米簇，用荧光光谱仪分别检测溶液荧光值；
(5)梯度浓度的Galectin-4蛋白标准品按照步骤(3)、(4)方法进行检测，处理步骤(4)所得数据，绘制标准曲线；
(6)根据待测蛋白样品的检测结果，对照标准曲线，获得待测蛋白样品的浓度数据。
所述步骤(2)方法如下：将醋酸锌溶液或者硝酸锌溶液或者氯化锌溶液中的一种或者几种二价锌离子混合溶液与2-甲基咪唑溶液混合，锌离子与2-甲基咪唑溶液的摩尔浓度比为10:1～1:10，再加入葡萄糖氧化酶溶液至葡萄糖氧化酶浓度为0.1～10mg/mL，反应30分钟后，离心洗涤收集得GOx/ZIF-8；将GOx/ZIF-8分散于浓度5～50mM的Tris-HCl缓冲液中加入多巴胺溶液至多巴胺终浓度为0.05～10mg/mL，进行自聚合反应10分钟～12小时，离心洗涤收集得GOx/ZIF-8-PDA；将GOx/ZIF-8-PDA与STV溶液于pH 8.0～8.5缓冲液中，STV终浓度为1μg/mL～1mg/mL，共价反应10分钟～12小时，离心洗涤收集得GOx/ZIF-8-PDA-STV。
所述荧光金纳米团簇是以谷胱甘肽为还原剂和保护剂还原氯金酸溶液得到；所述荧光金纳米团簇激发波长为375nm，发射波长为500～700nm，发射峰为610nm。
所述包被稀释液为10mM、pH 7.4的PBS；所述洗涤液组成如下：8g/L NaCl，0.2g/LKCl，0.05％Tween-20，溶剂为50mM、pH 7.4的PBS；所述封闭液为1％BSA，溶剂为前述洗涤液。
金属有机框架材料(MOFs)在多个领域如气体存储、传感、催化等具有良好应用。近年来，MOFs与生物分子结合构建生物复合物，可以有效提高生物分子稳定性，且合成方法简单、低成本，在生物传感方面展现潜在应用价值。金纳米簇具有良好生物相容性、光物理性质，在传感、成像等多个领域得到良好应用。本发明整合这些优点，设计了一种具有良好选择性和灵敏度的galectin-4荧光免疫分析方法。
本发明的检测原理是基于荧光金纳米簇在活性氧存在下，荧光被显著猝灭；利用金属有机框架材料与葡萄糖氧化酶形成酶-MOFs复合材料，在其外层包裹聚多巴胺壳层，再与链霉亲和素共价反应，形成酶标探针；类似传统酶联免疫吸附反应过程，将目标蛋白吸附于酶标板，目标蛋白与生物素标记抗体形成特异结合，再与酶标探针通过生物素-链霉亲和素特异结合作用形成复合物；葡萄糖氧化酶复合物在酶标板上的吸附量与待测蛋白成比例关系，利用葡萄糖氧化酶与葡萄糖反应产生过氧化氢，再加入亚铁离子和金纳米簇，过氧化氢与亚铁离子产生活性氧，淬灭金纳米簇荧光，通过荧光光谱仪检测荧光值，实现对待测蛋白质的特异分析检测目的。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明提供了一种检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法，具有合成简单、成本低、灵敏度和稳定性高等优点。
(2)利用金属有机框架与酶形成复合物可以保持甚至提高酶的催化活性、稳定性；修饰聚多巴胺壳层可在温和条件下与含氨基或者巯基的蛋白或者生物化学分子反应，具有良好扩展性，有望扩宽至其它目标检测体系。
(3)荧光金纳米簇发光稳定、对活性氧的响应灵敏，用作检测探针在可控性上更稳定、操作更方便。
(4)通过改变识别抗体，利用该酶标签和检测探针，可扩宽至其它免疫、适配体和基因检测，本方法可扩展到毒素、蛋白、核酸和药物等目标物分析。
(四)附图说明
图1为检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法原理示意图。
图2为合成的金纳米簇的吸收与荧光光谱图。
图3为合成的GOx/ZIF-8-PDA的透射电镜图。
图4为检测Galectin-4蛋白浓度的检测标准曲线图。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
1、金纳米团簇的合成
合成前将所用玻璃器皿于王水中浸泡，然后用大量的水冲洗，最后用超纯水润洗待用。准确移取5毫升4mM氯金酸溶液与5毫升8mM谷胱甘肽溶液于圆底烧瓶中室温搅拌混匀。然后将烧瓶转移至70℃油浴锅反应24小时。冷却至室温后，将反应溶液移至1000Da截留分子量透析袋以超纯水透析24小时，以除去未反应完全的氯金酸和谷胱甘肽分子，将所得透析液10000rpm离心10分钟，除去沉淀，得金纳米簇溶液，保存于4度冰箱避光待用。所合成的金纳米簇的光谱图如图2所示，在375nm激发时，金纳米簇显示出明亮红色荧光，最大吸收峰位于610nm。
2、葡萄糖氧化酶-金属有机框架复合材料-聚多巴胺-链霉亲和素合成
在室温条件下，将2毫升40mM的醋酸锌溶液加至圆底烧瓶中，往烧瓶中加入2毫升的160mM 2-甲基咪唑溶液，之后加入含200微升含1mg葡萄糖氧化酶的水溶液，搅拌反应1分钟后，室温静置老化30分钟。之后于6500rpm离心10分钟，水洗3次以除去未反应的物质。沉淀重分散于2毫升超纯水中，得GOx/ZIF-8。
取200微升的GOx/ZIF-8溶液加入140微升超纯水加入20微升10mg/mL多巴胺溶液再加入40微升100mM Tris-HCl缓冲液，室温振荡反应1小时。之后将反应液于9000rpm 10分钟离心，水洗3次以除去未反应物质，沉淀重分散于200微升超纯水中得GOx/ZIF-8-PDA。
取所得GOx/ZIF-8-PDA溶液200微升加入25微升100mM PBS(pH8.0)缓冲液，再加入2微升1mg/mL链霉亲和素溶液，四度振荡反应过夜，之后将反应液于9000rpm10分钟离心，水洗3次以除去未反应物质，沉淀重分散于200微升超纯水中。再加入25微升1％BSA溶液封闭空白位点以减少非特异吸附，反应4小时后，反应液于9000rpm 10分钟离心，重分散于0.1％BSA溶液中，得GOx/ZIF-8-PDA-STV保存于4度冰箱待用。所合成的GOx/ZIF-8-PDA的透射电镜图如图3所示，酶复合材料尺寸在400～800nm范围，外层有明显的聚多巴胺壳层。
3、目标蛋白galectin-4检测
图1为本发明的荧光免疫分析原理示意图，具体步骤如下：
(1)溶液配制
蛋白包被稀释液：10mM PBS(pH7.4)；
洗涤液：50mM PBS(pH7.4)+8g/L NaCl+0.2g/L KCl+0.05％(w/w)tween-20；
封闭液：1％(w/w)BSA溶液，溶剂为前述洗涤液；
(2)检测过程
包被：不同浓度的待测蛋白质用包被稀释液稀释到适当浓度，取50微升溶液加入至酶标板，4℃吸附12小时，弃去孔中溶液，洗涤液洗涤3次；
封闭：将300微升封闭液加至各反应孔并置于37℃2h，封闭结束后用洗涤液洗3遍；
检测抗体识别：加入50微升生物素标记galectin-4抗体250ng/mL并置于37℃孵育1小时，弃去孔中溶液，洗涤液洗涤5次；
酶标复合结合：加入50微升含5微升GOx/ZIF-8-PDA-SA溶液于酶标板中，并置于37℃振荡孵育30分钟，弃去孔中溶液，洗涤液洗涤5次；
催化葡萄糖反应：往酶标板各反应孔中加入100微升5mM葡萄糖溶液，置于37℃孵育30分钟；
荧光检测：将酶标板中的溶液移至1.5毫升离心管中，加入78微升超纯水，加入20微升金纳米簇溶液，再加入2微升1mM硫酸亚铁溶液，混匀后，用荧光光谱仪检测荧光值。设定激发波长375nm，扫描500～700nm处荧光光谱，读取610nm处荧光值。
梯度浓度的Galectin-4蛋白标准品按照上述方法进行检测，获得标准曲线如图4所示，随着Galectin-4蛋白浓度增加，金纳米簇荧光逐渐减弱，结果显示可检出10pg/mL的Galectin-4。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (4)

1.一种检测galectin-4的荧光酶联免疫分析方法，所述方法包括：
(1)合成荧光金纳米簇；
(2)固定葡萄糖氧化酶：先合成葡萄糖氧化酶-金属有机框架复合物GOx/ZIF-8，然后在GOx/ZIF-8外层包裹聚多巴胺壳层得到GOx/ZIF-8-PDA，再修饰上链霉亲和素得到GOx/ZIF-8-PDA-STV；
(3)目标蛋白检测：
(a)酶标板以包被稀释液包被待测蛋白，孵育后，再以洗涤液洗板；
(b)加入封闭液进行封闭，再以洗涤液洗板；
(c)加入生物素标记抗体孵育形成抗原-检测抗体特异反应，再以洗涤液洗板；
(d)再加入步骤(2)所得GOx/ZIF-8-PDA-STV孵育，利用链霉亲和素与生物素特异结合将酶复合物链接至抗体上，再以洗涤液洗板；
(e)加入1～100mM的葡萄糖溶液孵育反应，20～37℃反应5～60分钟，生成过氧化氢；
(f)将反应液转移至离心管；
(4)在离心管中，分别加入硫酸亚铁溶液和步骤(1)合成的荧光金纳米簇，用荧光光谱仪分别检测溶液荧光值；
(5)梯度浓度的Galectin-4蛋白标准品按照步骤(3)、(4)方法进行检测，处理步骤(4)所得数据，绘制标准曲线；
(6)根据待测蛋白的检测结果，对照标准曲线，获得待测蛋白的浓度数据。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)方法如下：将醋酸锌溶液或者硝酸锌溶液或者氯化锌溶液中的一种或者几种二价锌离子混合溶液与2-甲基咪唑溶液混合，锌离子与2-甲基咪唑溶液的摩尔浓度比为10:1～1:10，再加入葡萄糖氧化酶溶液至葡萄糖氧化酶浓度为0.1～10mg/mL，反应30分钟后，离心洗涤收集得GOx/ZIF-8；将GOx/ZIF-8分散于浓度5～50mM的Tris-HCl缓冲液中加入多巴胺溶液至多巴胺终浓度为0.05～10mg/mL，进行自聚合反应10分钟～12小时，离心洗涤收集得GOx/ZIF-8-PDA；将GOx/ZIF-8-PDA与STV溶液于pH 8.0～8.5的缓冲液中，STV终浓度为1μg/mL～1mg/mL，共价反应10分钟～12小时，离心洗涤收集得GOx/ZIF-8-PDA-STV。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述荧光金纳米团簇是以谷胱甘肽为还原剂和保护剂还原氯金酸溶液得到；所述荧光金纳米团簇激发波长为375nm，发射波长为500～700nm，发射峰为610nm。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述包被稀释液为10mM、pH7.4的PBS；所述洗涤液组成如下：8g/L NaCl，0.2g/L KCl，0.05％Tween-20，溶剂为50mM、pH 7.4的PBS；所述封闭液为1％BSA，溶剂为前述洗涤液。
CN201610539941.1A 2016-07-11 2016-07-11 一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法 Active CN106248951B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610539941.1A CN106248951B (zh) 2016-07-11 2016-07-11 一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610539941.1A CN106248951B (zh) 2016-07-11 2016-07-11 一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106248951A true CN106248951A (zh) 2016-12-21
CN106248951B CN106248951B (zh) 2018-03-06

Family

ID=57613662

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610539941.1A Active CN106248951B (zh) 2016-07-11 2016-07-11 一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106248951B (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108546331A (zh) * 2018-04-20 2018-09-18 浙江大学 酶-金属有机框架复合膜的制备方法及修饰电极生物传感的应用
CN108586759A (zh) * 2018-03-01 2018-09-28 北京化工大学 一种含双键的金属-有机框架材料的制备方法及应用
CN109490532A (zh) * 2018-12-28 2019-03-19 陕西师范大学 一种利用金属有机框架材料制备酶标记抗体的方法
CN109839500A (zh) * 2017-11-24 2019-06-04 中国农业大学 一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法
CN111118111A (zh) * 2019-12-11 2020-05-08 山东农业大学 一种葡萄糖的快速检测方法
CN112098649A (zh) * 2020-08-15 2020-12-18 青岛科技大学 一种检测肝癌患者血清生物标志物的信号控释纳米材料及其制备方法
CN112098648A (zh) * 2020-08-15 2020-12-18 青岛科技大学 一种检测肝癌患者血清生物标志物的方法
CN113218941A (zh) * 2021-04-30 2021-08-06 西北农林科技大学 一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针及其制备方法和应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0490839A2 (en) * 1990-12-13 1992-06-17 Antonio De Vizia Method and kit for enzyme-immunoassay
CN102495207A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 华东交通大学 一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法
WO2012174402A2 (en) * 2011-06-16 2012-12-20 University Of South Florida Polyhedral cage-containing mesoporous metal-organic frameworks as platform for biocatalysis, methods of making these frameworks, and methods of using these frameworks
CN104087572A (zh) * 2014-07-01 2014-10-08 清华大学 一种蛋白质与金属有机骨架化合物复合材料及其制备方法
CN104262487A (zh) * 2014-08-21 2015-01-07 浙江大学 一种功能纳米材料/金属有机框架物复合物及其制备方法
CN104330393A (zh) * 2014-11-04 2015-02-04 福建医科大学 金纳米簇为荧光探针的葡萄糖测定方法
CN105543211A (zh) * 2016-02-29 2016-05-04 华南理工大学 一种固定化葡萄糖氧化酶及其制备方法与应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0490839A2 (en) * 1990-12-13 1992-06-17 Antonio De Vizia Method and kit for enzyme-immunoassay
WO2012174402A2 (en) * 2011-06-16 2012-12-20 University Of South Florida Polyhedral cage-containing mesoporous metal-organic frameworks as platform for biocatalysis, methods of making these frameworks, and methods of using these frameworks
CN102495207A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 华东交通大学 一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法
CN104087572A (zh) * 2014-07-01 2014-10-08 清华大学 一种蛋白质与金属有机骨架化合物复合材料及其制备方法
CN104262487A (zh) * 2014-08-21 2015-01-07 浙江大学 一种功能纳米材料/金属有机框架物复合物及其制备方法
CN104330393A (zh) * 2014-11-04 2015-02-04 福建医科大学 金纳米簇为荧光探针的葡萄糖测定方法
CN105543211A (zh) * 2016-02-29 2016-05-04 华南理工大学 一种固定化葡萄糖氧化酶及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DINGBIN LIU ET AL.: "Glucose Oxidase-Catalyzed Growth of Gold Nanoparticles Enables Quantitative Detection of Attomolar Cancer Biomarkers", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
FENGJIAO LYU ET AL.: "One-Pot Synthesis of Protein-Embedded Metal−Organic Frameworks with Enhanced Biological Activities", 《NANO LETTERS》 *
XIAOLING WU ET AL.: "Facile synthesis of multiple enzyme-containing metal–organic frameworks in a biomoleculefriendly environment", 《CHEM. COMMUN.》 *
XIAOLING WU ET AL.: "Metal–organic frameworks and inorganic nanoflowers: a type of emerging inorganic crystal nanocarrier for enzyme immobilization", 《CATALYSIS SCIENCE & TECHNOLOGY》 *
XIAOLING WU ET AL.: "Polydopamine tethered enzyme/metal–organic framework composites with high stability and reusability", 《NANOSCALE》 *
ZHENTAO LUO ET AL.: "From Aggregation-Induced Emission of Au(I)−Thiolate Complexes to Ultrabright Au(0)@Au(I)−Thiolate Core−Shell Nanoclusters", 《JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109839500A (zh) * 2017-11-24 2019-06-04 中国农业大学 一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法
CN108586759A (zh) * 2018-03-01 2018-09-28 北京化工大学 一种含双键的金属-有机框架材料的制备方法及应用
CN108546331A (zh) * 2018-04-20 2018-09-18 浙江大学 酶-金属有机框架复合膜的制备方法及修饰电极生物传感的应用
CN109490532A (zh) * 2018-12-28 2019-03-19 陕西师范大学 一种利用金属有机框架材料制备酶标记抗体的方法
CN111118111A (zh) * 2019-12-11 2020-05-08 山东农业大学 一种葡萄糖的快速检测方法
CN112098649A (zh) * 2020-08-15 2020-12-18 青岛科技大学 一种检测肝癌患者血清生物标志物的信号控释纳米材料及其制备方法
CN112098648A (zh) * 2020-08-15 2020-12-18 青岛科技大学 一种检测肝癌患者血清生物标志物的方法
CN112098648B (zh) * 2020-08-15 2022-12-02 青岛科技大学 一种检测肝癌患者血清生物标志物的方法
CN112098649B (zh) * 2020-08-15 2022-12-02 青岛科技大学 一种检测肝癌患者血清生物标志物的信号控释纳米材料及其制备方法
CN113218941A (zh) * 2021-04-30 2021-08-06 西北农林科技大学 一种酶基金属-多酚纳米级联催化的微生物活力检测探针及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN106248951B (zh) 2018-03-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106248951B (zh) 一种检测galectin‑4的荧光酶联免疫分析方法
Zhou et al. Emerging strategies to develop sensitive AuNP-based ICTS nanosensors
Chen et al. Alkaline phosphatase-triggered in situ formation of silicon-containing nanoparticles for a fluorometric and colorimetric dual-channel immunoassay
Zhu et al. Recent progress in biosensors based on organic-inorganic hybrid nanoflowers
EP2541248B1 (en) Preparation method of antigen-immobilized immunofluorescence slide, and immunofluorescence slide prepared thereby
Feng et al. Gold–platinum bimetallic nanoclusters with enhanced peroxidase-like activity and their integrated agarose hydrogel-based sensing platform for the colorimetric analysis of glucose levels in serum
Huang et al. Staining traditional colloidal gold test strips with Pt nanoshell enables quantitative point-of-care testing with simple and portable pressure meter readout
Mbage et al. Fabrication of folate functionalized polyoxometalate nanoparticle to simultaneously detect H2O2 and sarcosine in colorimetry
CN101706504A (zh) 金纳米粒子模拟酶应用于生物检测的方法
CN104865247B (zh) 基于纳米金聚集的显色方法在免疫检测中的应用
CN106093438B (zh) 一种利用杂交链反应便携式检测血管内皮生长因子的方法以及该方法所用的核酸序列
JP5781603B2 (ja) 結合反応の電気化学的検出方法
CN105651840A (zh) 一种检测β-淀粉样蛋白寡聚体的类免疫电化学传感器及其制备方法
CN111693571A (zh) 一种基于光寻址电位传感器检测gpc3的方法
CN108375616A (zh) 一种检测碱性磷酸酶的液晶生物传感器及其制备方法和应用
Attia et al. A new method for early diagnosis of liver cancer using a biosensor embedded in an alginate polymer thin film
Du et al. Thiol-activated fluorescent probe for sensitive detection and imaging of proteins
Yu et al. A gold nanoparticles growth-based immunoassay for detection of antibiotic residues
Huang et al. A fluorescence signal amplification strategy for modification-free ratiometric determination of tyrosinase in situ based on the use of dual-templated copper nanoclusters
CN107121549A (zh) 一种快速的检测癌胚抗原的比色分析方法
CN104198740A (zh) 一种对葡萄糖和胆固醇同步检测的纳米生物传感器
CN109342420A (zh) Fe3O4@C一维纳米线的应用
CN111060574B (zh) 一种基于双重信号放大策略检测唾液酸的核酸适配体电化学传感器
Sun et al. A signal amplification strategy for prostate specific antigen detection via releasing oxidase-mimics from coordination nanoparticles by alkaline phosphatase
CN108760696A (zh) 一种基于磷光铜纳米簇检测胰蛋白酶及其抑制剂的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant