CN106215192A - 一种pH和光双响应靶向载药体系及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种pH和光双响应的靶向载药体系，载药体系中药物分子经吸附贮存在介孔二氧化硅微球内部，微球表面修饰有端基为醛基的硅烷偶联剂和肼基甲基偶氮苯，并用大环分子α‑环糊精将其封装。本发明通过合成含有醛基的硅烷偶联剂和肼基甲基偶氮苯并将其修饰在介孔二氧化硅微球表面，然后吸附药物分子，用环糊精将其封装制备靶向载药体系。与其他载药体系相比，该靶向载药体系具有释放量大，释放速度快，易调节，灵敏度高的优点，在pH和紫外光刺激下可协同控制释放，具有双响应释放性能，通过控制pH和紫外光条件，实现药物的可控释放和阶段性释放。经细胞实验验证，本发明的靶向载药体系在生物医药领域靶向载药方面具有很好的应用前景。

Description

一种pH和光双响应靶向载药体系及其制备方法
技术领域
本发明属于生物化学领域，涉及一种pH和光双响应靶向载药体系及其制备方法。
背景技术
介孔二氧化硅具有表面易修饰、介孔孔径大、粒径可控、稳定性好、生物相容性好、毒性低等优点，可经表面修饰制得智能纳米容器广泛应用于众多领域。
在常见的外部环境刺激条件中，以pH作为外部刺激响应因子的研究最为广泛和成熟。人正常细胞组织的pH值约为7.4，但肿瘤细胞呈现弱酸性，尤其是晚期肿瘤细胞其pH值约为5左右。pH响应的智能纳米容器在中性条件下比较稳定，在呈酸性的肿瘤组织细胞处pH敏感键断裂，实现药物的靶向可控释放。目前报道的pH敏感化学键主要有腙键，缩醛，亚胺等。Aryal等人制备了顺铂衍生物聚合物，形成腙键制备出酸响应载药体系，该体系酸响应敏感度高，能够实现靶向载药(Aryal S，et al.Polymer-cisplatin conjugatenanoparticles for acid-responsive drug delivery.ACS Nano.2009，4，1)。
除了利用肿瘤与正常组织细胞微环境的pH的不同设计智能纳米容器外，光刺激响应由于其远程刺激响应，高可控性和非外物可控性等优点也被应用于制备智能纳米容器。光刺激响应纳米阀门主要有偶氮苯衍生物，香豆素衍生物等。偶氮苯具有光致异构化性能，在可见光或者黑暗的条件下，偶氮苯以反式结构存在，在紫外光的照射下，偶氮苯由反式变为顺式结构。Zink等人首次报道了偶氮苯-环糊精光刺激响应型超分子开关功能化的智能纳米容器，其中芘-β-CD可与偶氮苯衍生物自组装，包结络合将荧光分子封装，芘分子可用于监测光控条件下纳米阀门的状况，通过紫外吸收光谱检验该光响应智能纳米材料的药物释放情况，但是药物的释放量和释放速度不大(Ferris，D.P.，et al.J Am Chem Soc.2009，131，1686.)。
目前，纳米阀门容器主要对单一条件刺激如pH、酶、光、氧化还原、磁场和温度等具有响应。由于人体复杂的内环境，发展多刺激响应纳米阀门容器，适应临床应用具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种pH和光双响应靶向载药体系及其制备方法，本发明通过对介孔二氧化硅微球进行表面修饰，使其具有pH和光双响应性能，双响应靶向载药体系可在癌细胞附近释放药物，实现药物的靶向运输，并利用光控响应性能辅助药物载体的释放。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种pH和光双响应靶向载药体系，其分子结构如下：
其中药物分子经吸附贮存在介孔二氧化硅微球内部，介孔二氧化硅微球表面修饰有端基为醛基的硅烷偶联剂和肼基甲基偶氮苯，并用大环分子α-环糊精将其封装。
一种pH和光双响应靶向载药体系的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，将端基为乙烯基的硅烷偶联剂溶于二氯甲烷中，在-90～-70℃下通入臭氧至反应完全，除去臭氧，干燥，旋蒸即得到端基为醛基的硅烷偶联剂；
步骤2，将水合肼溶于三氯甲烷中，冰浴条件下滴入二碳酸二叔丁酯(Diboc)的三氯甲烷溶液至反应完全，旋蒸浓缩，萃取，旋蒸干燥得到BOC保护的水合肼，将得到的BOC保护的水合肼、溴甲基偶氮苯和K2CO3在乙腈中进行回流反应，反应结束后过滤旋蒸，柱层析纯化得到BOC保护的肼基甲基偶氮苯，将BOC保护的肼基甲基偶氮苯溶于乙酸乙酯中，加入稀盐酸，搅拌反应，反应结束后离心萃取，旋蒸得到肼基甲基偶氮苯；
步骤3，将介孔二氧化硅微球分散于无水甲苯中，氮气保护下加热回流，加入端基为醛基的硅烷偶联剂，反应过夜，离心，清洗，干燥得到表面修饰有醛基的硅烷偶联剂的介孔二氧化硅微球MSNs-1；
步骤4，将步骤3得到的MSNs-1分散于乙醇中，加入肼基甲基偶氮苯，回流反应，反应结束后离心，清洗，干燥得到表面修饰有肼基甲基偶氮苯的介孔二氧化硅微球MSNs-2；
步骤5，将步骤4得到的MSNs-2分散于丙酮中，加入药物分子，搅拌吸附，离心，将离心得到的固体分散在NaH2PO4/Na2HPO4缓冲溶液中，加入药物分子和大环分子α-环糊精，搅拌反应，反应结束后离心得到pH和光双响应靶向载药体系。
步骤1中，所述的臭氧的通入时间为2～4h，所述的端基为乙烯基的硅烷偶联剂选自乙烯基三乙氧基硅烷或乙烯基甲氧基硅烷，所述的端基为醛基的硅烷偶联剂为醛基三乙氧基硅烷或醛基甲氧基硅烷。
步骤2中，所述的水合肼与二碳酸二叔丁酯的摩尔比为5～10:1，BOC保护的水合肼与溴甲基偶氮苯的摩尔比为5～10:1，柱层析纯化中的洗脱剂为V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝2～3:1，回流反应时间为2～3天。
步骤5中，所述的药物分子为苯并三氮唑(BTA)或罗丹明B，药物分子在丙酮中的浓度为40～80mg/mL，搅拌吸附时间为24h以上。
步骤5中，所述的药物分子在缓冲溶液中的浓度为10～20mg/mL，大环分子α-环糊精在缓冲溶液中的浓度为10～20mg/mL，搅拌反应时间为2天以上，缓冲溶液的浓度为0.02mol/L。
与现有技术相比，本发明制备的pH和光双响应的靶向载药体系能够在pH和紫外光下协同控制药物释放，具有双响应释放性能，药物释放量超过80％，释放速度快，易调节，灵敏度高，且修饰在纳米材料上的肼基甲基偶氮苯能溶于水，利于反应，在生物医药领域靶向载药方面具有很好的应用前景。
附图说明
图1为pH和光双响应靶向载药体系的制备流程示意图。
图2为pH和光双响应靶向载药体系在不同pH条件下的BTA释放曲线。
图3为pH和光双响应靶向载药体系在紫外光照下的BTA释放曲线。
图4为pH和光双响应靶向载药体系在pH和紫外光照共同作用下的BTA释放曲线。
图5为pH和光双响应靶向载药体系在MCF-7细胞中的BTA释放结果图。
具体实施方式
本发明的pH和光双响应靶向载药体系，其组装过程如图1所示，首先将端基为乙烯基的硅烷偶联剂经过臭氧氧化得到端基为醛基的硅烷偶联剂，将叔丁氧羰基保护的水合肼与溴甲基偶氮苯回流反应得到BOC保护的肼基甲基偶氮苯，加入稀盐酸得到肼基甲基偶氮苯，然后将介孔二氧化硅微球先后与端基为醛基的硅烷偶联剂和肼基甲基偶氮苯进行回流反应，得到表面修饰有醛基三乙氧基硅烷和肼基甲基偶氮苯的介孔二氧化硅微球，最后将经修饰的介孔二氧化硅微球分散在含有药物分子和大环分子α-环糊精的溶液中，搅拌反应最终得到pH和光双响应的靶向载药体系。
当pH＝7时，大环分子α-环糊精与支链上的偶氮苯自组装包结，此时大环分子α-环糊精堵住介孔微球的孔道，吸附其中的药物分子无法从孔道口释放出来。
当pH减小，溶液变成酸性时，支链上的腙键结构断裂，大环分子α-环糊精脱离介孔微球，此时孔道被打开，吸附其中的药物分子缓慢释放出来，如图1(e)所示。
当紫外照射时，大环分子α-环糊精与支链上的偶氮苯分开，此时孔道被打开，吸附其中的药物分子缓慢释放出来，如图1(f)所示。
本发明所述的介孔二氧化硅微球按现有方法制备，实施例中参考文献【Chen，C.，et al.Angew.Chem.Int.Ed.2010，49，4.】制备得到，具体步骤如下：
将0.5g十六烷基三甲基溴化铵分散于240mL去离子水中，加1.75mL 2mol/L氢氧化钠溶液加热至80℃，剧烈搅拌反应活化30分钟。滴加2.5mL正硅酸乙酯反应2h，趁热过滤，充分水洗，干燥，分散于100mL甲醇和6mL浓盐酸中，65℃回流反应6h，离心，用甲醇洗3次，真空干燥得介孔二氧化硅微球MSNs。
实施例1
1.醛基三乙氧基硅烷和肼基甲基偶氮苯的合成
将2mL乙烯基三乙氧基硅烷于15mL二氯甲烷中搅拌，用液氮和乙醇保持温度-90℃，向溶液中通臭氧直至溶液变为浅蓝色，过多的臭氧用氮气吹走，加2.488g三苯基磷，将该混合物放置过夜，用无水硫酸钠干燥，旋蒸即可得到醛基三乙氧基硅烷。
4.66mL水合肼(0.1mol)溶于200mL三氯甲烷，另称4.4g Diboc(0.02mol)溶于20mL三氯甲烷中，冰浴条件下，分4次(每次5mL)滴入水合肼三氯甲烷溶液中(24h内滴完)，再在室温下反应24h。旋蒸浓缩后加入100mL乙酸乙酯溶解产物，用半饱和食盐水萃取3次，每次用50mL。产物在乙酸乙酯中，用无水硫酸钠干燥过夜，旋蒸浓缩真空干燥得BOC保护的水合肼。
取1.32g BOC保护的水合肼(10mmol)，550mg溴甲基偶氮苯(2mmol)和1.1gK2CO3 70℃下在30mL乙腈中回流反应2天，反应结束过滤旋蒸，用硅胶柱层析纯化，洗脱剂V(石油醚):V(乙酸乙酯)为2:1，得BOC保护的肼基甲基偶氮苯。
取326mg(1mmol)BOC保护的肼基甲基偶氮苯溶解在2mL乙酸乙酯中，滴加稀盐酸至不再生成固体，搅拌反应4h，离心得固体，用乙酸乙酯溶解再用水萃取，将水相旋蒸得肼基甲基偶氮苯。
2.介孔二氧化硅的表面修饰和分子组装
称取100mg MSNs分散于10mL无水甲苯中，氮气保护下加热回流，加入100μL醛基三乙氧基硅烷(0.52mmol)，反应过夜，离心，用甲苯和甲醇各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-1。
称取100mg MSNs-1分散于10mL乙醇中，加入100mg肼基甲基偶氮苯(0.44mmol)加热回流反应1d，离心，用乙醇和去离子水各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-2。
称取40mg MSNs-2分散于5mL丙酮中，加入200mg BTA搅拌1天，离心得固体BTA-MSNs-2，将BTA-MSNs-2分散于5mL pH值为7的磷酸缓冲溶液中，加入50mg BTA和50mgα-CD，搅拌2天，离心用磷酸缓冲溶液洗涤多次，在50℃下真空干燥得最终的封装产物MSNPs-1。
3.吸附分子pH的可控释放
为了研究在不同pH下pH和光双响应的靶向载药体系的释放效果，进行如下实验：称量1mg MSNPs-1放置在活化的半透膜中，将半透膜放置在有3.5mL的pH值为7的磷酸缓冲溶液中，将有MSNPs-1的部分浸没，用紫外分光光度计检测释放曲线至平缓为止，再将半透膜放置在有3.5mL的pH值为6.0的磷酸缓冲溶液中，将有MSNPs-1的部分浸没，用紫外分光光度计检测释放情况，用同种方法检测其在pH值为3.0和pH值为5.4的磷酸缓冲溶液中的释放情况。磷酸缓冲溶液中BTA紫外最大吸收波长是257nm。
结果如图2所示，从图中可知，在中性条件下，药物分子释放量极少，载体置于酸性条件下药物迅速释放出来，且酸性越强释放速度越快，释放量越大，在pH为3.0的条件下释放量可达约55％。
实施例2
1.醛基三乙氧基硅烷和肼基甲基偶氮苯的合成
将2mL乙烯基甲氧基硅烷于15mL二氯甲烷中搅拌，用液氮和乙醇保持温度-70℃，向溶液中通臭氧直至溶液变为浅蓝色，过多的臭氧用氮气吹走，加2.488g三苯基磷，将该混合物放置过夜，用无水硫酸钠干燥，旋蒸即可得到醛基甲氧基硅烷。
4.66mL水合肼(0.1mol)溶于200mL三氯甲烷，另称2.2g Diboc(0.01mol)溶于20mL三氯甲烷中，冰浴条件下，分4次(每次5mL)滴入水合肼三氯甲烷溶液中(24h内滴完)，再在室温下反应24h。旋蒸浓缩后加入100mL乙酸乙酯溶解产物，用半饱和食盐水萃取3次，每次用50mL。产物在乙酸乙酯中，用无水硫酸钠干燥过夜，旋蒸浓缩真空干燥得BOC保护的水合肼。
取1.32g BOC保护的水合肼(10mmol)，275mg溴甲基偶氮苯(1mmol)和1.1gK2CO3 70℃下在30mL乙腈中回流反应3天，反应结束过滤旋蒸，用硅胶柱层析纯化，洗脱剂V(石油醚):V(乙酸乙酯)为5:2，得BOC保护的肼基甲基偶氮苯。
取326mg(1mmol)BOC保护的肼基甲基偶氮苯溶解在2mL乙酸乙酯中，滴加稀盐酸至不再生成固体，搅拌反应4h，离心得固体，用乙酸乙酯溶解再用水萃取，将水相旋蒸得肼基甲基偶氮苯。
2.介孔二氧化硅的表面修饰和分子组装
称取100mg MSNs分散于10mL无水甲苯中，氮气保护下加热回流，加入100μL醛基甲氧基硅烷(0.52mmol)，反应过夜，离心，用甲苯和甲醇各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-1。
称取100mg MSNs-1分散于10mL乙醇中，加入100mg肼基甲基偶氮苯(0.44mmol)加热回流反应1.5d，离心，用乙醇和去离子水各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-2。
称取40mg MSNs-2分散于5mL丙酮中，加入400mg BTA搅拌1.5d，离心得固体BTA-MSNs-2，将BTA-MSNs-2分散于5mL pH值为7的磷酸缓冲溶液中，加入100mg BTA和100mgα-CD，搅拌3天，离心用磷酸缓冲溶液洗涤多次，在50℃下真空干燥得最终的封装产物MSNPs-1。
3.吸附分子光响应释放
为了研究在紫外光照下介孔二氧化硅纳米容器的释放效果，进行如下实验：称量1mg MSNPs-1放置在活化的半透膜中，将半透膜放置在有3.5mL的pH值为7的磷酸缓冲溶液中，将有MSNPs-1的部分浸没，用紫外分光光度计检测释放曲线至平缓为止，将在pH值为7.4下释放平的MSNPs-1置于紫外灯(365nm)下照射，用紫外分光光度计每隔一段时间测量一次。磷酸缓冲溶液中BTA紫外最大吸收波长是257nm。
结果如图3所示，从图中可知，在中性药物分子释放完的情况下将载体放置于紫外照射条件下药物迅速释放出来，且释放速度快，释放量较大可接近40％。
实施例3
1.醛基三乙氧基硅烷和肼基甲基偶氮苯的合成
将2mL乙烯基三乙氧基硅烷于15mL二氯甲烷中搅拌，用液氮和乙醇保持温度-78℃，向溶液中通臭氧直至溶液变为浅蓝色，过多的臭氧用氮气吹走，加2.488g三苯基磷，将该混合物放置过夜，用无水硫酸钠干燥，旋蒸即可得到醛基三乙氧基硅烷。
4.66mL水合肼(0.1mol)溶于200mL三氯甲烷，另称4.4g Diboc(0.02mol)溶于20mL三氯甲烷中，冰浴条件下，分4次(每次5mL)滴入水合肼三氯甲烷溶液中(24h内滴完)，再在室温下反应24h。旋蒸浓缩后加入100mL乙酸乙酯溶解产物，用半饱和食盐水萃取3次，每次用50mL。产物在乙酸乙酯中，用无水硫酸钠干燥过夜，旋蒸浓缩真空干燥得BOC保护的水合肼。
取1.32g BOC保护的水合肼(10mmol)，550mg溴甲基偶氮苯(2mmol)和1.1gK2CO3 70℃下在30mL乙腈中回流反应2天，反应结束过滤旋蒸，用硅胶柱层析纯化，洗脱剂V(石油醚):V(乙酸乙酯)为3:1，得BOC保护的肼基甲基偶氮苯。
取326mg(1mmol)BOC保护的肼基甲基偶氮苯溶解在2mL乙酸乙酯中，滴加稀盐酸至不再生成固体，搅拌反应4h，离心得固体，用乙酸乙酯溶解再用水萃取，将水相旋蒸得肼基甲基偶氮苯。
2.介孔二氧化硅的表面修饰和分子组装
称取100mg MSNs分散于10mL无水甲苯中，氮气保护下加热回流，加入100μL醛基三乙氧基硅烷(0.52mmol)，反应过夜，离心，用甲苯和甲醇各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-1。
称取100mg MSNs-1分散于10mL乙醇中，加入100mg肼基甲基偶氮苯(0.44mmol)加热回流反应1d，离心，用乙醇和去离子水各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-2。
称取40mg MSNs-2分散于5mL丙酮中，加入400mg BTA搅拌1天，离心得固体BTA-MSNs-2，将BTA-MSNs-2分散于5mL pH值为7的磷酸缓冲溶液中，加入50mgBTA和50mgα-CD，搅拌2天，离心用磷酸缓冲溶液洗涤多次，在50℃下真空干燥得最终的封装产物MSNPs-1。
3.吸附分子光响应释放
为了研究在不同酸碱性下介孔二氧化硅纳米容器的释放效果，进行如下实验：称量1mg MSNPs-1放置在活化的半透膜中，将半透膜放置在有3.5mL的pH值为7的磷酸缓冲溶液中，将有MSNPs-1的部分浸没，用紫外分光光度计检测释放曲线至平缓为止，再将半透膜放置在有3.5mL的pH值为5.4的磷酸缓冲溶液中，将有MSNPs-1的部分浸没，用紫外分光光度计检测释放情况。将在pH值为7.4下释放平的MSNPs-1置于紫外灯(365nm)下照射，用紫外分光光度计每隔一段时间测量一次。用同种方法检测其在pH值为5.4的磷酸缓冲溶液中放置于紫外灯下的释放情况。磷酸缓冲溶液中BTA紫外最大吸收波长是257nm。
结果如图4所示，从图中可知，在中性药物分子释放完的情况下将载体置于酸性且紫外照射条件下可见药物迅速释放出来，且明显比单一条件控制下释放速度和释放量大，释放量可达约80％。
实施例4
1.醛基三乙氧基硅烷和肼基甲基偶氮苯的合成
将2mL乙烯基三乙氧基硅烷于15mL二氯甲烷中搅拌，用液氮和乙醇保持温度-78℃，向溶液中通臭氧直至溶液变为浅蓝色，过多的臭氧用氮气吹走，加2.488g三苯基磷，将该混合物放置过夜，用无水硫酸钠干燥，旋蒸即可得到醛基三乙氧基硅烷。
4.66mL水合肼(0.1mol)溶于200mL三氯甲烷，另称4.4g Diboc(0.02mol)溶于20mL三氯甲烷中，冰浴条件下，分4次(每次5mL)滴入水合肼三氯甲烷溶液中(24h内滴完)，再在室温下反应24h。旋蒸浓缩后加入100mL乙酸乙酯溶解产物，用半饱和食盐水萃取3次，每次用50mL。产物在乙酸乙酯中，用无水硫酸钠干燥过夜，旋蒸浓缩真空干燥得BOC保护的水合肼。
取1.32g BOC保护的水合肼(10mmol)，550mg溴甲基偶氮苯(2mmol)和1.1gK2CO3 70℃下在30mL乙腈中回流反应2天，反应结束过滤旋蒸，用硅胶柱层析纯化，洗脱剂V(石油醚):V(乙酸乙酯)为5:2，得BOC保护的肼基甲基偶氮苯。
取326mg(1mmol)BOC保护的肼基甲基偶氮苯溶解在2mL乙酸乙酯中，滴加稀盐酸至不再生成固体，搅拌反应4h，离心得固体，用乙酸乙酯溶解再用水萃取，将水相旋蒸得肼基甲基偶氮苯。
2.介孔二氧化硅的表面修饰和分子组装
称取100mg MSNs分散于10mL无水甲苯中，氮气保护下加热回流，加入100μL醛基三乙氧基硅烷(0.52mmol)，反应过夜，离心，用甲苯和甲醇各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-1。
称取100mg MSNs-1分散于10mL乙醇中，加入100mg肼基甲基偶氮苯(0.44mmol)加热回流反应1d，离心，用乙醇和去离子水各洗3次，于50℃下真空干燥过夜得到MSNs-2。
称取40mg MSNs-2分散于5mL去离子水中，加入400mg罗丹明B搅拌1天，离心得固体罗丹明B-MSNs-2，将罗丹明B-MSNs-2分散于5mL pH值为7的磷酸缓冲溶液中，加入50mg罗丹明B和50mgα-CD，搅拌2天，离心用磷酸缓冲溶液洗涤多次，在50℃下真空干燥得最终的封装产物MSNPs-2。
3.药物在肿瘤细胞中释放
取对数生长的MCF-7细胞，接种在两个12孔板(每孔细胞接种量为1×105)中置于培养箱中培养1d，去除培养基。向每孔加入2mL含50ug/mL MSNPs-2的培养基，将一个12孔板放置在紫外灯(365nm)下照射10min后与另外一个12孔板一起培养0.5h，分别去除第一个培养孔中的培养基，用PBS(pH为7.4)缓冲溶液洗涤，分别加入2mL含有20uL Hoechst33342染色液的培养基继续培养15min，用PBS缓冲溶液洗涤。加入2mL 0.4％的台盼蓝浸泡30min，用培养基洗涤，用荧光显微镜观察有无紫外光照射两种条件下MSNPs-2加入0.5h细胞中罗丹明的释放状态。用同种方法观察有无紫外光照射两种条件下MSNPs-2加入2h、10h、1d时细胞中罗丹明的释放状态。
结果如图5所示，从图中可知，在中性药物分子释放完的情况下将载体置于癌细胞中或增加紫外照射条件，可见药物迅速释放出来，细胞中药物的荧光明显增强，且在紫外照射条件下药物的荧光明显较强，说明了载药体系具有双响应释放性能，能够实现药物的靶向释放。

Claims (6)

1.一种pH和光双响应靶向载药体系，其特征在于，其分子结构如下：
其中，药物分子经吸附贮存在介孔二氧化硅微球内部，介孔二氧化硅微球表面修饰有端基为醛基的硅烷偶联剂和肼基甲基偶氮苯，并用大环分子α-环糊精将其封装。
2.根据权利要求1所述的pH和光双响应靶向载药体系的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤1，将端基为乙烯基的硅烷偶联剂溶于二氯甲烷中，在-90～-70℃下通入臭氧至反应完全，除去臭氧，干燥，旋蒸即得到端基为醛基的硅烷偶联剂；
步骤2，将水合肼溶于三氯甲烷中，冰浴条件下滴入二碳酸二叔丁酯的三氯甲烷溶液至反应完全，旋蒸浓缩，萃取，旋蒸干燥得到叔丁氧羰基保护的水合肼，将得到的叔丁氧羰基保护的水合肼、溴甲基偶氮苯和K2CO3在乙腈中进行回流反应，反应结束后过滤旋蒸，柱层析纯化得到叔丁氧羰基保护的肼基甲基偶氮苯，将叔丁氧羰基保护的肼基甲基偶氮苯溶于乙酸乙酯中，加入稀盐酸，搅拌反应，反应结束后离心萃取，旋蒸得到肼基甲基偶氮苯；
步骤3，将介孔二氧化硅微球分散于无水甲苯中，氮气保护下加热回流，加入端基为醛基的硅烷偶联剂，反应过夜，离心，清洗，干燥得到表面修饰有醛基的硅烷偶联剂的介孔二氧化硅微球MSNs-1；
步骤4，将步骤3得到的MSNs-1分散于乙醇中，加入肼基甲基偶氮苯，回流反应，反应结束后离心，清洗，干燥得到表面修饰有肼基甲基偶氮苯的介孔二氧化硅微球MSNs-2；
步骤5，将步骤4得到的MSNs-2分散于丙酮中，加入药物分子，搅拌吸附，离心，将离心得到的固体分散在NaH2PO4/Na2HPO4缓冲溶液中，加入药物分子和大环分子α-环糊精，搅拌反应，反应结束后离心得到pH和光双响应靶向载药体系。
3.根据权利要求2所述的pH和光双响应靶向载药体系的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述的臭氧的通入时间为2～4h，所述的端基为乙烯基的硅烷偶联剂选自乙烯基三乙氧基硅烷或乙烯基甲氧基硅烷，所述的端基为醛基的硅烷偶联剂为醛基三乙氧基硅烷或醛基甲氧基硅烷。
4.根据权利要求2所述的pH和光双响应靶向载药体系的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述的水合肼与二碳酸二叔丁酯的摩尔比为5～10:1，BOC保护的水合肼与溴甲基偶氮苯的摩尔比为5～10:1，柱层析纯化中的洗脱剂为V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝2～3:1，回流反应时间为2～3天。
5.根据权利要求2所述的pH和光双响应靶向载药体系的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述的药物分子为苯并三氮唑或罗丹明B，药物分子在丙酮中的浓度为40～80mg/mL，搅拌吸附时间为24h以上。
6.根据权利要求2所述的pH和光双响应靶向载药体系的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述的药物分子在缓冲溶液中的浓度为10～20mg/mL，大环分子α-环糊精在缓冲溶液中的浓度为10～20mg/mL，搅拌反应时间为2天以上，缓冲溶液的浓度为0.02mol/L。
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