CN106153793A - 康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，是以芒柄花素对照品为对照，以乙腈-水＝35～40∶65～80为流动相的高效液相色谱法。本发明提供的康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，高效液相色谱图峰形好、分离度高，阴性对照无干扰，能够实现对鸡血藤含量进行快速、准确的测定；而且该方法的专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确，提升了康妇灵胶囊的质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

Description

康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法

技术领域

本发明涉及康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，属于中药检测技术领域。

背景技术

康妇灵胶囊是由杠板归、苦参、黄柏、鸡血藤、益母草、红花龙胆、土茯苓和当归八味制成的，其功能主治为：苗医：蒙凯，布发讲港，嘎几昂代。嘎溜纳洛，巢窝蒙秋，巢窝即得。中医：清热燥湿，活血化瘀，调经止带。用于宫颈炎、阴道炎，月经不调，赤白带下，痛经，附件炎等。

康妇灵胶囊是贵州百灵企业集团和仁堂药业有限公司的独家品种，批准文号为：国药准字Z20025767。目前该药的执行标准编号为(WS-10558(ZD-0558)-2002-2012Z)，在原标准中，该药的鉴别仅有当归、黄柏和苦参三项薄层鉴别，含量测定项目也仅有黄柏中盐酸小檗碱的含量测定。

康妇灵胶囊在市场上有较高的占有率，为了保证该药的质量和疗效，就该药品目前的执行标准来看，并未对臣药鸡血藤等药材进行质量检测，现有的检测项目已经不能确保康妇灵胶囊的质量得到良好控制。

现有技术中，关于康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，尚未见到相关科技报道。因此，为进一步完善康妇灵胶囊的质量检测标准，在技术上进行一些突破，保证药品质量的可控性以及用药的安全性，有必要建立康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，以对康妇灵胶囊产品的质量进行有效监测。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，其分离度高，阴性对照无干扰，能够实现对鸡血藤含量进行快速、准确的测定。

本发明的康妇灵胶囊，按照重量份数计，是由杠板归600份、苦参300份、黄柏150份、鸡血藤300份、益母草300份、红花龙胆200份、土茯苓150份和当归180份制得。前述八味，当归粉碎成细粉，备用；其余杠板归等七味加水浸泡30分钟后，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.25～1.30(40℃)的清膏，加入上述当归细粉，混匀，80℃以下干燥，粉碎，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，是以芒柄花素对照品为对照，以乙腈-水＝35～40∶65～80为流动相的高效液相色谱法。

进一步地，具体的含量测定方法为：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝35～40∶65～80为流动相，检测波长为240～260nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物3～5g，加80％甲醇40～50mL，水浴回流提取30～70分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

优选的含量测定方法为：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝35∶65为流动相，检测波长为254nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

按照前述含量测定方法，本制剂含鸡血藤以芒柄花素计,每1g不少于3.5mg。

为了确保本发明含量测定方法科学、合理、可行，对本发明的含量测定方法进行了研究和考察。

下面是鸡血藤含量测定的方法学考察：

鸡血藤为康妇灵方中的臣药，芒柄花素是其主要有效成分，故选择以芒柄花素作为本制剂内在质量的指标成分，经试验，该方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点。

1、仪器、试剂和样品

Agilent Technologies 1200series高效液相色谱仪，KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，甲醇(分析纯20130411，上海申博化工有限公司)，乙酸乙酯(分析纯20140328，上海申博化工有限公司)，乙腈(色谱纯20140721，上海申博化工有限公司)，芒柄花素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号为112542-201405)，康妇灵胶囊(20130811、20130905、20131001、20131107、20140301、20140303、20140305、20140306、20140307、20140309、20140310、20140312、20140401、20140402、20140403贵州百灵企业集团和仁堂药业有限公司提供)，其他均为分析纯。

2、色谱条件与系统适应性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝35∶65为流动相，检测波长为254nm；分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL注入高效液相色谱仪，测定。

3、对照品溶液的制备

取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液。

4、阴性对照溶液的制备

按处方比例及制备工艺，制备不含鸡血藤药材的阴性样品，同供试品制备方法制备阴性样品溶液。

5、供试品溶液的制备

取本制剂内容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

6、方法学验证

6.1系统适应性试验

按照上述色谱条件及样品处理方法，进行系统适应性试验，芒柄花素峰与其他成分达到基线分离，且峰形良好；阴性样品试验结果表明其它成分对芒柄花素的测定无干扰。结果见图1、图2、图3。

6.2线性关系的考察

取3项下的对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL分别进样，按上述色谱条件记录色谱图，测定峰面积，以峰面积的对数值为纵坐标，芒柄花素对照品进样量的对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y＝1.1465X+4.5823(Y为峰面积，X为浓度)，r＝0.9999。结果表明，芒柄花素在5.5850～27.9250μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

6.3精密度试验

取3项下的对照品溶液，按2项色谱条件进行实验，进样量均为10μL，连续进样5次，测得其峰面积积分值，RSD为0.72％，仪器精密度良好。

6.4重复性试验

取同一个批号的康妇灵胶囊(批号：20140304)，平行取样6份，按5项方法操作并检测。芒柄花素平均质量分数为5.37mg/g，RSD为0.10％，表明方法重复性好。

6.5稳定性试验

取同一批号的供试品溶液(批号：20140304)，按2项色谱条件进行试验，于0、4、8、12、16、20、24h各进样一次，进样量均为10μL，按峰面积积分值计算，芒柄花素的RSD值为0.14％，表明供试品溶液中芒柄花素在24h内具有良好的稳定性。

6.6加样回收率试验

称取已知芒柄花素含量的样品(质量分数为5.28mg/g)9份，分成3组(每组3份)，置50mL量瓶中，每组分别精密加入2.5204mg/mL的芒柄花素对照品溶液4、5、6mL，加乙醇约40mL，超声处理30分钟(功率250W，频率100Hz)，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，按5项下，自“加80％甲醇50mL”起，同法操作，并按2项下色谱条件进样，进样量均为20μL，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 芒柄花素加样回收率试验结果(n＝9)

由表1结果可见，加样回收率均值为99.90％，RSD为1.57％，该方法的准确度高。

6.7样品含量测试结果

取11批样品，同5项方法处理样品，作为供试品溶液。用0.45μm微孔滤膜过滤，各取续滤液10μL，注入高效液相色谱仪，按2项色谱条件测定，用外标两点法对数方程计算样品中芒柄花素的含量，结果见表2。

表2 11批康妇灵胶囊芒柄花素含量测试结果(n＝3)

由表2结果分析，可将含量限度定为：康妇灵胶囊含鸡血藤以芒柄花素计,每1g不少于3.5mg。

本发明的有益之处在于：本发明提供的康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，高效液相色谱图峰形好、分离度高，阴性对照无干扰，能够实现对鸡血藤含量进行快速、准确的测定；而且该方法的专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确，提升了康妇灵胶囊的质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

附图说明

图1是芒柄花素对照品HPLC色谱图；

图2是康妇灵胶囊样品HPLC色谱图；

图3是康妇灵胶囊阴性样品HPLC色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。

实施例1康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝35∶65为流动相，检测波长为254nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例2康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝40∶70为流动相，检测波长为250nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物4g，加80％甲醇45mL，水浴回流提取50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例3康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝40∶80为流动相，检测波长为260nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物3g，加80％甲醇40mL，水浴回流提取70分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

康妇灵胶囊含鸡血藤以芒柄花素计,每1g不少于3.5mg。

Claims (4)

1.康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，其特征在于：所述含量测定方法是以芒柄花素对照品为对照，以乙腈-水＝35～40∶65～80为流动相的高效液相色谱法。

2.根据权利要求1所述的康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，其特征在于：具体的含量测定方法为：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝35～40∶65～80为流动相，检测波长为240～260nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物3～5g，加80％甲醇40～50mL，水浴回流提取30～70分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～20μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

3.根据权利要求1或2所述的康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，其特征在于：具体的含量测定方法为：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水＝35∶65为流动相，检测波长为254nm；

对照品溶液的制备：取芒柄花素对照品，加80％甲醇溶解，制成每1mL含0.03mg芒柄花素对照品的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取本制剂装量差异项下的内容物5g，加80％甲醇50mL，水浴回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇10mL使其溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

4.根据权利要求2所述的康妇灵胶囊中鸡血藤的含量测定方法，其特征在于：本制剂含鸡血藤以芒柄花素计,每1g不少于3.5mg。