CN106153757B - 一种依维莫司中间体含量测定方法 - Google Patents
一种依维莫司中间体含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106153757B CN106153757B CN201510205288.0A CN201510205288A CN106153757B CN 106153757 B CN106153757 B CN 106153757B CN 201510205288 A CN201510205288 A CN 201510205288A CN 106153757 B CN106153757 B CN 106153757B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- everolimus
- everolimus intermediate
- mobile phase
- acetonitrile
- gradient elution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Abstract
本发明涉及一种用高效液相色谱法测定依维莫司中间体有关物质的方法，用于依维莫司中间体的质量控制，是以辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(4.6×150mm，5μm)，检测波长为262～272nm，柱温为50～60℃，以水和乙腈为流动相，进行梯度洗脱。本发明的有关物质测定方法可以有效的将依维莫司中间体及其杂质分开，而且该方法具有分离度及灵敏度高，重复性及耐用性好，分析时间短，操作简单，结果稳定可靠的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种高效液相色谱法测定依维莫司中间体有关物质的方法。
背景技术
依维莫司(everolimus)是新一代大环内酯类雷帕霉素衍生物药物。该药由诺华制药公司开发并于2004年首先在德国上市，主要用于：1)其他药物治疗无效的晚期肾癌；2)可增补神经钙蛋白抑制剂环孢素的免疫抑制作用，用于预防心脏或肾脏移植的排异反应；3)药物支架用药，是目前药物洗脱支架最常用的药物之一。
(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氢-9-三甲基硅氧基-27-羟基-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙氧基]-3-甲氧环己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-环氧-3H-吡啶并[2,1-c][1,4]-氧杂氮杂三十一环烯-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-戊酮是合成依维莫司的重要中间体，其化学式为C62H105NO14Si2，结构式如下：其中，TBS为叔丁基二甲基硅基，TMS为三甲基硅基。
专利WO2012103959A1和CN101175760A中虽然记载了依维莫司及雷帕霉素相关衍生物的分析方法，但并未记载该中间体的含量测定方法，而且该中间体的含量测定对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品依维莫司的质量，所以建立一种稳定有效的含量测定方法对该中间体进行质量控制是非常必要的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种测定依维莫司中间体有关物质的方法，用于依维莫司中间体的质量控制。
为解决上述技术问题，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：
一种用高效液相色谱法测定依维莫司中间体含量的方法，是以辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，包括以下步骤：
A、取依维莫司中间体样品适量，用70％体积比的乙腈水溶液溶解，配制成每1mL含依维莫司中间体0.20～1.40mg的样品溶液；
B、设置流动相流速为0.7～1.1mL/min，检测波长为262～272nm，柱温为50～60℃；
C、取A的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成依维莫司中间体含量的测定；
其中，依维莫司中间为：
(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氢-9-三甲基硅氧基-27-羟基-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙氧基]-3-甲氧环己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-环氧-3H-吡啶并[2,1-c][1,4]-氧杂氮杂三十一环烯-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-戊酮；
所述的梯度洗脱设置如下：
进一步地，梯度洗脱的设置优选为：
所述色谱柱的规格为4.6×150mm，5μm。
所述流动相的流速优选为1.0mL/min，检测波长优选为267nm，柱温优选为55℃。
通过各实施例中的数据说明，本发明涉及的有关物质测定方法，可以有效地将依维莫司中间体及其杂质分开，而且该方法分离度及灵敏度高，重复性及耐用性好，分析时间短，操作简单，结果稳定可靠，从而可用于依维莫司中间体的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
图1实施例1的依维莫司中间体HPLC图谱。
图2实施例2的依维莫司中间体HPLC图谱。
图3实施例3的依维莫司中间体HPLC图谱。
图4实施例8的依维莫司中间体线性与范围工作曲线。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1
仪器与条件：Agilent 1200液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8(4.6×150mm，5μm)，检测波长267nm，柱温55℃，流速1.0ml/min，以水为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
实验步骤：将依维莫司中间体用70％体积比的乙腈水溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。
附图1表明，在该色谱条件下，依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离，依维莫司中间体峰的分离度为1.53，保留时间在23.897min。
实施例2
仪器与条件：Agilent 1200液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8(4.6×150mm，5μm)，检测波长267nm，柱温55℃，流速1.1mL/min，以水为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
实验步骤：将依维莫司中间体用70％体积比的乙腈水溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。
附图2表明，在该色谱条件下，依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离，依维莫司中间体峰的分离度为1.58，保留时间在21.918min。
实施例3
仪器与条件：Agilent 1200液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8(4.6×150mm，5μm)，检测波长267nm，柱温55℃，流速0.7ml/min，以水为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
实验步骤：将依维莫司中间体用70％体积比的乙腈水溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体1mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。
附图3表明，在该色谱条件下，依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离，依维莫司中间体峰的分离度为3.06，保留时间在26.878min。
实施例4
系统适应性实验
仪器与条件：同实施例1。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加70％体积比的乙腈水溶液溶解并稀释制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，分别计算依维莫司中间体峰峰面积以及保留时间的相对标准偏差，实验结果见表1。
表1依维莫司中间体系统适用性实验结果
由表1可知，依维莫司中间体峰与相邻杂质峰的分离度均大于1.5，理论板数均高于2500，峰面积的相对标准偏差为0.16％(限度2.0％)，保留时间的相对标准偏差为0.15％(限度1.0％)。可见，该色谱条件下，依维莫司中间体及其杂质可以完全分离，而且相对标准偏差均在中国药典规定的限度内，所得结果稳定可靠。
实施例5
重复性实验
仪器与条件：同实施例1
实验步骤：取本品适量，精密称定，加70％体积比的乙腈水溶液溶解并稀释制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液，同法配制6份供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，按面积归一化法计算依维莫司中间体的有关物质，并计算其相对标准偏差，实验结果见表2。
表2依维莫司中间体重复性实验结果
由表2可知，各供试品溶液中依维莫司中间体的有关物质没有明显差异，相对标准偏差为0.0259％，可见本分析检测方法的重复性良好。
实施例6
耐用性实验
仪器与条件：Agilent 1200液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8(4.6×150mm，5μm)，以水为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加70％体积比的乙腈水溶液溶解并稀释制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液。分别通过改变柱温、流速和检测波长，记录依维莫司中间体有关物质及含量的变化情况(按面积归一化法计算)，实验结果见表3。
表3依维莫司中间体耐用性实验结果
由表3可知，改变柱温、流速和检测波长后，依维莫司中间体有关物质及含量的测定结果没有明显差异，可见本发明分析检测方法的耐用性良好。
实施例7
检测限
仪器与条件：同实施例1
实验步骤：精密称取依维莫司中间体9.6mg，置于10mL量瓶中，加70％体积比的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，作为检测限储备液。采用加溶剂逐步稀释法，以S/N≈3时的浓度作为检测限浓度，此时依维莫司中间体的浓度为0.0288μg/mL，检测限为0.576ng。可见本方法及仪器的灵敏度较高。
实施例8
线性与范围
仪器与条件：同实施例1
实验步骤：取依维莫司中间体249.30mg，精密称定，置50mL量瓶中，加70％体积比的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，即得线性储备液。精密量取线性储备液1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL，6.0mL，7.0mL分别置25mL量瓶中，加70％体积比的乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，依法测定。以供试品溶液的浓度为横坐标，以依维莫司中间体峰峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程为y＝23567.4633x-131.6271，工作曲线见附图4。
由附图4可知，图中趋势线的相关系数r＝0.9994，可见在该色谱条件下，依维莫司中间体在0.20～1.40mg/mL的浓度范围内线性关系良好。
Claims (4)
1.一种依维莫司中间体的含量测定方法，其特征在于采用辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，包括以下步骤：
A、取依维莫司中间体样品适量，用70％体积比的乙腈水溶液溶解，配制成每1mL含依维莫司中间体0.20～1.40mg的样品溶液；
B、设置流动相流速为0.7～1.1mL/min，检测波长为262～272nm，柱温为50～60℃；
C、取A的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成依维莫司中间体含量的测定；
其中，依维莫司中间体为：
(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)
-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氢-9-三甲基硅氧基-27-羟基-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙氧基]-3-甲氧环己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-环氧-3H-吡啶并[2,1-c][1,4]-氧杂氮杂三十一环烯-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-戊酮；
梯度洗脱设置如下：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述色谱柱的规格为4.6×150mm，5μm。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于梯度洗脱设置为：
4.如权利要求1,2或3所述的方法，其特征在于流动相流速为1.0mL/min，检测波长为267nm，柱温为55℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510205288.0A CN106153757B (zh) | 2015-04-25 | 2015-04-25 | 一种依维莫司中间体含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510205288.0A CN106153757B (zh) | 2015-04-25 | 2015-04-25 | 一种依维莫司中间体含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106153757A CN106153757A (zh) | 2016-11-23 |
| CN106153757B true CN106153757B (zh) | 2020-05-01 |
Family
ID=57347332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510205288.0A Active CN106153757B (zh) | 2015-04-25 | 2015-04-25 | 一种依维莫司中间体含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106153757B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101522691A (zh) * | 2006-11-27 | 2009-09-02 | 泰尔茂株式会社 | O-烷基化雷帕霉素衍生物的制备方法及o-烷基化雷帕霉素衍生物 |
| CN101633669A (zh) * | 2008-07-23 | 2010-01-27 | 中国科学院上海药物研究所 | 选择性硅醚化保护雷帕霉素31位或42位羟基的新方法 |
| WO2012103960A1 (en) * | 2011-02-04 | 2012-08-09 | Synthon Bv | Process for making trisubstituted silyloxyethyl triflates |
| CN102786534A (zh) * | 2012-05-25 | 2012-11-21 | 上海现代制药股份有限公司 | 一种依维莫司的制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8759753B1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-06-24 | Thermo Finnigan Llc | Methods and apparatus for improved immunosuppressant drug monitoring |
-
2015
- 2015-04-25 CN CN201510205288.0A patent/CN106153757B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101522691A (zh) * | 2006-11-27 | 2009-09-02 | 泰尔茂株式会社 | O-烷基化雷帕霉素衍生物的制备方法及o-烷基化雷帕霉素衍生物 |
| CN101633669A (zh) * | 2008-07-23 | 2010-01-27 | 中国科学院上海药物研究所 | 选择性硅醚化保护雷帕霉素31位或42位羟基的新方法 |
| WO2012103960A1 (en) * | 2011-02-04 | 2012-08-09 | Synthon Bv | Process for making trisubstituted silyloxyethyl triflates |
| CN102786534A (zh) * | 2012-05-25 | 2012-11-21 | 上海现代制药股份有限公司 | 一种依维莫司的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Selective Substitution of 31/42-OH in Rapamycin Guided by an in Situ IR Technique;Shuang Cao et al.;《Molecules》;20140610;第19卷(第6期);7770-7784 * |
| 依维莫司合成路线综述;刘飞 等;《国外医药（抗生素分册）》;20140115;第35卷(第1期);12-15 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106153757A (zh) | 2016-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104655751B (zh) | 一种检测达泊西汀中有机溶剂残留的方法 | |
| WO2017152689A1 (zh) | 伊马替尼基因杂质的高灵敏度分析方法 | |
| CN108593831B (zh) | 盐酸法舒地尔有关物质的hplc检测方法 | |
| CN104062375B (zh) | 一种同时检测药品及其对映异构体杂质的方法 | |
| CN110031573B (zh) | 二维柱切换高效液相色谱法测定维生素d含量的方法 | |
| CN107271592B (zh) | 一种盐酸替吡拉西与其相关杂质完全分离的液相色谱纯度检测方法 | |
| CN106153757B (zh) | 一种依维莫司中间体含量测定方法 | |
| CN110988158A (zh) | 一种盐酸替罗非班注射液有关物质的检测方法 | |
| CN104764840B (zh) | 盐酸帕洛诺司琼及杂质的分离与检测方法 | |
| CN112834637B (zh) | 反相高效液相色谱检测帕拉米韦中间体i的方法 | |
| CN103884784B (zh) | 一种培美曲塞二钠中间体的分析检测方法 | |
| CN106153756B (zh) | 一种检测依维莫司中雷帕霉素的高效液相色谱法 | |
| CN106153758B (zh) | 一种依维莫司中间体的含量测定方法 | |
| CN107561170B (zh) | 一种坦西莫司中间体的分析检测方法 | |
| CN109212116B (zh) | 高效液相色谱法分离测定比拉斯汀中间体化学纯度的方法 | |
| CN107656005B (zh) | 盐酸厄洛替尼与潜在杂质的分离与测定方法 | |
| CN112881538A (zh) | 一种福多司坦及福多司坦片中杂质及对映异构体的检测方法 | |
| CN106153755B (zh) | 2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的分析检测方法 | |
| CN113125574A (zh) | 气相色谱法分离测定美金刚起始物料有关物质的方法 | |
| CN103884809B (zh) | 一种地西他滨中间体的分析检测方法 | |
| CN106525987B (zh) | 一种奈达铂的杂质检测方法 | |
| CN104330505B (zh) | 一种小牛血清去蛋白注射液中残留溶剂的测定方法 | |
| CN113219105B (zh) | 一种艾司奥美拉唑镁及其中间体中2-硝基-4-甲氧基苯胺的检测方法 | |
| CN114062567B (zh) | (1r,2s)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法 | |
| CN109725097B (zh) | 一种原料药中dbu的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |