CN106148328A - 一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法 - Google Patents

一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106148328A
CN106148328A CN201610683687.2A CN201610683687A CN106148328A CN 106148328 A CN106148328 A CN 106148328A CN 201610683687 A CN201610683687 A CN 201610683687A CN 106148328 A CN106148328 A CN 106148328A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fixative
prelarva
fish roe
dna
strong base
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610683687.2A
Other languages
English (en)
Inventor
王生
付辉云
徐先栋
黄江峰
万锦涛
罗楠
赵立军
樊首品
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
JIANGXI AQUATIC PRODUCT SCIENCE RESEARCH INSTITUTE
Original Assignee
JIANGXI AQUATIC PRODUCT SCIENCE RESEARCH INSTITUTE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by JIANGXI AQUATIC PRODUCT SCIENCE RESEARCH INSTITUTE filed Critical JIANGXI AQUATIC PRODUCT SCIENCE RESEARCH INSTITUTE
Priority to CN201610683687.2A priority Critical patent/CN106148328A/zh
Publication of CN106148328A publication Critical patent/CN106148328A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液，包括无水乙醇和可溶性强碱溶液；各组份的体积份数的组成为：无水乙醇450‑500份；可溶性强碱溶液3‑5份。本发明还涉及该固定液的制备方法和固定方法。本发明提供一种固定液用于保存鱼卵或仔鱼，在室内常温保存时间达一年后，采取常规提取鱼卵或仔鱼DNA方法仍可提取到DNA。在长期野外采样过程，没有冷藏措施情况下，本发明解决了采取常规总DNA提取方法在鱼卵或仔鱼等基因组DNA含量较少样品，样本无法长期保存问题。

Description

一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液及其制备和固定方法
技术领域
本发明属于生物体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液。本发明还涉及该固定液的制备和固定方法。
背景技术
高质量总DNA提取是研究DNA分子在生命代谢的基础，提取鱼卵或仔鱼DNA是在鱼类产卵季节，捕获鱼卵或仔鱼之后常用的分子生物学试验。鱼卵和仔鱼样本的固定保存是高质量DNA提取的保证之一。DNA是属于碱稳定性的物质，基本组成成分中的碱基，是DNA所特有的，鱼卵或仔鱼处在个体生长发育初期阶段，DNA含量较少，若固定保存方法不当，会很难提取到DNA。常规保存鱼卵或仔鱼的方法使用固定液为无水乙醇，需要冷藏保存，保藏条件要求高。无水乙醇呈若酸性，在酸性条件下，DNA的 嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键不稳定，当在冷藏措施不足时，例如样本长期置常温下保存时，容易被水解，很难提取高质量DNA，不利于长期保存。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA在室内常温保存一年以上的固定液。
本发明通过以下技术方案解决上述技术问题，
一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液，其特征在于，
包括无水乙醇和可溶性强碱溶液；
各组份的体积份数的组成为：
无水乙醇450-500份；
可溶性强碱溶液3-5份。
为了获得更好的技术效果，各组份的体积份数的组成为：乙醇500份、可溶性强碱溶液3~4份；
为了获得更好的技术效果，所述无水乙醇的质量浓度不低于99.5%；
为了获得更好的技术效果，所述可溶性强碱溶液的质量浓度为1~3%；
为了获得更好的技术效果，所述可溶性强碱溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液之一或二者组合；
为了获得更好的技术效果，所述固定液pH值为7.5-8.0。
本发明还提供该固定液的制备方法和固定方法，
一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液的制备方法，其步骤为，
（1）配制质量浓度1-3%的可溶性强碱溶液10ml；
（2）准备无水乙醇500ml；
（3）取配制好的质量浓度1-3%可溶性强碱溶液3~5ml加入到450-500ml的无水乙醇中，搅拌均匀，得到混合液；
（4）将上述混合液密封，静置15分钟，得到便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液。
一种便于提取单个鱼卵或仔鱼DNA的固定液的固定方法，其步骤为，
（1）用小镊子或常规滴管将单个鱼卵或仔鱼放入5ml的EP管中；
（2）换一根干净无水的常规滴管吸取已经配制完毕的上述固定液；
（3）用常规滴管取上述固定液4ml，加入含有上述鱼卵或仔鱼的EP管中，将鱼卵或鱼苗完全覆盖；
（4）用封口膜将上述已经固定完毕的EP管密封；
（5）将上述已经密封完毕的样本静置24小时；
（6）更换一次上述已经静置完毕EP管中的上述固定液；
（7）再次用封口膜将上述EP管密封，放常温下保存。
本发明提供一种固定液用于保存鱼卵或仔鱼，尤其是适合保存单个鱼卵。使用本发明固定液在室内常温保存时间达一年后，采取常规提取单个鱼卵或仔鱼DNA方法时，仍可提取到DNA。在长期野外采样过程，没有冷藏措施情况下，本发明解决了采取常规总DNA提取方法在鱼卵或仔鱼等基因组DNA含量较少样品，样本无法长期保存的问题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。
实施例1
一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液，
包括无水乙醇和氢氧化钠溶液；所述无水乙醇的质量浓度99.5%以上；所述氢氧化钠溶液的质量浓度为3%；
各组份的体积份数的组成为：
无水乙醇500份；
氢氧化钠溶液3份；
所述固定液pH值为7.5-8.0。
作为优选方案之一，各组份的体积份数的组成为：乙醇450份、氢氧化钾溶液5份；所述氢氧化钾溶液的质量浓度为1%；
作为优选方案之一，各组份的体积份数的组成为：乙醇475份、氢氧化钠和氢氧化钾混合溶液4份；所述氢氧化钾溶液的质量浓度为1.5%；所述氢氧化钠溶液的质量浓度为1.5%；所述氢氧化钾溶液和所述氢氧化钠溶液按质量比1:1混合。
实施例2
一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA固定液的制备方法，其步骤为，
（1）配制质量浓度2%的氢氧化钠溶液10ml；
（2）准备质量浓度99.5%以上的无水乙醇500ml；
（3）取配制好的质量浓度2%的氢氧化钠溶液3~5ml加入到无水乙醇中，搅拌均匀，得到混合液；
（4）将上述混合液密封，静置15分钟，得到本发明实施例1所述便于提取单个鱼卵或仔鱼DNA的固定液。
实施例3
一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA固定液的固定方法，其步骤为，
（1）用小镊子或常规滴管将单个草鱼鱼卵放入5ml的EP管中；
（2）换一根干净无水的常规滴管吸取已经配制完备的固定液；
（3）用常规滴管固定液将加入上述含有单个草鱼鱼卵的EP管中；
（4）用封口膜将上述已经固定完毕的EP管密封；
（5）将上述已经密封完毕的样本静置24小时；
（6）更换一次上述已经静置完毕EP管中的固定液；
（7）再次用封口膜将上述EP管密封，放常温下保存。
实施例4
将本发明方法（试验组1）与现有的两种不同固定方法（对比组1、对比组2）做对比实验，选同一批次鱼卵分别用3种不同的方法进行固定保存，固定时间依次为0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月时，取不同固定方法的鱼卵提取鱼卵总DNA并电泳检测DNA提取效果，方法如下：冲洗去除固定液后，加入DNA提取缓冲液和细胞裂解缓冲液，将单个鱼卵或仔鱼剪碎后再加入蛋白酶K和RNA酶，温育消化。用高浓度NaCl溶液沉淀蛋白质，加入异丙醇沉淀DNA，用质量百分数70%的乙醇洗涤沉淀去除盐离子，12000r/min离心5min，弃去上清，敞盖待乙醇挥发后加入超纯水或TE溶液溶解。1%琼脂糖凝胶电泳检测比较鱼卵总DNA效果，结果见表1，百分比数字表示DNA电泳检出率。
实验说明：试验组1用本发明固定液按实施例3所述方法处理固定，放室温（20℃）下保存；对比组1用无水乙醇替换本发明固定液按实施例3所述方法处理固定单个鱼卵或仔鱼后，放入-20℃环境中冷藏保存；对比组2用无水乙醇替换本发明固定液按实施例3所述方法处理固定单个鱼卵或仔鱼后，放入室温（20℃）下保存。
。
实施例5
将本发明方法（试验组2）与现有固定方法（对比组3）做对比实验，模拟同样在高温下保存效果，选同一批次鱼卵分别用2种不同的方法固定保存，然后同时放入温度为35℃的烘箱下保存15天，依次在保存时间为1天、3天、7天、10天、15天分别提取鱼卵总DNA并电泳检测DNA提取效果，方法如下：冲洗去除固定液后，加入DNA提取缓冲液和细胞裂解缓冲液，将鱼卵或仔鱼剪碎后再加入蛋白酶K和RNA酶，温育消化。用高浓度NaCl溶液沉淀蛋白质，加入异丙醇沉淀DNA，用70%乙醇洗涤沉淀去除盐离子，12000 r/min离心5min，弃去上清，敞盖待乙醇挥发后加入超纯水或TE溶液溶解。1%琼脂糖凝胶电泳检测比较鱼卵总DNA效果，结果见表2，百分比数字表示DNA电泳检出率。
实验说明：试验组2用本发明固定液按实施例3所述方法处理固定，放入温度为35℃的烘箱下保存15天；对比组3用无水乙醇替换本发明固定液按实施例3所述方法处理固定单个鱼卵或仔鱼后，放入温度为35℃的烘箱下保存15天。
。
此外，需要说明的是，本说明书中所描述的具体实施例，其配比、工艺所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
虽然本发明已以实施例公开如上，但并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该项技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰，均应属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液，其特征在于，
包括无水乙醇和可溶性强碱溶液；
各组份的体积份数的组成为：
无水乙醇450-500份；
可溶性强碱溶液3-5份。
2.如权利要求1所述固定液，其特征在于，各组份的体积份数的组成为：乙醇500份、可溶性强碱溶液3~4份。
3.如权利要求1或2所述固定液，其特征在于，所述无水乙醇的质量浓度不低于99.5%。
4.如权利要求1或2所述固定液，其特征在于，所述可溶性强碱溶液的质量浓度为1~3%。
5.如权利要求1或2所述固定液，其特征在于，所述可溶性强碱溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液之一或二者组合。
6.如权利要求1所述固定液，其特征在于，所述固定液pH值为7.5-8.0。
7.如权利要求1-6所述固定液的制备方法，其步骤为，
（1）配制质量浓度1-3%的可溶性强碱溶液10ml；
（2）准备无水乙醇500ml；
（3）取配制好的质量浓度1-3%可溶性强碱溶液3~5ml加入到450-500ml的无水乙醇中，搅拌均匀，得到混合液；
（4）将上述混合液密封，静置15分钟，得到便于提取鱼卵或仔鱼DNA的固定液。
8.如权利要求1-6所述固定液的固定方法，其步骤为，
（1）用小镊子或常规滴管将鱼卵或仔鱼放入5ml的EP管中；
（2）换一根干净无水的常规滴管吸取已经配制完毕的如权利要求1-6所述固定液；
（3）用常规滴管取上述如权利要求1-6所述固定液4ml，加入上述含有鱼卵或仔鱼的EP管中，将鱼卵或鱼苗完全覆盖；
（4）用封口膜将上述已经固定完毕的EP管密封；
（5）将上述已经密封完毕的样本静置24小时；
（6）更换一次上述已经静置完毕EP管中的如权利要求1-6所述固定液；
（7）再次用封口膜将上述EP管密封，放常温下保存。
CN201610683687.2A 2016-08-18 2016-08-18 一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法 Pending CN106148328A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610683687.2A CN106148328A (zh) 2016-08-18 2016-08-18 一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610683687.2A CN106148328A (zh) 2016-08-18 2016-08-18 一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106148328A true CN106148328A (zh) 2016-11-23

Family

ID=57330694

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610683687.2A Pending CN106148328A (zh) 2016-08-18 2016-08-18 一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106148328A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108651337A (zh) * 2018-05-15 2018-10-16 江西省水产科学研究所 一种产漂流性卵鱼类早期不同发育阶段形态显微观察方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102161988A (zh) * 2011-01-21 2011-08-24 中国科学院海洋研究所 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法
CN104818268A (zh) * 2015-05-18 2015-08-05 河南师范大学 一种动物组织dna的保存方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102161988A (zh) * 2011-01-21 2011-08-24 中国科学院海洋研究所 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法
CN104818268A (zh) * 2015-05-18 2015-08-05 河南师范大学 一种动物组织dna的保存方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘雅文: "浅析DNA保存的研究进展", 《轻工科技》 *
王小刚等: "鱼类种质保存研究进展", 《海洋渔业》 *
田宗城等: "鱼类不同保存方法的DNA提取及RAPD分析", 《内陆水产》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108651337A (zh) * 2018-05-15 2018-10-16 江西省水产科学研究所 一种产漂流性卵鱼类早期不同发育阶段形态显微观察方法
CN108651337B (zh) * 2018-05-15 2020-11-03 江西省水产科学研究所 吻鮈属鳊属鳜属产漂流性卵鱼类早期发育形态观察方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Massana et al. Changes in marine bacterioplankton phylogenetic composition during incubations designed to measure biogeochemically significant parameters
Krueger et al. Temperature and feeding induce tissue level changes in autotrophic and heterotrophic nutrient allocation in the coral symbiosis–A NanoSIMS study
Cerulus et al. Transition between fermentation and respiration determines history-dependent behavior in fluctuating carbon sources
WO2016011798A1 (zh) 用于保存生物样品的稳定剂
CN104254776B (zh) 提取和储存核酸的方法和组合物
Elloumi et al. Composition and distribution of planktonic ciliates from ponds of different salinity in the solar saltwork of Sfax, Tunisia
CN106596211A (zh) 粪便样本保存液及其制备方法和应用
US20100029925A1 (en) Methods and kits for extraction of dna
JP5824141B2 (ja) 生体試料よりｒｎａを分離精製する方法
JP2018524016A5 (zh)
CN108192827A (zh) 一种肠道菌群样本常温保存液及其制备方法和用途
CN109609498A (zh) 一种动物组织rna的样品保存液及其保存方法
JP5924888B2 (ja) 核酸抽出方法、核酸抽出試薬キットおよび核酸抽出用試薬
CN106148328A (zh) 一种便于提取鱼卵或仔鱼dna的固定液及其制备和固定方法
CN107400668A (zh) 一种柞蚕微孢子虫模板dna的提取方法及其在分子诊断方面的应用
CN101382549A (zh) 一种结核分枝杆菌快速检测系统及方法
US9533307B2 (en) System for the stabilization, conservation and storage of nucleic acid
CN104694532A (zh) 一种橡胶树白粉病菌rna的提取方法
CN104673916A (zh) 一种家猪印记基因Rasgrf1的鉴定方法
CN107400671A (zh) 梨果实糖转运蛋白基因PbTMT4及其应用
CN104390834A (zh) 树脂切片的番红与甲基紫混合染色法及其染色液
Armstrong A time course for the analysis of meiotic progression in Arabidopsis thaliana
CN110295163B (zh) 水稻根际铁膜微生物dna的提取试剂及提取方法
CN106857502A (zh) 一种防止rna降解的样品保存液以及保存方法
CN109609497B (zh) 一种兜兰dna提取缓冲液及其配制方法和使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination