CN106086237A - 一种猪圆环病毒2型的pcr检测方法、所用引物及检测试剂盒 - Google Patents

一种猪圆环病毒2型的pcr检测方法、所用引物及检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法、所用引物及检测试剂盒，所述PCR检测方法操作简单、技术要求低，适合于临床检测。所述PCR检测方法，包括以下步骤：（1）以样品中提取的DNA为模板进行PCR扩增，其中PCR扩增的引物序列为：上游5‑CGTTGGAATGGTACTCCTC‑3；下游5‑TATGGAAATTCAGGGCATG‑3；（2）对扩增产物进行电泳；（3）分析、判定结果，样品出现153bp扩增条带，且阴性对照无相应的扩增条带时，结果为阳性。

Description

一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法、所用引物及检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法、所用引物及检测试剂盒。
背景技术
猪圆环病毒（PCV）属于圆环病毒科，圆环病毒属。是迄今为止发现的最小的单股环状DNA病毒，对外界环境有很强的抵抗力，不易被灭活。根据其抗原性的不同，可将其分为不具致病性的1型（PCV1）和具致病性的2型（PCV2），其基因的同源性较高。PCV2的危害主要是侵害机体的免疫系统，使机体的抵抗力遭到破坏，在机体遭受其他病原侵害时抵抗力下降，引起并发或继发感染。PCV2常与猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪链球菌等协同作用引起发病。引起的疾病有：断奶仔猪多系统衰弱综合症（PMWS）、猪皮炎和肾病综合症（PDNS）、繁殖与呼吸综合征、渗出性皮炎等疾病。
自1997年加拿大报道该病以来，世界上大多数国家和地区对该病均有报道，说明PCV2呈世界性分布，PCV2的发生和蔓延给全世界的养猪业带来了巨大的经济损失。由于目前尚无针对该病的有效预防和控制措施，且该病常以亚临床感染的形式存在，所以做好该病的诊断对该病的监控尤为重要。目前对PCV2的诊断方法较多，除了有传统的病毒分离、免疫荧光法、ELISA等方法以外，还有实时荧光PCR等，与这些方法相比，普通PCR操作简单，技术要求较低，更适合于临床检测或流行病学调查。
发明内容
发明目的
本发明的目的是提供一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法，操作简单、技术要求低，适合于临床检测。
本发明的另一个目的是提供用于所述猪圆环病毒2型的PCR检测方法的引物。
本发明的另一个目的是提供与上述检测方法相应的检测试剂盒。
发明概述
根据本发明的第一方面，提供了一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法，包括以下步骤：
（1）以样品中提取的DNA为模板进行PCR扩增，其中PCR扩增的引物序列为：
上游 5-CGTTGGAATGGTACTCCTC-3；
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3；
（2）对扩增产物进行电泳；
（3）分析、判定结果，样品出现153bp扩增条带，且阴性对照无相应的扩增条带时，结果为阳性。优选的，PCR扩增的条件及程序为：95℃预变性5min; 94℃变性30s，48-59℃退火30s，72℃延伸30s，共41个循环，最后72℃延伸6min。进一步优选的，PCR扩增的条件及程序为：95℃预变性5min; 94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，共41个循环，最后72℃延伸6min。
优选的，PCR反应体系为：
PCR缓冲液；
MgCl2终浓度2.5mmol/L；
dNTP 终浓度0.2mmol/L；
TaqDNA聚合酶1unit；
上下游引物终浓度均为0.5μmol/l；
模板2.0μl；
加ddH2O至终体积50 μl。
其中，TaqDNA聚合酶的终浓度为本领域常规参数，引物及模板的终浓度可以由本领域技术人员经试验确定，以能获得有效的PCR扩增反应为目标。所述有效的PCR扩增反应是指当DNA模板中含有足量目标DNA序列可以进行PCR扩增反应时，扩增产物的量足以被检出，显示结果为阳性。
所述阴性对照可以由本领域技术人员进行选择，优选的，所述PCR检测方法以猪伪狂犬病病毒作为阴性对照。
根据本发明的第二方面，还提供了用于所述猪圆环病毒2型的PCR检测方法的引物，其序列为：
上游 5-CGTTGGAATGGTACTCCTC-3；
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3。
根据本发明的第三方面，还提供了一种用于猪圆环病毒2型的PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括：
PCR缓冲液；
引物对，序列为：
上游 5-CGTTGGAATGGTACTCCTC-3，
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3；
MgCl2；
dNTP；
Taq DNA聚合酶；
ddH2O；
阴性对照；
DNA Ladder。
优选的，所述阴性对照为猪伪狂犬病病毒。
本发明所述猪圆环病毒2型的PCR检测方法操作简单，技术要求较低，便于临床检测或流行病学调查，所检测的泰州地区67份疑似PMWS的病料，其中42份表现为阳性，其阳性率可达62.6%。
附图说明
图1是实施例1的PCR扩增电泳图，其中，M: 100bp DNA Ladder；1、2、3、4：PCV2扩增产物；
图2是敏感性试验的PCR扩增电泳图，其中，M：100bp DNA Ladder；1、2、3、4、5、6、7分别代表稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7倍数的PCV2扩增产物。
具体实施方式
下边结合实施例作具体的说明。
1.1主要试剂及仪器
基因组DNA快速抽提试剂盒、100bp DNA Ladder、6× DNA Loading Dye、dNTP Mix均为上海生工生物工程有限公司产品；TaqDNA聚合酶为Fermentas产品，型号EP0404，浓度为1u/μl；25mM MgCl2及10×Buffer为Fermentas产品；PCR扩增仪（PTC-200rev）、JS-380A自动凝胶图像分析仪、Mikro200R冷冻高速离心机、DYY-7C型电泳仪、DYCP-31DN琼脂糖水平电泳槽、恒温箱、微量移液器等。
1.2引物的设计及合成
参照GenBank上发表的PCV2全基因序列JX682407和发明人分离鉴定的5株PCV2序列（GenBank登录号:：KC788750、KF039888、KF039889、KF039890、KF039891），设计一对扩增PCV2片段的特异性引物，扩增片段位于826-979bp,长度为153bp，引物的序列为：
上游5- CGTTGGAATGGTACTCCTC-3；
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3。
引物的合成由上海生物工程有限公司合成，-20℃冰箱保存备用。
1.3 DNA模板的提取
采集有PMWS典型症状发病猪的脾脏、淋巴结和肺等病变组织，按照基因组DNA快速抽提试剂盒的说明书操作。提取的DNA模板-20℃保存备用。
实施例1
以1.3提取的DNA为模板，用上述引物进行扩增，反应体系为：10×Buffer和MgCl2各5μl，2.5mmol/LdNTP 4μl,TaqDNA聚合酶1μl，上下游引物各1μl，模板2.0μl，加ddH2O至终体积50μl，混匀后放入PCR扩增仪中。反应的程序为：95℃预变性5min; 94℃变性30s，采用48-59℃范围内不同温度退火30s，72℃延伸30s，共41个循环，最后72℃延伸6min，发现退火温度为53℃时扩增效果最好。反应结束后，将PCR产物在1.5%琼脂糖上进行电泳，凝胶成像系统进行观察。在约153bp处见一特异性条带，与预期的大小一致。结果如图1（1、2、3、4是在完全相同条件下的四次重复实验的结果，退火温度均为53℃）。
将PCR产物按DNA凝胶回收试剂盒的要求进行回收，将回收产物送去生物公司进行测序，测序的结果与GenBank中的PCV2序列进行比对，结果显示扩增的条带为PCV2序列。
实施例2 特异性测定
以1.3提取的DNA、猪瘟脾淋苗、猪伪狂犬病阳性病料的DNA、猪大肠杆菌的DNA为模板，用上述所设计的PCV2的特异性引物按照实施例1的方法进行扩增，电泳、观察结果。结果显示，所设计的引物仅能扩增出PCV2的DNA片段，约153bp，而其它扩增结果均没显示条带。其中猪瘟脾淋苗圩大北农科技集团股份有限公司商品疫苗，猪伪狂犬病阳性病料的DNA和猪大肠杆菌的DNA由申请人按照现有技术分离鉴定保存。
实施例3 敏感性测定
将1.3提取的DNA作不同程度的稀释，分别用实施例1的方法进行PCR扩增，扩增结束后以10μL的PCR产物进行电泳，检测PCR方法的敏感性。结果如图2所示，说明DNA模板在经过10-1-10-7稀释后，采用所述优化的条件扩增仍能在10-5时扩出片段，表明其敏感性较高。
实施例4 PCR检测方法的验证试验
采用实施例1的方法，对发明人分离鉴定的5株PCV2（发明人最近几年从苏中地区(泰州市及周围地区) 发病猪场分离到多株不同生物学特性的 PCV2 毒株，并对其进行了 Cap基因序列测定（GenBank登录号: KC788750、KF039888、KF039889、KF039890、KF039891）和进化树分析）的PK15细胞培养物进行了PCV2的检测，同时设阴性对照（猪伪狂犬病病毒PK15细胞培养物），计算与病毒分离鉴定方法检测结果的符合率。结果显示，2种方法检测5株PCV2和阴性对照，阴性和阳性结果完全符合，符合率为100%。
实施例5 PCR检测方法的应用
采用实施例1的方法，对泰州海陵区、高港区及兴化市等6个地区发病猪的脾脏、淋巴结和肺等病变组织进行了PCV2的检测。
采用最佳的扩增条件，对所采的67份疑似PMWS的病料进行了PCV2的检测。结果显示，其中42份表现为阳性，其阳性率可达62.6%。
本实验根据GenBank上发表的PCV2全基因序列JX682407，设计一对扩增PCV2片段的特异性引物，扩增片段长度为153bp，对其反应条件及程序进行优化，建立的PCV2的PCR检测方法，其特异性和敏感性较好，可用于泰州地区PCV2的早期诊断及流行病学调查。对收集的疑似临床病料进行检测，67份病料，其阳性率达62.6%。该检测方法的建立有利于规模化猪场对PCV2的检测及监控，为该病的早期诊断提供了技术平台。
序列表
<110>江苏农牧科技职业学院
<120>一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法、所用引物及检测试剂盒
<160>2
<170>PatentIn version 3.4
<210> 1
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<400> 1
cgttggaatg gtactcctc 19
<210> 2
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<400> 2
tatggaaatt cagggcatg 19

Claims (8)

1.一种猪圆环病毒2型的PCR检测方法，其特征在于，顺序包括以下步骤：
（1）以样品中提取的DNA为模板进行PCR扩增，其中PCR扩增的引物序列为：
上游 5-CGTTGGAATGGTACTCCTC-3；
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3；
（2）对扩增产物进行电泳；
（3）分析、判定结果，样品出现153bp扩增条带，且阴性对照无相应的扩增条带时，结果为阳性。
2.如权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR检测方法以猪伪狂犬病病毒作为阴性对照。
3. 如权利要求1所述的PCR检测方法，其特征在于，PCR扩增的条件及程序为：95℃预变性5min; 94℃变性30s，48-59℃退火30s，72℃延伸30s，共41个循环，最后72℃延伸6min。
4. 如权利要求3所述的PCR检测方法，其特征在于，PCR扩增的条件及程序为：95℃预变性5min; 94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，共41个循环，最后72℃延伸6min。
5.如权利要求1-4中任一项所述的PCR检测方法，其特征在于，PCR反应体系为：
PCR缓冲液；
MgCl2终浓度2.5mmol/L；
dNTP 终浓度0.2mmol/L；
TaqDNA聚合酶1unit；
上下游引物终浓度均为0.5μmol/l；
模板2.0μl；
加ddH2O至终体积50 μl。
6.一种用于猪圆环病毒2型PCR检测方法的引物，其序列为：
上游 5-CGTTGGAATGGTACTCCTC-3；
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3。
7.一种用于猪圆环病毒2型的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
PCR缓冲液；
引物对，序列为：
上游 5-CGTTGGAATGGTACTCCTC-3，
下游5- TATGGAAATTCAGGGCATG-3；
MgCl2；
dNTP；
Taq DNA聚合酶；
ddH2O；
阴性对照；
DNA Ladder。
8.如权利要求7所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为猪伪狂犬病病毒。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106929606A (zh) * 2017-04-14 2017-07-07 华南农业大学 一种检测鉴定非典型猪瘟病毒（appv）的pcr引物及检测方法与检测试剂盒
CN107012259A (zh) * 2017-04-14 2017-08-04 华南农业大学 一种检测鉴定猪圆环病毒3型的pcr引物及检测方法与检测试剂盒
CN107586887A (zh) * 2017-10-31 2018-01-16 咸阳职业技术学院 一种猪圆环病毒2型与3型pcr鉴别诊断试剂盒及其检测方法
CN107828916A (zh) * 2017-11-30 2018-03-23 山东新希望六和集团有限公司 用于检测猪圆环病毒3型的引物、pcr试剂盒及应用
CN109517929A (zh) * 2018-12-21 2019-03-26 武汉科前生物股份有限公司 用于猪圆环病毒检测和2型分型的引物组和试剂盒

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040062775A1 (en) * 1997-12-05 2004-04-01 Agence Francaise De Securite Sanitaire Des Aliments Circovirus sequences associated with piglet weight loss disease (PWD)
CN101294223A (zh) * 2007-05-08 2008-10-29 深圳太太基因工程有限公司 一种用于检测ⅱ型猪圆环病毒核苷酸片段的引物和探针序列
CN102206715A (zh) * 2011-04-22 2011-10-05 上海市动物疫病预防控制中心 一种检测猪圆环病毒2型和分型的试剂盒及方法
CN102711816A (zh) * 2009-10-22 2012-10-03 莱比锡大学 患有牛新生儿全血细胞减少症的小牛中的圆环病毒的检测
CN105648118A (zh) * 2016-03-14 2016-06-08 扬州大学 一种TaqMan荧光定量PCR检测嵌合型猪圆环病毒1-2的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040062775A1 (en) * 1997-12-05 2004-04-01 Agence Francaise De Securite Sanitaire Des Aliments Circovirus sequences associated with piglet weight loss disease (PWD)
CN101294223A (zh) * 2007-05-08 2008-10-29 深圳太太基因工程有限公司 一种用于检测ⅱ型猪圆环病毒核苷酸片段的引物和探针序列
CN102711816A (zh) * 2009-10-22 2012-10-03 莱比锡大学 患有牛新生儿全血细胞减少症的小牛中的圆环病毒的检测
CN102206715A (zh) * 2011-04-22 2011-10-05 上海市动物疫病预防控制中心 一种检测猪圆环病毒2型和分型的试剂盒及方法
CN105648118A (zh) * 2016-03-14 2016-06-08 扬州大学 一种TaqMan荧光定量PCR检测嵌合型猪圆环病毒1-2的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
郭广富等: "江苏泰州地区猪圆环病毒2型感染情况调查", 《江苏农业科学》 *
郭广富等: "猪圆环病毒2型泰州株的分离鉴定", 《江苏农业科学》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106929606A (zh) * 2017-04-14 2017-07-07 华南农业大学 一种检测鉴定非典型猪瘟病毒（appv）的pcr引物及检测方法与检测试剂盒
CN107012259A (zh) * 2017-04-14 2017-08-04 华南农业大学 一种检测鉴定猪圆环病毒3型的pcr引物及检测方法与检测试剂盒
CN107586887A (zh) * 2017-10-31 2018-01-16 咸阳职业技术学院 一种猪圆环病毒2型与3型pcr鉴别诊断试剂盒及其检测方法
CN107586887B (zh) * 2017-10-31 2021-06-08 咸阳职业技术学院 一种猪圆环病毒2型与3型pcr鉴别诊断试剂盒及其检测方法
CN107828916A (zh) * 2017-11-30 2018-03-23 山东新希望六和集团有限公司 用于检测猪圆环病毒3型的引物、pcr试剂盒及应用
CN109517929A (zh) * 2018-12-21 2019-03-26 武汉科前生物股份有限公司 用于猪圆环病毒检测和2型分型的引物组和试剂盒

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Application publication date: 20161109

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