CN106109511A - 一种银杏叶提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种银杏叶提取物及其制备方法和应用，本发明制备的银杏叶提取物包含银杏黄酮、银杏内酯和白果内酯，所述银杏黄酮含量为20～25wt％、银杏内酯含量为2～4wt％、白果内酯含量为2～4wt％；所述银杏叶提取物制备方法为乙醇提取，提取液浓缩后水沉，再上酸性氧化铝柱，再用含乙酸的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩、干燥。本发明制备银杏叶提取物的方法简单、高效，所制备的银杏叶提取物能有效舒张小鼠的气管平滑肌，用于哮喘的治疗，同时所述银杏叶提取物具有毒性低、用药安全性高的优点，为临床提供了一种新型、安全的哮喘治疗药物。

Description

一种银杏叶提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种银杏叶提取物及其制备方法和应用，属于医药技术领域。

背景技术

银杏为银杏科银杏属多年生落叶乔木，我国药典中记载银杏叶有润肺、平喘、止痛作用，可用于肺虚咳嗽、冠心病心绞痛等，在临床上应用多年，取得了良好的临床疗效。银杏叶主要活性成分为黄酮类化合物和内酯类化合物，银杏叶提取物具有广泛的药理作用:拮抗血小板活化因子、清除自由基、抗炎、抗过敏等方面，具有广阔的应用前景。众所周知，中药提取物的功效与提取物中的物质组成有直接的关联，不同来源的药材、不同的提取方法均会影响中药提取物中的物质组成，进而影响中药提取物的功效。

中国发明专利CN1827120A公开了一种含有银杏叶提取物与肾上腺素受体激动剂的药物组合物，较单独使用药物组合物中任一活性组分，本发明通过银杏叶提取物与沙美特罗或福莫特罗组合使用取得了显著的协同性作用，药物组合物引喘潜伏期得到了延长、抽搐发生率更低。

但是上述技术方案仍然存在缺陷与不足：(1)银杏叶提取物对内酯和黄酮的含量有较高的要求，银杏叶提取物内酯含量需大于80％，或者黄酮含量大于70％，同时要求内酯含量大于18％；(2)制备高含量内酯和黄酮的银杏叶提取物工序繁琐，活性成分损失大，银杏叶物料利用率低；(3)药物组合物为银杏叶提取物与β2-肾上腺素受体激动剂的复方，依然无法避免β2-肾上腺素受体激动剂临床使用时引起骨骼肌震颤、低血钾、心律紊乱等不良反应。因此，我们迫切需要开发一种新型的、安全的、纯中药哮喘药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种银杏叶提取物及其制备方法和应用，本发明制备方法简单、条件温和，所使用的试剂毒性小，所制备的银杏叶提取物单独使用能有效舒张气管平滑肌，用于哮喘的治疗。

实现本发明的技术方案是：

一种银杏叶提取物，所述银杏叶提取物包含银杏黄酮、银杏内酯和白果内酯，所述银杏黄酮、银杏内酯和白果内酯三者之和的质量百分含量小于35％。

优选的，所述银杏叶提取物中银杏黄酮的含量为20～25wt％、银杏内酯的含量为2～4wt％、白果内酯的含量为2～4wt％。

一种银杏叶提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)银杏叶干燥后粉碎，过40～60目筛；

(2)向银杏叶中加入银杏叶重量4～8倍、体积浓度为60～80％乙醇提取2～3次，每次提取60～70min，合并提取液；

(3)将步骤(2)制备的提取液减压蒸馏得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12～15h，取上清液；

(4)将步骤(3)的上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用含乙酸的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸馏得到流浸膏，流浸膏减压干燥得到银杏叶提取物，其中，所述含乙酸的乙醇为体积浓度为80～90％的乙醇和体积百分比0.1～0.5％的乙酸组成。

优选的，步骤(3)所述浓缩液为提取液体积的1/10～1/5。

一种银杏叶提取物在制备气管平滑肌舒张药物中的应用。

优选的，所述气管平滑肌舒张药物用于治疗哮喘。

优选的，所述气管平滑肌舒张药物的剂型为片剂或胶囊剂中的一种。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于:

(1)本发明制备的银杏叶提取物中银杏黄酮、银杏内酯、白果内酯的含量分别为20～25wt％、2～4wt％、2～4wt％，避免了高含量黄酮和内酯银杏叶提取物的使用，提高了中药银杏叶的利用率，也简化了制备工艺。

(2)本发明制备的银杏叶提取物单独使用便能有效舒张气管平滑肌，用于哮喘药物的制备和应用，避免了高含量黄酮和内酯银杏叶提取物与β2-肾上腺素受体激动剂组合用药，因而可克服β2-肾上腺素受体激动剂的不良反应。

(3)本发明制备方法简单、高效，提取液减压蒸馏浓缩后加与浓缩液等体积的水沉淀，除去亲水性强的无活性物质，减少了后续上酸性氧化铝柱的样品量，便于银杏叶提取物的制备。

(4)纯化过程使用酸性氧化铝柱，再用含乙酸的体积浓度为80～90％的乙醇洗脱，可实现银杏黄酮、银杏内酯、白果内酯的高效吸附和洗脱，减少银杏黄酮、银杏内酯、白果内酯的损失，提高了转移率。

(5)本发明银杏叶提取物的制备方法避免使用有毒性的有机试剂及其残留，进一步提高了银杏叶提取物的安全性。

具体实施方式

为使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。

一、实施例部分

实施例1银杏叶提取物的制备方法

(1)银杏叶干燥后粉碎，过60目筛；

(2)加入银杏叶重量4倍、体积浓度为65％乙醇提取3次，每次提取60min，合并提取液；

(3)提取液减压回收得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12h；

(4)取上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用体积浓度为90％的乙醇(含乙酸0.5％，v/v)洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸馏得到流浸膏，流浸膏减压干燥得到银杏叶提取物。

实施例2银杏叶提取物的制备方法

(1)银杏叶干燥后粉碎，过40目筛；

(2)加入银杏叶重量8倍、体积浓度为60％乙醇提取2次，每次提取60min，合并提取液；

(3)提取液减压回收得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀15h；

(4)取上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用体积浓度为80％的乙醇(含乙酸0.2％，v/v)洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浸膏减压干燥得到银杏叶提取物。

实施例3银杏叶提取物的制备方法

(1)银杏叶干燥后粉碎，过50目筛；

(2)加入银杏叶重量6倍、体积浓度为80％乙醇提取2次，每次提取70min，合并提取液；

(3)提取液减压回收得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12h；

(4)取上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用体积浓度为85％的乙醇(含乙酸0.1％，v/v)洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浸膏减压干燥得到银杏叶提取物。

实施例4银杏叶提取物的制备方法

(1)银杏叶干燥后粉碎，过40目筛；

(2)加入银杏叶重量5倍、体积浓度为70％乙醇提取3次，每次提取60min，合并提取液；

(3)提取液减压回收得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12h；

(4)取上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用体积浓度为90％的乙醇(含乙酸0.3％，v/v)洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浸膏减压干燥得到银杏叶提取物。

实施例5银杏叶提取物片剂的制备

(1)银杏叶提取物、淀粉、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁分别粉碎，过60目筛；

(2)将银杏叶提取物30g、淀粉65g、低取代羟丙基纤维素5g、聚乙烯吡咯烷酮4g混合均匀；

(3)将4g硬脂酸镁加入步骤(2)的混合物中，混合均匀；

(4)将步骤(3)得到的混合物压片，制备1000片银杏叶提取物片。

实施例6银杏叶提取物胶囊剂的制备

(1)银杏叶提取物、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁分别粉碎，过60目筛；

(2)将银杏叶提取物30g、淀粉65g、聚乙烯吡咯烷酮3g、硬脂酸镁4g混合均匀，填充于胶囊囊壳，制备1000粒银杏叶提取物胶囊。

二、实验例部分

实验例1本发明实施例1～4所制备的银杏叶提取物分析

本发明实施例1～4所制备的银杏叶提取物以银杏黄酮、银杏内酯、白果内酯为指标成分进行含量分析，分析结果表明，本发明的实施例1～4制备的银杏叶提取物中银杏黄酮含量在20～25wt％之间，银杏内酯含量在2～4wt％之间，白果内酯含量在2～4wt％之间，银杏黄酮、银杏内酯、白果内酯三者质量百分含量波动小，提取方法稳定、可靠。实施例1～4所制备的银杏叶提取物检测结果见表1。

表1实施例1～4所制备的银杏叶提取物检测结果

实验例2银杏叶提取物的非临床药效学研究

1.实验材料

1.1实验动物

性成熟且健康的昆明小鼠，平均年龄6～8周，购于湖北省疾病预防控制中心。小鼠饲养在20～25℃室温温度和50～60％湿度环境下，并且光-暗循环间隔时间为12小时。

1.2实验仪器和试剂

银杏叶提取物(自制)；无水乙醇(国药化学试剂有限公司)；

乙酰胆碱(美国Sigma公司)；

倒置显微镜(Nikon公司)；

张力换能器JH-2型(中国北京航天医学工程研究所)；

锥形瓶(崇州市蜀玻化工有限责任公司)；

HV-4型离体组织器官恒温灌流系统(成都泰盟科技有限公司)；

超级恒温水浴锅HW-1000(成都泰盟科技有限公司)；

生物机能实验系统BL-420S(成都泰盟科技有限公司)。

1.3实验溶液配制

1.3.1高钙溶液的配制

取氯化钠7.889g、氯化钾0.3728g、葡萄糖1.982g、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.383g、氯化镁0.2033g、氯化钙0.2296g，加无菌水至1000mL，再用浓度为0.5mol/L NaOH溶液调至pH7.4。

1.3.2乙酰胆碱溶液的配制

取乙酰胆碱16.3mg，用高钙溶液溶解并稀释至1000mL。

1.4药物材料

取实验例1制备的银杏叶提取物，研磨成粉状，称取0.3g于离心管中，加入3mL高钙溶液，配置成100mg/mL的实验药物，备用。

2.实验方法

2.1小鼠气管的获取

运用颈椎脱臼法将小鼠处死，然后将小鼠固定在解剖板上，喷洒75wt％酒精，用消过毒的剪刀沿着胸腔剪到颈部，暴露出气管后，在喉结处剪开，用镊子轻提喉结，剪刀斜着30度剪去左右两边的结缔组织，最后分离出气管与心肺组织，迅速置于预冷的高钙溶液中。将组织固定于解剖盘中，清除气管周围的各种结缔组织，然后将气管上端到支气管前端剪断。

2.2张力换能器试验系统调试

对仪器经行校准后打开氧气阀门，调节供氧量在合适的范围，以保证组织的基本耗氧量但又不干扰测试基线，再打开张力换能系统，采样率设为100HZ，打开恒温控制系统，保证离体组织温度恒定为37℃，每个浴槽置有6mL高钙溶液，仪器预热0.5小时，备用。

2.3气管的处理及张力换能器的样品上样

截取长度为5mm的气管，将小鼠气管通过挂钩衔接张力换能器试验系统，置于含有6mL37℃高钙溶液并持续通氧的恒温水浴槽內。前负荷设置为300mg，每15分钟更换一次高钙溶液，连续四次。平衡60分钟后，用100μmol/L乙酰胆碱进行预刺激，使气管处于最佳收缩状态，洗脱后恢复至基线。

2.4银杏叶提取物对乙酰胆碱预收缩的舒张作用

将小鼠气管通过挂钩衔接张力换能器试验系统，置于含有6mL 37℃高钙溶液并持续通氧的恒温水浴槽內。前负荷设置为300mg，每15分钟更换一次高钙溶液，连续四次。平衡60分钟后，用100μmol/L乙酰胆碱进行预刺激三次，使气管肌张力达到800mg以上，洗脱后恢复至基线，再加入乙酰胆碱使气管预收缩15分钟，再依次按浓度梯度0.01mg/mL、0.032mg/mL、0.1mg/mL、0.316mg/mL、1mg/mL、3.16mg/mL、5.62mg/mL、10mg/mL的银杏叶提取物进行试验，每个浓度作用10分钟。

3.实验结果

小鼠气管用100μmol/L乙酰胆碱进行预刺激三次，使气管肌张力达到800mg以上，洗脱后恢复至基线，再加入乙酰胆碱使气管预收缩15分钟，小鼠气管张力为10mN，再给予不同浓度的银杏叶提取物，测定各浓度项下小鼠气管的舒张率。结果见表1。

表2不同浓度银杏叶提取物对乙酰胆碱预收缩的舒张作用结果

小鼠气管张力(mN)＝拉力(mg)/气管重量(mg)，即单位重量的气管平滑肌拉力；

舒张率(％)＝(加入药物前张力—加入药物后张力)/(加入乙酰胆碱后张力—加入乙酰胆碱前张力)×100％。

由表2可知，随着银杏叶提取物浓度的不断增高，小鼠气管张力不断下降，在0.01～5.62mg/mL药物浓度范围内呈浓度依赖性，当银杏叶提取物浓度为5.62mg/mL时，小鼠气管张力降至最低2mN，即使将银杏叶提取物浓度提高至10mg/mL，小鼠气管张力也不再下降。本发明制备的银杏叶提取物能舒张小鼠气管平滑肌，解除支气管痉挛，实现治疗哮喘的功效。

Claims (7)

1.一种银杏叶提取物，其特征在于，所述银杏叶提取物包含银杏黄酮、银杏内酯和白果内酯，所述银杏黄酮、银杏内酯和白果内酯三者之和的质量百分含量小于35％。

2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物，其特征在于，所述银杏叶提取物中银杏黄酮的含量为20～25wt％、银杏内酯的含量为2～4wt％、白果内酯的含量为2～4wt％。

3.一种银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)银杏叶干燥后粉碎，过40～60目筛，再放入提取罐中；

(2)向提取罐中加入银杏叶重量4～8倍、体积浓度为60～80％乙醇提取2～3次，每次提取60～70min，合并提取液；

(3)将步骤(2)制备的提取液减压蒸馏得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12～15h，取上清液；

(4)将步骤(3)的取上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用含乙酸的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸馏得到流浸膏，流浸膏减压干燥得到银杏叶提取物，其中所述含乙酸的乙醇为体积浓度为80～90％的乙醇和体积百分比0.1～0.5％的乙酸组成。

4.根据权利要求3所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述浓缩液为提取液体积的1/10～1/5。

5.根据权利要求1～2所述的银杏叶提取物在制备气管平滑肌舒张药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的银杏叶提取物在制备气管平滑肌舒张药物中的应用，其特征在于，所述气管平滑肌舒张药物用于治疗哮喘。

7.根据权利要求5所述的银杏叶提取物在制备气管平滑肌舒张药物中的应用，其特征在于，所述气管平滑肌舒张药物的剂型为片剂或胶囊剂中的一种。