CN106177175A - 一种枸杞提取物、抗疲劳作用的药物制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种枸杞提取物、抗疲劳作用的药物制剂及其制备方法，属于天然药物提取技术领域。枸杞提取物，它是通过如下方法提取得到：浸提、微滤过滤、纳滤、浓缩、醇沉、酶解、二次醇沉、干燥后得到。本发明提供的枸杞提取物，具有纯度高、收率高的优点，采用了酶解技术之后，促进了其中的大分子向小分子的转变，使抗疲劳作用效果更好。

Description

一种枸杞提取物、抗疲劳作用的药物制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种枸杞提取物、抗疲劳作用的药物制剂及其制备方法，属于天然药物提取技术领域。
背景技术
枸杞（学名：Lyciumchinense）是茄科枸杞属的多分枝灌木植物，高 0.5-1 米，栽培时可达 2 米多。国内外均有分布。
枸杞的作用包括有：1．增强非特异性免疫作用 宁夏枸杞的醇或水提取物，均能显著增强网状内皮系统对印度墨汁的吞噬能力。枸杞的提取物，也能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。 2．保护肝脏及抗脂肪肝作用 枸杞的水提取物或甜菜碱，可提高大鼠肝脏的磷酯水平和总胆固醇含量。对四溴酜钠(BSP)、谷草转氨酶(SGPT)、碱性磷酸酶、胆碱脂酶等试验均有改善作用。另外，还有促进肝细胞再生作用，抑制脂肪在肝细胞内的沉积作用。枸杞对脂质代谢及抗脂肪肝作用，主要和甜菜碱传递甲基供体有关。 3．其他作用 枸杞煎剂对小鼠正常造血功能有促进作用，可使白细胞(主要是淋巴细胞)数增多，对环磷胺抑制白细胞(主要是淋巴细胞)生成也具有对抗作用。枸杞水提取物，能引起家兔血压降低、心脏抑制、呼吸和肠平滑肌兴奋，其作用可被阿托品阻断。枸杞内含有胍的衍生物具有降低血糖作用。甜菜碱还有刺激家禽生长及促进乳酸菌生长及产酸作用。
枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相对分子质量为68-200，成为国内外研究热点。其中又以枸杞多糖的免疫调节和抗肿瘤作用的研究最多。现已有很多研究表明枸杞多糖具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作用。
CN101564469A公开了一种枸杞多糖提取物，其特征在于酸性多糖含量为85％-95％，中性多糖为1％-5％。采用水提醇沉、超滤和离子交换有机结合的方法，提取得到枸杞多糖提取物；药理实验表明，该枸杞多糖具有很好的治疗肿瘤的作用。CN101133833A公开一种枸杞活性多糖制备方法，用经过40～60度酒精冷浸或加热提取后的枸杞药渣为原料，以水为溶剂进行提取，从而获得枸杞多糖提取物；选择具有α－(1→4)糖苷键内切活性的α－淀粉酶对枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的枸杞活性多糖。
但是上述常规方法得到的枸杞多糖存在着活性低，保健治疗效果有待进一步提高的问题。
发明内容
本发明的目的是：提供一种枸杞提取物，其具有较好的抗疲劳效果，并提供了相应的药物制剂。
技术方案是：
一种枸杞提取物，它是通过如下方法提取得到：
第1步、按重量份计，取枸杞20～30份，研磨成粉末，再加入6～8倍重量的水、硫酸钠0.2～0.5份、磷酸二氢钠0.2～0.4份，升温至60～70℃浸提，时间是1～3小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的30%～40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度大于80%，使产生沉淀，静置1～3小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入30～40份的水，再加入水的重量0.5～1%的酶，调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为25%～30%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%以上，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物。
第1步中研磨的粉末目数是200～400目。
第2步中微滤膜的平均孔径是100～200 nm。
第3步中纳滤膜的截留分子量是300～500Da。
第5步中，使用质量浓度是1%～3%的盐酸溶液对pH进行调节；酶解时间为0.5～2h，酶解温度为50～70℃。
第5步中，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物。
包含有上述枸杞提取物的药物制剂。
上述的枸杞提取物在制备提高哺乳动物抗疲劳能力药物中的应用。
有益效果
本发明提供的枸杞提取物，具有纯度高、收率高的优点，采用了酶解技术之后，促进了其中的大分子向小分子的转变，使抗疲劳作用效果更好。
具体实施方式
实施例1
第1步、按重量份计，取枸杞20份，研磨成200～400目粉末，再加入6倍重量的水、硫酸钠0.2份、磷酸二氢钠0.2份，升温至60℃浸提，时间是1小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是100nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是300Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的30%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置1小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入30份的水，再加入水的重量0.5%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是1%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为0.5h，酶解温度为50℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为25%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量43wt%。
实施例2
第1步、按重量份计，取枸杞30份，研磨成200～400目粉末，再加入8倍重量的水、硫酸钠0.5份、磷酸二氢钠0.4份，升温至70℃浸提，时间是3小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是200 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是500Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置3小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入40份的水，再加入水的重量1%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是3%的盐酸溶液对pH进行调节pH至6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为2h，酶解温度为70℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为30%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量45wt%。
实施例3
第1步、按重量份计，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、硫酸钠0.3份、磷酸二氢钠0.3份，升温至65℃浸提，时间是2小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是150 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是400Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置2小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是2%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为1h，酶解温度为60℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为28%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量47wt%。
对照例1
与实施例3的区别在于：浸提过程中未加入硫酸钠。
第1步、按重量份计，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、磷酸二氢钠0.3份，升温至65℃浸提，时间是2小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是150 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是400Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置2小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是2%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为1h，酶解温度为60℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为28%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量43wt%。
通过实施例3和对照例1可以看出，通过在浸提过程中加入硫酸钠可以有效地促进细胞分解，使更多的提取物可以得到利用，提高了提取物中多糖含量。
对照例2
与实施例3的区别在于：在第5步的酶解中碱性果胶酸裂解酶未加入，其重量被碱性木聚糖酶所替代。
第1步、按重量份计，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、硫酸钠0.3份、磷酸二氢钠0.3份，升温至65℃浸提，时间是2小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是150 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是400Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置2小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶选自碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比0.5：3：1的混合物，使用质量浓度是2%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为1h，酶解温度为60℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为28%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量44wt%。
对阳虚症小鼠的影响
取雄性小鼠70只，体重20～23g，将小鼠随机分7组：正常对照组、阳虚证模型组(氢化可的松0.125g/kg)及氢化可的松+本发明的枸杞提取物(实施例1～3、对照例1～2，0.5g/kg)5组。各组均灌胃给 药或N.S，每天一次，连续用药6天。给药第4天(除正常对照组外)同时肌注氢化可的松 0.125g/kg，连续肌注3天。末次给药后1小时记录各组小鼠体重、体温、自主活动次数(10 分钟内)及低温游泳存活时间，结果见下表：
本发明制剂对阳虚证小鼠的影响(n＝10， X±S)
注 ： 与阳虚模型组比较 ※P ＜ 0.05，与实施例3组比较 #P<0.05。
结果表明本发明得到的提取物能使阳虚证小鼠体温升高，活动增加，低温游泳时间延长，体重增加。实施例3相对于对照例2来说，通过加入碱性果胶酸裂解酶，促进了提取物的分解，使成分活性得到了提高，提高了促进阳虚证小鼠恢复体力的效果。

Claims (8)

1.一种枸杞提取物，其特征在于，它是通过如下方法提取得到：
第1步、按重量份计，取枸杞20～30份，研磨成粉末，再加入6～8倍重量的水、硫酸钠0.2～0.5份、磷酸二氢钠0.2～0.4份，升温至60～70℃浸提，时间是1～3小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的30%～40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度大于80%，使产生沉淀，静置1～3小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入30～40份的水，再加入水的重量0.5～1%的酶，调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为25%～30%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%以上，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物。
2.根据权利要求1所述的枸杞提取物，其特征在于，第1步中研磨的粉末目数是200～400目。
3.根据权利要求1所述的枸杞提取物，其特征在于，第2步中微滤膜的平均孔径是100～200 nm。
4.根据权利要求1所述的枸杞提取物，其特征在于，第3步中纳滤膜的截留分子量是300～500Da。
5.根据权利要求1所述的枸杞提取物，其特征在于，第5步中，使用质量浓度是1%～3%的盐酸溶液对pH进行调节；酶解时间为0.5～2h，酶解温度为50～70℃。
6.根据权利要求1所述的枸杞提取物，其特征在于，第5步中，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物。
7.包含有权利要求1～6任一项所述的枸杞提取物的药物制剂。
8.权利要求1～6任一项所述的枸杞提取物在制备提高哺乳动物抗疲劳能力药物中的应用。
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