CN106138909A - 益气活血、利湿化浊的中药复方制剂及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种益气活血、利湿化浊的中药复方制剂，由以下重量份的原料药制成：泽兰1～30份、黄芪1～50份、生蒲黄1～30份、苍术1～30份、虎杖1～30份、土茯苓1～30份、水蛭1～15份、川牛膝1～30份、怀牛膝1～30份、绵萆薢1～30份。本发明还提供这种中药复方制剂的应用。本发明优点在于：本发明中药复方制剂具有益气活血、利湿化浊的功效，经多年临床应用和药理学研究确证，用于糖尿病肾病治疗，具有疗效确切，无毒副作用，成本低廉，便于应用的优势。

Description

益气活血、利湿化浊的中药复方制剂及其用途

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是一种益气活血、利湿化浊的中药复方制剂，此外，本发明还涉及该中药复方制剂的医药用途。

背景技术

糖尿病是一种慢性代谢紊乱性疾病.可造成机体多种器官的慢性损伤、功能障碍和衰竭等。2010年中国14个省市近5万人的流行病学资料显示，全人群糖尿病患病率为9.7％，城市的发病率高于农村，其中2型糖尿病约占95.0％。糖尿病并发症主要有微血管并发症和大血管并发症两大类，糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见、最严重的慢性微血管并发症之一，也是糖尿病患者致残、致死的重要原因。在美国，DN占慢性肾衰竭病因的第一位，其中45％的DN患者需接受肾脏替代治疗。虽然我国导致慢性肾衰竭的主要病因是原发性肾小球肾炎，但随着糖尿病发病率的不断升高，糖尿病肾病将成为终末期肾病的重要原因，因此延缓或阻止DN的发展，对改善病人的生活质量、减轻患者的经济负担至关重要。

目前，早期症状并不明显，肾脏仅发生代偿性增大，无病理组织学改变，肾小球滤过率增加，出现微量或少量的蛋白尿，因此不易被发现。一旦患者出现典型的临床症状时，患者肾脏病变已不能逆转，治疗只能改善症状和减少患者的病痛，不能阻断病程的发展。西医针对DN的治疗以控制血糖、血压等对症支持治疗为主，缺乏特异性治疗手段，这亦成为西医治疗糖尿病肾病的瓶颈。

糖尿病肾病属中医“消渴”、“水肿”、“关格”等范畴，其起病特点为起病隐匿、发展缓慢。中医学认为，脾肾两虚夹血瘀，夹杂湿浊内生、气阴两虚贯穿DN始终，阴虚为本，燥热为标。初期以燥热为主，病程日久，阴伤气耗，气阴两虚。消渴日久，肾元亏虚，气阴两伤。因此，临床治疗应以益气活血、利湿化浊以培本为主要治法。

中国专利公开号CN104147316A公开了一种治疗糖尿病肾病的中药组合物，其由以下重量份的原料药制成：生黄芪10-50份、鸡血藤10-50份、熟地10-50份、山药5-20份、山萸肉5-20份、芡实5-30份、金樱子5-20份、制水蛭1-5份、熟军2-15份、翻白草5-30份、茯苓10-50份、车前子10-50份，及其制备方法和用于制备治疗糖尿病肾病的药物中的用途。中国专利公开号CN103316101A公开了一种治疗糖尿病肾病的中药及其制备方法，由下述重量配比的中药材制备而成：胡芦巴6～15份、黄芪6～15份、淫羊藿3～8份、补骨脂3～8份、山茱萸3～8份、大黄1～5份、肉桂3～8份、黄连2～6份。但是关于一种益气活血、利湿化浊、原料价廉、制备简便且治疗糖尿病肾病疗效显著的中药复方制剂，目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种益气活血、利湿化浊的中药复方制剂。

本发明的第二个目的是，提供一种益气活血、利湿化浊的中药复方制剂的用于制备治疗糖尿病性肾病药物的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种益气活血、利湿化浊的中药复方制剂，由以下重量份的原料药制成：泽兰1～30份、黄芪1～50份、生蒲黄1～30份、苍术1～30份、虎杖1～30份、土茯苓1～30份、水蛭1～15份、川牛膝1～30份、怀牛膝1～30份、绵萆薢1～30份。

优选的，由以下重量份的原料药制成：泽兰1～20份、黄芪1～30份、生蒲黄1～20份、苍术1～20份、虎杖1～20份、土茯苓1～20份、水蛭1～10份、川牛膝1～20份、怀牛膝1～20份、绵萆薢1～20份。

更优选的，由以下重量份的原料药制成：泽兰15份、黄芪24份、生蒲黄15份、苍术15份、虎杖15份、土茯苓15份、水蛭6份、川牛膝15份、怀牛膝15份、绵萆薢15份。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的益气活血、利湿化浊的中药复方制剂在制备治疗糖尿病性肾病药物中的应用。

所述的药物还包括药学上允许的辅料。

所述的药物为汤剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、口服液或糖浆剂。

本发明优点在于：

本发明的中药复方制剂，其配伍符合中药“君臣佐使”原则，具有益气活血、利湿化浊的功效，同时具有原料系常用中药，原料价廉，制备简便，使用方便的优势，经多年临床应用和药理研究，对治疗糖尿病肾病具有显著的疗效。鉴于该病发病人数众多，且本发明中药复方制剂具有无毒、可长期服用的特点，具有广阔的市场前景。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。

本发明提供的中药复方制剂的原料配比系发明人结合中医辨证组方，经长期临床实践摸索得出，各组分的用量以下述比例具有较好疗效：泽兰1～30份、黄芪1～50份、生蒲黄1～30份、苍术1～30份、虎杖1～30份、土茯苓1～30份、水蛭1～15份、川牛膝1～30份、怀牛膝1～30份、绵萆薢1～30份。优选为泽兰1～20份、黄芪1～30份、生蒲黄1～20份、苍术1～20份、虎杖1～20份、土茯苓1～20份、水蛭1～10份、川牛膝1～20份、怀牛膝1～20份、绵萆薢1～20份。最优选为泽兰15份、黄芪24份、生蒲黄15份、苍术15份、虎杖15份、土茯苓15份、水蛭6份、川牛膝15份、怀牛膝15份、绵萆薢15份。

本发明所述的中药复方制剂，辅以常用药用辅料，可采用本领域常规制备方法制备成药剂学上所说的汤剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、口服液或糖浆剂等常见剂型。

实施例1

分别称取泽兰1500g、黄芪2400g、生蒲黄1500g、苍术1500g、虎杖1500g、土茯苓1500g、水蛭600g、川牛膝1500g、怀牛膝1500g、绵萆薢1500g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，此提取物直接可以包装、冲服。

实施例2

分别称取泽兰500g、黄芪1600g、生蒲黄1000g、苍术1000g、虎杖2000g、土茯苓1000g、水蛭600g、川牛膝1000g、怀牛膝1000g、绵萆薢600g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，此提取物直接可以包装、冲服。

实施例3

分别称取泽兰500g、黄芪4000g、生蒲黄500g、苍术2000g、虎杖600g、土茯苓3000g、水蛭300g、川牛膝500g、怀牛膝2000g、绵萆薢200g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，此提取物直接可以包装、冲服。

实施例4

分别称取泽兰3000g、黄芪2000g、生蒲黄1200g、苍术500g、虎杖800g、土茯苓200g、水蛭1000g、川牛膝2000g、怀牛膝400g、绵萆薢3000g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，此提取物直接可以包装、冲服。

实施例5

分别称取泽兰800g、黄芪200g、生蒲黄2000g、苍术250g、虎杖500g、土茯苓250g、水蛭150g、川牛膝2000g、怀牛膝600g、绵萆薢500g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，此提取物直接可以包装、冲服。

实施例6

分别称取泽兰1000g、黄芪5000g、生蒲黄3000g、苍术3000g、虎杖6000g、土茯苓300g、水蛭1800g、川牛膝3000g、怀牛膝3000g、绵萆薢2000g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，此提取物直接可以包装、冲服。

实施例7 颗粒剂的制作

按实施例1-6任一所述的方法制备的提取物150g，加糊精300g，混匀，加入适量60％乙醇制成软材，过24目筛制粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，分装，即得。

实施例8 片剂/胶囊剂的制作

按上述配比将提取物、微晶纤维素、淀粉混匀，加入适量60％乙醇制成软材，过24目筛制粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片或填充装胶囊，即得。

实施例9 合剂/口服液/糖浆剂的制作

采用实施例1-6任一所述的方法制备的提取液，浓缩，加适当制药辅料(白糖、蜂蜜、苯甲丙酸或羟苯乙酯等)，制成合剂、口服液或糖浆剂。

实施例10 汤剂的制作

称取实施例1-6任一所述的原料药，采用中药汤剂常规的制作方法，加水煎煮成汤剂。

实施例11 本发明中药复方制剂的药理作用研究

实验一中药复方对糖尿病肾病大鼠肾小管间质性损害的影响

1.实验动物

健康雄性Wistar大鼠65只，清洁级，体重180g～200g，购于中国科学院上海实验动物中心，动物合格证号：[SCXK(沪)2007-0005]，自由进食和饮水。

2.实验药物

实验药物为本发明实施例1制备的中药复方制剂；链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司，为1％枸橼酸浓度缓冲液，批号：091104l；盐酸贝那普利片，Novartis公司产品，为5％混悬液；兔抗大鼠转移生长因子TGF-β1抗体购自Sigma公司，批号：02980；兔抗大鼠晚期糖基化终末产物特异性受体抗体RAGE抗体购自Santa Cruz生物技术公司，批号：KT0081。

3.仪器与设备

低温超速离心机(Optima XPN系列，美国贝克曼库尔特有限公司)；低温冰箱(BCD-252K型，新飞牌)；石蜡切片机(CUT4062型，德国SLEE)；石蜡包埋机(MPS P2型，德国SLEE)；病理组织烘烤仪(TEC-2500型，澳大利亚郝思琳)；光学显微镜及显微摄像系统(OLYMPUS公司生产)。

4.动物分组及糖尿病肾病大鼠模型的建立

(1)动物分组及模型建立：取10只大鼠作为空白对照组，其余55只大鼠喂养高糖高脂饲料(含猪油10％，蔗糖20％，胆固醇2.5，胆酸钠1％，基础饲料66.5％)喂养4周。大鼠禁食不禁饮12h，一次性腹腔注射STZ 30mg/kg(溶解于1％枸椽酸缓冲液中，pH值为4.5)，随即腹腔注射50％葡萄糖5mL。对照组腹腔内注射等量枸缘酸缓冲液。注射后48h进行尾静脉采血，血糖仪测定全血血糖(BG)>16.7mmol/L为糖尿病模型制作成功标准。本研究共51只大鼠成功建立糖尿病模型，随机分为模型组10只，中药复方制剂高剂量组11只，中剂量组10只，低剂量组10只，阳性对照组10只。各组均继续给予高脂高糖饲料，4周后发展为糖尿病肾病模型，再进行各自干预措施。

5.干预方法

模型组及治疗组皮下注射甘精胰岛素2u，每日1次；对照组皮下注射等量生理盐水。所有大鼠自由饮水，并继续给予高脂高糖饲料。高剂量组予中药复方制剂混悬液32.4g/kg，即每公斤体重15g混合生药量；中剂量组予中药复方制剂混悬16.2g/kg，低剂量组予中药复方制剂混悬液8.1g/kg。阳性对照组予盐酸贝那普利4mg/kg混悬液灌胃。第8周末称量大鼠的体重，腹主动脉取血约6mL，检测各项指标。取右肾称重，用于计算肾重/体重比(即肾脏肥大指数)。取左肾沿正中剖开，置于10％甲醛溶液中固定，送病理检测。

6.观察指标

(1)观察实验药物对糖尿病肾病模型大鼠体重、肾重、肾重/体重的影响。

(2)观察实验药物对糖尿病肾病模型大鼠血糖、糖化血糖蛋白(HbA1c)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，尿β2微球蛋白(β2-MG)，尿微量白蛋白(ULA)

(3)观察实验药物对糖尿病肾病模型大鼠肾脏病理的影响。具体方法为：肾组织10％甲醛固定，石蜡包埋，组织切片，脱蜡，苏木精/伊红HE染色，放大400倍光镜下观察。

(4)免疫组化法测定肾组织肾小管间质TGF-β1、晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。在显微镜×400条件下随机选择10个肾小管区域为主的视野，阳性细胞率：≤5％记0分，6％-25％记1分，26％-50％记2分，51％-75％记3分，＞75％记4分；染色强度计分：无着色记0分，浅黄色记1分，黄褐色记2分，深褐色记3分。计算阳性细胞率与染色强度的乘积，得出阳性指数(PositiveIndex，PI)。

7.实验结果

(1)实验药物对糖尿病肾病模型大鼠体重体重、肾重、肾重/体重的影响

大鼠造模后，与空白对照组比较，各造模组大鼠体重下降明显；早期多动、敏感、好打斗，后期迟纯、皮毛疏松无光泽，小便量多，进食量、饮水量明显增加。8周末模型组大鼠体重较空白对照组下降明显，中药组及阳性对照组体重较模型组增加，仍较空白对照组有所下降。中、高剂量组较低剂量组有所增加，但差异无统计学意义。模型组肾重/体重比较空白对照组及各中药组显著增高，各中药组、阳性对照组较空白对照组仍有所升高，高剂量组较阳性对照组有所下降，但差异无统计学意义。说明中药复方制剂具有升高糖尿病大鼠体重、降低肾脏重量增大状态的作用。见表1。

表1 各组大鼠体重、肾重比较

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05；与模型组比较，^△P＜0.05。

(2)观察实验药物对糖尿病肾病模型大鼠理化指标的作用。血糖、糖化血糖蛋白(HbA1c)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，尿β2微球蛋白(β₂-MG)，尿微量白蛋白(ULA)

模型组大鼠较空白组血糖升高明显，阳性对照组对血糖有轻微下降作用，但不明显；各中药组血糖较模型组及阳性对照组下降，且随剂量的增加血糖逐渐下降，高剂量组血糖较阳性对照组下降明显(P＜0.05)；模型组大鼠HbA1c较空白对照组升高，阳性对照组与模型组相比下降不明显，各中药组HbA1c随剂量增加而下降。说明本发明药物对糖尿病肾病大鼠血糖有下调作用。模型组大鼠BUN及Cr均较空白对照组升高。阳性对照组未能较模型组明显降低，说明盐酸贝那普利未能有效降低糖尿病肾病大鼠Cr及BUN。中、高中药组BUN、Cr均模型组降低，且中、高剂量组较阳性对照组BUN、Cr降低明显。说明本发明药物对糖尿病肾病大鼠肾功能下降有治疗作用，中、高剂量优于洛汀新。模型组大鼠β₂-MG、ULA均较空白对照组明显升高，说明模型组大鼠存在肾小管功能下降。各中药组及阳性对照组β₂-MG、ULA均较模型组下降，各中药组随剂量增大β₂-MG、ULA下降程度越大，但与阳性对照组差异无统计学意义。说明本发明中药具有降低尿微量白蛋白及尿β₂微球蛋白，对糖尿病肾病大鼠肾小管功能障碍具有治疗作用。见表2、表3。

表2 各组大鼠血糖、HbA1c、BUN比较

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05；与模型组比较，^△P＜0.05；与阳性对照组比较，^#P＜0.05。

表3 各组大鼠Cr、β2-MG、ULA比较

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05；与模型组比较，^△P＜0.05；与阳性对照组比较，^#P＜0.05。

(3)观察实验药物对糖尿病肾病模型大鼠肾脏病理的影响

光镜检查：空白对照组大鼠肾小球结构清晰，基底膜完整，肾小管上皮细胞均排列整齐，未示缺失；模型组大鼠肾小球肥大，系膜区显著增宽，可见系膜细胞增生，肾小管上皮细胞肿胀脱落，呈空泡样变性；阳性对照组及低剂量组大鼠肾小球内可见红细胞淤积的情况，上皮细胞空泡样变性，肾小管可见上皮细胞脱落：中药组大鼠肾小球内红细胞淤积减少，肾小管上皮细胞脱落较模型组明显减少，小管内蛋白管型较模型组明显减少。

(4)免疫组化法测定肾组织肾小管间质TGF-β₁、晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达

TGF-β₁在空白组肾小管上皮及间质表达较少，模型组表达明显，呈黄褐色及深褐色；各中药组及阳性对照组均呈浅黄色或黄褐色，较模型组表达减少，高剂量组较模型组较少明显，但各中药组及阳性对照组之间差异无统计学意义。RAGE在空白组肾小管上皮及间质表达较少，模型组颜色呈深褐色；各中药组及阳性对照组均呈浅黄色或黄褐色，较模型组表达减少，中药组随剂量增加RAGE表达减少，但各中药组及阳性对照组之间差异无统计学意义。免疫组化结果说明本发明中药能够减少糖尿病肾病大鼠肾小管组织TGF-β₁及RAGE表达。见表4。

表4 各组大鼠免疫组化TGF-β1、RAGE表达

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

实验二(中药复方对糖尿病肾病大鼠肾足突细胞的影响)

1.实验动物：同实验一。

2.实验药物及试剂：

实验药物为本发明实施例1制备的中药复方制剂；

大鼠α₃β₁整合素ELISA试剂盒(美国Santa Cruz，CSB-EQ027530RA)兔抗大鼠nephrin抗体(武汉博士德生物工程有限公司，BA1669)兔抗大鼠podocin抗体(武汉博士德生物工程有限公司，CA2170)

3.仪器与设备

低温超速离心机(Optima XPN系列，美国贝克曼库尔特有限公司)；低温冰箱(BCD-252K型，新飞牌)；石蜡切片机(CUT4062型，德国SLEE)；石蜡包埋机(MPS P2型，德国SLEE)；病理组织烘烤仪(TEC-2500型，澳大利亚郝思琳)；光学显微镜及显微摄像系统(OLYMPUS公司生产)；酶标仪(352型，Labsystems Multiskan MS，芬兰生产)；隔水式恒温培养箱(GNP-9080型，国产)；JEM-1230透射电子显微镜(日本电子株式会社生产)；图像采用Miaspro图像分析系统进行分析。

4.动物分组及糖尿病肾病大鼠模型的建立。

(1)动物分组：同实验一；

(2)模型制备：同实验一。

5.干预方法

同实验一。

6.观察指标

(1)观察各组大鼠足突细胞状态：足突细胞数、足突宽度及融合率、基底膜厚度变化

肾组织观察。肾组织10％甲醛固定，经包埋、切片、脱蜡、苏木精/伊红HE染色，于放大400倍光镜下观察。每只大鼠各取2张切片，观察20个视野。透射电镜：将1mm³大小肾皮质组织固定，Epon 812包埋，切片铅铀双重染色后，透射电镜观察。

(2)观察各组大鼠免疫组化nephrin及podocin蛋白表达：石蜡切片置于烘箱中，加热2h；脱蜡：切片用二甲苯浸泡脱蜡，25min；水化：100％、95％、80％、70％梯度酒精水化，PBS冲洗3次，各5min；阻断：3％H₂O₂(去离子水)孵育20min，PBS冲洗3次，各5min；抗原修复：切片用pH6.0的0.01mol/L柠檬酸钠抗原修复液，煮沸15min，保温15min，室温自然冷却，PBS冲洗3次，各5min；封闭：滴加山羊血清，37℃孵育30min；加一抗，4℃，孵育过夜；PBS冲洗3次，各5min；加二抗，37℃孵育30min；PBS冲洗3次，各5min；显色：DAB显色5min(DAB，TB，30％H₂O₂)；复染：苏木素复染45s，自来水流动冲洗5min；分化：盐酸酒精分化1s,流水冲洗15min；脱水：梯度酒精浸润；透明：二甲苯浸润；封片：滴入中性树脂；每只动物标本经nephrin、podocin染色后各取2张切片，在显微镜×400条件下随机选择10个视野，阳性细胞率：≤5％记0分，6％-25％记1分，26％-50％记2分，51％-75％记3分，＞75％记4分；染色强度计分：无着色记0分，浅黄色记1分，黄褐色记2分，深褐色记3分。计算阳性细胞率与染色强度的乘积，得出阳性指数(PositiveIndex，PI)。

(3)观察各组大鼠α₃β₁整合素ELISA检测表达：标准品稀释，将ELISA试剂盒中原倍标准品稀释成相应要求的标准品稀释液。设孔：在酶标包被板上设空白对照孔：不加血清样品及酶标试剂；标准对照孔：加标准品50μl；样品孔：先加稀释液40μl，再加血清样品10μl，血清样品最终稀释度为1:5；温育：在酶标包被板上盖封板膜，轻晃至均匀，于37℃条件下温育，30min；配液：用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释30倍后备用；洗涤：去封板膜，弃孔内液体后干燥，加洗涤剂，静置30s，弃液，重复5次，用吸水纸干燥；加酶：除空白对照孔外，各孔加酶标试剂50μl；温育，洗涤；显色：各孔加入显色剂A、显色剂B各50μl，轻晃至均匀，室温避光显色15min；终止：各孔加终止液50μl，反应终止后由蓝色变为黄色；读取OD值：15min内，将空白孔调零，以波长450nm依序测量各孔的吸光度(OD值)。根据5个标准孔的已知浓度和OD值，进行标准曲线分析后绘制标准曲线，得出直线回归方程。按照个样品孔的OD值代入方程，按稀释倍数换算出样本血清该指标浓度含量，以(表示，ng/L)。

7.实验结果

(1)观察各组大鼠足突细胞状态：足突细胞数、足突宽度及融合率、基底膜厚度变化

透射电镜检查：空白对照组大鼠肾小球足突分布均匀，足突间裂孔膜结构清晰；模型组大鼠肾小球基底膜较空白组增厚，肾小球系膜区增宽，系膜细胞及基质弥漫增宽，足突肿胀，局部裂孔膜减少或消失；低剂量组及阳性对照组病变相对较轻，系膜区增宽减轻，足突融合及裂孔膜破坏较轻；中、高剂量组病变最轻，基底膜增厚不显著，足突损伤轻微。

电镜测量显示，模型组足突较空白对照组明显增大，说明模型组足突肿胀融合明显；各中药组及阳性对照组均较模型组下降；各中药组随剂量增加足突宽度降低，高剂量组较阳性对照组足突宽度显著降低。说明本发明中药能够减轻糖尿病肾病大鼠足突肿胀状态，降低足突宽度，高剂量时疗效优于洛汀新。

模型组足突融合率较空白组显著升高，各中药组及阳性对照组足突融合率均较模型组下降，高剂量组较阳性对照组下降明显。说明本发明中药能够减轻糖尿病大鼠足突融合状态，且高剂量时作用优于洛汀新。

模型组基底膜厚度较空白对照组明显增厚，说明基底膜处于炎症增生的弥漫性增宽状态。各中药组及阳性对照组基底膜厚度均有所下降，各中药组随剂量增加基底膜厚度下降明显，高剂量组基底膜厚度显著低于阳性对照组。说明本发明中药能够降低糖尿病肾病大鼠基底膜厚度，减轻基底膜弥漫性择增厚状态。见表5。

表5 各组大鼠足突及基底膜情况比较

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05；与模型组比较，^△P＜0.05；与阳性对照组比较，^#P＜0.05。

(2)观察各组大鼠免疫组化nephrin及podocin蛋白表达

模型组较空白对照组nephrin蛋白表达显著下降，说明糖尿病肾病大鼠足突破坏，所表达的nephrin蛋白表达下降。各中药组及阳性对照组较模型组nephrin蛋白表达上升，中、高剂量组较阳性对照组nephrin蛋白上升明显。说明本发明中药可以改善糖尿病肾病大鼠足突破坏状态，且中、高剂量时作用优于洛汀新。模型组较空白对照组podocin蛋白表达显著下降，说明糖尿病肾病大鼠足突破坏，所表达的podocin蛋白表达下降。各中药组及阳性对照组较模型组nephrin蛋白表达上升，高剂量中药组较阳性对照组升高明显。说明本发明中药可以改善糖尿病肾病大鼠足突破坏状态，且高剂量时作用优于洛汀新。见表6。

表6 各组大鼠nephrin及podocin蛋白表达

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与阳性对照组比较，^##P＜0.01。

(3)观察各组大鼠α₃β₁整合素的ELISA检测表达

模型组大鼠α₃整合素较空白对照组显著降低；各中药组及阳性对照组较模型组有所升高，中、高剂量组均升高显著；高剂量组较阳性对照组有升高趋势，但差异无统计学意义。说明本发明中药能够上调糖尿病肾病大鼠血清α₃整合素表达，减少足细胞脱落。模型组大鼠β₁整合素较空白对照组显著降低；各中药组及阳性对照组较模型组有所升高，中、高剂量组均升高显著；高剂量组较阳性对照组有升高趋势，但差异无统计学意义。说明本发明中药能够上调β₁整合素表达，减少足细胞脱落。见表7。

表7 各组大鼠nephrin及podocin蛋白表达

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05；与模型组比较，^△P＜0.05；与阳性对照组比较，^#P＜0.05。

实施例12

陈某，女，65岁，2013年5月2日初诊。10年前无明显诱因出现多饮、多尿、多食，即去某三甲医院就诊，多次查空腹血糖在9.0mmol/L～11.8mmol/L之间波动，尿蛋白(-)，诊断为2型糖尿病，服用二甲双胍、达美康等口服降糖药，血糖控制不稳定，常有波动。3月前因劳累过度，觉全身乏力，头晕目眩，口干唇燥，双下肢浮肿。就诊于当地医院，检查，尿糖(3+)，尿蛋白(3+)，24小时尿蛋白定量4.5g，空腹血糖11.8mmol/L，Cr135.6/μmol/L，BUN 9.6mmol/L，白蛋白23.3g/L，诊断为糖尿病肾病Ⅳ期，经西医治疗后效果不佳，故来我院门诊求治。尿液检查尿糖(3+)，尿蛋白(3+)，24小时尿蛋白定量6.5g/L，空腹血糖12.6mmol/L，Cr142.6μmol/L，血尿素氮7.8mmol/L，白蛋白25.5g/L，总蛋白53.5g/L。患者面色灰暗，双下肢可凹陷性浮肿，舌质淡胖，苔腻，脉沉涩，血压146/82mmHg。证属脾虚湿阻，络脉瘀滞，治以益气活血、利湿化浊，药用黄芪24g、泽兰15g、苍术15g、生蒲黄15g、虎杖15g、土茯苓15g、水蛭6g、川牛膝15g、怀牛膝15g、绵萆薢10g，同时嘱患者按时服用拜唐苹50mg，tid，po；洛汀新l0mg，qd，po。随证加减治疗3个月以后，继续服用本发明中药复方颗粒剂治疗，每次用量相当于生药50g，每日3次，共4周，测尿糖(+)，尿蛋白(+)，24小时尿蛋白定量1.8g，空腹血糖9.6mmol/L，Cr:121.7μmol/L，BUN6.6mmol/L，白蛋白38.5g/L，患者一般情况明显好转，双下肢浮肿消退，病情稳定，于门诊继续服药观察。

实施例13

郭某，男，52岁，2014年3月19日初诊。患者8年前体检查空腹血糖7.4mmol/L，后于龙华医院行OGTT试验，确诊2型糖尿病。服用二甲双胍、诺和龙、拜唐苹等药物，规律性差，未严格按医嘱控制饮食。1月前于我院体检查空腹血糖8.2mmol/L，餐后2小时血糖12.4mmol/L，总胆固醇6.2mmol/L，血压142/87mmHg，尿蛋白(+)；后于肾内科查24小时尿微量白蛋白402mg。现乏力、腰酸、汗多、大便溏、舌淡苔薄腻、舌下络瘀、脉沉滑。治以益气活血、利湿化浊。药用泽兰15g、黄芪24g、生蒲黄15g、苍术15g、虎杖30g、土茯苓15g、水蛭9g、川牛膝15g、怀牛膝15g、绵萆薢10g、炒白术15g、车前子30g，予诺和灵30R 25u、20u控制血糖，服药一周后腹泻消失，大便成形，上方去炒白术15g、车前子30g，继以泽兰15g、黄芪24g、生蒲黄15g、苍术15g、虎杖30g、土茯苓15g、水蛭9g、川牛膝15g、怀牛膝15g、绵萆薢10g，服用2个月后查24小时尿微量白蛋白315mg，后继续服用本发明中药复方颗粒剂治疗，每次用量相当于生药50克，每日2次，共2个月，复查24小时尿微量白蛋白145mg，总胆固醇4.7mmol/L。

实施例14 不同中药复方对糖尿病肾病大鼠肾足突细胞的影响

1.实验动物：同实施例11实验二。

2.实验药物及试剂：

本发明的中药复方制剂：本发明实施例1制备的中药复方制剂；

中药对照一：分别称取泽泻1500g、黄芪2400g、生蒲黄1500g、白术1500g、丹参1500g、金银花1500g、水蛭600g、川牛膝1500g、怀牛膝1500g、绵萆薢1500g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，即得。

中药对照二：分别称取泽兰1500g、黄芪2400g、生蒲黄1500g、苍术1500g、虎杖1500g、土茯苓1500g、水蛭600g、川牛膝1500g、怀牛膝1500g、绵萆薢1500g，车前子1500g，当归1500g，甘草1500g，用水回流提取3次(100L，1小时；80L，1小时；80L，1小时)，合并提取液，浓缩，烘干，粉碎，即得。

3.仪器与设备：同实施例11实验二。

4.动物分组及糖尿病肾病大鼠模型的建立。

(1)动物分组及模型建立：取10只大鼠作为空白对照组，其余55只大鼠喂养高糖高脂饲料(含猪油10％，蔗糖20％，胆固醇2.5，胆酸钠1％，基础饲料66.5％)喂养4周。大鼠禁食不禁饮12h，一次性腹腔注射STZ 30mg/kg(溶解于1％枸椽酸缓冲液中，pH值为4.5)，随即腹腔注射50％葡萄糖5mL。对照组腹腔内注射等量枸缘酸缓冲液。注射后48h进行尾静脉采血，血糖仪测定全血血糖(BG)>16.7mmol/L为糖尿病模型制作成功标准。共50只大鼠建立糖尿病模型，随机分为模型组10只，本发明中药复方制剂组10只，中药对照一组10只，中药对照二组10只，西药对照组10只。各组均继续给予高脂高糖饲料，4周后发展为糖尿病肾病模型，再进行各自干预措施。

5.干预方法

模型组及治疗组皮下注射甘精胰岛素2u，每日1次。所有大鼠自由饮水，并继续给予高脂高糖饲料。本发明中药复方制剂组予中药复方制剂混悬液，每公斤体重15g混合生药量；中药对照一组予中药对照一的中药复方混悬液，每公斤体重15g混合生药量；中药对照二组予中药对照二的中药复方混悬液，每公斤体重15g混合生药量；西药对照组予盐酸贝那普利4mg/kg混悬液灌胃。第8周末称量大鼠的体重，腹主动脉取血约6mL，检测各项指标。取右肾称重，用于计算肾重/体重比(即肾脏肥大指数)。取左肾沿正中剖开，置于10％甲醛溶液中固定，送病理检测。

6.观察指标：同实施例11实验二。

7.实验结果

(1)观察各组大鼠足突细胞状态：足突细胞数、足突宽度及融合率、基底膜厚度变化

透射电镜检查：空白对照组大鼠肾小球足突分布均匀，足突间裂孔膜结构清晰；模型组大鼠肾小球基底膜较空白组增厚，肾小球系膜区增宽，系膜细胞及基质弥漫增宽，足突肿胀，局部裂孔膜减少或消失；西药对照组、中药对照一组和中药对照二组病变相对较轻，系膜区增宽减轻，足突融合及裂孔膜破坏较轻；本发明中药复方制剂组病变最轻，基底膜增厚不显著，足突损伤轻微。

电镜测量显示，模型组足突较空白对照组明显增大，说明模型组足突肿胀融合明显；西药对照组和各中药组均较模型组下降；但中药对照一组和中药对照二组与西药对照组相比无显著差异。本发明中药复方制剂组较西药对照组足突宽度显著降低。说明本发明中药能够减轻糖尿病肾病大鼠足突肿胀状态，降低足突宽度，疗效显著优于洛汀新、中药对照一和中药对照二。

模型组足突融合率较空白组显著升高，西药对照组和各中药组足突融合率均较模型组下降，但中药对照一组和中药对照二组与西药对照组相比无显著差异。本发明组较西药对照组下降明显。说明本发明中药能够减轻糖尿病大鼠足突融合状态，且作用优于洛汀新、中药对照一和中药对照二。

模型组基底膜厚度较空白对照组明显增厚，说明基底膜处于炎症增生的弥漫性增宽状态。西药对照组和各中药组基底膜厚度均有所下降，中药对照一组和中药对照二组与西药对照组相比无显著差异。本发明组基底膜厚度显著低于西药对照组、中药对照一组和中药对照二组。说明本发明中药能够降低糖尿病肾病大鼠基底膜厚度，减轻基底膜弥漫性择增厚状态。见表8。

表8 各组大鼠足突及基底膜情况比较

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05；与模型组比较，^△P＜0.05；与西药对照组比较，^#P＜0.05。

(2)观察各组大鼠免疫组化nephrin及podocin蛋白表达

模型组较空白对照组nephrin蛋白表达显著下降，说明糖尿病肾病大鼠足突破坏，所表达的nephrin蛋白表达下降。各中药组及阳性对照组较模型组nephrin蛋白表达上升，中药对照一组和中药对照二组与西药对照组相比无显著差异，本发明组较西药对照组nephrin蛋白上升明显。说明本发明中药可以改善糖尿病肾病大鼠足突破坏状态，作用优于洛汀新、中药对照一和中药对照二。

模型组较空白对照组podocin蛋白表达显著下降，说明糖尿病肾病大鼠足突破坏，所表达的podocin蛋白表达下降。各中药组及阳性对照组较模型组nephrin蛋白表达上升，中药对照一组和中药对照二组与西药对照组相比无显著差异，本发明组较西药对照组升高明显。说明本发明中药可以改善糖尿病肾病大鼠足突破坏状态，且作用优于洛汀新、中药对照一和中药对照二。见表9。

表9 各组大鼠nephrin及podocin蛋白表达

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01；与阳性对照组比较，^##P＜0.01。

本发明的中药复方由泽兰、黄芪、生蒲黄、苍术、虎杖、土茯苓、水蛭、川牛膝、怀牛膝、绵萆薢组方，系在多年临床实践基础上，以传统中医理论为指导，精心选药组方而成。方中黄芪味甘性微温，归心、肺、脾、肾经，功能益气行血、利水消肿、托毒化浊；泽兰味苦辛性微温，归肝、脾经，能活血化瘀、行水消肿、解毒消痈，两药相合，一入气分，一入血分，共奏益气活血、利水解毒化浊之功效，为方中君药。苍术味辛苦性温，归胃、肝、脾经，具有燥湿健脾之功效，《本草纲目》载：“治湿痰留饮，或挟瘀血成窠囊”；蒲黄味甘微辛性平，归心、肝、脾经，功能止血、祛瘀、利尿，两者相辅相成，助君药益气健脾、活血利水，共为臣药。虎杖味苦酸性微寒，归肝胆经，能活血散瘀、清热利湿解毒；水蛭味咸苦性平，归肝经，长于破血逐瘀、通经消癥；土茯苓甘淡平，归肝脾胃经，擅清热除湿、泄浊解毒；绵萆薢味苦辛平，归肾、胃经，能利湿化浊，四者共为佐药。川、怀牛膝，味甘苦性平，归肝肾经，功擅活血祛瘀、滋补肝肾、引血下行。《药品化义》载：牛膝，味甘能补，带涩能敛，兼苦直下，用之入肾。盖肾主闭藏，涩精敛血，引诸药下行，两药共为引药。虎杖、土茯苓、水蛭、川牛膝、怀牛膝活血利湿化浊，加强君药活血祛湿的功效，使邪有出路。诸药合用，活血利湿化浊以治标，益气以培本，共奏益气活血、利湿化浊之功。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种益气活血、利湿化浊的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：泽兰1～30份、黄芪1～50份、生蒲黄1～30份、苍术1～30份、虎杖1～30份、土茯苓1～30份、水蛭1～15份、川牛膝1～30份、怀牛膝1～30份、绵萆薢1～30份。

2.根据权利要求1所述益气活血、利湿化浊的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：泽兰1～20份、黄芪1～30份、生蒲黄1～20份、苍术1～20份、虎杖1～20份、土茯苓1～20份、水蛭1～10份、川牛膝1～20份、怀牛膝1～20份、绵萆薢1～20份。

3.根据权利要求1所述益气活血、利湿化浊的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：泽兰15份、黄芪24份、生蒲黄15份、苍术15份、虎杖15份、土茯苓15份、水蛭6份、川牛膝15份、怀牛膝15份、绵萆薢15份。

4.根据权利要求1-3任一所述的益气活血、利湿化浊的中药复方制剂在制备治疗糖尿病性肾病药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物还包括药学上允许的辅料。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物为汤剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、口服液或糖浆剂。