CN106214620A - 一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，包括以下步骤：步骤S1、收集人体脐带，从人体脐带中分离出间充质干细胞；步骤S2、通过间充质干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据间充质干细胞生长状况进行换液、补液；步骤S3、观察间充质干细胞生长情况，达到预定条件时，进入步骤S4；步骤S4、对干细胞的培养基进行处理；步骤S5、将处理后的间充质干细胞的培养基冻干成粉末状，面膜冻干粉制备完成。本发明制备的美容冻干粉含有干细胞分泌的各种活性因子，具有提高成纤维细胞的增殖能力，促进皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞。同时该方法操作方便，具有良好应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术美容抗衰领域，特别涉及一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法。
背景技术
干细胞(stem cells,SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称之为“万用细胞”。从功能上说，干细胞被定义为具有自我复制能力和产生分化细胞能力的细胞。更准确的说，干细胞既能产生和其亲代细胞相同的子代细胞(自我复制)，又能产生分化潜能有限的子代细胞(分化细胞)。干细胞可以在机体生命过程中无限期分裂，并在合适的条件或给予恰当的条件后，能分化产生多种不同的细胞类型。
人体表皮干细胞的减少，再生能力降低，表皮细胞的死亡脱落、功能减退等，随着日积月累皮肤出现斑点、皱纹增多等衰老的迹象。
干细胞抗衰老基于其两种基本功能，一是干细胞的增殖分化能力，可以分化成不同的体细胞以代替衰老死亡的机体细胞，二是干细胞的分泌功能，可以产生许多生物活性分子，间充质干细胞一个强大的功能就是分泌众多的营养性细胞因子。间充质干细胞至少分泌免疫调节因子(HGF、LIF)、趋化因子(RANTES、SDF-1α、fractalkine、MIP-1α、MCP-1、MCP-2)、支持祖细胞的营养因子(IL-6、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、血管再生因子(VEGF165、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、抑制疤痕因子(HGF、FGF-2)、抗凋亡因子(VEGF165、FGF-2、HGF)、伤口愈合相关因子(IL-6、IL-8、TGF-β1、MCP-1、VEGF、GM-CSF)、TIMP-1)、各型胶原蛋白(I、II、III、IV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1、收集人体脐带或脐带血，从人体脐带或脐带血中分离出间充质干细胞；
步骤S2、通过间充质干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据间充质干细胞生长状况进行换液和补液；
步骤S3、观察间充质干细胞生长情况，达到预定条件时，进入步骤S4；
步骤S4、对间充质干细胞的培养基进行处理；
步骤S5、将处理后的间充质干细胞的培养基冻干成粉末状，面膜冻干粉制备完成。
本发明的有益效果是：本发明制备的美容冻干粉含有干细胞分泌的各种活性因子，具有提高成纤维细胞的增殖能力，促进皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞。同时该方法操作方便，具有良好应用前景。
进一步的，所述预定条件为，培养瓶中的贴壁细胞为成纤维样或漩涡状生长，细胞表面的CD29粘附分子和CD105粘附分子呈阳性，且阳性率不低于95％。
采用上述进一步方案的有益效果为：本步骤目的是要对间充质干细胞培养状态进行监控，以确定细胞生长状态是否良好，在细胞状态良好的情况下以能够更好的分泌相关因子。进一步的，所述处理后的间充质干细胞的培养基中至少包括免疫调节因子、趋化因子、支持祖细胞的营养因子、血管再生因子、抑制疤痕因子、抗凋亡因子和伤口愈合相关因子。
采用上述进一步方案的有益效果为：干细胞分泌的这些生物活性分子可以支持干细胞自身的生物活性功能，同时改善机体整体或者局部的微环境，提高成纤维细胞的增殖能力，且能提高皮肤的成纤维细胞合成胶原蛋白的能力，促进机体组织再生和器官功能恢复，刺激机体其他成体细胞的抗衰老作用。治愈抗衰老最根本的途径是修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞的功能。只有及时对受损细胞和衰老细胞进行有效修复，使受损细胞得到康复，衰老细胞得到激活，器官组织和生理功能才能完全恢复正常，人体才真正保持健康和年轻态。
进一步的，所述步骤S4中对间充质干细胞的培养基进行处理的具体方法为：
将间充质干细胞培养基放置于离心管中，加入硫酸铵后搅拌，再将上述搅拌液离心和去上清，并收集沉淀，向沉淀中加入浓度为0.9％的生理盐水并装入透析袋，透析袋外溶液为浓度为0.9％的生理盐水，透析多次后，取出透析后的溶液，得到处理后的间充质干细胞的培养基。
采用上述进一步方案的有益效果为：把培养基中的有效因子通过硫酸铵沉淀的方法沉淀，再进行透析去除硫酸铵，获得可以使用的有效成分，获得的冻干粉纯度更高。进一步的，所述步骤S4中对间充质干细胞的培养基进行处理的具体方法为：
取干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于温度在-80℃以下的冰箱中冷冻24h以上，取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，得到处理后的培养基。
采用上述进一步方案的有益效果为：通过冻干工艺处理样品，有利于样品的长时间保存及功能保持。
一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉，至少包括免疫调节因子、趋化因子、支持祖细胞的营养因子、血管再生因子、抑制疤痕因子、抗凋亡因子和伤口愈合相关因子。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1，一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，并利用面膜冻干粉制备面膜液，具体包括以下步骤：
1.收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带切割分为细小组织。
2.剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块2小时，以分化出单核细胞。收集分化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。
3.间充质干细胞的扩增培养，用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液。
4.观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面标志CD29、CD105的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。
5.取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。
6.冻干成粉末状分装小瓶。
7.取一小瓶冻干粉加入15ml生理盐水溶解，即形成面膜液。
本实施例制备的面膜液含有脐带间充质干细胞分泌的因子，通过直接冻干含有干细胞分泌因子的培养基进行，方法简单，易操作。
实施例2，一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，并利用面膜冻干粉制备面膜液，具体包括以下步骤：
1.收集健康人体脐带血，分离出单核细胞。用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。
2.间充质干细胞的扩增培养，用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液。
3.观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面标志CD29、CD105的表达情况。高表达上述检测物质，取出200ml干细胞培养基，放置于离心管中，加入100g硫酸铵，放置于4℃冰箱，搅拌1h。
4.将上述搅拌液离心，去上清，将沉淀手机，加入200ml生理盐水，装入透析袋，外溶液为生理盐水，透析5次。
5.取出透析后的溶液，分装在小瓶中，冻干保存。
6.取一小瓶冻干粉加入15ml生理盐水溶解，即形成面膜液。
本实施例制备的面膜液含有脐带血间充质干细胞分泌的因子，通过提取培养基中的有效成分后，再进行冻干得到含有效成分纯度更高的冻干粉。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1、收集人体脐带或脐带血，从人体脐带或脐带血中分离出间充质干细胞；
步骤S2、通过间充质干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据间充质干细胞生长状况进行换液和补液；
步骤S3、观察间充质干细胞生长情况，达到预定条件时，进入步骤S4；
步骤S4、对间充质干细胞的培养基进行处理；
步骤S5、将处理后的间充质干细胞的培养基冻干成粉末状，面膜冻干粉制备完成。
2.根据权利要求1所述的含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤S3的预定条件为，培养瓶中的贴壁细胞为成纤维样或漩涡状生长，细胞表面的CD29粘附分子和CD105粘附分子呈阳性，且阳性率不低于95％。
3.根据权利要求1所述的含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤S5的处理后的间充质干细胞的培养基中至少包括免疫调节因子、趋化因子、支持祖细胞的营养因子、血管再生因子、抑制疤痕因子、抗凋亡因子和伤口愈合相关因子。
4.根据权利要求1所述的含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中对间充质干细胞的培养基进行处理的具体方法为：
将间充质干细胞培养基放置于离心管中，加入硫酸铵后搅拌，再将搅拌液离心和去上清，并收集沉淀，向沉淀中加入浓度为0.9％生理盐水并装入透析袋，透析袋外溶液为浓度为0.9％生理盐水，透析多次后，取出透析后的溶液，得到处理后的间充质干细胞的培养基。
5.根据权利要求1所述的含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中对间充质干细胞的培养基进行处理的具体方法为：
取间充质干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于温度在-80℃以下的冰箱中冷冻24h以上，取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，培养皿中为处理后的培养基。
6.一种由权利要求1-5任一项所述制备方法制备而成的面膜冻干粉，其特征在于，至少包括免疫调节因子、趋化因子、支持祖细胞的营养因子、血管再生因子、抑制疤痕因子、抗凋亡因子和伤口愈合相关因子。
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