CN102526025A - 制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法 - Google Patents

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CN102526025A CN2011104549279A CN201110454927A CN102526025A CN 102526025 A CN102526025 A CN 102526025A CN 2011104549279 A CN2011104549279 A CN 2011104549279A CN 201110454927 A CN201110454927 A CN 201110454927A CN 102526025 A CN102526025 A CN 102526025A
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胡林水
杨浩
梁虎
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ZHEJIANG CONBA PHARMACEUTICAL CO Ltd
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Abstract

本发明涉及一种制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法。先用银杏叶或银杏叶提取物提取银杏有效成分再进一提取中间体I银杏黄酮含量部位，再进一步提取中间体Ⅱ银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位，然后再提取中间体Ⅲ白果内酯部位，将所得的银杏黄酮含量部位、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位、白果内酯部位按标准要求含量称量直接调制，或与含量不符合要求的银杏叶提取物调制获得符合规定标准的要求，如EP6.0标准或USP31标准或客户指定要求的银杏叶提取物。弥补了因银杏叶品质受产地、天气、树龄、采集时间、贮存期等多种因素综合作用，导致提取物质量不稳定，难以保证每批提取物中的黄酮和内酯含量、及总黄酮与总内酯比例、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位与白果内酯的比例相对稳定和准确的缺陷，具有产品原料要求低，生产控制容易，制取产品有效成份含量准确稳定的特点。

Description

制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法
技术领域
本发明属于银杏叶提取物的制备方法,具体地说是一种制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法。
背景技术
银杏叶提取物己经成为应用最广泛、最有效的植物产品之一，具有改善心脑血管循环，治疗心脑血管疾病，提高记忆，清除自由基，延缓衰老的作用，有治疗和保健双重作用。其有效成分是银杏总黄酮和银杏总内酯。
银杏总黄酮内含有40余种黄酮类化合物，其主要药理作用为天然氧自由基清除剂和血管扩张剂，能显著降低缺血缺氧和衰老过程中过多自由基对心脑组织细胞的损伤，并能促进血液流变学的改善，特别对脑部的小动脉扩张作用显著，近年来国内外均有长期服用银杏叶产品致头晕，头痛的报道，主要原因是临床使用的银杏叶提取物中黄酮含量过高，长期服用后脑部小动脉及血管过度扩张所致。鉴于此，国际行业界对银杏总黄酮含量非常重视，USP32版和EP6.8标准都要求银杏叶提取物中黄酮类化合物以黄酮苷计含量控制在22.0％～27.0％(干燥提取物)范围内，精确、合理化的总黄酮含量限度有效保证了临床使用有效性和安全性。
银杏总内酯根据结构式的不同分成两大类：银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位和白果内酯，其中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位是强效血小板活化因子（PAF）拮抗剂，可有效阻止心脑血管动脉粥样硬化内壁的异常血小板聚集和血栓形成。白果内酯具有神经元保护作用，是天然的神经元保护剂和记忆改善剂，可改善神经递质和受体结合力，对因年老而出现的呆傻现象有奇异的疗效，也用于治疗神经病、脑病和脊髓病，症状包括：感觉异常，软瘫或麻痹性痴呆，非正常神经反射，肌肉萎缩，肌肉痉挛，震颤，表面性或深度敏感性失调，头痛和四肢痛，语言失调，视力和听力失调，玄晕，神经失调和缺乏集中性，记忆力减退及定向力消失等。为保证临床疗效和安全性，EP6.8规定白果内酯含量为2.6％～3.2％，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量为2.8％～3.4％，USP32版的标准也规定白果内酯含量为2.6 ～ 5.8 %，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量为2.8 ～6.2 %。
目前从银杏叶中提取银杏叶提取物一般同时将银杏黄酮含量和内酯提取出来，由于银杏叶的质量受产地、天气、树龄、采集时间、贮存期等多种因素的综合作用，导致提取物的质量不稳定，难以保证每批提取物中的黄酮和内酯含量指标、及总黄酮与总内酯比例、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位与白果内酯的比例相对稳定，因此难以有效保证生产出高质量的银杏叶提取物。本发明的目的是提出一种以现有大生产普遍应用的水醇-树脂法工艺为基础，通过分离、纯化得到含量相对稳定的银杏黄酮含量部位、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位、白果内酯部位，并以此三者作为中间产品，通过此三者调配或以此三者的任一部分与市售银杏叶提取物调配，获得银杏黄酮含量部位和银杏内酯部位含量，黄酮与内酯比，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位与白果内酯部位比相对精确、稳定的银杏叶提取物的制备方法，该银杏叶提取物可以满足EP或USP或不同客户的需求。
发明内容
实现本发明目的技术方案是：
先用银杏叶或银杏叶提取物通过水醇法提取，酰胺型树脂和大孔吸附树脂吸附，梯度洗脱，结晶纯化得到中间体Ⅰ为银杏总黄酮部位，银杏黄酮含量>30%，且白果内酯含量<1%、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量<1%；中间体II为银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量>95%；中间体III为白果内酯部位，白果内酯含量>3.2%，且白果内酯>银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量，银杏黄酮含量<20%，具体工艺步骤为：
一种制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法，先用银杏叶或银杏叶提取物通过水醇法提取，酰胺型树脂和大孔吸附树脂吸附，梯度洗脱，结晶纯化得到中间体Ⅰ为银杏总黄酮部位，其银杏黄酮含量>30%，且白果内酯含量<1%、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量<1%；中间体II为银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位，其银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量>95%；中间体III为白果内酯部位，白果内酯含量>3.2%，且白果内酯>银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量，银杏黄酮含量<20%，具体工艺步骤为：
(1)提取银杏有效成分
A、银杏叶为起始原料时，银杏叶用含水乙醇或甲醇或丙酮多次提取，取提取液浓缩回收溶剂，浓缩液用水或纯化水稀释，在20℃以下冷却沉降，得生药比约为0.25g/ml的上清液。
B、以不合格的银杏叶提取物为起始原料时，取银杏叶提取物，用2～4倍体积、浓度为50～75%乙醇溶解，溶解后加热水溶解稀释成0.50～0.70g/ml，回收乙醇，冷却沉降，得上清液。
(2)提取中间体I银杏黄酮含量部位
上清液先过聚酰胺柱或ADS～F8等对黄酮选择性较强的极性树脂。收集吸附残液，备用；
过柱后用4～5 倍体积的纯化水预洗，收集纯化水预洗液，备用；
再用2～5倍体积的50～75%乙醇水溶液解吸附，收集流出液，
将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到中间体I银杏黄酮含量部位。
(3)提取中间体Ⅱ银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位
吸附残液与纯化水预洗液分别过苯乙烯型非极性大孔吸附树脂柱，如HPD100 、D101 、三菱HP20、XAD～4、YWD 13C等。
用3～5倍体积水洗后，分步用2～5倍体积的用百分比浓度为10～35%乙醇洗脱，收集洗脱液，得洗脱液Ⅰ；
用用百分比浓度为35～75%乙醇洗脱，洗脱液Ⅰ，得洗脱液Ⅱ；
洗脱液Ⅱ浓缩至上清液体积的1/15～1/30，冷藏放置，过滤，得结晶，母液备用；结晶干燥得中间体Ⅱ银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位
(4)提取中间体Ⅲ白果内酯部位
上述母液与洗脱液Ⅰ合并，减压浓缩，减压干燥，得中间体III白果内酯部位。
(5)分别对所得的银杏黄酮含量部位、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位、白果内酯部位称量调制，使调制后的银杏叶提取物产品符合规定标准的要求，如Schwabe标准、6911标准、CP05标准、EGB761标准、EP6.0标准、USP31标准、CP10标准或客户指定要求，即可。
　　本发明的制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法，弥补了一直以来因银杏叶的质量受产地、天气、树龄、采集时间、贮存期等多种因素的综合作用，导致提取物的质量不稳定，难以保证每批提取物中的黄酮和内酯含量指标、及总黄酮与总内酯比例、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位与白果内酯的比例相对稳定和准确的缺陷，以现有大生产普遍应用的水醇～树脂法工艺为基础，通过分离、纯化得到含量相对稳定的银杏黄酮含量部位、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位、白果内酯部位，并以此三种提取物作为中间产品，通过其三者调配或以此三种植物提取物与市售银杏叶提取物调配，获得银杏黄酮含量部位和银杏内酯部位含量，黄酮与内酯比，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位与白果内酯部位含量精确、稳定的商品银杏叶提取物，具有产品原料要求低，生产控制容易，制取产品有效成份含量准确稳定的特点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述实施例仅用于说明本发明的技术方案，但对本发明并没有限制。
实施例1
目标提取物：银杏黄酮含量>50%，且白果内酯含量<1%、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量<1%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用2倍体积的50%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量50.5%，白果内酯含量0.38%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.5%的银杏黄酮部位(中间体I) 5.81公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HPD100大孔树脂柱，用3倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用3倍体积的10%乙醇、50%乙醇解吸，50%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至100L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量99.2%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）392克。
上述结晶母液与10%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量5.72%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.4%，银杏黄酮含量15.5%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)10.7公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物5.81公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 5.81 50.5 0.38 0.5
中间体II 0 0 0 99.2
中间体III 0 15.5 5.72 3.4
目标银杏叶提取物 5.81 50.5 0.4 0.5
实施例2
    目标提取物：银杏黄酮含量>30%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的ADS-F8树脂柱，收集吸附残液备用，过柱后用5 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用5倍体积的75%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量40.6%，白果内酯含量0.06%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.27%的银杏黄酮含量部位(中间体I) 5.43公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HPD100大孔树脂柱，用5倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用5倍体积的35%乙醇、75%乙醇解吸，75%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至200L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量98.8%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）389克。
上述结晶母液与35%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量4.33%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.6%，银杏黄酮含量13.4%的白果内酯部位(中间体III)12.2公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物6.82公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 5.43 40.6 0.06 0.27
中间体II 0.389 0 0 98.8
中间体III 1 13.4 4.33 3.6
目标银杏叶提取物 6.82 34.3 0.7 6.4
实施例3
    目标提取物：银杏黄酮含量>24%,白果内酯含量>2.6%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用3倍体积的60%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量35.8%，白果内酯含量0.18%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.24%的银杏黄酮含量部位(中间体I)6.13公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HPD100大孔树脂柱，用4倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用3倍体积的20%乙醇、60%乙醇解吸，60%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至150L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量97.3%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）268克。
上述结晶母液与20%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量3.89%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.0%，银杏黄酮含量19.4%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)11.8公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物18.2公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 6.13 35.8 0.18 0.24
中间体II 0.268 0 0 97.3
中间体III 11.8 19.4 3.89 3
目标银杏叶提取物 18.2 24.6 2.6 3.5
实施例4
    目标提取物：银杏黄酮含量>24%,(白果内酯: 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位 )=0.95~1.05且白果内酯含量>2.6%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的ADS-F8，收集吸附残液备用，过柱后用5 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用2倍体积的50%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量39.1%，白果内酯含量0.22%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.38%的银杏黄酮含量部位(中间体I)7.2公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HPD100大孔树脂柱，用5倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用2倍体积的35%乙醇、75%乙醇解吸，75%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至100L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量96.5%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）148克。
    上述结晶母液与35%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量4.54%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量4.0%，银杏黄酮含量16.1%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)13.8公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物20.5公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 7.2 39.1 0.22 0.38
中间体II 0.078 0 0 96.5
中间体III 13.2 16.1 4.54 4
目标银杏叶提取物 20.5 24.1 3.0 3.1
实施例5
    目标提取物：银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量>95%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用5倍体积的75%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量46.5%，白果内酯含量0.18%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.2%的银杏黄酮含量部位(中间体I) 5.36公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HP100大孔树脂柱，用3倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用4倍体积的10%乙醇、50%乙醇解吸，50%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至200L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量95.5%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）281克。
     上述结晶母液与10%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量4.78%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.9%，银杏黄酮含量10.7%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)11.5公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物0.281公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 0 40.5 0.18 0.2
中间体II 0.281 0 0 95.5
中间体III 0 10.7 4.78 3.9
目标银杏叶提取物 0.281 0.0 0.0 95.5
实施例6
    目标提取物：银杏黄酮含量>22%,白果内酯含量4%， 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量4%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的ADS-F8，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用2倍体积的50%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量30.1%，白果内酯含量0.25%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.6%的银杏黄酮部位(中间体I) 5.02公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的D101大孔树脂柱，用3倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用3倍体积的10%乙醇、50%乙醇解吸，50%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至100L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量95.1%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）205克。
上述结晶母液与10%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量5.72%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.4%，银杏黄酮含量19.5%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)11.3公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物16.6公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 5.02 30.1 0.25 0.6
中间体II 0.265 0 0 95.1
中间体III 11.3 19.5 5.72 3.4
目标银杏叶提取物 16.6 22.4 4.0 4.0
实施例7
    目标提取物：银杏黄酮含量>22%,白果内酯含量< 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量，且白果内酯含量>3.0%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的ADS-F8树脂柱，收集吸附残液备用，过柱后用5 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用5倍体积的75%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量32.6%，白果内酯含量0.09%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.25%的银杏黄酮含量部位(中间体I) 6.21公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HP20大孔树脂柱，用5倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用5倍体积的35%乙醇、75%乙醇解吸，75%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至200L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量96.3%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）199克。
上述结晶母液与35%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量4.9%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量4.6%，银杏黄酮含量18.5%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)12.3公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物18.7公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 6.21 32.6 0.09 0.25
中间体II 0.199 0 0 96.3
中间体III 12.3 18.5 4.9 4.6
目标银杏叶提取物 18.7 23.0 3.3 4.1
实施例8
目标提取物：银杏黄酮含量>22%，(白果内酯: 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位 )=0.95~1.05
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用3倍体积的60%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量36.9%，白果内酯含量0.12%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.62%的银杏黄酮含量部位(中间体I)5.75公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的XAD-4大孔树脂柱，用4倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用3倍体积的20%乙醇、60%乙醇解吸，60%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至150L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量97.3%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）362克。
上述结晶母液与20%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量3.25%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量2.98%，银杏黄酮含量16.3%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)11.9公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物17.6公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 5.75 36.9 0.12 0.62
中间体II 0 0 0 97.3
中间体III 11.9 16.3 3.25 2.98
目标银杏叶提取物 17.6 23.0 2.2 2.2
实施例9
目标提取物：银杏黄酮含量22%~27%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的ADS-F8，收集吸附残液备用，过柱后用5 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用2倍体积的50%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量38.5%，白果内酯含量0.25%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.21%的银杏黄酮含量部位(中间体I)6.62公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的YWD13C大孔树脂柱，用5倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用2倍体积的35%乙醇、75%乙醇解吸，75%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至100L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量98.7%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）256克。
上述结晶母液与35%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量3.6%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.44%，银杏黄酮含量13.8%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)10.5公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物13.4公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 6.62 38.5 0.25 0.21
中间体II 0.256 0 0 98.7
中间体III 6.5 13.8 3.6 3.44
目标银杏叶提取物 13.4 25.8 1.9 3.7
实施例10
目标提取物：银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量>99%
取银杏叶为起始物料提取得到的，生药量约0.25kg/L的上清液3000L，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用5倍体积的75%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量42.1%，白果内酯含量0.52%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.25%的银杏黄酮含量部位(中间体I) 5.67公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的HP100大孔树脂柱，用3倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用4倍体积的10%乙醇、50%乙醇解吸，50%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至200L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量99.2%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）384克。
     上述结晶母液与10%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量3.3%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.21%，银杏黄酮含量12.9%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)11.7公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物0.384公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 0 42.1 0.52 0.25
中间体II 0.384 0 0 99.2
中间体III 0 12.9 3.3 3.21
目标银杏叶提取物 0.384 0.0 0.0 99.2
实施例11
目标提取物：银杏黄酮含量>22%
取银杏黄酮含量19.4%、 白果内酯含量2.17% 、 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量2.86%的银杏叶提取物15公斤，用2倍体积的50%乙醇加热溶解，溶解后加适量热水稀释，减压回收乙醇至无醇味，并用水定容至提取物含量为0.5%，冷却，沉降，取上清液体，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用5倍体积的65%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量37.1%，白果内酯含量0.08%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.14%的银杏黄酮含量部位(中间体I)5.34公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的YWD13C大孔树脂柱，用5倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用5倍体积的35%乙醇、55%乙醇解吸，55%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至100L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量99.4%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）134克。
上述结晶母液与35%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量4.15%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.2%，银杏黄酮含量12.9%的白果内酯部位(中间体Ⅲ)6.54公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物12.0公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 5.34 37.1 0.08 0.14
中间体II 0.134 0 0 99.4
中间体III 6.54 12.9 4.15 3.2
目标银杏叶提取物 12.0 23.5 2.3 2.9
实施例12
    目标提取物：银杏黄酮含量>24%
取银杏黄酮含量22.4%、 白果内酯含量3.17% 、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量4.16%的银杏叶提取物15公斤，用4倍体积的75%乙醇加热溶解，溶解后加适量热水稀释，减压回收乙醇至无醇味，并用水定容至提取物含量为0.7%，冷却，沉降，取上清液体，以1倍体积/h的流速过750L的聚酰胺柱，收集吸附残液备用，过柱后用4 倍体积的纯化水以1倍体积/h的流速预洗，收集纯化水预洗液，备用；再用5倍体积的65%乙醇水溶液以1倍体积/h的流速解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到银杏黄酮含量39.0%，白果内酯含量0.38%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量0.44%的银杏黄酮含量部位(中间体I)5.25公斤。
吸附残液再以1倍体积/h的流速上450L的YWD13C大孔树脂柱，用5倍体积纯化水洗柱，洗柱水液弃去，再分步用5倍体积的35%乙醇、55%乙醇解吸，55%乙醇洗脱液浓缩至有结晶析出，继续浓缩至200L左右冷藏放置。滤结晶,干燥得银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量98.9%的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位部位（中间体Ⅱ）157克。
上述结晶母液与35%乙醇洗脱液合并浓缩干燥，得白果内酯含量6.15%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量5.2%，银杏黄酮含量17.9%的白果内酯部位(中间体III)7.21公斤。
按照下表中的配方，物料粉粹混合即得该实施例目标提取物12.6公斤。
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 5.25 39 0.38 0.44
中间体II 0.157 0 0 98.9
中间体III 7.21 17.9 6.15 5.2
目标银杏叶提取物 12.6 26.5 3.7 4.4
 实施例13
按照下表中的配方
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
市售提取物 15.0 22.4 3.17 4.16
中间体II 1.7 39 0.38 0.44
中间体III 7.2 17.9 6.15 5.2
物料用20倍体积的65%乙醇溶解成均质溶液，以1倍体积流速过除酸树脂柱，收集过柱液，回收乙醇，减压干燥得银杏黄酮含量22.2 %，白果内酯含量4.0%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量含量4.2%，银杏酸小于5ppm的符合USP标准的银杏叶提取物22.9公斤。
实施例14
按照下表中的配方
物料名称 数量(kg) 银杏黄酮含量/% 白果内酯含量/% 银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量/%
中间体I 6.0 35.8 0.18 0.24
中间体II 0.157 — — 98.9
中间体III 6.0 15.5 5.72 3.4
物料用10倍体积的50%乙醇溶解成均质溶液，以1倍体积流速过除酸树脂柱，收集过柱液，回收乙醇，减压干燥得银杏黄酮含量25.4 %，白果内酯含量2.9%，银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量3.1%，银杏酸小于1ppm的符合EP标准的银杏叶提取物11.4公斤。

Claims (1)

1.一种制备含多种指定有效成份含量的银杏叶提取物方法，其特征在于：先用银杏叶或银杏叶提取物通过水醇法提取，酰胺型树脂和大孔吸附树脂吸附，梯度洗脱，结晶纯化得到中间体Ⅰ为银杏总黄酮部位，其银杏黄酮含量>30%，且白果内酯含量<1%、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量<1%；中间体II为银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位，其银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量>95%；中间体III为白果内酯部位，白果内酯含量>3.2%，且白果内酯>银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位含量，银杏黄酮含量<20%，具体工艺步骤为：
(1)提取银杏有效成分      
A、银杏叶为起始原料时，银杏叶用含水乙醇或甲醇或丙酮多次提取，取提取液浓缩回收溶剂，浓缩液用水或纯化水稀释，在20℃以下冷却沉降，得生药比约为0.25g/ml的上清液；
B、以不合格的银杏叶提取物为起始原料时，取银杏叶提取物，用2～4倍体积、百分比浓度为50～75%乙醇溶解，溶解后加热水溶解稀释成0.50～0.70g/ml，回收乙醇，冷却沉降，得上清液；
(2)提取中间体I银杏黄酮含量部位
上清液先过聚酰胺柱或ADS～F8等对黄酮选择性较强的极性树脂；
收集吸附残液，备用；
过柱后用4～5 倍体积的纯化水预洗，收集纯化水预洗液，备用；
再用2～5倍体积百分比浓度为50～75%乙醇水溶液解吸附，收集流出液，将收集的流出液减压回收乙醇后，真空干燥得到中间体I银杏黄酮含量部位；
(3)提取中间体Ⅱ银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位
吸附残液与纯化水预洗液分别过苯乙烯型非极性大孔吸附树脂柱，如HPD100 、D101 、三菱HP20、XAD～4、YWD 13C等；
用3～5倍体积水洗后，分步用2～5倍体积的、百分比浓度为10～35%的乙醇洗脱，收集洗脱液，得洗脱液Ⅰ；
用百分比浓度为35～75%乙醇洗脱洗脱液Ⅰ，得洗脱液Ⅱ；
洗脱液Ⅱ浓缩至上清液体积的1/15～1/30，冷藏放置，过滤，得结晶，母液备用；结晶干燥得中间体Ⅱ银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位；
(4)提取中间体Ⅲ白果内酯部位
上述母液与洗脱液Ⅰ合并，减压浓缩，减压干燥，得中间体III白果内酯部位；
 (5)分别对所得的银杏黄酮含量部位、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C部位、白果内酯部位称量调制，使调制后的银杏叶提取物产品符合规定标准的要求，如Schwabe标准、6911标准、CP05标准、EGB761标准、EP6.0标准、USP31标准、CP10标准或客户指定要求，即可。
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